PCR基因扩增仪ppt课件

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第二节 PCR扩增仪的 分类与结构
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第二节 PCR扩增仪的分类与 结构
荧光实时定量PCR（real-time quantitative PCR,RQ-PCR）技术 在PCR反应体系中加入特异性的荧光染料或探针 荧光信号的变化真实地反映了体系中模板的增加 通过检测荧光信号，从而实时监测整个PCR反应过 程 最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析
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第二节 PCR扩增仪的分类与 结构
SmartCyclerⅡ荧光定量PCR仪
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第三节 PCR扩增仪的性能指标、 操作规程及常见故障的排除
一、PCR扩增仪的性能指标
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（二）荧光检测系统
激发光源
检测器
卤钨灯光源 发光二极管 超低温CCD 光电倍增管
PCR基因扩增仪
(PCR Gene Amplifier)
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内容提要
1. PCR基因扩增仪的工作原理 • PCR技术的原理及发展 • PCR基因扩增仪的工作原理
2. PCR扩增仪的分类与结构 • 定性PCR扩增仪 • 实时荧光定量PCR扩增仪
3. PCR扩增仪的性能指标、操作规程 PCR扩增仪的性能指标
转到跟前的样品，有效减少系统误差
可容纳样品量少，有的需用特殊毛细管作样品管 ，增加了使用成本，也不带梯度功能
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第二节 PCR扩增仪的分类与 结构
Rotor-Gene 3000荧光定量PCR仪
Light CycleTM荧光定量PCR仪
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第二节 PCR扩增仪的分类 与结构
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第一节 PCR基因扩增仪的 工作原理
PCR基因扩增仪的工作关键 DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得 加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂 贵，制约了PCR技术的应用和发展。 从PCR反应基本原理可以看出，PCR基因扩增仪工 作关键是温度控制。
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第一节 PCR基因扩增 仪的工作原理
1986年5月，Mullis在冷泉港实验室做专题报告，全世界从此开始学习PCR的方法。
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第一节 PCR基因扩增仪的 工作原理
二、PCR技术的原理
体外核酸扩增，加热使双链DNA解开螺旋，在退火温度条 件下引物同模板DNA杂交，在Taq DNA聚合酶，dNTPs(脱氧 核糖核苷三磷酸)，Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引 物，重复 “变性→退火→引物延伸”过程至25-40个循环， 呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。
简单的说，PCR仪就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外 或试管内的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶进行专一 性的连锁复制。目前常用的技术，可以将一段基因复制为原 来的一百亿至一千亿倍。
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第一节
PCR基因扩增仪的 工作原理
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• PCR扩增仪的操作规程 4. PCR扩增仪的应用
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第一节 PCR基因扩 增仪的工作原理
一、PCR技术的聚合发酶展链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的
Khorana (1971)等分最最子大早生特提物点出学，核技是酸术能体，将外它微扩可量增看的的作D设N是A想生大：物幅“体增经外加D的。N特A因变殊此性D，，N无A与论复合是制适化，的石P引C中R物的的 杂交，用DNA聚合酶古延生伸物引、物历，史并人不物断的重残复骸该，过还程是便几可十合年成前t凶RN杀A案基中因凶。手”所遗留的 1985年，Kary M毛ull发is在、C皮e肤tus或公血司液工，作只期要间能，分发离明出了一P丁CR点。的MDuNlliAs要，合就成能D用NPAC引R物加 来进行测序工作，却以常放为大没，有进足行够比多对的。模这板也D是N“A而微烦量恼证。据”的威力之所在。
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第二节 PCR扩增仪的分类与 结构
MJ公司Chromo 4荧光定量PCR仪
ABI 7500荧光定量PCR仪
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Bio-rad公司 iCycler荧光定量 PCR仪
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第二节 PCR扩增仪的分 类与结构
离心式实时定量PCR仪 温度均一性较好 使用的是同一个激发光源和检测器，随时检测旋
各孔独立控温的定量PCR仪 不同样品槽分别拥有独立的智能升降温模块，各孔独 立控温，适合多指标快速检测。
SmartCyclerⅡ的软件允许一台仪器同时操作六个样品 模块，既满足高速批量要求，又能灵活运用，还可实现 任意梯度反应。
SmartCyclerⅡ上样不如传统方法方便，而且需要独特 的扁平反应管，使用成本较高。
1983年4月的一个星期五晚上，他开车去乡下别墅的路上,猛然闪现出“多聚酶链 式反应”的想法。
1985年10月25日申请了PCR的专利，1987年7月28日批准（专利号4,683,202 ）， Mullis是第一发明人；
1985年12月20日在Science杂志上发表了第一篇PCR的学术论文，Mullis是共同 作者；
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第二节 PCR扩增仪的 分类与结构
实时荧光定量PCR仪
金属板式实时定量PCR仪
离心式实时定量PCR仪
各孔独立控温的定量PCR仪
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第二节 PCR扩增仪的分类 与结构
金属板式实时定量PCR仪 可作为普通PCR仪使用 可带梯度功能 可容纳的样本量大，无需特殊耗材 温度均一性欠佳，有边缘效应，标准曲线的反应条 件难以做到与样品完全一致