生物化学简明教程第四版15章蛋白质的生物合成
Ch15-Gangan生化课件- 蛋白质的生物合成
生物化学
第十五章 蛋白质的生物合成
蛋白质合成过程
起始 延长
终止
厚德 博学 精诚 济世
生物化学
第十五章 蛋白质的生物合成
二、肽链的延长
肽链的延长是在核蛋白体上连续性循环式 进行，又称为核蛋白体循环（ribosomal cycle)，每次循环增加一个氨基酸，分为 以下三步：
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第十五章 蛋白质的生物合成
S-D序列
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第十五章 蛋白质的生物合成
3. 起始氨基酰tRNA与小亚基结合
IF-2 GTP
5' IF-3
AUG
3' IF-1
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第十五章 蛋白质的生物合成
4. 核蛋白体大亚基结合
GTP Pi IF-2 GDP
1961年，Nirenberg 证明了mRNA的模板 作用。
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第十五章 蛋白质的生物合成
mRNA结构简图
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第十五章 蛋白质的生物合成
密码子（codon）
mRNA上存在遗传密码 mRNA分子上从5至3方向，由AUG开
始，每3个核苷酸为一组，决定肽链上某一 个氨基酸或蛋白质合成的起始、终止信号， 称为三联体密码（triplet codon）。
第十五章 蛋白质的生物合成
肽链合成起始
指mRNA和起始氨基酰-tRNA分别与核 蛋白体结合而形成翻译起始复合物 (translational initiation complex)。
生物化学简明教程第四版课后习题
生物化学简明教程（第四版)课后习题————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期:２蛋白质化学１.用于测定蛋白质多肽链N端、C端的常用方法有哪些？基本原理是什么？解答:（1) N-末端测定法:常采用2,4―二硝基氟苯法、Edman降解法、丹磺酰氯法。
①2,4―二硝基氟苯(DNＦＢ或FＤNB)法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与2,4―二硝基氟苯(2,4―DNFB）反应(Sａngeｒ反应)，生成ＤNP―多肽或DNＰ―蛋白质。
由于ＤNＦB与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此DNP―多肽经酸水解后,只有N―末端氨基酸为黄色DNＰ―氨基酸衍生物,其余的都是游离氨基酸。
②丹磺酰氯(DNS)法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯（DNS―Ｃl)反应生成DＮＳ―多肽或DNS―蛋白质。
由于DＮS与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定,因此DNS―多肽经酸水解后,只有N―末端氨基酸为强烈的荧光物质ＤNＳ―氨基酸，其余的都是游离氨基酸。
③苯异硫氰酸脂(ＰITＣ或Edman降解)法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与异硫氰酸苯酯(PITＣ）反应(Eｄman反应),生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。
在酸性有机溶剂中加热时，N―末端的PTC―氨基酸发生环化，生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来,除去N―末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。
④氨肽酶法：氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶，能从多肽链的N端逐个地向里切。
根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量，按反应时间和残基释放量作动力学曲线，就能知道该蛋白质的N端残基序列。
（2)Ｃ―末端测定法：常采用肼解法、还原法、羧肽酶法。
肼解法：蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解，反应中除C端氨基酸以游离形式存在外,其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。
②还原法:肽链C端氨基酸可用硼氢化锂还原成相应的α―氨基醇。
大学生物化学课件蛋白质的生物合成
核糖体结合的分子伴侣
非核糖体结合性分子伴侣— 热休克蛋白 伴侣蛋白
(1)热休克蛋白（heat shock protein, HSP )：
属于应激反应性蛋白，高温应激可诱导该蛋白 合成增加。
在大肠杆菌中包括HSP70, HSP40和GrpE三族
Peptidyl site （P Site）
E位
Aminoacyl site （A Site）
mRNA
肽链合成需要酶类和蛋白质因子
• 蛋白质因子： • （1）起始因子 • 原核生物 IF； 真核生物 eIF • （2）延长因子 • 原核生物 EF； 真核生物 eEF • （3）释放因子 • 原核生物 RF； 真核生物 eRF
第二节 蛋白质生物合成的过程
翻译过程从阅读框架的5’-AUG开始，按mRNA 模板三联体密码的顺序延长肽链，直至终止密码 出现。
整个翻译过程可分为三个阶段：
起始(initiation）
延长（elongation)
终止(termination)
一、肽键合成的起始（Initiation）
多肽链合成后需要逐步折叠成天然空间构象才成为有 功能的蛋白质。
时间： 新生肽链N端在核蛋白体上一出现，肽链的折叠
即开始，折叠在肽链合成中、合成后完成。
细胞中大多数天然蛋白质折叠都不是自动完 成，而需要其他酶、蛋白质辅助 ：
•
分子伴侣
•
蛋白二硫键异构酶
•
肽-脯氨酰顺反异构酶
1．分子伴侣*（molecular chaperon）
需要：
转位酶（原核生物中是EFG，真核生物中是eEF-2）， GTP 结果：
生物化学习题与解析--蛋白质的生物合成
蛋白质的生物合成一、选择题（一） A 型题1 ．蛋白质生物合成A ．从 mRNA 的 3 ' 端向 5 ' 端进行B ．由 N 端向C 端进行C ．由 C 端向 N 端进行D ．由 28S-tRNA 指导E ．由 5S-rRNA 指导2 ．蛋白质生物合成的延长阶段不需要A ．转肽酶B ． GTPC ． EF-Tu 、 EF-Ts 、 EFGD ． mRNAE ． fMet-tRNA fMet3 ．有关蛋白质合成的叙述正确的是A ．真核生物先靠 S-D 序列使 mRNA 结合核糖体B ．真核生物帽子结合蛋白复合物（ eIF -4F 复合物）在起始过程中发挥作用C ． IF 比 eIF 种类多D ．原核生物和真核生物使用不同的起始密码E ．原核生物有 TATAAT 作为起始序列，真核生物则是 TATA4 ．关于氨基酸密码子的描述错误的是A ．密码子有种属特异性，所以不同生物合成不同的蛋白质B ．密码子阅读有方向性，从 5 ' 端向 3 ' 端进行C ．一种氨基酸可有一组以上的密码子D ．一组密码子只代表一种氨基酸E ．密码子第 3 位（ 3 ' 端）碱基在决定掺入氨基酸的特异性方面重要性较小5 ．遗传密码的简并性是A ．蛋氨酸密码可作起始密码B ．一个密码子可编码多种氨基酸C ．多个密码子可编码同一种氨基酸D ．密码子与反密码子之间不严格配对E ．所有生物可使用同一套密码6 ．遗传密码的摆动性正确含义是A ．一个密码子可以代表不同的氨基酸B ．密码子与反密码子可以任意配对C ．一种反密码子能与第三位碱基不同的几种密码子配对D ．指核糖体沿着 mRNA 从 5 ' 端向 3 ' 端移动E ．热运动所导致的 DNA 双螺旋局部变性7 ．一个 tRNA 的反密码子为 5 '- IGC-3 ' ，它可识别的密码是A ． GCAB ． GCGC ． CCGD ． ACGE ． UCG8 ．信号肽识别颗粒（ signal recognition particles ， SRP ）可识别A ． RNA 聚合酶B ． DNA 聚合酶C ．核小体D ．分泌蛋白的 N 端序列E ．多聚腺苷酸9 ．下列关于多聚核糖体（ polysome ）叙述正确的是A ．是一种多顺反子B ．是 mRNA 的前体C ．是 mRNA 与核糖体小亚基的聚合体D ．是核糖体大、小亚基的聚合体E ．是一组核糖体与一个 mRNA 不同区段的结合物10 ．关于蛋白质生物合成的描述哪一项是错误的A ．氨基酸必须活化成活性氨基酸B ．氨基酸的羧基被活化C ． 20 种编码氨基酸各自有相应的密码D ．活化的氨基酸靠相应的 tRNA 搬运到核糖体E ． tRNA 的反密码子与 mRNA 上的密码子严格按碱基配对原则结合11 ．核糖体结合位点（ ribosomal binding site ， RBS ）A ．也称 Pribnow 盒B ．在原核生物 mRNA 上C ．真核生物转录起点D ．由 Meselson-stahl 首先发现E ．在 tRNA 分子上12 ．翻译延长的进位A ．指翻译起始复合物的生成B ．肽酰 -tRNA 进入 P 位C ．由延长因子 EFG 带领，不需消耗能量D ．是下一位氨基酸的氨基酰 -tRNA 进入核糖体的 A 位E ．多肽链离开核糖体13 ．翻译延长需要A ．氨基酰 -tRNA 转移酶B ．磷酸化酶C ．氨基酸合成酶D ．肽链聚合酶E ．转肽酶14 ．蛋白质生物合成中多肽链的氨基酸排列顺序取决于A ．相应 tRNA 的专一性B ．相应氨基酰 -tRNA 合成酶的专一性C ．相应 tRNA 上的反密码D ．相应 mRNA 中核苷酸排列顺序E ．相应 rRNA 的专一性15 ．肽链合成终止的原因是A ．翻译到达 mRNA 的尽头B ．特异的 tRNA 识别终止密码C ．释放因子能识别终止密码子并进入 A 位D ．终止密码子本身具有酯酶功能，可水解肽酰基与 tRNA 之间的酯键E ．终止密码子部位有较大阻力，核糖体无法沿 mRNA 移动16 ．蛋白质合成终止时，使多肽链从核糖体上释出的因素是A ．终止密码子B ．转肽酶的酯酶活性C ．释放因子D ．核糖体解聚E ．延长因子17 ．蛋白质合成中，有关肽链延长叙述正确的是A ．核糖体向 mRNA5 ' 端移动三个核苷酸距离B ．肽酰 -tRNA 转位到核糖体的 A 位C ． GTP 水解成 GDP 和 H 3 PO 4 以提供能量D ．空载的 tRNA 从 P 位进入 A 位E ． ATP 直接供能18 ．多聚核糖体中每一核糖体A ．从 mRNA 的 3 ' 端向 5 ' 端前进B ．可合成多条多肽链C ．可合成一条多肽链D ．呈解离状态E ．可被放线菌酮抑制19 ．氨基酸通过下列哪种化学键与 tRNA 结合A ．糖苷键B ．酯键C ．酰胺键D ．磷酸酯键E ．氢键20 ．信号肽的作用是A ．保护 N- 端的蛋氨酸残基B ．引导分泌性蛋白进入内质网腔C ．保护蛋白质不被水解D ．维护蛋白质的空间构象E ．传递蛋白质之间的信息21 ．下列那一项是翻译后加工A ．加 5 ' 端帽子结构B ．加 3 ' 端 poly （ A ）尾C ．酶的激活D ．酶的变构E ．氨基酸残基的糖基化22 ．干扰素抑制蛋白质生物合成是因为A ．活化蛋白激酶，而使 eIF-2 磷酸化B ．抑制肽链延长因子C ．阻碍氨基酰 -tRNA 与小亚基结合D ．抑制转肽酶E ．使核糖体 60S 亚基失活23 ．下列哪一种物质抑制氨基酰 -tRNA 与小亚基结合A ．土霉素B ．氯霉素C ．红霉素D ．链霉素E ．林可霉素24 ．哺乳动物细胞中蛋白质生物合成的主要部位在A ．细胞核B ．线粒体C ．核糖体D ．高尔基复合体E ．核仁25 ．靶向输送到细胞核的蛋白多肽链含有特异信号序列，下列叙述错误的是A ．多肽链进细胞核定位后不被切除B ．位于 N 末端C ．不同多肽链的特异信号序列无共同性C ．富含赖、精及脯氨酸 E ．也称为核定位序列26 ．下列哪种物质直接抑制真核生物核糖体转肽酶A ．放线菌酮B ．四环素C ．土霉素D ．链霉素和卡那霉素E ．利福平27 ．氯霉素可抑制原核生物的蛋白质合成，其原因是A ．特异性的抑制肽链延长因子（ EFT ）的活性B ．与核糖体的大亚基结合，抑制转肽酶的活性，而阻断翻译延长过程C ．活化一种蛋白激酶，从而影响起始因子（ IF ）磷酸化D ．间接活化一种核酸内切酶使 mRNA 降解E ．阻碍氨基酰 -tRNA 与核糖体小亚基结合28 ．白喉毒素的作用是A ．抑制信号肽酶B ．与位于内质网膜表面的受体蛋白结合C ．使延长因子 -2 （ eEF-2 ）发生 ADP 糖基化而失活，阻断多肽链延长D ．加速肽酰 -tRNA 从 A 位移到 P 位，造成氨基酸缺失，从而生成无功能的蛋白质E ．通过抑制 GTP 和 fMet-tRNA fMet 在小亚基上的结合，抑制蛋白合成的起始29 ．出现在蛋白质分子中的氨基酸，下列哪一种没有遗传密码A ．色氨酸B ．蛋氨酸C ．谷胺酰胺D ．脯氨酸E ．羟脯氨酸30 ．在体内，氨基酸合成蛋白质时，其活化方式为A ．磷酸化B ．与蛋氨酸结合C ．生成氨基酰辅酶 AD ．生成氨基酰 -tRNAE ．与起始因子结合31 ．不属于蛋白质合成后加工修饰的过程为A ．肽链 N 端修饰B ．亚基聚合C ．疏水脂链的共价连接D ．多肽链折叠为天然构象的蛋白质E ．酶的化学修饰（二） B 型题A ．进位B ．成肽C ．转位D ．终止E ．释放1 ．氨基酰 -tRNA 进入核糖 A 位称为2 ．肽酰 -tRNA-mRNA 与核糖体位置的相互变更称为3 ． P 位上的肽酰基与 A 位上的氨基酰 -tRNA 的氨基形成肽键称为A ．链霉素B ．氯霉素C ．林可霉素D ．嘌呤霉素E ．白喉毒素4 ．对真核及原核生物蛋白质合成都有抑制作用的抗生素是5 ．主要抑制真核细胞蛋白质合成的是A ．蛋白质 6- 磷酸甘露糖基化B ．滞留信号序列C ．囊泡D ．分泌小泡E ．前体形式6 ．靶向输送至溶酶体信号是7 ．靶向输送至内质网的蛋白质多肽链 C- 端含8 ．质膜蛋白质的靶向输送需要A ．信号肽B ．信号肽酶C ．信号肽识别颗粒D ．分泌性蛋白E ．对接蛋白9 ．有碱性 N 端、疏水核心和加工区三个区域的是10 ．属于蛋白核酸复合体的是A ．肽键B ．酯键C ．氢键D ．磷酸二酯键E ．糖苷键11 ．核苷酸之间的连接键12 ．氨基酸之间的连接键13 ．碱基与核糖之间的连接键14 ．氨基酸与 tRNA 之间的连接键A ． RNase 抑制因子B ．干扰素C ．嘌呤霉素D ．红霉素E ．链霉素15 ．抑制 RNase 活性的是16 ．能诱导合成 2 ' -5 ' 寡聚腺苷酸的是17 ．与酪氨酰 - tRNA 结构相似的是（三） X 型题1 ．参与蛋白质合成的物质是A ． mRNAB ． GTPC ．转肽酶D ．核糖体E ．聚合酶2 ．翻译后加工包括A ．剪切B ．共价修饰C ．亚基聚合D ．加入辅基E ．水解修饰3 ．蛋白质合成后可靶向运输到A ．留在胞液B ．线粒体C ．细胞核内D ．内质网E ．溶酶体4 ．引起读码错误的抗生素有A ．巴龙霉素B ．链霉素C ．潮霉素 BD ．新霉素E ．嘌呤霉素5 ．真核生物的 hnRNA 要具有模板作用，必须进行A ．剪接B ．首尾修饰C ．插入稀有碱基D ．切除内含子E ．碱基甲基化6 ．关于 S-D 序列的叙述，正确的是A ．也称核糖体结合位点B ．与 16S rRNA 3 ' 端 --UCCUCC-- 互补C ．碱基序列 --AGGAGG-- 为核心D ．位于起始密码上游E ．即起始序列7 ．翻译的准确性与下列哪些因素有关A ．氨基酰 -tRNA 合成酶对底物氨基酸和相应 tRNA 都有高度特异性B ．氨基酰 -tRNA 分子中 tRNA 的反密码可通过碱基配对识别 mRNA 分子的遗传密码C ．氨基酰 -tRNA 合成酶具有校正活性D ．延长因子 EFG 有转肽酶活性E ．核糖体对氨基酰 -tRNA 的进位有校正功能8 ．关于分子伴侣A ．高温应激可诱导该蛋白合成增加B ．与分泌性蛋白同在C ．能加快多肽链折叠速度D ．增加功能性蛋白折叠产率E ．可促进需折叠的多肽链折叠为天然构象的蛋白质9 ．在蛋白质生物合成中A ． 20 种编码氨基酸是原料B ． tRNA 携带氨基酸C ． mRNA 起模板作用D ． rRNA 是合成的场所E ．氨基酰 -tRNA 合成酶识别并结合相应的氨基酸和 tRNA10 ．干扰素的作用是A ．调解细胞生长分化B ．激活免疫系统C ．抗病毒D ．间接诱导核酸内切酶E ．诱导使 eIF-2 磷酸化的蛋白激酶活化11 ．关于蛋白质二硫键异构酶A ．主要在内质网发挥作用B ．促二硫键变构C ．胞液中活性高D ．催化错配的二硫键断裂并形成正确二硫键E ．促蛋白质变性二、是非题1 ．蛋白质生物合成所需的能量都由 ATP 直接供给。
动物生物化学课件：蛋白质的生物合成
蛋白质的生物合成
将mRNA分子中 4 种核苷酸序列 编码的遗传信息，通过遗传密码破译的 方式解读为蛋白质一级结构中20种氨基 酸的排列顺序过程，称为蛋白质的生物 合成或翻译。
参与蛋白质生物合成的物质 蛋白质生物合成的过程
第一节 参与蛋白质生物合成的物质
参与蛋白质合成的物质
• 原料：20种氨基酸 • 模板：mRNA • 运载体：tRNA • 场所：核蛋白体（rRNA与蛋白质构成） • 蛋白质因子：
生物功能
占据A位防止结合其他tRNA 促进起始tRNA与小亚基结合 促进大、小亚基分离，提高P位对结合起始tRNA的 敏感性 促进起始tRNA与小亚基结合 最先结合小亚基促进大、小亚基分离 eIF-4F复合物成分，有解螺旋酶活性，促进mRNA 结合小亚基 结合mRNA，促进mRNA扫描定位起始tRNA eIF-4F复合物成分，结合mRNA5`-帽子 eIF-4F复合物成分，结合eIF-4E和PAB
➢ tRNA凭借自身的反密码子与mRNA链上的密码 子相识别，按照mRNA链上的密码子所决定的氨 基酸顺序将所带氨基酸转运到核糖体的特定部位。
一种氨基酸可以有一种以上tRNA作为 运载工具。通常把携带相同氨基酸而反密 码子不同的一组tRNA称为同功tRNA.
氨基酰tRNA----氨基酸的活化形式。 表示为： tRNAPhe
对应同一种氨基酸的不同密码子，称 为同义密码子。同义密码子使用频率不同.
在蛋白质中出现频率越多的氨基酸， 其密码子的数量越多。
4.密码子使用频率不同
• 在蛋白质合成时，对简并密码子的使用频率是 不同的。
• 如UUU和UUC都为苯丙氨酸编码，但在高表 达的蛋白质中使用UUC的频率明显高于UUU。
5. 密码子与反密码子配对的不严格性
【生物化学简明教程】第四版15章 蛋白质的生物合成
15 蛋白质的生物合成1．一个编码蛋白质的基因，由于插入一段4个核苷酸序列而被破坏的功能，是否可被一个核苷酸的缺失所恢复？解释原因。
解答：一个编码蛋白质的基因，如果插入4个核苷酸序列，就会发生移码突变，即从插入处开始此蛋白质的氨基酸顺序都发生了变化，导致此蛋白质功能的丧失。
但如果在此插入段相邻处缺失一个核苷酸，此蛋白质仅在插入处的几个氨基酸发生了改变，如果此变异不是蛋白质发挥功能必需的部位，那么此蛋白质可能恢复其功能。
2．一个双螺旋DNA片段的模板链含有顺序：5GTTAACACCCCTGACTTCGCGCCGTCG 3(a)写出从这条链转录产生的mRNA的碱基顺序；(b)从(a)中的mRNA的5-末端开始翻译产生的肽链的氨基酸顺序是什么?（参考密码表）(c)合成此多肽需消耗多少ATP解答：（a）转录产生mRNA的碱基顺序为：5-CGACGGCGCGAAGUCAGGGGUGUUAAC-3(b) Arg-Arg-Arg-Glu-Val-Arg-Gly-Val-Lys（不考虑起始密码和终止密码）(c) 在蛋白质合成过程中，每个氨基酸活化消耗2个高能键（ATP→AMP），进位和转肽各需要1个GTP，每往肽链中加入1个氨基酸要消耗4个ATP，所以以上肽链合成需要9×4=36个ATP（不考虑起始和终止）。
3．原核生物是如何区分AUG是起始密码还是多肽链内部Met的密码的?解答：原核生物在起始密码上游约10个核苷酸处(即-10区)通常有一段富含嘌呤的序列，称为SD序列（Shine-Dalgain sequence）。
SD序列可以与小亚基16S rRNA 3′-末端的序列互补，使mRNA与小亚基结合，使得核糖体能够识别正确的起始密码AUG。
而多肽链内部Met的密码前没有SD序列。
4．原核生物蛋白质合成体系由哪些物质组成？各起什么作用？解答：原核生物蛋白质合成体系的物质组成和作用。
详见15.1。
5．简述蛋白质合成的起始、延长和终止过程。
中国海洋大学资料生物化学课件第十五章 蛋白质合成(新)
（一）遗传密码的破译
* 美国科学家 Nirenberg 等， 1968 年获诺贝尔生 理学奖。 * 1961 年， Nirenberg 等人，在大肠杆菌的无细 胞体系中外加 poly(U) 模板、 20 种标记的氨基 酸，经保温后得到了多聚 phe-phe-phe ，于是 推测UUU编码phe。利用同样的方法得到 CCC 编码pro，GGG编码gly，AAA编码lys。 * 如果利用 poly （ UC ），则得到多聚 Ser-LeuSer-Leu，推测UCU编码Ser，CUC编码Leu。 * 到1965年就全部破译了64组密码子。
蛋白质合成时，mRNA结合于核糖体小亚基 上，大亚基结合带氨基酸的tRNA，tRNA的 反密码子与mRNA密码子配对，ATP供能， 合成蛋白质。
三、遗传密码
遗传密码：mRNA中的核苷酸序列与蛋白质 中氨基酸序列之间的对应关系称为遗传密码 三个碱基编码一个氨基酸称为三联体密码或 密码子（Coden）。 密码子的发现。
（1）在进入A位点之前，新氨酰tRNA首先必须与延伸因子EF— TU—GTP结合。 （2）延伸因子 EF—Tu是一个GTP结合蛋白，参与氨酰 tRNA的 就位。 （3）氨酰tRNA入位后，EF—TU—GTP水解，EF—TU—GDP从 核糖体上释放下来，在第二个延伸因子 EF—Ts 帮助下 EF— Tu—GDP 释 放 掉 GDP 并 重 新 结 合 一 分 子 GTP 再 生 成 EF— Tu—GTP。
简并性的生物学意义
A、减少有害突变：假如每种氨基酸只有一个密 码子，那么剩下的44个密码子都成了终止子， 如果一旦哪个氨基酸的密码子发生了单碱基的 点突变，那么极有可能造成肽链合成的过早终 止。如GUN 编码 Ala ，由于简并性的存在，不 论第三位的U变成什么，都仍然编码Ala； B、可以使DNA上的碱基组成有较大的变化余地， 而仍然保持多肽上氨基酸序列不变（意思基本 同上）。
生物化学简明教程(第四版)课后习题
2 蛋白质化学1．用于测定蛋白质多肽链N端、C端的常用方法有哪些？基本原理是什么？2,4―二硝基氟苯法、Edman降解法、丹磺酰氯法。
解答：（1） N-末端测定法：常采用2,4―二硝基氟苯(DNFB或FDNB)法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与2,4―二硝基①2,4―DNFB）反应（Sanger反应），生成DNP―多肽或DNP―蛋白质。
由于DNFB与氨氟苯（基形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此DNP―多肽经酸水解后，只有N―末端氨基酸为黄色DNP―氨基酸衍生物，其余的都是游离氨基酸。
②丹磺酰氯(DNS)法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯（DNS―Cl）反应生成DNS―多肽或DNS―蛋白质。
由于DNS与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此DNS―多肽经酸水解后，只有N―末端氨基酸为强烈的荧光物质DNS―氨基酸，其余的都是游离氨基酸。
③苯异硫氰酸脂（PITC或Edman降解）法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与异硫氰酸苯酯（PITC）反应（Edman反应），生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。
在酸性有机溶剂中加热时，N―末端的PTC―氨基酸发生环化，生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来，除去N―末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。
④氨肽酶法：氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶，能从多肽链的N端逐个地向里切。
根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量，按反应时间和残基释放量作动力学曲线，就能知道该蛋白质的N端残基序列。
（2）C―末端测定法：常采用肼解法、还原法、羧肽酶法。
肼解法：蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解，反应中除C端氨基酸以游离形式存在外，其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。
②还原法：肽链C端氨基酸可用硼氢化锂还原成相应的α―氨基醇。
肽链完全水解后，代表原来C―末端氨基酸的α―氨基醇，可用层析法加以鉴别。
③羧肽酶法：是一类肽链外切酶，专一的从肽链的C―末端开始逐个降解，释放出游离的氨基酸。
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1．一个编码蛋白质的基因，由于插入一段4个核苷酸序列而被破坏的功能，是否可被一个核苷酸的缺失所恢复？解释原因。
解答：一个编码蛋白质的基因，如果插入4个核苷酸序列，就会发生移码突变，即从插入处开始此蛋白质的氨基酸顺序都发生了变化，导致此蛋白质功能的丧失。
但如果在此插入段相邻处缺失一个核苷酸，此蛋白质仅在插入处的几个氨基酸发生了改变，如果此变异不是蛋白质发挥功能必需的部位，那么此蛋白质可能恢复其功能。
2．一个双螺旋DNA片段的模板链含有顺序：
5'GTTAACACCCCTGACTTCGCGCCGTCG 3'
(a)写出从这条链转录产生的mRNA的碱基顺序；
(b)从(a)中的mRNA的5-末端开始翻译产生的肽链的氨基酸顺序是什么?（参考密码表）
(c)合成此多肽需消耗多少ATP
解答：（a）转录产生mRNA的碱基顺序为：
5-CGACGGCGCGAAGUCAGGGGUGUUAAC-3
(b) Arg-Arg-Arg-Glu-Val-Arg-Gly-Val-Lys（不考虑起始密码和终止密码）
(c) 在蛋白质合成过程中，每个氨基酸活化消耗2个高能键（ATP→AMP），进位和转肽各需要1个GTP，每往肽链中加入1个氨基酸要消耗4个ATP，所以以上肽链合成需要9×4=36个ATP （不考虑起始和终止）。
3．原核生物是如何区分AUG是起始密码还是多肽链内部Met的密码的?
解答：原核生物在起始密码上游约10个核苷酸处(即-10区)通常有一段富含嘌呤的序列，称为SD序列（Shine-Dalgain sequence）。
SD序列可以与小亚基16S rRNA 3′-末端的序列互补，使mRNA与小亚基结合，使得核糖体能够识别正确的起始密码AUG。
而多肽链内部Met的密码前没有SD序列。
4．原核生物蛋白质合成体系由哪些物质组成？各起什么作用？
解答：原核生物蛋白质合成体系的物质组成和作用。
详见。
5．简述蛋白质合成的起始、延长和终止过程。
解答：详见15.2.3，，。
6．试比较原核生物与真核生物在蛋白质合成上的差异。
解答：（1）原核生物转录和翻译同步进行，真核生物转录产物要加工后才进行翻译。
（2）原核生物核糖体为70S，由50S与30S两个亚基组成；真核生物核糖体为80S，由60S与40S两个亚基组成。
（3）原核生物的蛋白质合成起始于甲酰甲硫氨酸，需起始因子IF-1、IF-2、 IF-3及GTP、Mg2+参加。
真核生物的蛋白质合成起始于甲硫氨酸，起始因子为 eIF-1、eIF-2、eIF-3、
eIF-4、eIF-5和eIF-6。
（4）原核生物在起始密码上游的SD序列可以与小亚基16S rRNA 3′-末端的序列互补，从而确定起始密码的位置。
真核生物核糖体与mRNA 5′-末端的帽子结构结合之后，通过消耗ATP的扫描机制向3端移动来寻找起始密码。
（5）原核生物的延长因子有EF-Ts、EF-Tu和EF-G。
真核生物的延长因子是eEF-1和eEF-2。
（6）肽链合成的终止需要有肽链释放因子。
原核生物释放因子有3种：RF-1、RF-2、RF-3。
RF-1识别终止密码UAA、UAG，RF-2识别终止密码UAA、UGA，RF-3是一种与GTP形成复合体的GTP结合蛋白，它不参与终止密码的识别，但是可促进核糖体与RF-1、RF-2的结合。
在真核生物中，仅1种释放因子eRF，它可以识别3种终止密码。
7．何谓信号肽理论?
解答：蛋白质的定向转运机制，普遍被人接受的是和提出的信号肽理论。
此理论认为多肽链中的信号序列控制蛋白质在细胞内的转移与定位。
详见。
8．密码子的简并性和摆动性有何生物学意义？
解答：tRNA上的反密码子与mRNA的密码子配对时，密码子的第一位、第二位碱基是严格按照碱基配对原则进行的，而第三位碱基配对则可以不按照碱基配对原则进行，这种现象称为摆动性（wobble）。
详见15.1.1.2。
由于摆动性的存在，合理的解释了密码子的简并性，同时也使基因突变造成的危害程度降至最低。
9．蛋白质合成后的加工有哪些方式？
解答：蛋白质合成后要经历下述加工过程才能成为有生物活性的蛋白质。
① N端甲酰基或N端氨基酸的切除；②信号肽的切除；③氨基酸的修饰；④二硫键的形成；⑤糖链的连接；⑥蛋白质的剪切；⑦辅基的附加；⑧多肽链的正确折叠。
详见。