MP人类免疫缺陷病毒(HIV1+2型)抗体检测试剂盒(免疫印迹法)

新加坡MP生物医学亚太有限公司生产的HIV-1+2抗体免疫印迹试剂(HIVBLOT 2．2)

1)原理wB是将HIV蛋白经SDS-PAGE，由于蛋白分子大小不同而分离开来，然后再把这些已分离的不同蛋白带转移到硝化纤维膜上，以后用不同的方式，包括非常敏感的免疫酶法，检测HIV抗体。每一条硝化纤维膜上均含有经电泳分离过的HIV抗原。若有相应抗体就会与硝化纤维膜条上的抗原带相结合。然后与抗人的IgG酶结合物反应。在底物作用下，硝化纤维膜条带上呈现紫色，表示阳性反应。

2)基本检测程序

(1)准备试剂：配制稀释洗涤液、印迹缓冲液、工作酶结合溶液。

(2)湿润膜条：用镊子从塑料管中小心取出所需的硝化纤维膜条，其中包括3条对照(强阳性、弱阳性、阴性对照各1条)，并且将有编号的膜面向上放入分析槽中，随后加人2 ml 已经稀释好的洗液，室温(22～28℃)振荡浸泡至少5 min，然后吸干槽内液体。

(3)加样：每槽中加入2 ml印迹缓冲液和20ul待检标本或对照血清(每个标本都需换新的移液头)。

(4)孵育：盖上盖子，室温振荡1 h(也可采用室温振荡16～18 h)。

(5)洗涤：小心打开盖子，吸干槽内液体，避免标本交叉污染。加入2 ml已经稀释的洗涤液，室温浸泡振荡5 min，再吸干槽内液体。如此反复洗涤3次。

(6)酶结合：加入2 ml工作酶结合溶液，盖上盖子，室温振荡1 h(如果在6步骤中采用室温振荡16～18 h的，则此步酶反应步骤中室温振荡30 min)。

(7)洗涤：吸干槽内液体，再洗涤3次。

(8)显色：加入2 ml底物溶液，室温振荡15 min。

(9)终止：吸干槽内液体，加入蒸馏水终止反应，反复3次，随后用镊子小心取出膜片于滤纸巾上，并开始读膜片结果。

(10)结果判定标准：每次实验须设立对照血清，如阳性对照必须全部条谱带均出现；弱阳性对照可以谱带不全，但必须够判定阳性的结果；阴性对照则无反应谱带。如果对照血清的结果未出现正确的谱带，则此次实验无效，须重做。同时，每条膜片上有一血清条带，此带未出现说明有可能漏加标本；那么此条带为无效实验，也须重做。

(11)结果判定：阴性标本，在膜片上不出现有颜色的谱带。阳性血清标本可在膜上呈现水平的深紫色谱带。小分子量蛋白谱带在膜片下端，高分子量的谱带在膜片上端。谱带颜色的深浅与血清中HIV抗体的浓度呈正比。典型的反应谱带可参照标准图谱判断(试剂盒中备有)。

中国疾病预防控制中心2004：年版的《全国艾滋病检测技术规范》WB检测的判定标准如下。

HIV-1抗体阳性：至少有2条env带(gp41和gpl60／gpl20)出现；

至少有1条env带和P24带同时出现。

HIV-1抗体阴性：无抗体特异带出现。

HIV-1抗体不确定：出现HIV特异性抗体带，但带型不足以确认阳性的。

上述标准为判读WB检测结果的基本原则，在实际工作中还应参照所用试剂的说明综合判断，遇疑难情况应报上级实验室解决。

如膜片上出现特异性HIV-2 gp36带，则须进一步用检测HIV-2抗体的WB药盒进一步检测。HIV-2抗体血清学阳性：至少有2条env带(gp36和gpl40／gpl50)。HIV-2抗体阴性和HIV-2抗体不确定的判断，类同于HIV-1的判断。