细胞化学染色表格模板格整理
皮肤组织特殊染色法一览表
皮肤组织特殊染色法一览表皮肤组织特殊染色一览表显示内容染色方法染色结果胶原纤维Masson染色法胶原纤维蓝色；细胞质、肌肉和神经红色；细胞核黑色弹性纤维①Verhoeff-Van gieson染色法弹性纤维蓝黑或黑色；胶原纤维红色；细胞质和肌肉黄色②地衣红（Acid orcein)染色法弹性纤维深棕色③间苯二酚品红染色法弹性纤维紫色网状纤维①硝酸银浸染法网状纤维、黑色素和神经黑色；胶原纤维紫色；细胞质和细胞核灰色②Wilder染色法网状纤维黑色；胶原纤维玫瑰红色；其它组织红色黑色素Fontana-Masson氨银法黑色素黑色；细胞核粉色细菌Gram-Weigert染色法革兰氏阳性菌蓝色；革兰氏阴性菌红色真菌，Donovan小体六胺银法真菌、Donovan小体黑色真菌、黏多糖PAS反应真菌、基底膜、含中性黏多糖的黏蛋白、糖原、纤维素和网状纤维呈玫瑰红色至紫红色真菌，纤维素磷钨酸苏木精（PTAH）染色法肌肉、纤维素、细胞核和细胞质蓝色；胶原纤维、网状纤维、基底膜呈红至棕红色螺旋体Donovan小体Warthin-Starry染色法螺旋体如梅毒苍白螺旋体，Donovan小体呈黑色酸性黏多糖①Alcian blue染色法酸性黏多糖蓝色②甲苯胺蓝（Toluidine bl ue)染色法酸性黏多糖呈异染性紫色；肥大细胞颗粒红至紫红色③胶样铁法酸性黏多糖深蓝色'胶原纤维红色；细胞质和肌肉黄色肥大细胞颗粒，利什曼原虫Giemsa染色法肥大细胞、酸性黏多糖呈异染性紫红色；利什曼原虫、嗜酸性粒细胞颗粒呈红色耐酸杆菌①Fite染色法耐酸杆菌如结核杆菌及麻风杆菌呈红色②Ziehl-Neelsen染色法耐酸杆菌如结核杆菌及麻风杆菌呈红色含铁血黄素Perl亚铁氰化钾法含铁血黄素蓝色淀粉样蛋白①碱性刚果红染色法淀粉样蛋白在偏振光下呈绿色双折光；普通光镜下呈淡粉至红色②结晶紫染色法淀粉样蛋白红色，其它组织蓝色神经纤维Bodian染色法神经纤维和细胞核黑色；髓鞘、肌肉和红细胞红色钙Von Kossa染色法钙质呈黑色脂质①猩红染色法脂质红色②苏丹黑B染色法脂质黑色附：制作要点皮肤组织固定液HE染色用10%中性甲醛缓冲液寒冷季节在中性甲醛90毫升加95%酒精10毫升直接免疫荧光染色用Michel液固定：硫酸铵55克溶于缓冲液（含0.1M N-乙基顺丁烯二酰亚胺N-Ethylmaleimide2.5毫升，蒸馏水87.5毫升，以1M氢氧化钾调至pH7.0)100毫升或改良缓冲液：硫酸铵55dq ,叠氮钠或三氮化钠（Sodium Azide 或Smite）0.05克，蔗糖7 克，甘油3毫升，酚红0.001克，0.05MPBS（pH7.0)100毫升，以1M氢氧化钾调至pH7.0室温放一周取材当天观察免疫荧光：放生理盐水或0.01M pH7.0固定时间：4毫米厚组织8小时以上；6毫米厚组织至少12小时切片厚度5~7㎛HE染色结果：细胞核蓝色；细胞质和结缔组织、肌肉、神经呈红色；红细胞亮粉红色。
血液检验表格归纳
▲ 诊断： 1. 骨髓中原始细胞应≥20％ 2. 常规细胞化学染色均阴性 3. 确诊：细胞免疫分型或细胞超微结构检查
检验 临床表现 血象 1. WBC明显增高＞ 50×109/L ，RBC、 PLT降低 2. 分类以原始幼稚 淋巴细胞为主 3. 蓝细胞易见 （又称 涂抹细胞、退化细 胞）
细胞特征/ 类型
POX： 强（+） PAS： （+） ，弥散 NAS-DCE ： 强（+） NAS-DAE ： 强（ + ） ，不被 NaF抑制 α -NBE： （—）
成熟阶 段 的 CD15 、 CD11b （ + ）率 高
t(8；21)（q22；q22）是 特异性染色体异常；形 成 AML1-ETO 融 合 基 因
（急 性 型 ）粒 ＊ 单 核 细 胞 白 血 病
1. WBC分类可见粒 单两系细胞，原始和 幼稚阶段细胞增多 2. RBC、Hb 降低 3. BPC偶见或罕见
1. BM增生极度或明显活跃； 2. 粒、单两系同时增生，可分为四型： M4a：以原粒和早幼粒细胞为主，原+幼单 >20% M4b：以原、幼单为主，原粒+早幼粒>20% M4c： 既有粒又有单核系细胞形态的原始细胞 >30% M4Eo： 具备上述特点又有异常嗜颗粒 3.红系增生减低或受抑 4.淋巴细胞比例减低或明显减低 5.巨核细胞数明显减低或没有，血小板偶见或 罕见。
骨髓象 1. 增生极度或明显活跃，少数增生活跃； 2. 分类以原始及幼稚淋巴细胞为主， 常成堆分 布，破坏细胞多见；无 Auer’s小体 3. 比例≥25%，可达90%以上； 4. 粒系、红系及巨核细胞增生可受抑制，BPC 少或罕见。 ALL的FAB形态学分类：
M1 M2a M2b
4——细胞化学染色
临床血液学与检验-
细胞化学染色
细胞化学染色检验
骨髓报告
细胞化学染色
主要内容Contents
铁染色
中性粒细胞碱性磷酸酶（ALP）
细胞化学染色 过氧化物酶（POX）苏丹黑
糖原（PAS） 酯酶染色
酸性磷酸酶 （ACP） 细胞化学染色检验
第二节、细胞化学染色检验 P74
定义： 血细胞化学染色是以形态学为基
幼红细胞核呈鲜红色，浆呈淡黄红色。铁粒呈蓝色， 定位于胞质内。
根据铁颗粒的多少、粗细将铁粒幼红细胞分为 以下几种类型：
Type I: 幼红细胞内含铁粒1～2粒 Type II: 幼红细胞内含铁粒3～5粒 Type III:幼红细胞内含铁粒6～10粒 Type IV: 幼红细胞内含铁粒﹥10粒
铁粒红细胞（Siderocyte）: 成熟红细 胞中出现铁颗粒称为铁粒红细胞。
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
复染
使各种细胞有明显的对比度 中性红 甲基绿 核固红 亮绿
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
一、铁染色
原理：
4Fe3+ + 3K4「Fe(CN)6」 含铁物质 亚铁氰化钾
Fe4「Fe(CN)6」3 +12K+ 亚铁氰化铁
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
结果判断
萘酚+ 重氮盐偶联
（亮红色沉着于胞浆中） [结果] NAP主要存在于成熟中性粒细胞，
其他血细胞均呈阴性反应。
细胞化学染色检验
中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （neutrophil alkaline phosphatase NAP）
（钙钴法） [原理]
β-甘油磷酸钠 NAP 甘油+磷酸钠 NaHPO4 + Ca（NO3)2+（NH4） SCO↓ 棕黑色（沉着于胞浆中
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)
结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞图表A 1.1.Mallory染色，显示胶原纤维，A组排列规则1.2. Masson三色染色法绿色：胶原纤维红色：肌纤维橘红色：红细胞图表B 1.2 Mssson三色法图表C 1.2.Masson三色染色胃癌组织中血管平滑肌1.3. 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法红色：胶原纤维黑色：网状纤维绿色：弹性纤维淡黄色：肌肉、红细胞图表D 4.Weigert间苯二酚法二、胶原纤维染色法2.2. Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法鲜红色：胶原纤维黄色：肌纤维、细胞质、红细胞蓝褐色：胞核图表E 2.胶原纤维，Van Gieson(V.G.)苦味酸-酸性品红法图心肌梗塞myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。
2.1 天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)红色：胶原纤维绿色：细胞核黄色：其他三、网状纤维染色3.1 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黑色：网状纤维红色：胞核（核固红复染）黄棕色：胶原纤维淡红色：细胞质（红液复染）图表F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法3.2 Gomori氏银氨液配制法图表G Gomori氏银氨液配制法四、弹性纤维染色Gomori醛复红染色法*甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳图表H 4.GOMORI醛复红染色法五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法蓝绿色：弹性纤维红色：胶原纤维黄色：背景图表I 4.Weigert间苯二酚法六、肌肉组织染色△横纹肌组织染色Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨微紫色：粗弹性纤维（有时）紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌图表J 6.1.磷钨酸苏木素法图表K 6.1.磷钨酸苏木素染色液△早期心肌病变组织染色1.Nagar-Olsen染色法（1974年）红色：缺氧心肌、红细胞黄色或黄棕色：正常心肌蓝色：细胞核图各组小鼠心肌组织Nagar-Olsen染色（光学显微镜, ×200）2.Poley显示缺氧心肌染色法（1964年）红色：缺氧心肌紫色：胞核绿色：其他组织七、糖类染色过碘酸-Schiff（PAS）染色法红色：糖原及其他PAS反应阳性物质蓝色：细胞核图表L 7.胃贲门腺体胞浆呈PAS阳性八、黏液物质（黏多糖）染色1.Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）染色法（1956）红色：中性黏液物质蓝色：酸性黏液物质紫红色：混合性黏液物质图表M 8.1.AB-PAS染色结肠粘膜图表N 8.1.胃粘膜组织AB-PAS染色40×：2.爱先蓝（PH2.5）法蓝色：唾液酸、弱硫酸化黏液物质、一般粘液红色：胞核不着色：强硫酸化黏液物质图表O 8.2.爱先蓝（PH2.5）染色液图表P 8.2.爱先蓝法图表Q 8.2.爱先蓝法—3、爱先蓝（PH1.0）法蓝色：含硫酸黏液物质不着色：非硫酸化酸性黏液物质红色：复染后的胞核九、黑色素染色1.Masson-Fontana黑色素银浸染色法黑色：黑色素及嗜银细胞颗粒红色：胶原纤维浅黄色：背景图表R 9.1.Melanin pigment in cells of9.1. malignant melanoma, Fontana-Masson stain.2.Lillie亚铁染色法暗绿色：黑色素浅绿或不着色：背景黄色：肌纤维和背景精品十、含铁血黄素染色Perls blue（普鲁士蓝）反应显示三价铁蓝色：含铁血黄素浅红色：其他组织图表S 10.普鲁士蓝染色肝脏普鲁士蓝染色呈蓝色的含铁血黄素颗粒大量沉着在肝实质细胞和库普弗细胞内。
病理学技术特殊染色最最全总结均配图
结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞图表 A 1.1.Mallory染色，显示胶原纤维，A组排列规则1.2. Masson三色染色法绿色：胶原纤维红色：肌纤维橘红色：红细胞图表 B 1.2 Mssson三色法图表 C 1.2.Masson三色染色胃癌组织中血管平滑肌1.3. 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法红色：胶原纤维黑色：网状纤维绿色：弹性纤维淡黄色：肌肉、红细胞图表 D 4.Weigert间苯二酚法二、胶原纤维染色法2.2. Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法黄色：肌纤维、细胞质、红细胞蓝褐色：胞核图表E 2.胶原纤维，Van Gieson(V.G.)苦味酸-酸性品红法图心肌梗塞myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。
2.1 天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)绿色：细胞核黄色：其他三、网状纤维染色3.1 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黑色：网状纤维红色：胞核（核固红复染）黄棕色：胶原纤维淡红色：细胞质（红液复染）图表 F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法3.2 Gomori氏银氨液配制法图表G Gomori氏银氨液配制法四、弹性纤维染色Gomori醛复红染色法*甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳图表H 4.GOMORI醛复红染色法五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法蓝绿色：弹性纤维红色：胶原纤维黄色：背景图表I 4.Weigert间苯二酚法六、肌肉组织染色△横纹肌组织染色Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨微紫色：粗弹性纤维（有时）紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌图表J 6.1.磷钨酸苏木素法图表K 6.1.磷钨酸苏木素染色液△早期心肌病变组织染色1.Nagar-Olsen染色法（1974年）红色：缺氧心肌、红细胞黄色或黄棕色：正常心肌蓝色：细胞核图各组小鼠心肌组织Nagar-Olsen染色（光学显微镜, ×200）2.Poley显示缺氧心肌染色法（1964年）红色：缺氧心肌紫色：胞核七、糖类染色过碘酸-Schiff（PAS）染色法红色：糖原及其他PAS反应阳性物质蓝色：细胞核图表L 7.胃贲门腺体胞浆呈PAS阳性八、黏液物质（黏多糖）染色1.Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）染色法（1956）红色：中性黏液物质蓝色：酸性黏液物质紫红色：混合性黏液物质图表M 8.1.AB-PAS染色结肠粘膜图表N 8.1.胃粘膜组织AB-PAS染色40×：2.爱先蓝（PH2.5）法蓝色：唾液酸、弱硫酸化黏液物质、一般粘液红色：胞核不着色：强硫酸化黏液物质图表O 8.2.爱先蓝（PH2.5）染色液图表P 8.2.爱先蓝法图表Q 8.2.爱先蓝法—3、爱先蓝（PH1.0）法蓝色：含硫酸黏液物质不着色：非硫酸化酸性黏液物质红色：复染后的胞核九、黑色素染色1.Masson-Fontana黑色素银浸染色法黑色：黑色素及嗜银细胞颗粒红色：胶原纤维浅黄色：背景图表R 9.1.Melanin pigment in cells of9.1. malignant melanoma, Fontana-Masson stain.2.Lillie亚铁染色法暗绿色：黑色素浅绿或不着色：背景黄色：肌纤维和背景十、含铁血黄素染色Perls blue（普鲁士蓝）反应显示三价铁蓝色：含铁血黄素浅红色：其他组织图表S 10.普鲁士蓝染色肝脏普鲁士蓝染色呈蓝色的含铁血黄素颗粒大量沉着在肝实质细胞和库普弗细胞内。
病理学技术—特殊染色最最全总结材料(均配图)
结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞图表 A 1.1.Mallory染色，显示胶原纤维，A组排列规则1.2. Masson三色染色法绿色：胶原纤维红色：肌纤维橘红色：红细胞图表 B 1.2 Mssson三色法图表 C 1.2.Masson三色染色胃癌组织中血管平滑肌1.3. 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法红色：胶原纤维黑色：网状纤维绿色：弹性纤维淡黄色：肌肉、红细胞图表 D 4.Weigert间苯二酚法二、胶原纤维染色法2.2. Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法黄色：肌纤维、细胞质、红细胞蓝褐色：胞核图表 E 2.胶原纤维，Van Gieson(V.G.)苦味酸-酸性品红法图心肌梗塞 myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。
2.1 天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)绿色：细胞核黄色：其他三、网状纤维染色3.1 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黑色：网状纤维红色：胞核（核固红复染）黄棕色：胶原纤维淡红色：细胞质（红液复染）图表 F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法3.2 Gomori氏银氨液配制法图表 G Gomori氏银氨液配制法四、弹性纤维染色Gomori醛复红染色法*甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳图表 H 4.GOMORI醛复红染色法五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法蓝绿色：弹性纤维红色：胶原纤维黄色：背景图表 I 4.Weigert间苯二酚法六、肌肉组织染色△横纹肌组织染色Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨微紫色：粗弹性纤维（有时）紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌图表 J 6.1.磷钨酸苏木素法图表 K 6.1.磷钨酸苏木素染色液△早期心肌病变组织染色1.Nagar-Olsen染色法（1974年）红色：缺氧心肌、红细胞黄色或黄棕色：正常心肌蓝色：细胞核图各组小鼠心肌组织Nagar-Olsen染色（光学显微镜, ×200）2.Poley显示缺氧心肌染色法（1964年）红色：缺氧心肌紫色：胞核七、糖类染色过碘酸-Schiff（PAS）染色法红色：糖原及其他PAS反应阳性物质蓝色：细胞核图表 L 7.胃贲门腺体胞浆呈PAS阳性八、黏液物质（黏多糖）染色1.Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）染色法（1956）红色：中性黏液物质蓝色：酸性黏液物质紫红色：混合性黏液物质图表 M 8.1.AB-PAS染色结肠粘膜图表 N 8.1.胃粘膜组织 AB-PAS染色 40×：2.爱先蓝（PH2.5）法蓝色：唾液酸、弱硫酸化黏液物质、一般粘液红色：胞核不着色：强硫酸化黏液物质图表 O 8.2.爱先蓝（PH2.5）染色液图表 P 8.2.爱先蓝法图表 Q 8.2.爱先蓝法—3、爱先蓝（PH1.0）法蓝色：含硫酸黏液物质不着色：非硫酸化酸性黏液物质红色：复染后的胞核九、黑色素染色1.Masson-Fontana黑色素银浸染色法黑色：黑色素及嗜银细胞颗粒红色：胶原纤维浅黄色：背景图表 R 9.1.Melanin pigment in cells of9.1. malignant melanoma, Fontana-Masson stain.2.Lillie亚铁染色法暗绿色：黑色素浅绿或不着色：背景黄色：肌纤维和背景十、含铁血黄素染色Perls blue（普鲁士蓝）反应显示三价铁蓝色：含铁血黄素浅红色：其他组织图表 S 10.普鲁士蓝染色肝脏普鲁士蓝染色呈蓝色的含铁血黄素颗粒大量沉着在肝实质细胞和库普弗细胞内。
细胞化学染色
【临床意义】 （1）生理变化：
新生儿NAP增高，成人较儿童减低，老 人更低；激烈运动增高；
月经期经前增高，行经后降低，经后期 恢复正常；
妊娠期2-3月轻度增高，以后逐渐增高， 分娩时达到高峰，产后恢复正常。
（2）、病理变化 增高：严重化脓性感染、类白血病反应、 AA、CML加速期、ALL、CLL、恶性淋巴 瘤、癌转移、MM、真红、骨髓纤维化等。 减低：PNH、CML、恶性组织细胞病、 MDS。
【结果】
脂类呈黑色或棕黑色颗粒，定位于细胞浆中 （+） 颗粒很小，细小、稀疏，或胞质局部面积的
1/4有致密的颗粒。 （++）颗粒较少，或胞质面积的1/2出现黑色颗粒。 （+++）颗粒较密，或胞质面积的3/4出现黑色颗粒。 （++++） 颗粒极密，颗粒间无间隙。
【临床意义】 1. 粒细胞系 早幼粒及以下阶段随着细胞成熟，阳性颗
×
二、苏丹黑B染色
【原理】 苏丹黑B (sudan black B , SB )是一种能 溶解于脂肪中的色素染料，可使细胞内的 中性脂肪、磷脂和类固醇着色，即使细胞 内微细结构的脂类物质也能显示出来。
【试剂】 1. 10%甲醛液。 2. 苏丹黑B乙醇溶液
【操作】 1．干燥血片或骨髓片在甲醛蒸气中固定。 2．自来水冲洗。 3．放人染色液中，37 ℃染色30~60min。 4．用70%乙醇脱色1~2min，水洗lmin。. 5．瑞氏染液复染20~30min。
这些方法学在白血病的鉴别诊断上 具有重要意义。
一、过氧化物酶染色（POX）
（一）四甲基联苯胺法 【原理】 粒细胞和单核细胞的胞浆内的
髓过氧化物酶（POX orMPO）分解过氧 化氢，释放新生态氧，使无色联苯胺氧 化成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕色 化合物沉着于细胞质内。
细胞化学染色
常见血液病及细胞化学染色简写1、IDA 缺铁性贫血2、MegA 巨幼细胞性贫血3、HA 溶血性贫血4、AA 再生障碍性贫血5、AAA 急性再生障碍性贫血6、CAA 慢性再生障碍性贫血7、PRCA 纯红细胞再生障碍性贫血8、SA 继发性贫血9、SBA 铁粒幼细胞性贫血10、RA 难治性贫血11、RAEB 原始细胞增多性难治性贫血12、RAEB-t 转变中原始细胞增多性难治性贫血13、PA 恶性贫血14、IA 感染性贫血15、SCA 镰状红细胞贫血16、HS 遗传性球形红细胞增多症17、HE 遗传性椭圆形红细胞增多症18、HST 遗传性口形红细胞增多症19、PNH 阵发性睡眠性血红蛋白尿症20、AL 急性白血病21、ALL 急性淋巴细胞性白血病22、ANLL 急性非淋巴细胞性白血病23、AML 急性髓细胞性白血病24、AGL 急性粒细胞性白血病25、AmoL 急性单核细胞性白血病26、AmmL 急性粒-单核细胞性白血病27、AmgKL(AmKBL) 急性巨核细胞性白血病28、APL 急性早幼粒细胞性白血病29、AEL 急性红白血病30、CML 慢性髓细胞性白血病（慢粒）31、CGL慢性单核细胞性白血病32、CmmL 慢性粒-单核细胞性白血病33、CLL 慢性淋巴细胞性白血病34、CmL-BC 慢性粒细胞性白血病急性变35、PCL 浆细胞白血病36、PLL 幼淋巴细胞性白血病37、MAL 混合性白血病38、HAL 低增生性白血病39、HCL 毛细胞白血病40、ATL 成人T细胞白血病41、CNSL 中枢神经系统白血病42、G-ALL 颗粒性急性淋巴细胞白血病43、H-ALL 手镜形急性淋巴细胞白血病44、T-ALL T细胞急性淋巴细胞白血病45、B-ALL B细胞急性淋巴细胞白血病46、C-ALL 普通型急性淋巴细胞白血病47、LSL 淋巴肉瘤白血病48、MH 恶性组织细胞病49、MDS 骨髓增生异常综合症50、MPD 慢性骨髓增殖性疾病51、MF 骨髓纤维化52、MM 多发性骨髓瘤53、ML 恶性淋巴瘤54、HD 霍奇金病55、NHL 非霍奇金淋巴瘤56、Chl 绿色瘤57、HX 组织细胞增生症X58、L-SD 勒雪病59、HSCD 韩-薛=柯病60、GD 高雪病61、N-PD 尼曼-匹克病62、SHH 海蓝组织细胞增多症63、AP 过敏性紫癜64、SLE 系统性红斑狼疮65、AG 粒细胞减少症66、PV 真性红细胞增多症67、ITP 原发性血小板减少性紫癜68、LR 类白血病反应69、lm 传染性单核细胞增多症70、Hm 脾功能亢进71、DIC 弥漫性血管内凝血72、POX 过氧化物酶染色73、SB(SBB) 苏丹黑B染色74、ALP 碱性磷酸酶染色75、NAP 中性粒细胞碱性磷酸酶染色76、ACP 酸性磷酸酶染色77、NAE 非特异性酯酶染色78、ANAE 酸性非特异性酯酶染色79、CE 特异性酯酶染色80、MPO 髓性过氧化物酶染色81、PPO 血小板过氧化物酶染色82、PAS 过碘酸席夫染色（糖原染色）83、NBT 硝基蓝四氮唑染色84、TaT 末端脱氧核苷酸转移酶85、UHT 尿水解试验。
9.3 血细胞的细胞化学染色
第三节血细胞的细胞化学染色概念以细胞形态学为基础，根据化学反应的原理，应用骨髓涂片进行固定、化学反应显色、复染等程序染色，在光学显微镜下观察细胞的化学成分（如酶类、糖类、铁等）及其变化的一种检验方法。
常用的细胞化学染色1.过氧化物酶染色（ MPO, Myeloperoxidase )2.中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）Neutrophil alkalinephosphatase3.糖原染色（PAS）4.非特异性酯酶（NSE）5.铁染色（Iron stain ）1. Myeloperoxidase1.1 原理：联苯胺蓝亚硝基铁氰化钠过氧化物酶底物H 2O 2 O 2联苯胺 蓝黑色颗粒粒细胞系单核细胞系The members of the granulocytic series contain an enzyme, peroxidase, whichliberates the oxygen from hydrogen peroxide. This enzyme is more prominent in mature forms. A benzidine derivative is used as an indicator of peroxidase activity. The indicator is oxidized and precipitates in the form of brown to blue granules. This stain is used to help differentiate leukemias.阳性•粒细胞，单核细胞阴性•淋巴细胞，红细胞，浆细胞，巨核细胞强阳性阴性弱阳性1.3 临床意义（Clinical Significance）主要用于急性白血病的鉴别:①急性粒细胞白血病 ---强阳性②急性单核细胞白血病---弱阳性或阴性③急性淋巴细胞白血病---阴性2.中性粒细胞碱性磷酸酶(neutrophil/leukocyte alkaline phosphatase, NAP orLAP)染色2.1 原理（principle)：碱性磷酸酶分解底物黑色2.2 参考值（reference）:成人NAP 阳性率：10%~40%积分： 40~80*(0) No stain*(+1) Faint stain*(+2) Moderate stain*(+3) Strong stain*(+4) Strong stain without cytoplasmic background2.3 临床意义NAP活性增高NAP活性减低或阴性细菌性感染病毒性或寄生虫感染中性粒细胞类白血病反应慢性粒细胞白血病（慢性期）真性红细胞增多症阵发性睡眠性血红蛋白尿多发性骨髓瘤，霍奇金病3. 过碘酸-雪夫反应( 糖原染色 ) （periodic acid-Schiff reaction，PAS）多糖类物质含有乙二醇基双醛基过碘酸氧化无色Schiff试剂紫红色【正常参考值】1.红系：正常有核红细胞---→阴性2.淋巴系：多为阴性，随着成熟，阳性率略微增加3.单核细胞：弱阳性4.巨核细胞和血小板：阳性5.粒细胞系统:分化差的原粒细胞---→阴性；分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞---→阳性•【临床意义】1.鉴别红白血病(AML-M6): 幼稚红细胞呈强阳性2.鉴别：急性淋巴细胞白血病：呈红色粗颗粒状或块状急性粒细胞白血病：细颗粒状弱阳性或阴性3. 鉴别Gaucher和Niemann-Pick：Gaucher强阳性4. 非特异性酯酶（NSE）特性：•非特异性酯酶主要存在于单核系细胞中•原始单核细胞---→阴性•幼单核、成熟单核---→阳性• NSE可以被氟化钠（NaF）抑制急性单核细胞白血病（M4) acute monocyticleukemiaNaF抑制YES急性粒细胞白血病（AML-M1）No5. Iron Stain（铁染色）原理：单核巨噬细胞系统幼稚红细胞铁低铁氰化钾铁氰化铁沉淀3.2 Result：①细胞外铁: ＋1～＋2•②细胞内铁：20％～90％•3.3 临床意义（Clinical Significance）缺铁性贫血铁粒幼细胞贫血细胞外铁(－)> +2细胞内铁<15%环状铁粒幼红细胞>15%。
骨髓细胞化学染色
铁染色
[原理] 机体多余的铁以铁蛋白及含铁 血黄素的形式储存。这些铁与低 铁氰化钾在酸性溶液中发生反应 而呈蓝色。
[试剂]
40g/l亚铁氰化钾溶液。 4%盐酸（38%浓盐酸40ml，小 心倒入340ml冷蒸馏水中，混匀） 20g/l伊红溶液。 甲醛溶液。
[方法]
取骨髓片2张，加固定液固定10min， 水洗待干。 将II缓缓滴入I内，混合后染液滴于骨髓 涂片上， 37°C放置60分钟，流水冲洗 数分钟 流水冲洗，一张待干观察外铁，一张冲 洗后用核固红复染1分钟，冲洗待干，观 察细胞内铁。
[注意事项]
1.标本宜新鲜，若不能及时测定可先用 固定液处理后，可保存数天。 2.基质液配制后要及时应用，以免失效 或降低阳性强度。 3.基质液为一次性使用，配制后不能反 复应用。
[临床意义]
1.各种急、慢性粒细胞性白血病，其NAP积分 可降低甚至为零。 2.各种炎症（细菌性），手术后，灼伤等NAP 积分均可升高。 3. NAP活性对下列疾病有鉴别诊断价值： 1）.慢性粒细胞白血病与类白血病反应的鉴别 2 ）.慢性粒细胞白血病与其他骨髓增生性疾病 的鉴别
阳性的中性粒细胞
阳性的原始粒细胞和阴性的淋 巴细胞
阳性的粒细胞和阴性的巨核细 胞
[临床意义]
用于鉴别急性粒细胞白血病、急性 单核细胞白血病、急性淋巴细胞白 血病。POX主要存在于粒系细胞中， 细胞越成熟，其反应越强。原始单 核细胞呈阴性，幼稚单核细胞和成 熟单核细胞呈弱阳性反应。淋巴系、 巨核系、红细胞系各阶段细胞均呈 阴性反应。
环形铁粒幼红细胞
[参考值]
1.细胞内铁：计算100个中幼红细胞、 晚幼红细胞，计数阳性率，正常值2045%；铁颗粒1-5粒，一般不超过10 粒。 2.细胞外铁：观察骨髓小粒中巨噬细 胞胞浆内蓝色颗粒。正常为（+）或 （++）。
血液学血细胞化学染色
【原理】
乙二醇基 过碘酸
(多糖类物质含有) 氧化
双醛基
雪夫试剂中 的无色品红
紫红色化合物 (附于含多糖类
的胞浆内)
编辑ppt
【结果判断】
阳性 胞浆内红色阳性物呈弥散状、颗 粒状或块状。
阴性 胞浆内无色或无颗粒,核淡绿。
编辑ppt
【正常血细胞染色反应】
1.粒细胞系统 分化差的原粒细胞为阴性； 分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞
呈颗粒状或块状阳性（含血小板）。
编辑ppt
【临床评价】
1.红血病或红白血病 幼红细胞阳性 巨幼细胞性贫血 幼红细胞阴性
编辑ppt
编辑ppt
3.鉴别急性白血病类型 （1）急性淋巴细胞白血病
阳性率20%-80%，呈红色粗颗粒状 或块状。
编辑ppt
（2）急性粒细胞白血病
少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。
(蓝色沉淀在含Fe部位)
骨髓小粒中的含Fe血黄素（细胞外铁） 骨髓中贮存铁
幼红细胞内的Fe（编辑细ppt胞内铁）
【结果判断】
幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝 绿色。
编辑ppt
➢ 细胞外铁 低倍镜观察涂片尾部和骨髓小粒,细
胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬 细胞浆内，呈蓝色颗粒状、小珠状或团 块状。
（3）急性单核细胞白血病
可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时 胞质边缘处颗粒较粗大。
编辑ppt
α-醋酸萘酚酯酶染色
（α-naphthol acetate esterase，α-NAE）
编辑ppt
α-醋酸萘酚
（基质液中）
【原理】
水解 α-醋酸萘酚酯酶 （细胞内）
α-萘酚
重氮盐
血细胞化学染色方法汇总笔记
中文名称英文名称 粒系淋系分化差原粒 (-), 分化好原 过氧化物酶粒至中性成熟粒（ +），（- ） POX嗜酸性粒阳性最强，嗜碱 染色性粒（ - ）。
细胞越成熟越强。
分化差原粒 (-), 分化好原 过碘酸-雪粒至中性成熟粒（ +），一般为 (-) PAS嗜酸性粒颗粒不着色，颗 夫反应粒间胞浆阳性，嗜碱性粒(+) 。
细胞越成熟越强。
中性粒细胞中性成熟粒细胞 (+)(-)碱性磷酸酶 NAP 染色单核（ - ）/( ±)分化差原单 (-) ；其余 (+)(-)α- 醋酸萘一般(-) ，少数 ( ±) ， 一般 (-) ，少数 原单(-) 或( ±) α-NAE(±)，幼单或单核 (+) 酚酯酶染色阳性不被 NaF 抑制阳性不被 NaF 抑制阳性可被 NaF 抑制原粒(-) 或( ±) ，早幼粒 氯乙酸 AS-D 至成熟粒 (+) ，活性不随萘酚酯酶染 AS-D NCE细胞成熟而增强。
嗜酸性 (-)(-)色粒(-) 或( ±) ，嗜碱性粒细胞 (+)醋酸AS-D 萘原粒(-) 或( ±) ，早幼粒 一般 (-) ，少数原单(-) 或( ±) AS-D NAE至成熟粒 (+) ，阳性不被 (±)，幼单或单核 (+) 酚酯酶染色NaF 抑制阳性不被 NaF 抑制阳性可被 NaF 抑制碱性α - 丁酸萘酚酯酶α-NBE 染色酸性磷酸酶ACP染色分化差原单 (-) ，(-)B淋(-) ，其余 (+)分化好原单至成熟单(+) ，阳性可被NaF抑制(+)(+)(+)铁染色细胞内外铁染成蓝色，定位于含铁的部位；根据蓝色铁颗粒的多少、粗巨核细胞红系浆细胞组织细胞血小板(-)(-)(-)(-)(-) (+)(-)一般为(-)(+) (-)(-)(-)(-)(-)一般 (-) ，少数(+)(±)，(-)(+)阳性不被NaF抑制(-)(-)(-)(-)(-)早幼红(±)，随细胞成熟(+)强度减(+)弱，阳性不被 NaF抑制(-) 或(-) 或(-) 或(+) ，阳(-) 或(±)，阳 (±)，阳 (±)，阳(±)，阳性不被性不被性不被性不被 NaF NaF抑制性不被NaF抑制NaF抑制抑制NaF抑制(+)(+)(+)(+)少、粗细分为 I/II/III/IV型/环型铁粒幼红细胞。
实验室做细胞常用染色
实验室做细胞常用的细胞固定与染色方法一、爬片前盖玻片处理方法对于悬浮培养的细胞，在进行各种染色前常需先制备成涂片。
为了保证细胞在长时间的染色过程中不从载玻片脱落，必须使其牢固贴附于载玻片上。
在载玻片上涂布一层有助于细胞黏附的物质是经常采用的方法之一。
能促进细胞黏附的物质主要有多聚赖氨酸、铬矾明胶等，这里介绍多聚赖氨酸的涂布方法。
1、将载玻片用玻璃专用洗涤剂(如Decon)浸泡5min，间或振荡。
2、用自来水冲洗5min。
3、以1％盐酸—70％乙醇溶液浸泡5min。
4、烤箱干燥(至此即可用于普通染色)。
5、多聚L-赖氨酸(1:10溶于去离子水)浸泡5min，振荡。
6、入60℃烤箱1 h，或室温过夜干燥(用于细胞化学、免疫细胞化学及原位杂交细胞化学)。
二、细胞固定常用方法固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避免组织和细胞发生降解、自溶、腐败和变形等，使细胞和组织内的各种酶失去活性，防止细胞和组织的各种分子变性、解离，使细胞的化学物质和酶能准确定位，并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。
同时，固定还可使细胞的各部分易于着色，适于观察、长期保存和分析。
1.固定组织、细胞的基本原则：尽可能选用新鲜培养物；根据检测工具、对象、目的和要求选择固定剂和固定方法。
2.培养物的准备和固定前处理：各种细胞培养物，如双盖片悬滴培养物、悬液培养物、单层培养物和盖片单层培养物都可作固定材料。
对双盖片悬滴培养物和悬液培养物来说，常通过离心收集细胞，PBS漂洗2～3次后，备固定制片；对盖片单层培养物来说，将盖片从培养器皿中取出后，PBS液漂洗2～3次，以洗去血清和附着于细胞表面的残渣，备固定用。
3.常用固定液：常用的固定液分两类，一类是以单一化学物质配成的固定液，称简单固定液。
主要有甲醇、乙醇、甲醛、醋酸、丙酮、戊二醛、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞、氯化镉、四氧化锇(锇酸)。
另一类是用两种或两种以上化学物质配合成的固定液，称混合固定液。
细胞化学染色
3．单核细胞系统：除早期原始阶段外皆呈弱 阳性反应。其颗粒细小，弥散分布，可覆 盖核上，有的也可呈阴性反应。
4．正常网状细胞(分化型)及吞噬细胞：可呈 不同程度阳性反应。
5．淋巴细胞、浆细胞、红细胞、巨核细胞系 统等：均为阴性。
6．Auer小体：呈阳性。
【临床意义】
POX染色是鉴别急性粒细胞白血病(简 称急粒)、急性单核细胞白血病(简称急单)、 急性淋巴细胞白血病(简称急淋)类型的重 要细胞化学方法。
二、铁 染 色(Iron Stain)
【目的和原理】 骨髓小粒中的含铁血黄素称细胞外铁，
其中的三价铁与分子中的蛋白质结合不牢， 经稀盐酸处理后而游离，并能在酸性亚铁 氰化钾溶液中产生普鲁士蓝反应。细胞内 铁也可用此法显示。
【材料】
1.酸性亚铁氰化钾溶液
取200g／L亚铁氰化钾溶液置于试管中，缓 缓滴加浓盐酸，边滴边摇匀，至出现白色沉淀， 再滴加200g／L亚铁氰化钾溶液，亦边滴边摇匀， 至白色沉淀消失为止，备用。
(++)：有较多的铁颗粒和小珠。
(+++)：有很多的铁颗粒、小珠和少数小 块状。
(++++)：有极多铁颗粒、小珠，有很多 的小块，密集成堆。
(3)细胞内铁：用油镜计数100个中、晚幼红 细胞，记录胞浆中含有蓝色铁粒的细胞(铁 粒幼红细胞)的百分率。并根据细胞内铁颗
粒的数目、大小、染色深浅和颗粒分布情
1．急性粒细胞白血病：细胞分化较好时，原 始粒细胞呈阳性反应，阳性率可>30%， 在分化较差的白血病，如AML-M0和未分 化型（AML-M1）的部分病例，原粒细胞 的POX染色也可呈阴性。
2．急性早幼粒细胞白血病时白血病细胞呈强 阳性反应。
试验十二常用血细胞化学染色
实验十二常用血细胞化学染色Cytochemistry stain for blood cells一、过氧化物酶染色染色原理粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有髓过氧化物酶(myeloperoxidase, POX或MPO),能将底物H202分解，产生新生态氧，新生态氧可氧化四甲基联苯胶成联苯胺蓝。
联苯胺蓝自我脱氢氧化形成棕色的四甲基苯酿二胺，后者与亚硝基铁氧化纳结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色颗粒，沉淀于细胞质内酶所在的部位。
试剂器材1．1%TMB(3,5,31,5f一四甲基联苯胶)乙醇溶液:0.1g TMB溶于100mL88%乙醇溶液中，置棕色瓶内，冰箱保存。
2．亚硝基铁氧化锅饱和溶液在少量蒸馏水中加入亚硝基铁氰晶体，至不再溶解为止，置棕色瓶内，冰箱保存。
3．1%过氧化氢溶液取30%H2021mL加入蒸馆水29mL。
4．稀过氧化氢溶液1%H2021滴，加10 mL蒸馏水稀释(新鲜配制)。
5．瑞氏(Wright)染色液。
6．新鲜涂片(骨髓或血片)、染色架、洗耳球、光学显微镜等。
操作步骤1．取0.1%TMB乙醇溶液1mL，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10μL，溶液呈淡棕黄色，染色液应临用前配制。
2．在新鲜干燥的血片或骨髓涂片上，加0.1%TMB一亚硝基铁氰化钠饱和溶液0.5mL，放置lmin，再加稀H202溶液0.7mL，吹匀，染色6min。
3．自来水冲洗，待干，用瑞氏染液复染15~20 min。
4．自来水冲洗，待干，用油镜镜检。
注意事顶1．血涂片或骨髓涂片应新鲜制作，涂片应厚薄适宜。
2．TMB配制在85%~88%的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90%~95%乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而导致染色效果差。
3．H202需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。
涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示H202过浓。
若H202加于血片上不产生气泡，则示无效。
4．染色液pH应为5.5。
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浆细胞-
白系：急粒：均匀红色细颗粒，急淋;红色粗颗粒或块状，急单：弥散分布细颗粒状
嗜碱性粒细胞紫红色颗粒
巨噬细胞+
其他：不典型巨核+和霍奇金细胞或Reed-Sternberg-；戈谢细胞+和尼曼-皮克+；白血病细胞+和腺癌细胞-
碱性磷酸酶NAP
灰褐色到深黑色颗粒状/片状
主要存在成熟中性粒，巨噬细胞+，其余细胞-
骨髓增生异常综合征：铁粒幼增高，常见环形铁粒幼
环形铁粒幼红：>5颗蓝色颗粒，围 Nhomakorabea核周1/3者
非缺铁性贫血（溶贫，营养性巨幼贫，再障贫，白血病）：外铁和铁粒幼均正常或升高
参考值：外铁：+到++，大多++。内铁：12%-44%
外铁增加：感染，肝硬化，慢肾炎，尿毒症，血色病，多次输血
急粒-单：单核细胞+并被NaF抑制，粒细胞-并不NaF抑制
碱性α-丁酸萘酚酯酶NBE（单核细胞）
蓝色颗粒
各期均为-
分化差的原单-
T淋巴+
巨核/幼红/浆-或+-
与NAE相同
分化好原单+被NaF抑制
非T和非B+
组织细胞+
幼单和单核+被NaF抑制
B淋巴-
不被NaF抑制
氯乙酸-AS-D萘酚酯酶NCE（粒细胞特有）
细胞化学染色的临床应用
化学染色
结果
正常血细胞的染色反应
临床意义
粒系
单核系
淋巴系
其他
过氧化物酶POX
棕黑色颗粒
分化差的原粒-
原单-
淋巴-
巨核细胞-，PLT-
急粒+，急淋-，急单-/-+
分化好的原粒到成中粒+
幼单+-
组织细胞-
急早幼粒+，急单-
嗜酸性粒细胞+
单核+-
浆细胞-，幼红细胞-
小型原粒+，原淋-
铁染色
蓝色亚铁氰化铁沉淀
细胞外铁：骨髓小粒中，呈弥漫蓝色，颗粒，小珠，块状。分-，+，++，+++，++++
缺铁贫：外铁减低甚至消失，铁粒幼红的百分率减低
细胞内铁：100个中/晚幼红中铁粒幼红百分比。
铁粒幼贫血：出现较多环形铁粒幼，铁粒幼增多，
铁粒幼红：胞质中有蓝色铁颗粒，分Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ型及环形铁粒幼红
嗜碱性粒细胞-
升高见于再障，感染，急/慢淋。降低见于急/慢粒，急单，骨髓增生综合症，放射病
过碘酸-雪夫试验PAS
红色颗粒，块状，弥漫状
分化差的原粒-
原单-
大多数-
巨核细胞+，PLT-
红系：幼红+见于：缺铁贫，地中海贫血，骨髓增生异常
分化好的原粒到成中粒+
幼单+
红系：幼红和红-
幼红-见于：巨幼贫，溶贫，再障贫，白血病时
再障升高和PHD减低；真性RBC升高和继发RBC不变；恶性淋巴瘤升高和恶组减低；原发PLT升高和继发PLT减低
酸性磷酸酶ACP
鲜红色颗粒
粒细胞/单核/淋巴/巨核/PLT/浆细胞/巨噬细胞+
戈谢细胞+和尼曼-匹克-
多毛细胞白血病+并耐L-酒石酸的抑制和慢淋+并可被L-酒石酸的抑制
T淋巴细胞+和B淋巴细胞-
棕黑色颗粒
原粒-/+
原单-/+
淋巴+-
巨核细胞+，PLT+
急粒：原粒+，不被NaF抑制
早幼粒到成中粒：+到++
幼单到单：++到+++
早幼红+，逐渐减弱
急单：原单，幼单和单军+，被NaF抑制
不被NaF抑制
被NaF抑制
不被NaF抑制
不被NaF抑制
急粒-单：单核细胞+并被NaF抑制，粒细胞-并不NaF抑制
升高见于：细菌感染，急淋，慢淋，淋巴瘤，髓纤维化，原发PLT增多，真性RBC增多，慢粒，慢中粒，再障
积分值：油镜下数100个成熟中性粒。-/0，+/1，++/2，+++/3，++++/4
减低见于：慢粒（慢性期），PHD，骨髓增生异常综合症，恶组
参考值：30-130
细菌感染升高和病毒感染不变；类白血病升高和慢粒降低；慢中粒升高和慢粒减低；急淋增加和急粒减低
α-乙酸萘酚酯酶NAE（多种细胞中）
棕黑色颗粒
多数阴性，
原单-/+-
淋巴-
巨核细胞+，PLT+
单核细胞白血病：原单+，幼单和单核大多+，被NaF抑制，抑制率>50%
少数阳性，不被NaF抑制
幼单+被NaF抑制
浆细胞-
急粒和急淋均为-，个别细胞+（主要见于T淋巴细胞型急淋），不NaF抑制
单核+被NaF抑制