FACS细胞表型染色操作
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细胞表型染色分析/表面抗原染色
*Stain Buffer:PBS+2%FBS+0.2%NaN3
*抗体为BD荧光标记一抗,标准用量为20uL/test(~106细胞/100uL)
1.弃去培养基,消化收集细胞,低温4度300g离心5分钟;
2.弃上清,适量Stain Buffer重悬,计数;
3.取0.5-1 X 106细胞至1.5mL离心管,低温4度300g离心5分钟;
4.弃上清,加入100uL Stain Buffer,加入20uL各抗体,吹打混匀;
5.避光,冰上孵育30分钟;
6.加入1mL Stain Buffer,低温4度300g离心5分钟;
7.弃上清,加入1mL Stain Buffer,低温4度300g离心5分钟;
8.弃上清,500uL Stain Buffer重悬,过滤,置于冰上,避光,上机;