硅胶柱色谱结合高速逆流色谱法分离纯化荷花中黄酮类化合物

黄酮类化合物的提取纯化技术

黄酮类化合物的提取纯化技术程晓雨;胡福良【摘要】黄酮类化合物是蜂胶中的主要功效成分,不仅结构多样,而且还有多种不同的生物学活性,是天然产物研究中的热点之一.本文综述了国内外黄酮类化合物的提取及纯化技术研究进展,重点介绍了一些新兴技术,包括双水相萃取法、半仿生法、高压脉冲电场法,膜分离法、柱层析法等,旨在为蜂胶黄酮的研究应用提供参考.【期刊名称】《蜜蜂杂志》【年(卷),期】2015(035)005【总页数】4页(P1-4)【关键词】黄酮类化合物;提取;纯化;蜂胶黄酮【作者】程晓雨;胡福良【作者单位】浙江大学动物科学学院,浙江杭州310058;浙江大学动物科学学院,浙江杭州310058【正文语种】中文【中图分类】S896.6黄酮类化合物是泛指两个苯环通过三个碳原子或一个吡喃环或吡喃酮环连接而成的化合物，主要包括：黄酮和黄酮醇类、二氢黄酮和二氢黄酮醇、异黄酮类及二氢异黄酮类、查耳酮和二氢查耳酮类及花青素类等[1]。

黄酮化合物广泛存在于绿色植物细胞中，是一种次生代谢产物，不仅结构多样，而且不同结构的化合物表现出不同的生物学活性，主要有：抗菌、抗病毒[2]、抗氧化、免疫调节、抗炎、抗癌、抗肿瘤、护肝、对心血管疾病的作用、对过敏和哮喘的作用[3]等药理活性，在医药、食品和日化等行业得到广泛的开发利用。

黄酮类化合物的传统提取方法存在能耗大、提取率和效率低、溶剂残留及不利于母核的保护等局限性。

随着现代科学技术与仪器的发展，一些新兴的提取方法应运而生，日益普及。

黄酮类化合物是蜂胶的主要功效成分，但对蜂胶黄酮的提取纯化技术的研究相对较少。

运用适宜的技术提取纯化纯度高、活性强的蜂胶黄酮具有重要意义。

本文综述了国内外对各种天然产物中黄酮类化合物的提取纯化技术，旨在为蜂胶黄酮类化合物的研究、开发和应用提供参考。

黄酮类化合物的提取是根据相似相溶的原理，根据黄酮类化合物的极性、溶解性差异选择合适溶剂，并辅助一定破壁措施进行初级分离。

各种化学成分过柱子经验

各种化学成分过柱子经验与虫友分享！★★clkk216(金币+2,VIP+0):谢谢分享经验~~！呵呵~~！5-4 14:22皂苷的提取分离皂苷部分极性较大，首先应该附集皂苷部位，通常可用正丁醇萃取或是大孔树脂得到总皂苷部位。

对于具体皂苷的分离，若使用硅胶柱层析，一般以氯仿：甲醇：水进行洗脱，氯仿：甲醇：水一般为9：1：0.1，8：2：0.3，7：3：0.5，同时应注意要加大柱层析硅胶的装柱量，减少样品的上样量；另外也可使用反相柱。

此外有些皂苷类成分极性较大容易含有一些色素，不易结晶，可使用Sephedex LH-20去除色素，进而使皂苷结晶。

类似物的hplc分离注意的问题HPLC时生物碱对流动相的PH值很敏感。

三萜皂苷的提取与分离（1）提取：三萜皂苷常用醇类溶剂提取，若皂苷含有羟基、羧基极性基团较多，亲水性强，用稀醇提取效果较好。

提取物先用石油醚脱脂，然后再用正丁醇萃取，萃取物再经大孔吸附树脂，得粗皂苷。

（2）分离：采用分配柱色谱法要比吸附柱色谱法好，常用硅胶为支持剂，以氯仿-甲醇-水为或乙酸乙酯-乙醇-水为洗脱剂。

氨基酸的分离将氨基酸分离成酸性氨基酸，碱性氨基酸，中性氨基酸和芳香族氨基酸。

取酸水解氨基酸液适量通过阳离子交换的层析柱，碱性氨基酸就保留在层析柱上；而中性氨基酸和酸性氨基酸的混合液则进入滤液中。

再将滤液通过阴离子交换的层析柱，一切酸性氨基酸就保留在层析柱上；而中性氨基酸就进入滤液中。

吸附在阳离子交换层析柱上的氨基酸，用2 N HAc洗脱；吸附在阴离子交换层析柱上的氨基酸，用0.5 NNaOH洗脱。

黄酮类化合物的分离黄酮类化合物在硅胶上的吸附较多，可以采取减压硅胶柱或者中压硅胶柱，上样量稍大一些（这样可以减小吸附量），将样品分段，然后采用sephadex LH－20进行细分。

采用sephadex LH－20时，最好选择一个比较合适的水与甲醇的比例（样品不会毫无保留），进行等度洗脱。

因为水甲醇梯度洗脱很容易产生气泡。

高速逆流色谱与硅胶柱色谱结合分离制备高纯度芦荟素异构体

图 ! " 芦荟素异构体的结构 !"#$ !" %&’()&(’*+ ,- ./,"0 1".+&*’*,"+,2*’+
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高速逆流色谱与硅胶柱色谱结合分离制备高纯度芦荟素异构体
黄丹凤， 4 曹学丽， 4 赵 4 华， 4 董银卯
（北京工商大学化学与环境工程学院北京市植物资源研究开发重点实验室，北京 $"""2/ ）摘要：芦荟素是芦荟叶中主要的蒽醌类成分，通常以芦荟素 7 和 8 两种非对映异构体形式并存，目前已成为许多芦荟产品质量控制指标之一。采用高速逆流色谱和硅胶柱色谱结合的方法，从老芦荟干粉中分离制备了高纯度的芦荟素 7 （纯度为 10 9 ）和芦荟素 8 （纯度为 1# 9 ）样品，并采用快原子轰击质谱（ :78)6; ）和核磁共振氢谱以及 >?(;@ （ AB+3,’4/)’40+4-’3 42-#’+B ?C’B0+2D’B ’EE’-/ DF’-/B"D-"FG ）等方法对所得的两个芦荟素（ $ < %6= ）异构体的立体构象进行了确认。该法具有制备量大和分离效率高的特点。关键词：高速逆流色谱；硅胶柱色谱；分离制备；高效液相色谱；芦荟素异构体中图分类号： ?#-04 4 文献标识码： 7 4 4 文章编号： $""" )0/$2 （ !""# ） "$ )""+! )"+4 4 栏目类别：研究论文

高效逆流色谱分离化橘红中黄酮类化合物及组分结构鉴定

高效逆流色谱分离化橘红中黄酮类化合物及组分结构鉴定尹鹭;曹学丽;徐静;成超;王尉;乐胜峰;周晓晶【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2013(034)020【摘要】应用高效逆流色谱法分离纯化了化橘红中两种黄酮类化合物.以乙酸乙酯-正丁醇-水(1∶4∶5,V/V)为两相溶剂系统,从1g粗提物中可1次分离得到纯度大于98％的柚皮苷单体83.3mg.以二氯甲烷-甲醇-水(10∶7∶4,V/V)和正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶1∶1∶1,V/V)为溶剂系统,可从1g粗提物的酸解物中经2次分离得到纯度大于98％的柚皮素单体27.5mg.两种物质的分离时间均在60min内,该法简便、快速、制备量大,可用于化橘红中黄酮类化合物的快速分离制备.【总页数】5页(P268-272)【作者】尹鹭;曹学丽;徐静;成超;王尉;乐胜峰;周晓晶【作者单位】北京工商大学食品学院,食品添加剂与配料北京高校工程研究中心,北京 100048;北京工商大学食品学院,食品添加剂与配料北京高校工程研究中心,北京100048;北京工商大学食品学院,食品添加剂与配料北京高校工程研究中心,北京100048;北京工商大学食品学院,食品添加剂与配料北京高校工程研究中心,北京100048;北京市理化分析测试中心,北京 100089;北京市理化分析测试中心,北京100089;北京市理化分析测试中心,北京 100089【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.高速逆流色谱技术分离纯化天然产物中黄酮类化合物的研究进展 [J], 邸多隆;郑媛媛;陈小芬;黄新异;封士兰2.高速逆流色谱分离与鉴定鹿药中黄酮类化合物 [J], 赵淑杰;韩梅;韩忠明;李彦颖;杨利民3.应用高速逆流色谱分离黄芩茎叶中黄酮类化合物 [J], 陈四平;赵桂琴;潘海峰;韩生玉4.硅胶柱色谱结合高速逆流色谱法分离纯化荷花中黄酮类化合物 [J], 徐双双;孙瑜;井凤;段文娟;杜金华;王晓5.嘉祥白菊花中黄酮类化合物的分离纯化和结构鉴定 [J], 秦宏伟;李晓萌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高速逆流色谱法分离纯化青皮中六种多甲氧基黄酮

高速逆流色谱法分离纯化青皮中六种多甲氧基黄酮于波;彭爱一;齐鑫;曲学伟;李慧;杨红【摘要】应用高速逆流色谱法(HSCCC)分离制备了青皮中6种多甲氧基黄酮类(Polymethoxyflavones,PMFs)化合物.以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比为4:6:4:6)为两相溶剂系统,在主机转速800 r/min、流动相流速2mL/min、检测波长254 nm条件下进行分离制备,460 min内从270 mg青皮粗提物中一步分离制备得到甜橙素(1,sinensetin)3.5 mg,5,7,8,4-四甲氧基黄酮(2)13.9 mg,川陈皮素(3,Nobiletin)51.3 mg,3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮(4)9.5 mg,橘皮素(5,Tangeretin)44.7 mg,5-去甲川陈皮素(6,5-O-DesmethylNobiletin)11.2 mg,纯度均达97%以上,各化合物结构经质谱和核磁共振氢谱、碳谱鉴定.利用该方法可以对青皮中的黄酮类化合物进行快速的分离和纯化.【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2010(022)003【总页数】5页(P425-429)【关键词】高速逆流色谱;青皮;分离;多甲氧基黄酮【作者】于波;彭爱一;齐鑫;曲学伟;李慧;杨红【作者单位】辽宁师范大学生命科学学院,大连,116029;辽宁师范大学生命科学学院,大连,116029;辽宁师范大学生命科学学院,大连,116029;辽宁师范大学生命科学学院,大连,116029;辽宁师范大学生命科学学院,大连,116029;辽宁师范大学生命科学学院,大连,116029【正文语种】中文【中图分类】R284.2高速逆流色谱(High-Speed Counter-Current Chromatography,HSCCC)是利用溶质在两种互不相溶的溶剂系统中分配系数的不同,从而进行分离的色谱方法。

黄酮类化合物的提取与分离方法综述.总结

黄酮类化合物的提取和分离方法的综述摘要黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类化合物,具有比较强的生物活性和生理作用,按结构可分为黄酮类和黄酮醇类、二氢黄酮类和二氢黄酮醇类、查尔酮类、双黄酮类、异黄酮类以及其它黄酮类等。

目前,黄酮类化合物的提取方法主要有溶剂提取法、微波提取法、超声波提取法、酶解法、超临界流体萃取法、双水相萃取分离法、半仿生提取法等,各种提取方法都有它的优缺点。

本文对上述几种提取方法近年来的应用及研究进展做了简单综述,旨在为黄酮类化合物的研究、开发、应用提借鉴关键词：黄酮类化合物；性质；提取；分离；前景黄酮类化合物又称黄碱素,广泛存在于自然界的植物中,属植物次生代谢产物,是一类具有种生物活性的多酷类化合物,其在植物体内大部分与糖结合成苷类,小部分以苷元的形式存在[1]。

许多研究己表明黄酮类化合物安全、无毒,具有抗菌、消炎、清热解毒、镇静、利尿等作用外,它是大多数氧自由基的清除剂,对冠心病、心绞痛等疾病的治疗效果显著。

特别是由基和抗癌、防癌的作用,使黄酮类化合物的研究进入了一个新的阶段。

随着食品工业的发展与消费观念的改变,天然活性成分的保健食品成为现代人追逐的目标,其中黄酮类化合物以纯天然、高活性、见效快、作用广泛等特点日益受到人们的关注。

1.黄酮类化合物的概述黄酮类化合物(flavonoids)指的是两个苯环(A-与B-环)通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物。

根据中央三碳链的氧化程度、B-环联接位置(2-或3-位)以及三碳链是否构成环状等特点,可将重要的天然黄酮类化合物分为黄酮类(flavone)、黄酮醇类(flavonol)、二氢黄酮类(dihy-droflavone)、二氢黄酮醇类(dihydroflavonol)、异黄酮类(isoflavone)等15种。

大部分学者认为黄酮的基本骨架是由三个丙二酰辅酶A和一个桂皮酰辅酶A生物合成而产生的,经同位素标记实验证明了A环来自于三个丙二酰辅酶A,而B环则来自于桂皮酰辅酶A。

黄酮类化合物提取和分离方法研究进展

收稿日期:2007205225作者简介:梁　丹(19852),女,河南鹿邑人,贵州大学农药学硕士研究生,研究方向为植物源农药.第24卷第5期周口师范学院学报2007年9月Vol.24No.5Jo urnal of Zhoukou Normal U niversity Sept.2007黄酮类化合物提取和分离方法研究进展梁　丹1,张保东2(1.贵州大学农学院,贵州贵阳550025;2.周口师范学院继续教育学院,河南周口466001)摘　要:黄酮类化合物具有多种生理活性,从天然产物中提取和分离黄酮类化合物,引起了人们的广泛关注,其提取和分离方法也不断地改进和发展.文章主要综述了近几年来不同的提取和分离方法在黄酮类化合物中的应用进展.随着科技的进步,黄酮类化合物的提取和分离方法将更加快速、高效、完善.关键词:黄酮;提取;分离;进展中图分类号:O652 文献标识码:A 文章编号:167129476(2007)0520087203 黄酮类化合物是植物界分布广泛的天然酚类化合物,植物中的黄酮大体上可分为“黄酮类”与“黄烷酮类”两大类物质,已知化学结构的黄酮类物质至少有4000余种.黄酮类化合物具有广泛的生理功能,是许多中草药的有效成分,具有很高的药用价值,如有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用[1,2].黄酮类化合物还在食品、化妆品等行业中广泛应用.随着市场需求量的增加,经济效益的提高,黄酮类化合物提取和分离方法也在不断地改进和提高.1　黄酮类化合物提取方法的研究进展1.1　按所用溶剂不同分类(1)热水提取法(以水作溶剂).热水一般仅限于提取苷类.在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素.此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产.郭京波等[3]以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍),可以明显提高芦丁的产率.(2)有机溶剂萃取法.乙醇和甲醇是提取黄酮类化合物的最常用溶剂.高浓度的醇(90%～95%)适合提取苷元,60%左右的醇适合提取苷类,提取的次数一般为2～4次[4].胡福良等[5]提取蜂胶液中黄酮类化合物,以80%乙醇提取的总黄酮的含量最高.其他有机溶剂法是根据相似相溶原理,对不同性质的黄酮选择最佳的有机溶剂进行提取.(3)碱提取酸沉淀法.黄酮类成分大多具有酚羟基,易溶于碱水(如碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液)和碱性稀醇.因此,可先用碱性水提取,碱性提取液加酸后黄酮苷类即可沉淀析出.提取时应控制酸碱的浓度,以免在强碱下加热时破坏黄酮类化合物的母核.当有邻二酚羟基时可加硼酸保护.此方法简便易行,橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取.1.2　按提取条件不同分类(1)回流提取法.本法是加热回流提取黄酮类化合物的一种方法.所用回流剂一般有水、醇及混合溶剂.此法操作简便,但效率不够高,一般很难一次性完全提出黄酮化合物,需要反复回流提取[6,7].(2)索式提取法.该法是用索式提取器,多次提取黄酮,其溶剂可反复利用,操作方便,价格低廉且提取效率高,但此法所需时间较长.索式提取黄酮类化合物的方法已广泛为人们所利用[8].(3)微波辅助提取法.该法是利用微波加热的特性对成分进行选择性提取的方法.此法具有快速、高效、高选择性、对环境无危害等特点.刘峙嵘等采用微波萃取银杏叶中黄酮类化合物及唐课文等采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物,与传统溶剂萃取方法相比,微波萃取法更简单,而且具有萃取时间短、成本低、萃取效率高等优点[9,10].(4)超声提取法.该法是利用超声波浸提黄酮类化合物的一种方法.其基本原理是利用超声波的空化作用,破坏植物的细胞,使溶剂易于渗入细胞内,同时超声波的强烈振动能给植物和溶剂传递巨大的能量,使它们做高速的运动,加速细胞内物质的释放和溶解以及有效成分的浸出,大大提高了提取效率.超声提取法具有提取时间短、效率高、无需加热等优点[4].刘海鹏等[11]用超声波提取银杏叶总黄酮比回流法提取率高,且操作简便,节省时间,其最佳条件为:提取时间25min,温度10℃,连续提取3次,总黄酮提取率达96%.霍丹群等[12]在综合考虑成本等可行性因素下,提取山楂中黄酮类物质,提取时间大大缩短,产率较高,且实验可在室温下进行,设备简单,操作方便.(5)超滤法.该法是一种膜分离法,而且是唯一能用于分子分离的过滤方法,能从周围的介质中分离出100～1000nm的微粒.因此,超滤既可应用于除去溶液中胶体悬浮微粒,又能分离出溶液中的溶质.超滤的工作原理是:凡含有两种或两种以上溶质的溶液,通过滤膜分离流动时,其中分子体积小的溶质,经滤膜流出,而分子体积较大的溶质,不能通过滤膜而被截留[13].超滤法以多孔薄膜为分离介质,依靠薄膜两侧压力差作为推力来分离溶液中不同分子量的物质,从而起到提纯的作用.它具有不需加热,操作条件温和,不必添加化学试剂,不损坏黄酮类化合物,不存在相的转换,耗能低,分离率高,超滤装置可反复使用等优点.控制超滤膜孔径大小能有效除去溶液中大分子物质,选用适宜孔径的超滤膜是提高产品收率和质量的关键.20世纪80年代后期,采用超滤技术提取黄芩苷,收到了较好的效果.在溶液温度为14℃, p H=1.5时,提取黄酮类化合物的收率较高[14].(6)酶提取法.植物的有效成分往往被包裹在细胞壁内,提取时细胞壁造成传质阻力,使提取效果受到很大的限制.酶的作用可使细胞壁疏松、破裂,因此需要减小传质阻力,加速有效成分的释放,从而提高提取效率[15].毕会敏等[6]用纤维素酶法提取红景天总黄酮,最佳工艺条件为:加酶量1.95%(以原料干重计),液料比70∶1(体积质量比,mL∶g),p H 值5.5,酶解温度40℃,酶解时间5h,红景天总黄酮的浸出率为4.385%.研究表明,采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率,且粗提物产率高,DPP H清除活性强.(7)超临界流体提取法.该法(Supercritical Flu2 ids Ext raction,SFE)是20世纪80年代发展起来的一项提取分离技术,利用超临界流体(Supercritical Fluids,SCE)为萃取剂,从液体或固体中萃取出待测组分,其中超临界二氧化碳最为常用(SCF2 CO2)[16].SFE具有提取效率高、无溶剂残留、天然植物中活性成分和热不稳定成分不易被分解破坏等优点,同时还可以通过控制临界温度和压力的变化,达到选择性提取和分离化合物的目的.2　黄酮类化合物分离方法的研究进展由于黄酮化合物的性质不同,其分离原理有: (1)极性大小不同,利用吸附能力或分配原理进行分离;(2)酸性强弱不同,利用p H梯度萃取进行分离;(3)分子大小不同,利用葡聚糖凝胶分子筛进行分离;(4)分子中某些特殊结构,利用与金属盐络合能力的不同进行分离[17].2.1　p H梯度萃取p H梯度萃取适合分离酸性强弱不同的游离黄酮类化合物.将混合物溶于有机溶剂(如乙醚),依次用5%碳酸氢钠(萃取7,4′2二羟基黄酮)、5%的碳酸钠(萃取72羟基黄酮或4′2羟基黄酮)、0.2%氢氧化钠(萃取一般酚羟基黄酮)、4%氢氧化钠(萃取52羟基黄酮)萃取而使其分离[3].2.2　高效液相色谱分析(HPL C)法运用H PL C法分离黄酮类化合物的报道很多.有人对18种黄酮及黄酮苷类化合物在C8、C18和CN3种固定相上洗脱的RP2H PL C法分离做了研究,结果表明C18基本可以使植物黄酮苷元和配基实现分离,但它对极性大的苷部分洗脱出峰快,分离效果不大理想.而C8介于C18和CN之间,因而对黄酮苷的分离比较理想,峰形和分离也最好[18].H PL C 也可以用来测定黄酮的含量[19].2.3　高速逆流色谱分离法高速逆流色谱分离法(high speed co untercur2 rent chro matograp hy,HSCCC)是一种新的分离技术.其具有两大突出特点:(1)线圈中固定相不需要载体,因而清除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象;(2)特别运用于制备性分离,每次进样体积较大,进样量也较多[16].李彩侠等[20]提取荷叶中黄酮类化合物,经HSCCC分离纯化的效果很好,结合TL C分析、颜色反应鉴定得到两种纯度很高的黄酮醇类化合物.HSCCC对分离和制备黄酮类化合物有很大的优势,其应用前景越来越受到人们的关注.2.4　柱色谱法(1)硅胶柱色谱[17,18].此法应用范围最广,非极性与极性化合物都能用,适用于分离黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮醇类、二氢黄酮类、异黄酮类、黄酮苷元类.少数情况下,在加水活化后也可以用于分离极性较大的化合物,如羟基黄酮醇类及其苷类等.与硅胶88 周口师范学院学报2007年9月混存的微量金属离子,应预先用浓盐酸处理,以免干扰分离效果.(2)聚酰胺柱色谱[17,18].分离黄酮类化合物,聚酰胺是较为理想的吸附剂.其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目、位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小.由己内酰胺聚合而成的尼龙-66及由己二酸与己二胺聚合而成的尼龙-66,最早应用于黄酮类化合物的分离.此法是目前最有效而简便的方法.(3)葡聚糖凝胶(Sep hadex gel)柱色谱[18].黄酮类化合物的分离,主要使用两种型号的凝胶:Sep ha2 dex G型和Sep hadex L H220型.其原理主要是吸附作用.凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取决于游离羟基的数目.但分离黄酮苷时,分子筛的性质起主导作用.在洗脱时,黄酮苷类大体上是按相对分子质量由大到小的顺序流出柱体.(4)大孔吸附树脂分离法.该法是以大孔吸附树脂为吸附剂和分子筛的柱色谱分离形式.其原理是吸附性和分子筛性.吸附性主要来源于范德华力和氢键作用力;分子筛性来源于大孔树脂的多孔性结构产生的渗透和过滤作用.被分离的成分根据其分子的大小不同和吸附能力的差异而分离[3].近年来大孔吸附树脂在中药成分(如黄酮、生物碱等)精制纯化等领域中应用越来越广泛[21223].刘健伟等[22]对D101型(非极性)、Hz2806型(中等极性)和AB28型(弱极性)3种大孔吸附树脂进行了筛选,并对甘草中总黄酮分离纯化工艺进行了研究;王雅君等[23]则用D101大孔树脂进行了制备菟丝子总黄酮的研究.这些研究表明,大孔吸附树脂对于黄酮类化合物具有良好的分离纯化效果,与传统的分离方法相比,具有操作简便、树脂再生容易、耗费有机溶剂少、提取率高等优点.3　展望近几年来,科学家对黄酮进行了广泛而深入的研究,发现了黄酮不少令人感兴趣的新用途,黄酮类天然产物是近年来天然药物和人类健康产品研究开发的热点.从药用植物和经济植物中提取具有生理活性的黄酮作为天然药物、保健品和化妆品等行业的原料,已日益引起重视,其应用前景无限广阔.随着科学技术的不断进步和发展,黄酮类化合物的独特效能将得到不断的发掘及应用.因此,黄酮类化合物的提取和分离方法也将得到更加深层的研究和开发,已有的方法将会日趋成熟和完善,各种高效、方便快捷的新方法将会不断涌现.参考文献:[1]黄锁义,黎海妮,余美料.益母草总黄酮的提取及鉴别[J].时珍国医国药,2005,16(5):3982399.[2]姚小敏,覃成箭,羊金梅.茶叶中总黄酮的提取、鉴别及其含量测定[J].右江民族医学院学报,2005,27(6):7792 781.[3]郭京波,王向东,张燕,等.不同提取方法对苦荞类黄酮提纯得率的影响分析[J].食品科学,2006,27(10):4332 436.[4]杨红.中药化学实用技术[M].北京:化学工业出版社,2004:9.[5]胡福良,李英华,朱威,等.不同方法提取的蜂胶液中总黄酮含量的测定及抗肿瘤与抗炎作用研究[J].2005,5(3):11215.[6]毕会敏,张守勤,刘长姣.纤维素酶提取红景天总黄酮的研究[J].天然产物研究与开发,2006,18:8182821. [7]陈燕清,颜流水,黄智敏.醇溶剂回流法提取藜蒿中黄酮类化合物方法研究[J].南昌航空工业学院学报,2004, 18(3):61264.[8]徐洁昕,周方钦.白花败酱中总黄酮的提取研究[J].广州食品工业科技,2004,82(4):42243.[9]刘峙嵘,俞自由,方裕勋.微波萃取银杏叶黄酮类化合物[J].东华理工学院学报,2005,128(12):1512154. [10]唐课文,易健民,张跃超.微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物的研究[J].天然产物研究与开发,2005, 117(5):6622664.[11]刘海鹏,刘延成,马东升,等.超声波/回流法银杏叶总黄酮提取的研究[J].化学工程师,2005,119(8):49250.[12]霍丹群,张文.超声波法与热提取法提取山楂总黄酮的比较研究[J].中成药,2004,26(12):106321065. [13]李毓群,施顺清.采用先进的提取方法促进中药制剂现代化[J].中草药,2002,33(6):5722574.[14]李苑,张敏.中草药中黄酮类化合物提取工艺的研究概况[J].广东药学,1999,9(2):426.[15]Wu M L,Zhou C S,Chen L S,et al.Study on the ex2traction of total flavonoids f rom G inkgoleaves by en2 zyme hydrolysis[J].Nat Prod Res Dev,2004,16: 5572560.[16]周文华,杨辉荣,岳庆磊.生物碱提取和分离方法的研究新进展[J].当代化工,2003,32(2):1112113. [17]刘湘,汪秋安.天然产物化学[M].北京:化学工业出版社,2005:3.[18]宋晓凯.天然药物化学[M].北京:化学工业出版社,2004:8.[19]董文庚,邓晓丽.HPL C法测定银杏叶中黄酮的含量[J].理化检验:化学分册,200541(8):5632565. [20]李彩侠,张赟彬,黄国纲.荷叶提取物的分离和纯化[J].食品工业,2006(1):40241. (下转第97页)98第24卷第5期梁　丹,等:黄酮类化合物提取和分离方法研究进展 Hereditas ,1997,126(3):2112217.[18]Jiang J M ,G ill B S ,Wang G L ,et al.Metaphase andinterphase fluorescence in situ hybridization mapping of thericegenomewithbacterialartificialchromosome[J ].Proceedings of the National Academy of Science of USA ,1995,92:448724491.[19]Wei W H ,Qin R ,Song Y C ,et parativeanalyses to diseases resistant and nonresistant linesf rom maize ×Zea diploperennis by GISH[J ].Botanical Bulletin of Academia Sinica ,2001,42:1092114.[20]Li C B ,Zhang D M ,Ge S ,et al.Identification ofgenome constitution of Oryza malampuzhaen Οsis ,O.minuta ,and O.punctata by multicolor genomic in situ hybridization[J ].Theor ApplGenet ,2001,103:2042211.Analysis of ti f olia and O.alt a with genomic in situ hybridizationGUAN Ni 1,Q IU Xiao Οfen 1,SON G Fa Οjun 1,Q IN Rui 1,2(1.College of Life Science ,South ΟCentral University For Nationalities ,Wuhan 430074;2.College of Life Science ,Wuhan University ,Wuhan 430072,China )Abstract :Genomic in situ hybridization (GISH )method was used to study differentiation and relationship s between the ti f olia and O.alta genomes in the officinalis complex of the genus Ory z a .The chromosomes of ti f olia (CCDDgenomes )were hybridized with labelled probes of two CCDD genome f rom ti f olia and O.alta separating.The GISH results indicate that the homology between these two CCDD genomes is very close and differentiation is also clearly.Karyotype analysis is made based on the similar band patterns of the hybridization signal.K ey w ords :ti f olia ;O.alta ;GISH(上接第89页)[21]米靖宇,宋纯清.大孔吸附树脂在中草药研究中的应用[J ].中草药,2001,23(1):911.[22]刘健伟,陈勇,熊富良,等.骨碎补总黄酮提取和大孔吸附树脂纯化的工艺研究[J ].中国药学杂志,2006,41(16):122221224.[23]王雅君,郭澄.应用大孔吸附树脂吸附分离技术制备菟丝子总黄酮的研究[J ].中药材,2004,27(11):8612862.The ne w extraction and isolation progress of flavonoidsL IAN G Dan 1,ZHAN G Bao Οdong 2(1.College of Agriculture ,Guizhou University ,Guiyang 550025;2.School of Continuing Education ,Zhoukou Normal University ,Zhoukou 466001,China )Abstract :Flavonoids have a wide variety of physiological activity ,and many valuable results had been made.How to ex 2tract and isolate of flavonoids f rom the natural product made widely concern and its extraction and isolation methods are im 2proving .This paper reviews the application and progress of flavonoids ′different extraction and isolation methods in the re 2cent years.With the advancement of technology ,extraction and isolation methods of flavonoids will be more rapid ,efficient and perfect.K ey w ords :flavonoid ;extraction ;isolation ;progress79第24卷第5期关　妮,等:两种CCDD 型野生稻的基因组原位杂交比较分析。

高效液相色谱法同时测定荷叶中6种黄酮类成分

高效液相色谱法同时测定荷叶中6种黄酮类成分梁佳文;刘艾洁;马冰馨;王有为【摘要】为了探索同时测定荷叶茶及饮片中6种黄酮类成分(芦丁、金丝桃苷、紫云英苷、槲皮素、山奈素和异鼠李素)含量的方法,本研究以8种不同的荷叶样本为材料,采用高效液相色谱分析法对6种黄酮类成分进行了同时测定.样品经过前处理,以0 5％甲酸-水(A)和0 1％甲酸-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,流速为1mL/min,柱温为25℃,进样量为20 uL,经Agilent TC-C18(2)(150 mm×4.6 mm,5 um)色谱柱分离,于360 nm波长处检测,结果显示,芦丁、金丝桃苷、紫云英苷、槲皮素、山奈酚、异鼠李素6种黄酮类成分分别在1.6 ～ 160、1.8 ～ 180、2.16 ～ 216、1.4～140、2.12～212、1.6～160 μg/mL浓度范围内有良好的线性关系(R2＞ 0.9992),其检测稳定性、重复性、日内精密度、日间精密度以及加样回收率的RSD均小于2％.进一步用该方法对不同来源的8个荷叶样本进行检测,结果显示荷叶样本中6种黄酮类成分含量以槲皮素最高,并且以样本G荷叶茶(购自G 公司,批号为130802)的槲皮素含量最高.本研究建立的同时测定6种荷叶黄酮类成分含量的方法快速、准确,可为荷叶有效成分的检测和质量控制提供技术支撑.【期刊名称】《植物科学学报》【年(卷),期】2015(033)006【总页数】6页(P861-866)【关键词】高效液相色谱;同时测定;荷叶;黄酮【作者】梁佳文;刘艾洁;马冰馨;王有为【作者单位】武汉大学药学院中药与天然药物研究所,武汉430071;武汉大学药学院中药与天然药物研究所,武汉430071;武汉大学药学院中药与天然药物研究所,武汉430071;武汉大学药学院中药与天然药物研究所,武汉430071【正文语种】中文【中图分类】Q946.8荷叶为莲科植物莲(NelumbonuciferaGaertn)的干燥叶，夏、秋季采收，晒至七、八成干时，除去叶柄，折成半圆形或折扇形，干燥即得。

高速逆流色谱法分离纯化黄酮类化合物的研究进展

高速逆流色谱法分离纯化黄酮类化合物的研究进展陈丛瑾;杨国恩【摘要】Objective To review research progress on the high-speed countercurrent chromatography separation and puritication of flavonoid compounds. Method Papers, monographs, etc. published in recent years, on the high-speed countercurrent chromatography separation and purification of flavonoids were reviewed and analyzed. Result and Conclusion High-speed countercurrent chromatography is a very effective separation and purification method of flavonoids.%目的综述高速逆流色谱法分离纯化黄酮类化合物的研究进展.方法查阅近年来公开发表的论文、专著等资料,对高速逆流色谱法分离纯化黄酮类化合物进行概述.结果与结论高速逆流色谱法是一种非常有效的分离纯化黄酮类化合物的方法.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2011(026)004【总页数】4页(P306-309)【关键词】黄酮;高速逆流色谱;分离纯化;进展【作者】陈丛瑾;杨国恩【作者单位】广西大学化学化工学院,广西,南宁,530004;中南林业科技大学材料科学与工程学院,湖南,长沙,410004【正文语种】中文【中图分类】R284黄酮类化合物(flavonoids)是植物中广泛存在的一类天然产物，在植物体内大部分与糖结合成苷类，有一部分是以游离态(苷元)形式存在的，其对植物的生长、发育、开花、结果及抗菌防病等起着重要的作用。

黄酮类化合物的提取与分离

滤液浓缩至小体积，冰箱放置黄色结晶乙醇重结晶
沉淀(PbS)
同铅盐(A)法进行复分解晶块溶于少量乙醇中，放置黄色结晶乙醇重结晶浅黄色针晶(graveobioside B) (II)
浅黄色蔟状结晶(graveobioside A)(I)
有邻二酚羟基的黄酮可与硼酸络合，
生成物易溶于水，可与不具上述结构的黄酮类化合物相互分离。
举例：从芹菜［Apium graveolens L.］种子中分离芹菜双糖苷（graveobiodide） A及B
OH RO O OH RO O OH OCH3
OH
O
R=芹菜糖
OH
O
I（具有邻二酚羟基）
II（无邻二酚羟基）
原料（种子）石油醚浸泡脱脂脱脂药料乙醇提取提取液减压浓缩后，用醚处理杂质醚不溶物溶于热水中，煮沸，逐滴加入中性醋酸铅的热水溶液，直至不再析出沉淀为止，乘热过滤
棕色沉淀(A) 悬浮乙醇中，通H2S，过滤
滤液加入碱式醋酸铅的热水溶液至沉淀完全，过滤黄色铅盐沉淀(B)
第三节黄酮类化合物的提取与分离
一、提取黄酮苷类以及极性稍大的苷元（如羟基黄酮、双黄酮等），一般可用丙酮、醋酸乙酯、乙醇提取。一些多糖苷类可用沸水提取。在提取花青素类化合物时，可加入少量酸（0.1%盐酸，如果是黄酮苷应当慎用，避免苷键发生水解）。
大多数黄酮苷元宜用用氯仿、乙醚、
醋酸乙酯等中极性溶剂提取，而对多甲氧基黄酮类游离苷元，甚至可用苯等低极性溶剂进行提取。

酸性 :7 ， 4- 二 OH 溶于 5%NaHCO3 液 ) 7-或4-OH （5%Na2CO3液）一般OH（0.2%NaOH） 5-OH （4% NaOH液）

黄酮类化合物的提取分离方法

一.黄酮类化合物的提取分离方法按所用溶剂不同分类(1)热水提取法(以水作溶剂)---------- 灵芝多糖热水提取(2)有机溶剂萃取法-----------生产茶多酚工业试验、乳酸(3)碱提取酸沉淀法.---------- 橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取.2.按提取条件不同分类(1)回流提取法----------从苦楝树皮中提取苦楝素(2)索式提取法----------柑橘属类黄酮(3)微波辅助提取法----------采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物(4)超声提取法----------提取山楂中黄酮类物质(5)超滤法----------黄岑甙(6)酶提取法----------采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率(7)超临界流体提取法----------竹叶黄酮、从干姜片中提取挥发油PH梯度萃取法：石榴果皮褐变产物、葛花总异黄酮高效液相色谱分析法：五味子、葛根高速逆流色谱分离法：甘草、分离蜜环菌发酵液乙醇提取部位柱色谱法（1）硅胶柱色谱：姜黄素（2）聚酰胺柱色谱：紫锥菊（3）葡聚糖凝胶柱色谱：回心草、茵陈蒿（4）大孔吸附树脂分离法：川草乌、三七总皂甙二. 槐米中芸香苷（芦丁）的提取方法有哪些（设计）方法：渗漉法、煎煮法、回流提取法（1）槐米粗粉20g加约120ml的%硼砂水溶液，提碱搅拌下加入石灰乳至pH8-9，取溶1v1.0 可编辑可修改2 并保持该pH 值煮沸20分钟，四层纱布趁热滤过，反复2次提取液药渣浓盐酸调pH2~3搅拌，静置放冷，滤过。

滤液沉淀热水或乙醇重结晶芸香苷结晶碱溶酸沉法提取分离槐米中芸香苷的流程图（2）取30g 槐花米，置于250mL 烧杯中，加入%硼砂沸水200ml ，在搅拌下缓缓加入石灰乳调节pH=8～9，在此pH 下保持微沸20～30min ，趁热用棉花滤过，残渣再加水，同上法再煎一次，趁热抽滤。

合并滤液，在60～70℃下用浓盐酸调至pH=4—5，静置。

高速逆流色谱技术分离纯化天然产物中黄酮类化合物的研究进展

江南卷柏 Selaginella
dorffii
moellen-
穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮、竹柏双黄酮 A、银杏黄酮 Amentoflavone， hinokiflavone， podo-
carpusflavone A，ginkgetin
正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水 n-hexane-ethyl acetate-methanol-
1． 5
（ 1∶ 1∶ 2）
草珊瑚 Sarcandra glabra
异秦皮定 Isofraxidin
正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水
n-Hexane-ethyl acetate-Methanol-
2． 0
water （ 1∶ 2∶ 1∶ 2）
800
［12］
800
［13］
800［14］ຫໍສະໝຸດ 苹果树皮 Apple tree bark
木蝴蝶 Oroxylum indicum
黄芩素、白杨黄素 Fbaicalein，chrysin
石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水
Petroleum ether-ethyl acetate-
2． 0
Methanol-water （ 5∶ 5∶ 5∶ 5）
陈皮 Pericarpium Citri
Reticulatae
苷 Quercitrin，quercetin，hyperoside，iso-
quercitrin， miquelianin， epigallocate-
乙酸乙酯-甲醇-水 Ethyl acetate-methanol-water
（ 10∶ 1∶ 10）
chin，avicularin
2． 0
800
［7］
MTBE-n-butanol-MeCN-water

从黄芩中分离黄酮类成分的方法

从黄芩中分离黄酮类成分的方法黄芩，又名黄芩草、大黄芩，是一种常见的中草药材，被广泛用于中医药和保健品领域。

黄芩中含有丰富的黄酮类成分，具有很多药用价值，如抗氧化、抗炎和抗癌等功效。

分离和提取黄芩中的黄酮类成分，对于利用其药用价值具有重要意义。

在现代科学技术的支持下，人们逐渐摸索出了多种分离黄芩中黄酮类成分的方法，我们将在本文中就这些方法进行深入的探讨和分析。

1. 传统提取法首先要介绍的就是传统的提取法。

这种方法主要依靠有机溶剂提取，再通过薄层色谱、硅胶柱层析和凝胶柱层析等手段进行黄酮类成分的分离。

传统提取法的优点是技术成熟、操作简便，但缺点也十分明显，例如待提取物质含量低、提取效率低、溶剂残留等。

2. 超声波法随着科技的不断发展，超声波提取技术已经成为一种热门的分离方法。

超声波可以使得溶剂在被提取物料中形成大量微小气泡，这些气泡在破裂的瞬间可以形成巨大的冲击力，从而破坏植物细胞壁，使得被提取物质更易被分离。

超声波法的分离效率高、操作简便、溶剂用量低，可以较好地保持被提取物质的活性。

3. 超临界流体萃取超临界流体萃取是一种新兴的提取方法，超临界流体通常指的是超临界二氧化碳，具有密度小、粘度小等优点。

超临界流体在一定的温度和压力下可以保持液态和气态之间的平衡状态，因此可以作为一种绿色环保的提取剂。

这种方法的分离效果好，对植物原料的破坏小，可以充分保留黄酮类成分的活性。

4. 气相色谱法气相色谱是一种以气体为流动相的色谱分析方法，对于非极性、低极性化合物具有很好的分离能力。

在提取黄芩中的黄酮类成分时，可以利用气相色谱法对混合物进行分离，通过比对样品和标准品的色谱曲线来鉴定和定量目标成分。

气相色谱法分离效果好、操作简便，但需要相应的设备和技术支持。

总结与展望通过对以上几种分离黄芩中黄酮类成分的方法进行分析，我们可以发现每种方法都有其各自的特点和适用范围。

在未来的研究中，可以从多方面入手，如提高传统提取法的提取效率、降低超声波法的成本、探索新的超临界流体提取剂，以及改进气相色谱法的分析精度等。

荷叶中黄酮提取及测定方法的研究进展_邓源喜

饲料研究FEED RESEARCH NO .5,201118综述荷叶中黄酮提取及测定方法的研究进展邓源喜李妍许晖孙兰萍安徽蚌埠学院生物与食品工程系收稿日期：2011 - 01 - 26基金项目：2010年度院级自然科学研究项目（2010ZR12）通信作者：邓源喜荷叶系睡莲科植物莲的叶片，除了含有糖类、蛋白质、脂类等营养成分外，还含有多种生物活性物质。

因此，其在食品及药品方面均有较广泛的应用。

荷叶黄酮类成分是荷叶中含有的一类重要的药理活性物质。

许多研究表明：叶中的黄酮类成分具有抗氧化、抗自由基、调血脂、抑菌和抗病毒等多种生理活性功能。

对荷叶中黄酮类物质的化学成分、提取、分离和纯化及测定方法的国内外研究，旨在为荷叶黄酮类物质的进一步研究提供参考。

1 荷叶黄酮类物质的化学成分研究黄酮类物质指具有色酮环与苯环为基本结构的一类化合物的总称，是以C 6-C 3-C 6结构为基本母核的天然产物，常以游离态或与糖结合成甙的形式存在，可分为黄酮类、黄酮醇类、异黄酮类和黄烷酮类等。

广义的范围还包含查耳酮、嗅酮、异黄烷酮及茶多酚。

荷叶中黄酮类化合物主要是荷叶苷，其次是槲皮素、异槲皮素等，且槲皮素多以结合苷的形式存在。

此外，关于双黄酮类的原花青素、黄烷酮类的无色花青素与无色翠雀花素等方面的研究也有所报道。

田娜通过分离纯化荷叶的乙醇/水提取物，并通过光谱解析鉴定，得到了金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷和槲皮素4种黄酮类单体物质，其中紫云英苷是首次从荷叶中分离获得的。

张赟彬等用高速逆流色谱（HSCCC）分离纯化荷叶提取物，结合薄层层析(TLC)和颜色反应，分析结果表明：分离得到的2种化合物均为黄酮醇类化合物，分别为槲皮素-3-丙酯和山奈酚。

韦红对分离纯化后得到的荷叶黄酮制品，采用高效液相色谱（HPLC）分析其中组成，并对未知组分进一步分离纯化，通过紫外光谱(UV)、HPLC 和核磁共振(NMR)等手段分析，结果显示出，荷叶中含有芦丁和棚皮素，其中芦丁为首次从荷叶中分离获得。

高效制备液相色谱法从荷叶中分离制备黄酮类化合物

! 第"期
田 ! 娜，等：高效制备液相色谱法从荷叶中分离制备黄酮类化合物
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青海、西藏外，各地均有，且主要分布在长江、黄河和珠江等三大流域。荷叶呈圆形盾状，叶面为绿色，有蜡质感，背面色淡，园林中常用来美化水面。据报道，我国民间早就有用荷叶治疗肥胖症的记载。在 "##" 年 "" 月中华人民共和国卫生部的卫监发（ "##" ）第 $% 号文件中，荷叶被列入第 & 批 “ 既是食品又是药品 ” 的名单之中。现代医学研究发现，荷叶具有调血脂、清除自由基、抑菌等作用，且毒性极小［ & ’ ( ］，其主要的药理活性成分为黄酮类物质。但目前对荷叶中黄酮类化合物单体组分的研究及结构鉴定的报道甚少
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荷叶中黄酮类化合物的化学结构鉴定

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［２］李玲珍，赵淑桂，易杨柳．对羟基苯甲酸乙酯合成方法的改进［Ｊ］
丁酯［Ｊ］．辽宁化工，１９９５（２）：２３￣２５．
化学通报，１９８８（４）：３３．
［５］陈耀祖编著．有机分析［Ｍ］．北京，高等教育出版社．１９８３，１６０
为３６２ｎｍ，说明Ｂ为黄酮醇类化合物；加入诊断剂ＮａＯＭｅ
后，带 Ⅰ 红移４８ｎｍ，且强度不下降，示有４’－ＯＨ；
ＮａＯＡｃ／Ｈ３ＢＯ３谱图中，带Ⅰ红移４ｎｍ，带Ⅱ红移４ｎｍ，表示环、Ａ环均没有邻二酚羟基结构。
２．４．２ＭＳ检测结果及分析
依据。
点颜色及Ｒｆ值。
１材料与方法
１．２．颜色反应分别取荷叶提取物少许，甲醇溶解，加入不
１．１原料与主要仪器
同的定性试剂，观察其颜色反应。
原料：新鲜荷叶（十月上旬采于上海青浦区）。
１．２．５结构鉴定在中国科学院上海药物研究所完成。
主要仪器：ＵＶ－１７００紫外分光光度器（日本岛津）；真空
相（上层）和流动相（下层）。荷叶提取物上高速逆流色谱仪，
有消暑、清肺、安心神等作用［１］。现代研究表明，荷叶营养丰
柱温２５ ℃，首先泵入固定相，接着泵入流动相，达到平衡
富，除含有普通植物所共有的碳水化合物、脂类、蛋白质、单
时，固定相保留量为２６５ｍＬ。取少许荷叶提取物，用固定相
盐酸－镁粉反应和三氯化铁反应为鉴定黄酮类化合物