实验一 小白鼠骨髓细胞染色体制片
小鼠骨髓细胞染色体
实验步骤
预处理——取股骨——冲洗骨髓——离 心——低渗——离心——固定——离心——
滴片——染色——观察
1. 取材及前处理：取健康小白鼠（约65-90天龄）， 腹腔注射0.1%秋水仙素溶液0.1ml，剂量为 4ml/Kg动物体重 2. 取骨髓：将已用秋水仙素前处理的小白鼠，经过 2-3小时后，用损伤脊椎法处死小白鼠，立即取出 两侧股骨，把肌肉刮净，然后从骨股两端关节处 剪下，用2%柠蒙酸钠溶液洗净骨股上的血污及肌 肉残渣，剪去骨股两端膨大的关节头，使其露出 骨髓，然后用吸有3-5ml2%柠檬酸钠溶液的注射 器，从股骨的一端插入针头，往骨髓内冲洗多次， 直至股骨断面变成粉白色为止，可多剪几个断面 反复冲洗，这样制备了骨髓细胞悬浮液，也可用 眼科镊子小心地取出骨髓，置于有少量柠檬酸钠 溶液培养皿中捣碎，然后再加入2%柠檬酸钠溶液 适量，制成3-5ml骨髓细胞悬液
骨髓细胞染色体的制备与观察
2010级生物技术专业——冯德
实验目的 实验原理
实验用品 实验方法
实验目的
初步掌握小白鼠骨随细胞染色体的制 备方法，计算骨髓细胞分裂中期的分裂相 的染色体数目并观察端着丝点的形态特 点．
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞能生成 各种血细胞和原始细胞，具有较高的分裂 能力。本实验采用这一材料，通过前处理， 低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色 体标本，可观察到许多处于分裂中期的染 色体
3.
பைடு நூலகம்1.
低渗处理：用吸管将骨髓细胞悬液移入带刻度离心管 内，1000rpm离心10分钟，吸去上清液。加入0.075M氯 化钾溶液5ml立即将细胞团吹打均匀，置37℃水浴25-30 分钟 4. 预固定、固定：经低渗处理后的细胞，加入卡诺氏 固定液5-6滴搅拌均匀进行预固定10分钟，然后以 1000rpm离心10分钟，此为第一次固定然后以同法离心， 弃上清液，仅留约0.2-0.3ml的细胞团与部分上清液，吹 均匀制成细胞悬浮液涂片观察。如果细胞分散的不好， 可再按上述方法再固定1-2次，使染色体进一步分散 气干法制片：取预先冰冻的载玻片，滴2-3滴细胞 悬浮液于其上，立即吹气均匀打散、过火、置室温中自 然干燥
小鼠骨髓瘤细胞染色体标本的制备实验目的：实验原理：
2．试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液 （甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶 液、Giemsa染液等。
3．材料：小鼠
方法与步骤：
1.取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动 物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断 在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。
2.腹腔内注射秋水仙素3～4小时后，断头处死小鼠。 3.取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造
成骨髓细胞的流失。Fra bibliotek 4.滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、肌肉等 组织清除干净。
5.加入适量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并用吸管吹 打，使骨髓细胞全部释放出来。
6.用滤网将获得的液体过滤到离心管中，加低渗液至8ml 左右，室温下静置20～30分钟，进行低渗。低渗结束后， 加入1ml左右的Carnoy’s 固定液进行预固定，轻轻混匀 后，离心。
15分钟，弃去染液，水洗，镜检。
结果：
作业:
绘图表示动物染色体的典型形态。 说明在小鼠骨髓染色体的制备过程中的关键步
骤。
7. 1200转/分，离心5分钟，弃上清，加入固定液，混匀 后，室温放置30分钟，再次离心去上清，重复固定一次， 离心后，向沉淀中加入1ml预冷的固定液，将细胞重悬。
8.取洁净冰水中预冷的载玻片，稍作倾斜，用吸管吸取一 滴上述细胞悬浮液，于载玻片上方适当高度滴在载玻片 上；
9.滴片后，将片子晾干，滴加适量Giemsa染液染色10～
小鼠骨髓瘤细胞染色体标本的制备
实验目的：
掌握小鼠骨髓细胞染色体的原理和制备方法，识别小鼠染 色体的数目及特点。
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作和观察-医学资料
可见中西医学，一个是以“功能人” 为概念 的独特 的哲学 医学理 论体系 ，一个 是以“ 解剖人 、肉体 人”为 概念的 新兴的 现代医 学科学 理论体 系，二 者都不 是以完 整人为 研究对 象的科 学，从 理论讲 二者都 不是科 学的， 势必影 响各自 发展。 事实也 证明这 一切， 中医长 期停滞 不前、 疗效也 不确实 。西医 尽管发 展到目 前的基 因分子 层次， 但疾病 发病率 居高不 下，对 绝大部 分疾病 发病原 因认识 不清、 发病机 理弄不 明白， 治疗受 到制约 ，在小 小SAR S、禽 流感面 前竟束 手无策 ，在糖 尿病、 癌症、 心脑血 管疾病 、尿毒 症等相 当多疾 病面前 更是不 得不求 助或借 助中医 治疗。 一个是 疗效不 确实， 一个是 有些甚 至相当 多疾病 无法治 疗，这 就是中 西医学 结合的 缘由。 然而， 由于二 者是两 套理论 、两股 道上跑 的车， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。故 出现西 医对治 疗不了 的疾病 只好求 助中医 ，而中 医则往 往采用 西医诊 断中医 治疗， 以及中 西治疗 法一块 用的局 面。
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子
小白鼠染色体标本的制作染色与观察
小白鼠染色体标本的制作染色与观察染色体是生物体内的遗传物质DNA和蛋白质的组合体，通过对染色体的观察可以了解生物种群的遗传信息和进化变化。
染色体观察在遗传学、病理学等领域具有重要的应用价值。
本文将介绍小白鼠染色体标本的制作方法以及染色和观察的步骤。
1.小白鼠染色体标本的制作方法制作小白鼠染色体标本的过程主要包括取材、处理和固定等步骤。
（1）取材选择健康的小白鼠，尤其是发育期的小白鼠，取得其骨髓或肝脏等组织。
取材时要注意卫生和无菌操作，以保证样品的质量。
（2）处理将取得的骨髓或肝脏等组织放入离心管中，加入等体积的生理盐水悬浮液，并在其中加入适量的KCl溶液进行渗透，使细胞膜变得脆弱，易于裂解释放染色体。
（3）固定将处理后的细胞悬浮液滴到已经消毒的玻璃片上，然后迅速将玻璃片倾斜，让细胞悬浮液自然扩散开来。
待其固定后，用甲醛进行固定处理，固定时间一般为5-10分钟。
2.小白鼠染色体染色的步骤（1）裂解将固定的标本玻璃片在室温下迅速加热至约60℃的热板上，使染色体细胞裂解释放出染色体。
裂解时间一般为5-10分钟。
（2）染色将裂解后的细胞标本浸泡在浓度适当的染色液中，常用的染色液有乔治染色液、甲酸-吡啶染色液和乙酸酒精染色液等。
对于小白鼠染色体标本的染色，乔治染色液是较为常用的选择。
（3）洗涤染色后的标本需要进行洗涤步骤以去除多余的染色液和固定剂。
使用生理盐水或磷酸缓冲液进行反复洗涤，直到洗涤液清澈。
3.小白鼠染色体观察的步骤在染色体标本制作和染色之后，我们可以通过显微镜进行小白鼠染色体的观察，并对染色体进行测量和特征描述。
（1）显微镜观察将染色后的标本玻璃片固定在显微镜载玻片上，使用显微镜进行观察。
观察过程中可以选择不同倍数的镜头以获得更详细的图像。
（2）测量和特征描述通过观察染色体在显微镜下的形态和结构，我们可以测量染色体的长度、形状等参数，并对染色体的特征进行描述，如染色体数量、着丝点的位置等。
总结：小白鼠染色体标本的制作染色与观察是一项重要的生物实验技术，可以帮助我们了解生物的遗传特征和疾病的发生机制。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。
在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。
通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。
同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。
观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。
同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
实验一 小白鼠骨髓细胞染色体制片
一、原理
• 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分 裂的组织和细胞悬液中得到。最常用的途径是 从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中 制备染色体。在骨髓细胞中，有丝分裂的指数 是相当高的，因此可以直接得到中期细胞而不 必象血淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培 养，主要的中期相来自于细胞系统，也来自于 各种骨髓细胞。以骨髓为材料进行染色体研究 的优点是不需要培养，细胞数目越多，分裂数 目高，并能真实反映体内真实情况。
四、实验步骤与方法
四、实验步骤与方法
5.固定：沿管壁加５毫升新鲜卡尔诺固定液，马 上散细胞团，使其在固定液中悬浊均匀。 1000rmp离心５分，去上清液，即第一次固定。 同样方法固定三次，留沉淀。 6.滴片： • (1)在离心管底细胞团中再加少量（0.5ml）新 鲜固定液，搅匀制成细胞悬浊液。 • (2)将预先泡在75%酒精的广口瓶里的载玻片取 出，火焰烤干后，置于4℃冰箱中冷藏备用。 取出时轻甩玻片上的水，立即滴悬浊液2~3滴， 空气干燥。
四、实验步骤与方法
7.姬姆萨染色 • (1)配制染液：用缓冲液PBS（1升蒸馏水 加磷酸二氢钾9.08克、磷酸氢二钠 9.50 克 PH=6.8）配成2%姬姆萨染色液。 • (2)待玻片干燥后，迅速移到盛有染液的 染色缸中放置10分，然后水洗。
四、实验步骤与方法
8.镜检：先用低倍镜（×200-×400）找出比较 清晰而分裂相较好的染色体，然后用高倍油 浸镜下详细观察染色体的数目、形态等。拍 照，洗相。 9.核型分析：按同源染色体的相对长度、着丝 点位置等特征依次排常染色体，最后排是直接从骨髓中取出细胞，经压 片法或空气干燥法制片。为了提高有丝分裂的 指数，在动物实验时，可在取材前经腹胚注射 有丝分裂的抑制剂，一般常用秋水仙素。
小鼠骨髓细胞染色体制备
小鼠骨髓细胞染色体制备染色体制备是生物学研究中常用的实验技术之一，通过染色体制备可以获得染色体的形态和结构信息，从而进一步研究其功能和遗传特性。
本文将介绍小鼠骨髓细胞染色体制备的方法和步骤。
一、材料准备1. 小鼠骨髓细胞2. 10% 碘酒3. 0.075M KCl 溶液4. 甲醛溶液（4%）5. 甲基绿染液6. 预热37°C恒温水浴7. 玻片和载玻片夹二、实验步骤1. 将小鼠安乐死并取出骨髓，将骨髓切碎并转移到15ml离心管中。
2. 加入适量的10%碘酒，使得骨髓完全被浸泡，放置室温下静置15分钟，使细胞均匀染色后固定。
3. 使用离心机以1000rpm离心10分钟，将碘酒倒掉。
4. 加入适量的0.075M KCl 溶液，使骨髓细胞悬浮，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
5. 再次加入适量的0.075M KCl 溶液，使骨髓细胞悬浮，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
6. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
7. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
8. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
9. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
10. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
11. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
12. 将悬浮的骨髓细胞滴于预热的玻片上，并用载玻片夹轻轻压平。
13. 将载玻片夹放入预热37°C的恒温水浴中，静置10分钟。
14. 将载玻片夹取出，用甲醛固定液稍微洗净，并用酒精进行脱水。
15. 将载玻片夹放入洗净过的甲醛固定液中浸泡10分钟，然后用酒精进行脱水。
小鼠骨髓细胞染色体标本制备
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具： 注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品：
0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、 Giemsa染液、0.01M磷酸缓冲液 (PH6.8)，0.85%生理盐水。
实验九
小鼠骨髓
细胞染色体标本制备
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨
髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造
血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
2、适当浓度秋水仙素处理分裂 增殖的骨髓细胞，能抑制细胞分裂 时纺锤丝、纺锤体的形成，而染色 体不分裂成为子染色体，使细胞不 向后期过渡，从而收集到更多的中 期分裂相。 同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用 6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定； 1000rpm离心10分钟后，弃去上清液。
7、固定：沿管壁慢慢加入固定液 5ml，用吸管吹打成细胞悬液后，室 温下静置15分钟，5分钟时轻轻吹打， 使细胞充分固定。 8、离心：1000rpm离心10分钟， 弃上清液。 9、再固定：同固定I。 10、再离心：同8，离心后加 0.1ml固定液，吸管吹打成细胞悬液。
四倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=32）
二倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=16）
遗传学实验小白鼠骨髓细胞染色体制片资料
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04
结果分析
染色体制片的观察和描述
染色体形态
观察染色体的形态，如长 度、粗细、着丝粒位置等， 判断是否存在异常。
染色质结构
描述染色质的细致结构， 如染色质疏松、紧密程度， 核仁位置等。
染色体数目
统计染色体的数目，判断 是否符合正常小鼠的染色 体数目（40条）。
染色体数目和结构的分析
染色体数目异常
分析染色体数目是否正常，是否存在非整倍体、 多倍体等现象。
染色体结构异常
观察染色体是否存在易位、倒位、缺失、重复等 结构异常。
染色体带型分析
通过显带技术分析染色体带型，有助于更精确地 判断染色体结构和数目异常。
染色体畸变和异常的分析
染色体畸变
分析染色体是否存在畸变现象，如断裂、裂隙、环状 染色体等。
遗传学实验小白鼠骨 髓细胞染色体制片资 料
contents
目录
• 实验目的 • 实验材料 • 实验步骤 • 结果分析 • 结论与讨论
01
实验目的
了解小白鼠骨髓细胞染色体制片过程
了解染色体制片的基 本步骤：取材、固定、 解离、漂洗、染色和 制片。
了解染色体制片过程 中的注意事项和细节。
掌握每个步骤中使用 的试剂和仪器的操作 方法。
掌握染色体制片的基本原理和技术
理解染色体制片的基本原理
通过化学和物理方法将细胞内的DNA、RNA或蛋白质染色，以便在显微镜下 观察。
掌握常用的染色技术
如吉姆萨染色、瑞氏染色等。
分析染色体制片在遗传学研究中的应用
分析染色体制片在遗传学中的重要性 和应用价值。
了解染色体制片技术的局限性及其改 进方向。
实验报告骨髓细胞(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解骨髓细胞染色体制备的基本原理和操作步骤。
2. 掌握染色体制片技术，观察骨髓细胞染色体结构。
3. 熟悉显微镜的使用方法，提高观察细胞结构的能力。
二、实验原理骨髓细胞染色体制备是研究染色体结构、数量及异常的重要方法。
通过染色体制备，可以在显微镜下观察到细胞的染色体结构，从而分析细胞的遗传特性。
本实验采用小鼠骨髓细胞作为实验材料，通过秋水仙素处理使细胞分裂阻滞在中期，再进行低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，制备染色体标本。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠骨髓细胞、秋水仙素、柠檬酸钠、固定液、染色液等。
2. 实验仪器：显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、滴管、烧杯等。
四、实验步骤1. 实验前准备：将小鼠处死，取出骨髓组织，放入装有柠檬酸钠的小烧杯中，用剪刀剪碎，使骨髓细胞游离出来。
2. 低渗处理：将骨髓细胞悬浮液放入离心管中，离心后弃去上清液，加入适量固定液，再次离心，弃去上清液。
3. 染色：将固定后的细胞沉淀用染色液染色，室温放置10-15分钟。
4. 滴片：将染色后的细胞沉淀用滴管滴在载玻片上，盖上盖玻片，用显微镜观察。
五、实验结果与分析1. 观察到细胞呈圆形，细胞核较大，染色质清晰可见，染色体呈X形，可见有丝分裂中期细胞。
2. 观察到染色体数目与小鼠的正常染色体数目一致，染色体结构完整，无断裂、缺失、易位等异常。
六、实验讨论1. 秋水仙素处理：秋水仙素是一种细胞分裂抑制剂，能使细胞分裂阻滞在中期，有利于观察染色体结构。
2. 低渗处理：低渗处理可以使细胞膨胀，便于观察染色体结构。
3. 固定：固定可以使细胞和染色体保持原状，便于观察。
4. 染色：染色可以使染色体着色，便于观察。
七、实验总结本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本，并观察到了染色体结构。
通过本实验，我们掌握了染色体制备的基本原理和操作步骤，提高了观察细胞结构的能力。
在今后的实验中，我们将进一步学习染色体分析技术，为遗传学研究提供有力支持。
小树骨髓细胞有丝分裂染色体制片 制片质量评价
小鼠骨髓细胞染色体制片质量评价1、制片人：徐宜强2、同组人：朱沛煌徐宜强3、时间：2011年12月7日4、制片内容：小白鼠骨髓细胞染色体标本的制备5、制片过程：①预处理（实验前，老师已帮忙做好）取骨髓前3-4h给小鼠注射0.1%的秋水仙素。
②取骨髓断颈法处死小鼠，取股骨，剪掉股骨两端关节头，用注射器吸取1%你们酸钠洗脱至骨腔变白。
③低渗用吸管吹打，1000prm离心10min，去上清，加0.075mol/L KCl 5-8ml，吹打，水浴20min④固定1000prm离心10min，去上清，沿管壁慢慢加8ml固定液（3:1），轻轻吹打均匀，静置20-30min，1000prm离心10min，去上清，留0.5ml沉淀加固定液（1:1）5-6滴。
⑤滴片将事先在冰箱中预冷的载玻片30º倾斜，滴管与玻片50cm高度滴片，每张玻片上滴2-3滴，滴完立即吹散吹匀，放置至充分干燥。
⑥染色充分干燥后用苯酚品红染液染色20min。
⑦观察染色完毕后，用清水轻洗，干燥，观察染色体形态。
6、细胞破碎率：制片编号 1 2 3 4 5 65 10 12 13 15 5每100个细胞中细胞跌破数综合制作的六张玻片，得细胞破碎率=10%7、染色体形态：大体上呈现U字型。
8、染色体数目：小白鼠骨髓细胞染色体有40条。
9、清晰程度：中等，大部分染色体形态可以看清楚，有的染色体很清晰，个别染色体很模糊。
在个别较清晰破碎细胞中，可隐约数到36条。
10、实验中得失分析：实验开始的第一步就是杀死小白鼠，这着实给了我一个比较大的挑战，但是想想凡事总得有个第一次，就狠下心，捉了一只小鼠，按照老师指导的要点将小鼠迅速处死了。
但是取股骨的时候，由于大意没仔细听老师讲解，取错了，把股骨剪断了。
只好又重新又取了个小鼠来取股骨。
实验操作中还存在一些不足，导致细胞跌破率不高，染色的效果不是很好，有的载玻片上的很少，有的载玻片上还有不少细胞团簇在一起，可能原因是：一、低渗做的不是很好。
小鼠骨髓细胞染色体标本制备
小鼠骨髓细胞染色体标本制备1. 引言大家好，今天我们来聊聊一个听起来可能有点儿复杂，但其实挺有趣的话题——小鼠骨髓细胞染色体的标本制备。
别担心，我会把这些专业术语说得简单明了，让你也能轻松get到这个过程。
说起来，小鼠可真是科学研究中的“常客”，就像饭桌上的米饭，随处可见，缺了它可不行。
这不，今天咱们就来探索一下怎么从小鼠身上提取骨髓细胞，搞个染色体标本，看看这些小家伙们的秘密。
2. 骨髓细胞的来源2.1 小鼠的选择首先，你得找一只小鼠。
挑小鼠可不是随便的，得挑那些健康活泼的小家伙，就像挑选水果一样，选那种又圆又亮的最好。
一般来说，实验室里会用小鼠的某个特定品系，比如C57BL/6，它们可是科研界的明星。
别忘了，鼠鼠们可不是随便抓来的，得遵循一套规矩，确保它们的生活环境干净卫生，毕竟咱们要尊重这些小生命。
2.2 获取骨髓细胞接下来，就是动手获取骨髓细胞的环节了。
首先，要麻醉小鼠，这一步可不能省，麻醉得当才能让它们安静下来，不然你想抓取细胞，它们可是不会轻易妥协的。
麻醉之后，小心翼翼地取出小鼠的骨髓，这个过程就像是在做外科手术，要有点儿医生的范儿，稳重些。
骨髓一般是在鼠鼠的股骨和胫骨里，捣鼓的时候要小心别伤到周围的组织。
3. 细胞制备过程3.1 细胞分离一旦取出骨髓，你会发现那里面的小细胞们就像一群调皮的孩子，四处乱窜。
我们要做的就是把它们从骨髓中分离出来。
这个过程通常会用到生理盐水，简单说就是把骨髓和盐水混合，轻轻摇晃，让细胞们游出来。
记住，摇晃的时候要轻柔，别像个暴徒一样，细胞们可是很娇嫩的！3.2 染色体制备接下来就是最神奇的部分——染色体的准备。
我们需要把这些细胞放到培养基里，让它们再长一段时间，这样细胞会分裂得更多，染色体也会更加明显。
等到细胞生长到一定程度，我们就可以通过加一些化学药剂，比如秋水仙素，来阻止它们的分裂，准备好进行染色。
4. 染色体的染色与观察4.1 染色过程染色这个步骤可有意思了！我们要用一种专门的染色液，把这些细胞染上色。
遗传实验：小鼠骨髓染色体的制片与观察
❖ 与血淋巴细胞相比，造血干细胞具有分裂旺盛的 优势，无需PHA处理即可用于核型分析。
实验目的
❖ 掌握动物骨髓细胞染色体制片技术 ❖ 观察小鼠中期染色体的形态特征并对染色体计数
实验材料及流程 *
❖小鼠 2n=40
❖ 秋水仙素处理-收集骨髓细胞-低渗处理-固定-滴片 -染色-水洗-镜检
1 秋水仙素处理 *
❖ 原理：秋水仙素能够抑制纺锤丝形成，使中期 姐妹染色单体无法分离，大量的有丝分裂细胞 被阻断在中期。增加了中期分裂相细胞的比例。
❖方法：腹腔注射0.01%秋水仙素溶液 0.5ml 等 待2-4h，秋水仙素通过肠系膜吸收进入血液循 环。
盐浓度与渗透压 *
4 固定
❖ 目的：终止细胞生长过程及一切生理生化反应， 维持细胞结构不变。
❖固定液配方： 甲醇：乙酸=3:1
5 滴片 *
❖ 目的：使细胞膜破裂，细 胞核或核内染色体分散在 载玻片上。
❖ 原理：滴片时产生的剪切 力破坏细胞膜。预冷的玻 片使得液体的表面张力增 加，液层更薄，有利于细 胞的破裂和染色体的分散。
6 染色
❖ 染色液：石碳酸品红（卡宝品红），染色质特异 染料
❖ 步骤： 1 滴加染色液覆盖全部细胞 2 染色5min
中期分裂相特点 *
❖ 染色体浓缩成棒状，着丝点在染色体末端 ❖ 可见三种形状的中期染色体
镜检结果
பைடு நூலகம்
2 收集骨髓细胞 *
❖ 收集股骨和胫骨内 的骨髓细胞
2 收集骨髓细胞 *
❖用生理盐水（0.85% NaCl溶液）收集骨髓细胞 ❖ 目的：维持等渗环境，保持细胞自然形态。
大学课程遗传学实验小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察 JC课件
9.染色
10.镜检
【内容与方法】
1.动物预处理
• 4.预固定：现配固定液甲醇、冰
2.取材及收集细胞 醋酸（3：1）1ml，打匀，离心8分
3.低渗
钟（1000r/min），弃上清。
4.预固定
5.固定
6.再固定
7.制备细胞悬液
8.滴片
9.染色 10.镜检
使这些细胞及其染色体都固定在当前所处的时期，便于 观察
• 2.取材及收集细胞：颈椎脱臼法处
死小鼠，剪开后肢皮肤和肌肉，取出完整股骨，剔 除肌肉、肌腱，生理盐水洗净；剪去少许股骨头， 吸取4ml37℃预温0.075mol/L KCl低渗液冲洗两个
股骨的骨髓细胞至同一试管。
5.固定
6.再固定
7.制备细胞悬液
8.滴片
9.染色
10.镜检
1.动物预处理 2.取材及收集细胞 3.低渗 4.预固定 5.固定 6.再固定 7.制备细胞悬液 8.滴片 9.染色 10.镜检
【内容与方法】
• 6.再固定：重复步骤5，本
次实验省略不做。
1.动物预处理
【内容与方法】
2.取材及收集细胞
3.低渗 4.预固定 5.固定 6.再固定
• 7.制备细胞悬液：倒净后重
新加适量固定液至半透明（或留 4~5滴 ） ，吸管缓慢打匀。
7.制备细胞悬液
8.滴片
9.染色
10.镜检
【内容与方法】
1.动物预处理 2.取材及收集细胞 3.低渗 4.预固定 5.固定
3.低渗 4.预固定
，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察 到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色 体组型分析。
5.固定
如何做人的染色体制备？
小鼠骨髓细胞染色体制备
8.观察:高倍镜下观察,也可在油镜下观察. 8.观察 高倍镜下观察,也可在油镜下观察. 观察:
【思考题】 思考题】
l,实验中的预处理的目的是什么? ,实验中的预处理的目的是什么? 2,实验过程中的关键步骤有哪些?要如何把 ,实验过程中的材料和器材】 材料和器材】
1,实验材料:两个月龄的健康小白鼠 2,器 具:解剖器具(剪刀,镊子等),吸管, 具:解剖器具(剪刀,镊子等) 离心机, 水浴锅,显微镜,注射器 等. 品:秋水仙素, 甲醇,冰醋酸, Giemsa染液,0.075MKCL, Giemsa染液,0.075MKCL, 2%柠檬酸钠等. 2%柠檬酸钠等.
3,药
【实验方法和步骤】 实验方法和步骤】
1,预处理:实验前3---4小时,取健康小鼠,每只 预处理:实验前3---4
腹腔注射0 01% 秋水仙素0 腹腔注射0.01% 秋水仙素0.3--0.4ml.注意不要伤及内脏. 4ml.注意不要伤及内脏. 2,取股骨:用一只手的拇指和食指按住小鼠 取股骨:用一只手的拇指和食指按住小鼠 的头部,另一只手 拉住它的尾巴,用 力向后拉断其颈椎.处死后立即用剪 刀剪开后腿上的皮毛,取出小鼠的股 骨,剔除上面的肌肉,洗净.
小鼠骨髓细胞染色体制备
【目的和要求】 目的和要求】
1,掌握动物骨髓细胞染色体玻片标本的制备 方法. 2,观察染色体的形态特征,统计小白鼠体细 胞中染色体数目.
【基本原理】 基本原理】
骨髓细胞的制片技术基本的程序较为简便.并且骨 髓细胞中,有丝分裂的指数相当高. 髓细胞中,有丝分裂的指数相当高. 秋水仙素可抑制微管聚集,纺锤丝不能形成, 秋水仙素可抑制微管聚集,纺锤丝不能形成,使染色体 停留于中期时像,具有最典型形态. 停留于中期时像,具有最典型形态. 低渗液可以使细胞中的染色体充分散开, 低渗液可以使细胞中的染色体充分散开,便于记数和 观察. 观察.
小鼠骨髓染色体制片技术
八、参考文献
1、黄燕,赵小平,余红,陈绍坤.动物骨髓细胞染色体标本制
备失败的原因分析. 生物学通报, 2006, 41(1): 52-53
2、刘涌涛,马全祥,刘慧娟.小鼠骨髓细胞染色体标本制备 中的失误与对策. 生物学通报, 2003,38(6):53-54.
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五、实验步骤
1、前处理
为提高有丝分裂的指 数，增多细胞中期分 裂相。提前3-4小时 向小鼠腹腔内注射0.02
—0.04%秋水仙碱溶液。
每10g体重注入0.1ml
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12、镜检：干燥后即可镜检。
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六、实验结果 1．在低倍及中倍镜下观察Giemsa染色之后的
染色体制片，寻找分散适当的中期染色体图
象。 2．在高倍镜下进行仔细观察，熟悉小鼠染色 体的形态，统计染色体数目。 注意观察：在高倍显微镜下小鼠骨髓细胞
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二、实验原理
※小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是 骨髓组织。 ※骨髓细胞中，有丝分裂指数相当高，因此可以 直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或其它组 织那样要经过体外培养。 ※对大型动物通常采用对骼骨、脊或胸骨穿刺术 吸取红骨髓，小型动物多采用剥离术取股骨以 获得骨髓细胞。
的染色体类型？两条单体分开呈现的形态？。
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四、实验步骤与方法
四、实验步骤与方法
5.固定：沿管壁加５毫升新鲜卡尔诺固定液，马 上散细胞团，使其在固定液中悬浊均匀。 1000rmp离心５分，去上清液，即第一次固定。 同样方法固定三次，留沉淀。 6.滴片： • (1)在离心管底细胞团中再加少量（0.5ml）新 鲜固定液，搅匀制成细胞悬浊液。 • (2)将预先泡在75%酒精的广口瓶里的载玻片取 出，火焰烤干后，置于4℃冰箱中冷藏备用。 取出时轻甩玻片上的水，立即滴悬浊液2~3滴， 空气干燥。
四、实验步骤与方法
7.姬姆萨染色 • (1)配制染液：用缓冲液PBS（1升蒸馏水 加磷酸二氢钾9.08克、磷酸氢二钠 9.50 克 PH=6.8）配成2%姬姆萨染色液。 • (2)待玻片干燥后，迅速移到盛有染液的 染色缸中放置10分，然后水洗。
四、实验步骤与方法
8.镜检：先用低倍镜（×200-×400）找出比较 清晰而分裂相较好的染色体，然后用高倍油 浸镜下详细观察染色体的数目、形态等。拍 照，洗相。 9.核型分析：按同源染色体的相对长度、着丝 点位置等特征依次排常染色体，最后排列出 性染色体。
Байду номын сангаас
四、实验步骤与方法
1.秋水仙素处理： 先给小白鼠腹 膛内注射秋水仙素 (0.5μg/ml)0.2毫 升经1~2小时后致 死。
四、实验步骤与方法
2.摘取组织：用眼科剪子摘取股骨，剥离肌肉后 剪掉股骨两端膨大的关节头，使其露出骨髓腔。
四、实验步骤与方法
四、实验步骤与方法
3.采集细胞：先用镊子夹住股骨，放在离 心管口上方，然后用已抽吸少量0.075M 氯化钾的卡介苗注射器，由上端轻轻地 注入给骨髓腔，冲净细胞，再加入氯化 钾至５毫升刻度为止。 4.低渗处理：用吸管充分搅匀后，静置１ ５分钟进行低渗处理。1000rpm离心５分， 吸去上清液。
一、原理
• 直接制片法，是直接从骨髓中取出细胞，经压 片法或空气干燥法制片。为了提高有丝分裂的 指数，在动物实验时，可在取材前经腹胚注射 有丝分裂的抑制剂，一般常用秋水仙素。
二、目的
• 掌握采用直接法制作动物染色标本的步骤与方 法。
三、器材、试剂
• 卡介苗注射器、针头（5号）、V型离心管、吸 管、试管、试管架、显微镜、小白鼠、解剖器 具（剪刀、镊子）、酒精灯。秋水仙素、 0.075M氯化钾、甲醇、乙醇、冰醋酸、磷酸氢 二钠、磷酸二氢钠、盐酸、姬姆萨染色液、二 甲苯、香柏油、加拿大树胶。
实验一 小白鼠骨髓细胞染色体制片（直接法）
一、原理
• 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分 裂的组织和细胞悬液中得到。最常用的途径是 从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中 制备染色体。在骨髓细胞中，有丝分裂的指数 是相当高的，因此可以直接得到中期细胞而不 必象血淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培 养，主要的中期相来自于细胞系统，也来自于 各种骨髓细胞。以骨髓为材料进行染色体研究 的优点是不需要培养，细胞数目越多，分裂数 目高，并能真实反映体内真实情况。