金免疫技术(参考研究)

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二、方法类型
• 双抗体夹心法测抗原
A
G
T
C
B
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• 竞争法测抗原
A
G
T
C
B
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三、关键技术
（一）试剂盒组成
A、B两端分别粘贴吸水材料，G处为干燥固定在玻璃纤 维膜等材料上的胶体金结合物，T处粘附有已知的抗体 或抗原，C处为粘附的质控品（抗免疫金抗体），T、C 点物质往往以直线的形式包被在膜上。
层析 待 测 标 本
吸 水 垫
金标抗体
包 被
抗
体
包 被 抗 金
标
NC
抗 体
结
膜
合
观
物
察
垫
窗
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吸 水 垫
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阳性 阴性 无效
结果观察
TC
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• 金免疫技术具有操作简便、快速以及操作人员不需 技术培训，除试剂外无需特殊仪器设备，且试剂稳 定，便于保存等优点，因此特别适用于急诊检验。
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优质
胶体金
劣质
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第一节 胶体金免疫渗滤技术
• 免疫渗滤试验始创于1985年，最初以酶作为标记物。 • 20世纪90年代初金免疫渗滤技术得到了快速发展，用
于检测各种传染病的抗体和肿瘤标志物等。 • 目前临床中用于检测尿液HCG的“金标”早孕诊断试
剂就是应用这种方法。
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前言
• 金免疫技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原/ 抗体检测的一种免疫标记技术。
• 该类试验的最大特点是不需要大型设备，对检测人员 稍加培训即能掌握操作要求和判定标准。
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• 胶体金也称金溶胶，是由金盐被还原成原金后形成 的金颗粒悬液。
• 胶体金颗粒大小多在1nm～100nm，微小金颗粒稳定 、均匀、呈单一分散状态悬浮在液体中，成为胶体 金溶液。
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三、关键技术
（一）试剂盒组成
• 胶体金反应板 • 胶体金标记物 • 洗涤液 • 抗原参照品或抗体阳性对照品
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（二）技术要点
1 将反应板平放于实验台面上，于小孔内滴加含待 测抗原的标本1～2滴，待完全渗入，待测抗原与 膜上的抗体反应而结合在膜上。
2 于小孔内滴加胶体金标记抗体试剂1～2滴，待完 全渗入，使胶体金标记抗体与结合在膜上的待测 抗原反应。
A
B
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。
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第二节 胶体金免疫层析技术
• 免疫层析技术的原理与渗滤技术相同，不同点在于液 体的移动是基于层析作用的横流，而不是通过直向的 穿流。
• 该方法的试剂为试纸条形式，结构简单。 • 测定项目包括HCG等激素、肿瘤标志物、心血管病标
志物、传染病的抗原和抗体等。
免疫学检验
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第二十章 金免疫技术
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本章要点
1. 胶体金免疫渗滤技术的检测原理、方法类型和 关键技术。
2. 胶体金免疫层析技术的检测原理、方法类型和 关键技术。
3. 金免疫技术的方法学评价及临床意义。
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目录
1 胶体金免疫渗滤技术 2 胶体金免疫层析技术
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3 于小孔内滴加洗涤液2～3滴，待完全渗入，洗去 未结合的胶体金标记抗体。
4 在膜中央有清晰的淡红色或红色斑点显示者判定 为阳性反应；反之则为阴性反应。斑点呈色的深 浅相应地提示阳性强度。
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双抗体夹心法测抗原
待测标本 金标抗体
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一、检测原理
将各种反应试剂分点固定在试纸条上，检测标本滴 加在试纸条的一端，通过层析作用使样品在层析材 料上泳动，样本中的待测物与试纸条上的试剂发生 特异性结合反应，形成的复合物被富集或固定在层 析条上的特定区域（检测线），无关物则越过该区 域而被分离，通过胶体金的呈色条带判读实验结果。
• 目前临床检验中已开展的项目有：HCG、HBV等。新 项目正在不断发展中。
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小结
• 金免疫技术是以胶体金作为标记物的免疫标记技 术。
• 胶体金免疫渗滤试验是将硝酸纤维素膜上包被抗 原或抗体，将其置于渗滤装置中，进行免疫结合 试验，抗原抗体反应后，形成大分子胶体金复合 物，从而使阳性结果在膜上呈现红色斑点。
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一、检测原理
• 将抗原或抗体点加在固相载体硝酸纤维素膜上，制成 抗原或抗体包被的微孔滤膜并贴置于吸水材料上，依 次在膜上滴加标本、免疫金及洗涤液等，液体很快渗 入吸水材料中，阳性反应即在膜上呈现红色斑点。
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二、方法类型
• 双抗体夹心法测抗原 • 间接法测抗体
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• 胶体金免疫层析试验是以硝酸纤维素膜为载体将胶 体金标记技术和蛋白质层析技术相结合的免疫分析 技术。原理与渗滤试验相同，不同的是液体的移动 不是通过直向的穿流作用，而是基于层析作用的横 流。
• 方法学评价 金免疫技术简便、快捷，应用广泛，适 合“床边检验”。
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A
G
T
C
B
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（二）技术要点
以双抗体夹心法为例： 1 将试纸条标记线一端浸入待测标本中2秒～5秒或在
标本加样处加一定量的待检标本，平放于水平桌面 。 2 5min～20min内观察结果。 3 结果判断。
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双抗体夹心法测抗原