微生物检验病原性球菌及检验

第十八章病原性球菌及检验

本章考点：（掌握，熟练掌握）

（1）概念

（2）生物学性状

（3）微生物学检查方法与原理

（4）临床意义（致病性、所致疾病）

普及共性，单记个性

生物学性状

形态与结构：革兰染色性，菌体形态，大小，排列状态，特殊结构。

培养特性：对气体需求，营养要求，最适pH值，最适温度，在培养基中的生长现象。

生化反应：特殊生化。

抗原：

分类：

致病性

致病物质

所致疾病

微生物学检查：针对生物学性状和致病性

一、葡萄球菌属

（一）概念

一群革兰阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状而得名。

（二）生物学特性

1.形态与结构：本属菌革兰染色阳性，呈圆球形，直径0.5～1.5／μm，不规则成堆排列，形似葡萄串状，在脓汁、肉浸液培养物中，可见单个，成对或短链排列。无鞭毛和芽胞，有些细菌能形成荚膜。

2.培养特性：需氧或兼性厌氧，营养要求不高，通常在肉浸液及肉浸液琼脂或加入血液的培养基上生长良好。最适pH为7.4，最适温度为35℃～37℃。

在普通琼脂平板上经35℃24～48h培养，可形成圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为2～3mm。可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。

在血琼脂平板上，几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。对人致病的主要是α溶血素。

在液体培养基（普通肉浸液）中生长迅速呈均匀混浊状。

3.生化反应：触酶试验（+），对糖的发酵反应不规则，多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气。多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。

4.抗原：葡萄球菌水解后，用沉淀法可获得两种抗原，即蛋白抗原和多糖抗原。

（1）蛋白抗原：为完全抗原，有种属特异性，无型特异性。存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白（SPA）。

（2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性，有三种：①A型多糖抗原；②B型多糖抗原；③C型多糖抗原。

5.分类

6.抵抗力：对理化因素抵抗力强，耐热，耐干燥，耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。

（三）致病性及临床意义

葡萄球菌感染的特点是感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是引起临床感染最常见的葡萄球菌。

1）金黄葡萄球菌

2）表皮葡萄球菌是存在于皮肤的正常栖居菌，为医院感染的重要病原菌，它是导致血培养污染的常见细菌之一。

3）腐生葡萄球菌是导致尿路感染的常见病原菌之一。

（四）微生物学检验方法与原理

1.标本采集：根据葡萄球菌感染所致的疾病不同，可采集脓汁、渗出液、伤口分泌物、血液、尿液、粪便、痰液以及脊髓液等。（不同疾病采集不同标本）

2.检验方法及鉴定

（1）直接镜检：无菌取脓汁、痰、渗出物和脑脊液（离心后取沉渣）涂片，经革兰染色后镜检，如为革兰阳性球菌呈葡萄状排列可初步报告为：“找到革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌”。

（2）分离培养：血液标本（静脉血约5ml）注入50ml葡萄糖肉汤或含硫酸镁肉汤增菌培养，迅速摇匀，以防凝固，置35℃，一般于24h后开始观察有无细菌生长，若均匀混浊，溶血及胶胨状生长，则接种于血琼脂，进一步鉴定，若无细菌生长，于48～72h后自行观察（一般以7天为限），并接种血琼脂，以确定有无细菌生长。血液标本也可注入商品血培养瓶培养。

脓汁、尿道分泌物、脑脊液离心沉淀物，通常可直接接种血琼脂。35℃18～24h培养，可见直径2～3mm，产生不同色素的菌落。金黄色葡萄球菌在菌落周围有透明的溶血环。

尿液标本，必要时作细菌菌落计数。

粪便、呕吐物应接种高盐卵黄或高盐甘露醇琼脂平板，经35℃18～24h培养，可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。

（3）鉴定试验

金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌触酶+ + +

血浆凝固酶+ - -

甘露醇发酵试验+ - -

新生霉素敏感试验S S R

报告：检出“XXX葡萄球菌”

（4）耐药性检测：检测耐甲氧西林的金葡菌（MRSA），耐甲氧西林的表葡菌（MRSE），耐万古霉素的金黄色葡萄球菌（VRSA），耐万古霉素的表皮葡萄球菌（VRSE）。NCCLS／CLSI推荐用头孢西丁纸片法检测对苯唑西林耐药的葡萄球菌。

二、链球菌属

（一）概念

链球菌属为触酶阴性，兼性厌氧，呈圆形或卵圆形的革兰阳性球菌，在液体培养基中生长时易形成长链而表现为沉淀生长（但肺炎链球菌为混浊生长）。

（二）生物学特性

1.形态与染色：革兰染色阳性。菌体呈圆形，直径为0.8～1.0μm，呈链状排列，在液体培养基中易成长链。在脓汁标本中为短链，成双或单个散在。无鞭毛、无芽胞、某些菌株在血清肉汤中可有荚膜。

2.培养特性：本属细菌大多为需氧或兼性厌氧菌，少数微需氧及专性厌氧。营养要求较高，在含有腹水的培养基上生长良好。最适温度为35℃～37℃，最适pH为7.4～7.6，在5%C02环境下生长更好。在血琼脂平板上，经35℃ 18～24h培养后可形成灰白色、圆形、

凸起、直径为0.1～0.75mm细小菌落，菌落周围出现不同溶血环。

3.生化反应：本属细菌触酶试验阴性（与葡萄球菌属鉴别）

4.分类

（1）根据溶血能力分类：利用链球菌在血平板上溶血情况分为三类，

1）甲型（α）溶血性链球菌：又称草绿色链球菌。本菌为条件致病菌。

2）乙型（β）溶血性链球菌：通称溶血性链球菌，透明溶血环。该型细菌致病性最强，常引起人和动物多种疾病。

3）丙型（γ）链球菌：无溶血环。一般无致病性。

（2）根据链球菌细胞壁抗原（即C抗原）分类：即常用Lancefield血清分型法，将链球菌分为A、B、

C、D……T等18个群（其中Ｉ和J缺），对人类有致病性的90%属A群，B、C、

D、G群链球菌感染较少见。

5.对理化因素的抵抗力：不强。

（三）致病性

A群链球菌：

草绿色链球菌：属条件致病菌，常与亚急性心内膜炎相关。

B群链球菌：是新生儿肺炎、脑膜炎和败血症的病原体。

D群链球菌：引起呼吸道和泌尿道感染。

治疗原则：A群链球菌感染，青霉素G被列为首选。

B群链球菌常采用青霉素G和一种氨基糖苷类合用。

（四）微生物学检验方法与原理

1.标本采集：不同疾病采集不同标本。

2.检验方法及鉴定

（1）直接镜检：革兰染色，镜检。如符合链球菌的形态特征可初报。

（2）直接检测抗原。

（3）分离培养：血液标本，以无菌操作取两份血液各8～10ml，分别注入肉汤培养基，分别置需氧和厌氧环境中增菌，有细菌生长，然后分别接种于两个血平板，置需氧和厌氧环境中培养。脓汁和咽拭标本接种血平板并涂片染色镜检，若形态酷似链球菌，并革兰阳性，可初报。上述的培养物经35℃18～24h培养后，观察菌落特征和溶血情况。链球菌的菌落通常较小，透明或半透明，似针尖大小、凸起，菌落周围