粗制牛血清的质量控制
ELISA质量控制--质量控制血清
ELISA质量控制--质量控制血清ELISA 是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以做定量分析等优点，已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。
ELISA 的影响因素较多，加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。
质控血清是已有靶值的血清，在每次的常规检验中加入一份或数份，通过所得结果来了解本次检验的情况。
质控血清检验的结果如能控制其误差在一定范围内，就说明该检验没有发生不允许的误差。
如果出现超过允许误差范围的异常结果，提示该检验不合格，应寻找原因，纠正后，重检待测标本。
因此质控血清在质控工作中起重要作用。
一、质控血清的使用卫生部临床检验中心制备的乙肝标志物质控血清，可以在-20℃保持半年定值不变。
冰冻状态融化使用时，应先混匀，未用完部分可在4℃保存5天。
不宜反复冰融或自行分装。
开展某项检验的室内质控工作需要的质控血清，一般按3-6个月用量准备。
自制的不定值质控血清，在一批质控血清将用完之前，需准备下一批质控血清。
质控血清要求性能稳定，较长期内效价不变，其理化性质应与病人样本相近，这样才能有效地起到监测作用。
二、临界值质控血清质控制血清分定值和未定值两种。
如只用一份质控血清定值，一般定在正常值与异常值交界点上，定性测定时处于弱阳性水平，称为临界值。
乙肝标志物临界值的制定，应按临床要求，为临床提供统一的判断弱阳性的标准。
临界值质控血清可以作为试剂盒中的阳性对照品和阴性对照品以外的第三个对照品，它可以灵敏地反映出试剂盒的检出水平，确保弱阳性反应的标本不漏检。
三、质控血清的制备每个实验室可以根据自己的条件，选用临床中心提供的质控血清，或按以下方法自己制备本室使用的质控血清（以乙肝质控血清为例）。
（1）收集新鲜的无溶血、无黄疸、无细菌污染的阳性血清。
（2）56℃加热10小时去活。
小牛血类产品原料质量管理自律规范
小牛血类产品原料质量管理自律规范（征求意见稿）目录第一章总则 (2)第二章机构与人员 (2)第三章厂房与设施 (3)第四章设备 (3)第五章验证 (4)第六章文件 (5)第七章生产管理 (5)第八章质量控制管理 (7)第九章运输管理 (8)第十章附则.................................................. 错误!未定义书签。
第一章总则第一条为了规范会员单位小牛血类产品原料的生产，提高小牛血类产品原料的质量，旨在保证药品质量和安全性前提下最大限度降低其生产过程中污染、交叉污染以及混淆、差错等风险，确保持续稳定地生产出符合制剂成品的小牛血（清）原料，制定本规范。
第二条本规范所指的小牛血类产品原料（以下简称原料）是指用于小牛血类产品如小牛血（清）去蛋白提取物的注射剂、口服制剂（胶囊片剂）、眼用制剂等生产用，采集自供血牛的血液经去纤维蛋白的小牛血和小牛血清。
第三条本规范适用于小牛血类产品原料生产的全过程，包括采集、规定的加工工艺、质量检验、储存和运输。
第二章机构与人员第四条企业应当对原料直接负责，实施监管。
应设立与原料生产相适应的管理机构，履行质量保证和质量控制的职责。
第五条企业应当配备足够数量并具有适当资质（含学历、培训和实践经验）的管理和操作人员。
第六条与原料生产、质量控制有关的所有人员应经过培训，培训的内容应当与岗位的要求相适应，培训记录等应以书面形式归入个人培训档案中。
第七条进入洁净区的工作人员（包括维修人员、辅助人员）应定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净作业等方面的培训及考核，并纳入个人培训档案。
第八条企业应当对人员健康进行管理，并建立健康档案。
第三章厂房与设施第九条小牛血的采集点应设置在合法合规的屠宰企业或养殖场，并应有《动物防疫条件合格证》。
第十条用于小牛血采集的区域内表面应当平整光滑、无裂缝，避免积尘，便于有效清洁；并设置适当的隔离设施，能够有效防止虫、鼠进入，必要时应当进行消毒。
牛血清在细胞培养中的作用与质量要求
牛血清在细胞培养中的作用与质量要求．牛血清在细胞培养中的作用与质量要求生物技术已经被世界各国视为一种高技术，在整个科学技术中占据了特殊的显著地位，特别是生命科学的发展更离不生物技术，生命科学的发展备受各国的重视。
我国在很多大学中都设立了生命科学院。
现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。
比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。
基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。
正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。
总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。
细胞培养的发展，培养基的质量又是关键，而培养基的主要成份中动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。
在动物血清的应用中牛血清又是最为广泛的，所以牛血清是医药生物技术产品中重要的原材．料之一。
保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。
一、牛血清在细胞培养基中的主要功能牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。
1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。
2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。
3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。
4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
5.起酸碱度缓冲液作用。
6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。
二、牛血清的主要成份血清是一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已为人所知，但还有一部分尚不清楚，而且血清组成及生理条件和营养条年龄、随供血动物的性别、含量常．件不同而异。
新生牛血清生产工艺i规程
新生牛血清生产工艺i规程新生牛血清生产工艺规程引言：新生牛血清是一种重要的生物制品，广泛应用于医药、生命科学研究等领域。
为了确保新生牛血清的质量和安全性，制定和执行严格的生产工艺规程是必不可少的。
本文将介绍新生牛血清生产工艺规程的主要内容，包括原料采集、加工处理、质量控制等方面。
一、原料采集1.1 采集源新生牛血清的采集源主要是健康、无传染病和其他疾病的新生牛。
应确保采集源的健康状况和无抗生素残留。
1.2 采集方法采集时应使用无菌器具，避免污染。
采集前应对牛进行适当的操作，如洗净乳头、消毒等。
采集的血清应立即进行初步处理，以防止细菌和病毒的污染。
二、加工处理2.1 血清分离采集的牛血应置于无菌容器中，放置一段时间以进行血清和血凝块的分离。
然后，将血清通过离心等方法分离出来。
分离后的血清应立即进行下一步处理。
2.2 过滤和杀菌分离后的血清应经过0.22μm以上的过滤器进行过滤，以去除细菌和病毒。
过滤后的血清应进行杀菌处理，以确保无菌状态。
2.3 冷冻保存经过过滤和杀菌处理的血清应立即进行冷冻保存，以保持其活性和稳定性。
三、质量控制3.1 外观检查血清应具有清澈的外观，无悬浮物和异物。
若出现混浊、沉淀或颜色变化等异常情况，应予以淘汰。
3.2 冻干率检查血清冻干率是衡量血清质量的重要指标之一。
应使用合适的方法测定冻干率，并确保符合规定的标准。
3.3 病毒和细菌检测血清应进行病毒和细菌的检测，以确保无致病性微生物的存在。
常用的检测方法包括PCR、ELISA等。
3.4 活性检测血清的活性是其应用价值的重要指标之一。
应使用合适的方法测定血清的活性，并确保符合规定的标准。
四、包装和储存4.1 包装血清应使用无菌密封包装，以确保产品的无菌性。
包装材料应符合相关的规定和标准。
4.2 标签和说明书包装上应标明产品名称、规格、批号、生产日期、保质期等信息，并附上使用说明书。
4.3 储存条件血清应储存在低温、干燥、避光的条件下。
牛血清在疫苗生产中的质量控制措施
牛血清在疫苗生产中的质量控制措施牛血清作为细胞培养基中的主要成分，对细胞生长起着提供生长激素和特殊营养的作用，因此，其质量的高低在疫苗的生产中占据着很重要的地位，是保证细胞能否培养成功的关键。
该文主要通过对牛血清在疫苗生产质量控制中存在的问题进行针对性的分析与研究，从而找出影响牛血清质量的关键因素，以及对存在的问题采取相应的改进措施，以加强牛血清在疫苗生产中的质量控制。
标签：牛血清；疫苗；质量控制；培养基生物技术的发展、生物医学的进步都离不开细胞培养，牛血清具有解毒、终止胰蛋白酶，提供贴壁因子，缓冲酸碱的作用。
是细胞培养基中很重要的组成成分，但是目前的牛血清存在着很多方面的问题，如来源广泛杂乱、质量差别太大、检测工艺较低、管理不严格，储存不重视等等。
对于这些问题进行严格的把控，最大程度上地解决这些影响、干扰牛血清质量的因素，才能从真正意义上实现对牛血清质量的控制，从而最终提高疫苗的质量。
1 牛血清质量对疫苗质量的影响及作用动物血清一直是生物细胞工程培养基的主要构成成分，而在动物血清中牛血清又是最常用、最合适、最有效的培养基成分。
在培养基中加入适量的牛血清，可以为细胞成长提供很多有利的条件，例如生长激素、贴壁因子等等。
它不仅可以促进细胞的贴壁、分裂、影响细胞的生长繁殖，进而影响疫苗的质量。
还能够缩短细胞的生长周期从而加快疫苗的生产，提高疫苗的产量，为疫苗生产企业带来更多的利益。
2 影响牛血清质量的原因分析牛血清作为细胞培养的关键性因素，虽然在细胞生长和疫苗生产上有极为重要的作用，但是其质量的高低才是影响细胞生长和疫苗生产的关键。
质量不过关的牛血清只会对细胞的成长产生不利的影响，甚至使疫苗生产出现问题。
所以对于牛血清的质量控制，才是疫苗生产中的关键性问题。
目前牛血清的來源广泛，从国内到国外，因为从来源产地上就存在着极大的可能性，质量就更是参差不齐，加之时间的因素，或者其他方面的影响，即使同一来源的牛血清在批次上也存在这很大的质量差异。
牛血清白蛋白配制注意事项
牛血清白蛋白配制注意事项
牛血清白蛋白是一种重要的生化试剂，常用于细胞培养、免疫
学和生物化学实验中。
在进行牛血清白蛋白的配制时，有一些注意
事项需要牢记。
首先，要确保在配制过程中严格遵守无菌操作的原则，使用经
过消毒的器皿和工具，并保持清洁的工作环境，以防止外源性污染。
其次，牛血清白蛋白的配制需要使用高纯度的蒸馏水或无菌缓
冲液，以确保配制出的溶液不受微生物污染和离子污染。
在配制过
程中，要注意溶解牛血清白蛋白的温度和速度，通常建议在室温下
缓慢加入溶剂，并轻轻振荡而非搅拌，以避免产生气泡或使蛋白质
变性。
另外，牛血清白蛋白在配制过程中可能会出现凝聚或沉淀的情况，这可能是由于溶剂选择不当或溶解过程中的机械刺激所致。
因此，在溶解过程中要轻柔操作，避免剧烈振荡或搅拌。
此外，配制好的牛血清白蛋白溶液需要进行无菌过滤，以去除
悬浮的微生物和杂质，确保最终溶液的纯度和无菌性。
最后，配制好的牛血清白蛋白溶液要储存在干燥、阴凉、避光
的环境中，并且要密封保存，避免受到空气、光线和污染物的影响。
总的来说，牛血清白蛋白的配制需要严格遵守无菌操作原则，
注意溶剂选择和溶解过程中的操作细节，以及储存条件，确保最终
溶液的质量和稳定性。
希望这些注意事项能够对你有所帮助。
细胞培养用牛血清生产和质量控制技术指导原则
细胞培养用牛血清生产和质量控制技术指导原则细胞培养用牛血清生产和质量控制技术指导原则《中国生物制品生产用主要原辅材料质控标准》已由国家药品监督管理局颁布实施，为规范细胞培养用牛血清的生产、质量控制，促进我国牛血清质量的提高，特制定本技术指导原则。
一、总则由于牛血清为疫苗等有关生物制品生产中一种重要的原辅材料，某些用于疾病预防的疫苗中还含有一定量的残余牛血清，因此，牛血清的生产质量管理应参照国家现行《药品生产质量管理规范》执行。
二、牛血清的生产（一）牛血清生产单位必须经工商登记注册、具有独立法人资格，必须具有与牛血清规模化生产相适应的生产车间、设备。
（二）生产负责人及生产者必须具有相适应的专业知识，并经培训考核合格方可上岗。
（三）应有相对稳定的牛源材料来源；并与相应的供牛单位签定有法律效应的协议；协议内容应包括详细的牛群免疫接种情况、流行病的监测内容。
不得使用疫区或近期有传染病流行地区来源的牛材料（如口蹄疫、结核、布氏、疯牛病疫区等）。
（四）生产用水及其他材料应符合《中国药典》及《中国生物制品生产用主要原辅材料质控标准》或相应标准的要求。
（五）应具有稳定的批量生产工艺；工艺流程中至少应有一次0．1um的过滤。
灌装工艺应在百级净化区进行。
（六）直接接触血清的器具应进行灭菌及去热原处理。
（七）应建立系统的生产质量管理体系，包括批生产记录及生产工艺的操作细则。
（八）不得混用非牛源血清材料用于生产；产品中不得添加防腐剂或抗生素等。
三、质量管理（一）应具有牛血清质量控制相适应的实验室及仪器设备。
（二）生产单位应具有独立于生产的质量控制部门，负责包括牛源、初制原料、生产过程及终产品的质量控制。
（三）质控人员应具有相适应的专业知识，并经培训考核合格后方可上岗。
（四）建立完整的质量控制体系，按《中国生物制品生产用主要原辅材料质控标准》要求进行检测。
（五）企业应建立严格的批合格签发制度。
四、企业管理（一）应建立系统的生产、质检管理制度，岗位责任制度及标准操作细则。
浅析影响胎牛血清质量的几大因素
浅析影响胎牛血清质量的几大因素胎牛血清作为一种常用的培养基添加剂，被广泛用于细胞培养、疫苗制备、抗体生产等领域。
其质量的好坏直接关系到最终产品的质量和效果。
下面将重点分析影响胎牛血清质量的几大因素。
1.采集方式：采集胎牛血清的方式有两种，一种是直接采集胎牛静脉血，另一种是采集到胎儿自然脱落的胎盘血。
直接采集胎牛静脉血可以获得更多的血清，但胎牛的死亡率较高，容易造成血清污染和质量下降。
而采集胎盘血则减少了对胎牛的伤害，但血量较少，收集效率低。
因此，选择适当的采集方式可以更好地保证胎牛血清的质量。
2.饲养管理：胎牛的饲养管理直接关系到血清的质量。
饲养环境应该干净卫生，并严禁使用生长激素、抗生素和激素类药物等对胎牛进行干预。
合理的饲料和草料供应可以保证胎牛的健康成长，进而提高血清的质量。
3.血样处理：从采集到的胎牛血样中提取血清时，需要经过一系列处理步骤，如离心、分离、过滤等。
这些步骤的操作技术和条件都可能影响血清的质量。
离心速度和时间的不当可能导致沉淀和杂质的残留。
分离过程中，应避免血样与外界的接触，以避免污染。
过滤时应选择合适的滤膜和过滤器，以确保血清的纯净度。
4.保存条件：胎牛血清的保存条件对血清的质量起着重要作用。
一般来说，胎牛血清应存放在低温环境下，常见的保存温度为-20℃或-80℃，并避免频繁的冻融循环。
此外，胎牛血清应避免阳光直射和暴露在高温环境下，以防止脂质氧化和蛋白质降解。
适当的保存条件可以保持血清的活性和稳定性。
5.检测方法：血清的质量可通过多种方法来进行评估，如蛋白质浓度检测、免疫球蛋白含量检测、内毒素浓度检测等。
选择合适的检测方法，可以及时发现质量问题，并进行调整和改进。
定期对血清质量进行检测，是保证血清质量的重要手段。
总之，影响胎牛血清质量的因素很多，包括采集方式、饲养管理、血样处理、保存条件和检测方法等。
只有综合考虑这些因素，并采取相应的措施，才能有效提高胎牛血清的质量，满足各种应用的需求。
谈牛血清生产工艺设计的指导原则
3 工程师,山西省分析测试中心,030006太原收稿日期:2001-11-29谈牛血清生产工艺设计的指导原则张 浩3摘 要 文章概要阐述了牛血清产品生产工艺设计的指导原则。
关键词 牛血清 生产工艺 设计原则中图分类号 Q819 文献标识码 A 文章编号 1004—6429(2002)02—51—02 《中国生物制品生产用主要原辅材料质控标准》(2000年版)已由国家药品监督管理局颁布,其中首次登录了“牛血清”条目,规定了八项检查内容。
这一措施,不仅为牛血清的生产和使用提供了科学客观的依据,也从源头上加强了生物制品的质量管理。
对此,各牛血清生产厂家高度重视,均开始重新审视和改进工艺设计,开展全面加强生产和质量管理规范工作,力争早日达标。
现根据自己近年来向专家求教及在生产经营中的体会,谈谈牛血清生产工艺设计的指导原则,以期在企业达标改造中思路科学,设计合理,资金投入准确,并对今后的生产和质量控制有指导意义。
笔者认为,“要尽可能地保持牛血清的天然特性,要保证每个抽样都具有整批产品的代表性。
”这两句话,应是牛血清生产管理人员自觉运用的一条原则,也应作为工艺设计的总的指导思想。
一、牛血清产品必须保持天然特性1.牛血清在现代生物技术中,是细胞培养的重要的原辅材料之一。
由于细胞培养在生物技术产业中起到了关键的核心作用,动物血清作为培养基的主要成份,对细胞的生长繁殖发挥着重要的难以替代的作用。
其中,牛血清的应用最为广泛。
这种基础环节性质的地位,决定了牛血清生产工艺设计,应该也必须参照执行国家现行《药品生产质量管理规范》。
特别是某些用于疾病预防的疫苗中,不可避免地还含有一定量的残余牛血清,并最终要随带使用于人体,如果用劣质牛血清制药,服用此药的人体可能出现过敏、发烧、休克等反应,严重的可能危及人的生命,因而,牛血清的质量“人命关天”,也就绝不是危言耸听的大话。
2.分析牛血清的天然特性,合理设计生产工艺。
牛血清不是纯天然产品,不能自然得到,要经过人工采制,但我们获取的牛血清,必须保持下述四种天然属性,才能应用于生物制品生产。
猪瘟疫苗专用牛血清安全操作及保养规程
猪瘟疫苗专用牛血清安全操作及保养规程
1.安全操作规程
(a)提前做好准备工作，包括消毒操作台和器具，佩戴好口罩、手套等防护用品。
(b)使用前对疫苗专用牛血清进行外观检查，如出现浑浊、色彩变化等异常情况应停止使用。
(c)在操作过程中要轻拿轻放，避免抖动或剧烈摇晃瓶子，以免破坏疫苗的质量。
(d)操作时注意防止交叉感染，使用专用工具或器皿，不得与其他物质混合或共用。
2.保养规程
(a)疫苗专用牛血清的存储温度应符合要求（通常为2-8摄氏度）。
在存储过程中，要定期检查温度，防止温度升高导致牛血清质量下降。
(b)存放疫苗专用牛血清的容器应干净、密封、耐压。
在存放过程中应避免阳光直射和潮湿环境，以免对疫苗的质量产生影响。
(c)疫苗专用牛血清的过期日期要在使用前核对，严禁使用已过期的产品。
(d)未使用完的疫苗专用牛血清应密封保存，避免污染或受潮。
3.废弃物处理
(a)使用完毕的疫苗专用牛血清容器应作为医疗废弃物分类处理，不能随意丢弃。
(b)废弃物处理应符合相关法律法规，避免对环境造成污染和危害。
4.风险防控
(a)职工在接触疫苗专用牛血清时，应定期接受健康检查，如有不适及时报告，确保自身安全。
(b)职工应接受相关疫苗知识培训，掌握正确的操作方法并遵守安全操作规程，减少操作风险。
(c)如出现意外事故，应立即停止操作，并采取相应的紧急措施，及时寻求医疗救助。
总之，猪瘟疫苗专用牛血清的安全操作及保养规程是确保疫苗质量和保护工作人员健康与安全的重要环节。
在使用过程中，要严格按照规程操作，定期检查和保养，以减少操作风险、保证疫苗质量和维护人员健康。
猪瘟疫苗专用牛血清安全操作及保养规程
猪瘟疫苗专用牛血清安全操作及保养规程1. 引言猪瘟病毒是一种高度接触性的病毒，对猪群健康造成了严重的威胁。
为了控制猪瘟的传播，猪瘟疫苗专用牛血清被广泛使用。
然而，操作和保养这些疫苗需要严格遵循安全操作规程，以确保人员的安全和疫苗的有效性。
本文将详细介绍猪瘟疫苗专用牛血清的安全操作及保养规程。
2. 安全操作规程2.1 穿戴安全防护装备在操作猪瘟疫苗专用牛血清之前，必须穿戴适当的安全防护装备。
这包括：•实验室服和手套•护目镜或面罩•防护鞋这些装备可以有效地防止疫苗或病毒的意外接触，保护操作人员的安全。
2.2 操作前准备在操作猪瘟疫苗专用牛血清之前，应对操作区域进行彻底的消毒，确保操作环境的清洁卫生。
同时，准备好所需的工具和材料，并确保它们是干净的。
2.3 疫苗取用和注射2.3.1 疫苗取用•使用无菌注射器和针头取用疫苗，确保疫苗不被污染。
•操作人员应站立在安全台上，避免疫苗溅出。
2.3.2 注射猪群•在注射猪群之前，先对猪进行必要的防疫和检查。
•使用适当的注射方法和剂量，按照疫苗的使用说明进行操作。
•注射后，将使用过的注射器和针头妥善处理，避免再次使用或误伤他人。
2.4 废弃物处理废弃物包括使用过的注射器、针头、空瓶和包装材料等。
这些废弃物可能携带病毒或疫苗残留，因此需要特殊处理。
•使用专用的废弃物容器收集所有废弃物。
•废弃物容器应密封并标明“有生物危害物”的标识。
•在完成操作后，应将废弃物交由专业处理机构进行处置。
3. 保养规程3.1 疫苗存放•疫苗应存放在冷藏设备中，温度控制在2-8摄氏度。
•存放区域应定期进行清洁和消毒，以防止细菌和病毒污染。
•疫苗的包装盒上应标明相关信息，包括生产日期、有效期等。
过期疫苗应立即处理。
3.2 疫苗保质期监控•定期检查存放疫苗的冷藏设备的温度。
确保温度在2-8摄氏度之间。
•定期检查疫苗的包装盒上的有效期，及时处理超过有效期的疫苗。
3.3 监测疫苗效力•使用测试猪群进行疫苗效力监测。
新生牛血清在动物血清制备中的质量管理
2017年第2期（总第195期）1新生牛血清质量的极端重要性随着现代畜牧业的快速发展,世界各地和国内的动物之间流动日趋频繁,动物各类疾病发生越来越多,特别是人畜共患的重大疾病如禽流感、口蹄疫、结核病、布氏杆菌病的发生将极大威胁人类的身体健康,动物自身的重大疫病如猪瘟、新城疫病发生也将引起动物大规模的发病和死亡,给人类和畜牧业生产造成重大经济损失,所以,预防和控制动物重大疫病一直是兽医卫生监督最重要的工作,而制备动物血清则是动物重大疫病实验室诊断的基础工作,动物血清制备质量将直接影响对动物各种重大疫病的准确诊断[1]和所生产的疫苗质量。
目前新生牛血清产品应用最为广泛,但由于来源广泛、质量参差不齐、批次质量差异大、质量检测手段落后等原因,使得动物疫苗生产质量受到很大的影响,因产品污染、质量不合格而报废量增多会加大企业的生产成本,直接影响企业的疫苗产量和质量。
所以,新生牛血清的质量和使用效果以及其动物来源的安全性等问题已越来越突显出来[2],成为动物血清制备质量控制的关键问题。
动物血清是医药生物技术产品中重要的原料材料之一[3],它在生物科学领域中的主要应用是细胞培养。
细胞培养的发展,培养基的质量是关键,而培养基的主要成份中,动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用[4]。
在动物血清的应用中牛血清又最为广泛,供组织培养、细胞培养和诊断试剂等用的动物血清主要是新生牛血清。
在动物细胞培养中,新生牛血清应用最为广泛,所以新生牛血清是生物技术产品中重要的原辅材料之一。
随着细胞培养技术的发展和医学科学研究水平的不断提高,对细胞培养过程中培养基的质量要求越来越高[5],对制备工艺中所涉及到的各种原材料的质量标准也越来越高,目前培养基中主要成分动物血清的质量起着重要的作用。
况且,产品质量是企业生存的命根子,是开拓占领市场用户的通行证,是提高经济效益的重要条件。
所以,做好新生牛血清的质量管理是促进生物制品质量提高的重要环节,具有极端重要性。
3503生物制品生产和检验用牛血清质量标准
3503 生物制品生产和检验用牛血清质量标准用于生物制品生产和检验的新生牛血清为从出生14小时内未进食初乳的新生小牛采血，分离血清，经滤过除菌制成；胎牛血清为经心脏采集230～240日龄的胎牛全血，分离血清，经滤过除菌制成。
主要用于细胞培养。
【性状】澄清稍黏稠的液体，无溶血或异物，冻融后可能存在少量絮状沉淀。
【无菌检验】按附录3306进行检验，应无菌生长。
【支原体检验】按附录3308进行检验，应无支原体生长。
【外源病毒检验】取被检血清样品10 ml，3000 r/min离心10分钟，取上清液，按附录3305进行检验，应无外源病毒污染。
【特异性抗体测定】根据血清的用途确定测定的抗体种类，采用血清学方法进行检验，应符合规定。
【细菌内毒素测定】按《中国兽药典》一部附录进行检验，每毫升血清的内毒素含量应低于10 EU。
【细胞增殖试验】下列方法，任择其一。
（一）SP2/0增殖试验法。
取生长良好的Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞，弃营养液，用无血清MEM配成每毫升30万～50万细胞悬液，计数细胞后，用无血清MEM在96孔细胞板上作1:200、1:400、1:800、1:1600稀释，每稀释度加8孔，每孔0.1 ml，每孔再分别补加0.1ml含20%参考血清或20%被检血清MEM营养液，置5％CO2培养箱37℃培养至48小时，倒置显微镜下计数，取每孔克隆数均在30～50之间的稀释度的8个孔，求和计为总克隆数。
计算被检血清和参考血清的绝对克隆形成率和相对克隆形成率。
绝对克隆形成率＝该稀释度形成的细胞克隆总数×100% 该稀释度接种Sp2/0悬液细胞总数相对克隆形成率＝胎牛血清（或新生牛血清）的绝对克隆形成率×100% 参考血清的绝对克隆形成率判定标准：参考血清的绝对克隆形成率应不低于20%胎牛血清的相对克隆形成率应不低于80%新生牛血清相对克隆形成率应不低于50%（二）Vero细胞增殖试验法。
将已长成良好单层Vero细胞按常规传代方法，用0.25%胰酶消化分散制备成悬液，1000～1500rpm，离心10min，弃去上清。
关于血清的一些问题
关于血清的一些问题实验室里常会遇到的关于血清的问题1.保存血清最好的方法?我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。
然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。
若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。
2.培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗?一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。
因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
3.如何解冻血清才不会使产品质量受损?我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。
但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。
长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。
因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。
解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。
请勿将血清置于37℃太久。
若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。
4.血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。
这是正常特性，不会影响产品性质。
血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。
但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。
若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g,1-2分钟稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。
我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。
大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。
所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。
5.如何避免沉淀？按如下操作可避免沉淀的产生：(1)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。
牛血清在疫苗生产中的质量控制
牛血清在疫苗生产中的质量控制李华;徐琼芳;段维国;钱兴丽;龙润乡;洪超;谢忠平【期刊名称】《云南医药》【年(卷),期】2006(27)4【摘要】大多数疫苗产生是以细胞培养为基础,细胞培养是众多生物技术产品的基本条件之一,对作为培养所使用原辅材料--牛血清进行全面质量控制.根据2000年版<中国生物制品主要原辅材料质控标准>[1]进行质控,通过对近年来72批牛血清的检测,结果显示,影响牛血清质量的主要原因是大肠杆菌噬体污染及细菌内毒素的超标.【总页数】3页(P321-323)【作者】李华;徐琼芳;段维国;钱兴丽;龙润乡;洪超;谢忠平【作者单位】中国医学科学院,中国协和医科大学生物学研究所,云南,昆明,650118;中国医学科学院,中国协和医科大学生物学研究所,云南,昆明,650118;中国医学科学院,中国协和医科大学生物学研究所,云南,昆明,650118;中国医学科学院,中国协和医科大学生物学研究所,云南,昆明,650118;中国医学科学院,中国协和医科大学生物学研究所,云南,昆明,650118;中国医学科学院,中国协和医科大学生物学研究所,云南,昆明,650118;中国医学科学院,中国协和医科大学生物学研究所,云南,昆明,650118【正文语种】中文【中图分类】TQ46【相关文献】1.牛血清在疫苗生产中的质量控制措施 [J], 王明惠;张敬武2.疫苗生产中纯化水与注射用水的质量控制研究 [J], 方朝东;邱文娜;李磊;饶玲;熊吉滨;李健峰3.三种检测猪瘟疫苗中牛血清蛋白含量的ELISA试剂盒的性能对比 [J], 曹玉美;方茜;陆江;孙如水;孙龙4.口蹄疫灭活疫苗生产工艺中新生牛血清的应用进展 [J], 张峰宇5.检测疫苗残余牛血清ELISA试剂的质量控制 [J], 潘殊男;刘保奎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
牛血清生产质量管理手册
全国牛血清生产企业达标检查手册中国医药生物技术协会医药生物技术产品质量控制专业委员会动物血清学组二○○九年十月二十四日修订编辑说明一、根据SFDA药监注函2001129号文“关于下发全国牛血清质量管理研讨会纪要的通知”精神和2009年4月26日全国新生牛血清质量管理座谈会纪要,结合我国的实际情况制定本手册;二、本手册以2007年SFDA药品GMP认证检查评定标准为依据,把检查的重点落在：溯源；强调牛血清供血点的管理；洁净室区布局合理,完善洁净室区空气净化系统,完善工艺用水系统；以批号为主线,全面规范相关的文件、记录；强化质量监管,做好初制品和成品质量检测工作和现场管理,以及开展关键工艺、设备、有关清洁消毒等方面的验证和内部审计等工作内容上;三、本手册共分机构与人员、厂房与设施、设备、物料、卫生、验证、文件、生产管理、质量管理、产品销售与收回、投诉与处理、内部审核等十二个部分,共162项,其中一般项目62项,重要项目87项,否决项目△13项;四、检查中发现不符合要求的项目统称为“缺陷项目”;其中,重要项目不符合要求者称为“严重缺陷”,一般项目不符合要求者称为“一般缺陷”,否决项目不符合要求者称为“否决”;五、在检查过程中,企业隐瞒有关情况或提供虚假材料的,按否决项目处理;检查组应调查取证并详细记录;六、结果评定（一）未发现“否决”,且“严重缺陷”≤10%,且“一般缺陷”≤20%,各类缺陷项目能够立即改正的,企业必须立即改正；不能立即改正的,企业必须提供缺陷整改报告及整改计划,方可通过达标认证;二发现“否决”或“严重缺陷”＞10%或“一般缺陷”＞20%的,不予通过达标认证;一．机构与人员13项,其中△1项,7项二、厂房与设施35项,其中△2项,18项三、设备17项,其中△1项,3项四、物料19项,其中△2项,11项五、卫生18项,其中△1项,9项六、验证4项,其中△1项,3项七、文件12项,其中△2项,6项八、生产管理21项,其中△1项,14项九、质量管理14项,其中△2项,10项十、产品销售与收回4项,其中2项十一、投诉与处理2项,其中1项十二、内部审核3项,其中3项全国牛血清生产企业质量管理达标检查统计表专家组签字：200 年月日。
牛血清在细胞培养中的作用与质量要求
牛血清在细胞培养中的作用与质量要求生物技术已经被世界各国视为一种高技术,在整个科学技术中占据了特殊的显著地位,特别是生命科学的发展更离不生物技术,生命科学的发展备受各国的重视。
我国在很多大学中都设立了生命科学院。
现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术,而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系,特别是在医药领域的发展,细胞培养更具有特殊的作用和价值。
比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。
基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体;细胞工程中更是离不细胞培养,杂交瘤单克隆抗体,完全是通过细胞培养来实现的,既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。
正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现,发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。
总之,细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。
细胞培养的发展,培养基的质量又是关键,而培养基的主要成份中动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。
在动物血清的应用中牛血清又是最为广泛的,所以牛血清是医药生物技术产品中重要的原材料之一。
保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。
一、牛血清在细胞培养基中的主要功能牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能。
1.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
5.起酸碱度缓冲液作用。
6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
二、牛血清的主要成份血清是一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已为人所知,但还有一部分尚不清楚,而且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。
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第一作者简介:张 浩,男,1950年生,山西省太原市人,1986年毕业于河北大学,工程师,现为山西省分析测试中心生物技术室主任,山西省太原市北园街61号,030006. 文章编号:1005—6033(2001)06-0128-02收稿日期:2001—08—15粗制牛血清的质量控制张 浩,刘文静,张晓杰(山西省分析测试中心,山西太原,030006)摘 要:分别对牛血清检测的8项内容与粗制工艺流程的关系进行了叙述。
在此基础上,总结出粗制牛血清制取工艺中的质量控制要点。
关键词:牛血清;粗制工艺;质量检测;质量控制中图分类号:Q 813 文献标识码:A 粗制牛血清,系指从出生14h 未进食的新生牛采血并经分离制备得到的血清,是除菌过滤制取精牛血清的原料,《中国生物制品主要原辅材料质控标准》(2000版)登录了牛血清的质量标准8项,并且已于2000年10月1日正式实施,严格而有效地执行2000年版《中国生物制品规程》,必须从源头上加强生物制品生产用原辅(起始)材料的控制。
粗制牛血清是整个牛血清制成品质控的基础。
其中,细菌内毒素、血红蛋白、支原体、牛病毒等项目,如果在粗制血清生产过程中失控,在今后的生产过程中将没有任何技术手段清除此类污染,造成无法挽回的损失。
因此,牛血清的质量控制,必须从采血的第一刀抓起。
1 牛血清质量检测内容与粗制工艺流程的关系1.1 细菌内毒素该项目要求主要控制外源因子感染血清,健康新生牛的血清中细菌内毒素的含量是不高于10Eu m l 的。
因此,除对出生后表现体质衰弱和畸形的小牛,坚决摈弃不用外,要抓住严格意义上的“灭菌”操作。
一是采血所用玻璃器皿和器械,必须按医用和手术规程的要求,进行酸碱液、灭活液浸泡,用符合注射水标准的蒸馏水、去离子水冲洗,180℃ 2h (或250℃ 1h )干烤,或者121℃ 30m in 高压蒸煮,前处理完毕后,放置低温干燥洁净处保存。
使用当天提前放入无菌采血室,30m in 紫外灭菌灯照射。
二是采血室要洁净,达到万级标准,要做到一牛一布(手术布),一牛一刀(手术刀),开刀前消毒备皮,开刀后清创清洁血管。
尤其规定采血员操作时手不能触碰摸握采血针管,干净准确插入血管,插深套牢。
三是采血和分离过程要严格在处理好的器皿中进行,封闭式操作,将开口程度降到最低。
1.2 血红蛋白采用3000r m in 低温离心机分离血清,标准操作下血红蛋白不会超标,影响离心机正常工作,致使血红蛋白不能与血清分离的情况是:(1)电压不稳定,达不到220V 。
有的农村地区电压不到200V ,甚至不到150V ,使离心机转速超低,有这种情况的采血点应安装稳压器,并在醒目处安装电表,避开用电高峰,便于观察监视,待电压正常时开机。
(2)离心罐重力不平衡时,导致偏重发热;或离心机长期连续工作,致使罐体发热,对此,须细心平衡重力,及时采取相应措施,降温后再开机。
(3)离心机停机后须自然降速刹车,停稳后仍须静止片刻,待血清在器皿内也停止旋转,再静置沉淀,几分钟后方可取出。
这些均要制定在操作规程中,要求采血员严格执行。
(4)对运到采血点后平躺不起的小牛,需要将其放置阴凉处1h 以上进行观察,待其自然恢复,能够抬头卧起、站起,呈现健康有生气时,可以采血,不能恢复的则要放弃。
1.3 支原体支原体是没有细胞壁的一类原核细胞生物,一般比细胞小,能在无活细胞培养基中自行繁殖。
能引起牛支原体病的支原体主要有以下几种:一是牛传染性胸膜肺炎的病原微生物即丝状支原体丝状亚种;二是牛生殖支原体,三是无乳支原体牛变种。
支原体感染和存活于牛的鼻、口、眼、呼吸道、尿道、生殖道、乳房等。
寄存于人体的支原体有16种,致病5种,也寄居于人的口咽部、呼吸系统、生殖系统等。
因此,牛血清支原体项目的控制,主要是外源污染途径的控制。
主要控制点:一是识别和摈弃病牛产下的小牛;二是杜绝小牛的口鼻眼分泌物污染血液;三是严格操作人员的更衣着装,佩戴口罩,减少操作室中细菌和支原体的漂浮量;四是合理规定操作时间,人员休息后须重新进入消毒更衣程序。
1.4 牛病毒《规程》要求牛血清中不得有牛腹泻病毒污染。
这里特别指出:对兽医生物制药来说,有的产品生产强调的是不能有牛腹泻病毒抗体存在,即BVDV 检测为阴性,抗体是病牛康复后产生的,并能遗传后代。
因此,该项目属于内源因子的检测。
在没有畜牧区奶牛详细病史资料的情况下,对小牛血清采制,只能采取逐一登记、逐一化验的办法,在粗制血清后期完成化验,并相应分流。
1.5 蛋白质含量新版规程要求该项“血清蛋白含量应在3.5%～5.0%(w v )”。
据我们的实际检测数据和经验表明,新生牛出生14h 内采血制取的血清,只要符合3个条件,其血清蛋白含量都在这个规程范围之内,并且,这个时间越短,测定值越接近下限,小牛出生后存活的时间越长,所采血清的蛋白含量测定值越接近上限,这3个条件是:(1)保证在小牛出生14h 之内即采血。
保证措施是:要有一定的通讯手段和交通运输工具,要有连续运转的工作机制,要有保障一个批次产品在连续数天内不间断采血的器皿器械洗消能力和存储备用能力。
(2)保证小牛出生后没有吮乳喂水。
保证措施是:一是采血后剖检小牛的胃;二是检察血清是否因混有乳糜而混浊,发现违规立即将该头小牛的血作为废料处理。
(3)保证没有远途和非本畜牧区的小牛送入采血点。
保证措施是建立畜牧经济区奶牛的孕、病、养3项情报网络档案。
1.6 无菌试验该项目要求按照2000年版通则中《生物制品无菌试验规程》A 项进行,应符合规定。
也就是说,追溯生产环境及设备条件,只要符合无菌操作要求,即可达到该项目的检测标准。
根据我国现在的牛血清生产发展水平和技术资金力量,应该达到也可以达到建立无菌室和超净台的条件要求。
将来条件充分,企业可以自定标准,严格要求,完全按照G M P 的标准进行采血基地的设计、建设、安装和管理。
当前条件尚不具备,也要朝这个方向努力,应该达到的基本要求是:宰杀室达到洁净级别100000,采血室、分离室、灌装室达到洁净级别10000,采血操作台和灌装操作台应该达到100级,以上要求亦是平时所说万级套百级标准。
玻璃器皿和其他器械的灭菌821要求,在第1项细菌内毒素中已经详述。
1.7 大肠杆菌噬菌体此项要求,只要按照上述第六项“无菌试验”的相关生产要求做到即可。
这里顺便指出的是,以后在牛血清精制除菌过滤的工艺流程中,要求最后一级过滤采用0.1Λm 滤膜,有的要求过滤3次。
这样,细菌和噬菌体是通不过滤膜,都要被滤除掉的。
如果某批牛血清产品在质量检验中,“无菌试验”和“大肠杆菌噬菌体”不合格,首先应在精制牛血清的过滤及灌装两道工序中查找问题。
1.8 支持细胞增殖检查从一个相对稳定的畜牧区采制新生牛血清,其牛种和饲养条件都是基本不变的,因而其支持细胞增殖能力的测定结果,(细胞生长曲线、细胞倍增时间、克隆率)也都应该是近似的或相对不变的。
那么,导致其结果可能发生较大变化的原因,可从以下几个方面寻找:一是牛血清生产中使用的玻璃器皿、器械在清洗中不规范,残留有酸碱等化学物质。
二是前次生产后清洗不干净,使血迹、血清、血凝斑残留在器皿、器械的死角中,有的高温炭化成细小微粒,在以后的生产中带入血清。
三是牛群中发生较大疫情,牛血清中产生了影响生物制品生产的特定病素或抗体。
四是不同季节的饲养对牛血清营养成分的变化是否有影响,尚不清楚。
五是在牛血清添加了抗生素类药物或防腐剂等,这是严重违反规定的行为。
2 粗制牛血清制取工艺中的质量控制要点从上文可以看出,牛血清质量检测8项内容,是交叉贯穿于采制工艺流程的。
因此,提高牛血清质量,降低残次品率的中心工作,是合理科学地布置工艺流程中的质量控制要点。
这里提出12项控制内容做为重点,分别强调于不同的工序中。
控1为每月以滴定法检测酸液浓度,适量添加;控2为器皿、器械浸泡完全,无气泡;控3为灭火剂试纸检验;控4为蒸馏水系24小时内制取并使用电导仪检测比电阻;控5为恒温检查;控6为高温、高压试纸法检测;控7为剔除、摈弃病牛、弱牛;控8为备皮灭菌、清创灭菌;控9为剖查小牛胃,摈弃吮奶小牛血液;控10为室温下(18℃～24℃)净化工作室(万级)与工作台(百级);控11为低温离心分离(离心机转速为3000r m in ;控12为冷冻(冷冻室温度为-20℃)。
控1、控2用于弱酸液浸泡、洗涤工序;控2、控3、控4用于灭活剂浸泡与蒸馏水洗涤工序;控5用于封口工序;控6用于高压蒸气消毒工序;控7用于新生牛圈存区;控8、控9用于宰杀工序;控10用于采血及灌装工序;控11用于分离工序;控12用于冷冻工序或进入精制流程。
Qua l ity Con trol of Raw Ox -seru mZHANG Hao ,L IU W en -j i ng ,ZHANG X i ao -j ieABSTRACT :T h is p ap er narrates the relati on s betw een eigh t item s of con ten ts of ox -serum quality testing and raw techn ical p rocess resp ectively and ,based on th is ,sum s up the m ain po in ts of quality con tro l of raw serum in p rocessing techno logy .KEY WORD S :ox -serum ;raw p rocess ;quality testing ;quality con tro l第一作者简介:刘 刊,男,1961年1月生,山西省孝义市人,1981年毕业于北京水利电力学院,工程师,山西省水利水电勘测设计研究院,山西省太原市迎泽西大街39号,030024. 文章编号:1005—6033(2001)06-0129-02收稿日期:2001—11—13木龙湖升船机主提升机设备的布置及选择刘 刊,苏海宾,陈旭峰(山西省水利水电勘测设计研究院,山西太原,030024)摘 要:非完全平衡式垂直升船机是一种技术合理、经济适用的新型垂直升船机,其结构新颖,构思巧妙,有一定推广价值。
关键词:升船机;主机设备;提升机中图分类号:U 642 文献标识码:A 升船机采用非完全平衡式垂直升船机,是继岩滩水电站下水式部分平衡式垂直升船机之后的又一个特殊通航设施。
升船机由主提升机、承船厢、平衡调节装置、上闸首工作闸门、力矩平衡重、力矩平衡重、电力托动及监控系统、监测系统等组成。
用于使载水的乘船厢沿垂直方向上下运动,达到游船上下游通航的目地。
主提升设备是升船机中的核心系统之一。