实验一 小白鼠骨髓细胞染色体制片

四、实验步骤与方法
四、实验步骤与方法
5.固定：沿管壁加５毫升新鲜卡尔诺固定液，马 上散细胞团，使其在固定液中悬浊均匀。 1000rmp离心５分，去上清液，即第一次固定。 同样方法固定三次，留沉淀。 6.滴片： • (1)在离心管底细胞团中再加少量（0.5ml）新 鲜固定液，搅匀制成细胞悬浊液。 • (2)将预先泡在75%酒精的广口瓶里的载玻片取 出，火焰烤干后，置于4℃冰箱中冷藏备用。 取出时轻甩玻片上的水，立即滴悬浊液2~3滴， 空气干燥。
四、实验步骤与方法
1.秋水仙素处理： 先给小白鼠腹 膛内注射秋水仙素 (0.5μg/ml)0.2毫 升经1~2小时后致 死。
四、实验步骤与方法
2.摘取组织：用眼科剪子摘取股骨，剥离肌肉后 剪掉股骨两端膨大的关节头，使其露出骨髓腔。
四、实验步骤与方法
四、实验步骤与方法
3.采集细胞：先用镊子夹住股骨，放在离 心管口上方，然后用已抽吸少量0.075M 氯化钾的卡介苗注射器，由上端轻轻地 注入给骨髓腔，冲净细胞，再加入氯化 钾至５毫升刻度为止。 4.低渗处理：用吸管充分搅匀后，静置１ ５分钟进行低渗处理。1000rpm离心５分， 吸去上清液。
一、原理
• 直接制片法，是直接从骨髓中取出细胞，经压 片法或空气干燥法制片。为了提高有丝分裂的 指数，在动物实验时，可在取材前经腹胚注射 有丝分裂的抑制剂，一般常用秋水仙素。
二、目的
• 掌握采用直接法制作动物染色标本的ห้องสมุดไป่ตู้骤与方 法。
三、器材、试剂
• 卡介苗注射器、针头（5号）、V型离心管、吸 管、试管、试管架、显微镜、小白鼠、解剖器 具（剪刀、镊子）、酒精灯。秋水仙素、 0.075M氯化钾、甲醇、乙醇、冰醋酸、磷酸氢 二钠、磷酸二氢钠、盐酸、姬姆萨染色液、二 甲苯、香柏油、加拿大树胶。
实验一 小白鼠骨髓细胞染色体制片（直接法）
一、原理
• 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分 裂的组织和细胞悬液中得到。最常用的途径是 从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中 制备染色体。在骨髓细胞中，有丝分裂的指数 是相当高的，因此可以直接得到中期细胞而不 必象血淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培 养，主要的中期相来自于细胞系统，也来自于 各种骨髓细胞。以骨髓为材料进行染色体研究 的优点是不需要培养，细胞数目越多，分裂数 目高，并能真实反映体内真实情况。
四、实验步骤与方法
7.姬姆萨染色 • (1)配制染液：用缓冲液PBS（1升蒸馏水 加磷酸二氢钾9.08克、磷酸氢二钠 9.50 克 PH=6.8）配成2%姬姆萨染色液。 • (2)待玻片干燥后，迅速移到盛有染液的 染色缸中放置10分，然后水洗。
四、实验步骤与方法
8.镜检：先用低倍镜（×200-×400）找出比较 清晰而分裂相较好的染色体，然后用高倍油 浸镜下详细观察染色体的数目、形态等。拍 照，洗相。 9.核型分析：按同源染色体的相对长度、着丝 点位置等特征依次排常染色体，最后排列出 性染色体。