无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友

干粉工艺：具备与干粉产品流动性能相似的无菌TSB干粉或 无菌安慰剂粉末（PEG,乳糖,甘露醇…)
培养温度
|
20-35℃，目标值±2.5℃，不少于14天；如选择两个温度， 则每一温度下至少培养7天，从低温开始。
27 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
惰性替代粉末的选择
惰性替代品选择要求： – 无活性、易灭菌 – 易溶解 – 对培养基促进生长作用无副作用 – 易灌装，流动性要好（培养基流动性较差）
|
13 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
2、多产品简化试验思路
一条灌装线生产多个产品时， 根据下列因素可被划分为不 同的类型组
灌装工艺 不同的容器、密封方式
由此选出两个或更多个在下列方面能涵盖所有其它相关产品 的产品：
容器的大小、开放或密封的设计 灌装线的速度和干预
|
冻干, 贮存容器的形式、转移的方式
… 培养基灌装验证是对设备、环境以及人员操作的 一种系统验证,是判断无菌保证水平的关键手段…
工艺验证工作主要为培养基灌装验证试验。灌装的批数、批 量与合格标准见表1。
|
批量（瓶）
3000
允许染菌的数量（瓶） 0
4750 ≤1
6300 7760
≤2
≤3
10 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
相关指南文件
推荐使用类似于矩阵式试验设计，选择产品和工艺
14 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
模拟灌装实验的设计
包装容器代表性选择：
– 对于多规格、容器形状不同的灌装生产线，应对不同大 小、形状的容器进行评估。
– 多数可能选用最大敞口直径的容器和最低生产线速度； – 有时也会选择容易倒落的小型容器用来代表最差情况，
模拟灌装实验的设计
时间代表性：
– 应选择正常工作阶段的不同的时间间隔，并考虑可能 的中断、换班。培养基灌装应持续足够长的时间，覆 盖允许的工艺时间限度，并包括实际加工中最常发生 的操作。
操作代表性：
– 根据实际生产中可能发生的动作或操作来设计培养基
|
中发生的、允许和禁止的干预事件的一览表，并在试 验中进行模拟。
PDA 关于培养基模拟灌装的技术报告
– PDA Technical Repo ort No. 28, Process Simulation Testing ofroSterile Bulk Pharmaceutical Chem micals, Revised Supplement 2006
– PDA Technical Repo ort No.22 1996, Process SimulatiofnoT| esting or Aseptically Filled Products ）
4、模拟灌装实验的设计
最差状况：高于或低于正常范围的条件限度，与 正常生产条件相比最有可能造成工艺或生产失败 的条件。
宜尽可能模拟实际无菌生产过程，并包括产品加 工中的“最差状况”。其设计应具有以下几方面 的代表性：
– 时间代表性
|
– 运行代表性 – 包装容器代表性
18 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
EU GMP Annex1 无菌药品的生产
Validation of a|septic processin snhgould include a process simulation test using a nutrient t medium (media fill).
7|
国家大容量注射剂工程技术研究中心
19 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
模拟灌装实验的设计
运行代表性：
应模拟包括“最差状况”的生产条件下进行培养基灌装。 （如：最大干预次数、模拟的加卸料、可能的生产线停机的 纠正、灌装针/管的调整和更换、人工轧盖、在线过滤器的 更换以及所用人员的数量等）
|
20 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
人人员员卫操生作 环文境件监体系控
物料质量
4|
国家大容量注射剂工程技术研究中心
培养基模拟灌装试验
培养基模拟灌装试验---使用培养基作为药品的替代 品（Placebo）进行无菌模拟生产，对无菌工艺进行 验证。
– 培养基灌装在某种意义上是一种挑战性试验，因为几乎在 所有情况下，微生物在培养基中的繁殖和生长要比在实际 产品中更容易
因可能需要更多的人工干预； – 当不能兼顾 | 时，应考虑选取有代表性的几种容器进行培
养基模拟灌装试验。
15 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
3、验证与确认
稳定的产品质量 可靠的设备性能 材质与安装质量
|
用户需求与设计
16 |
性能确认及工艺验证（PQ/PV） 运行确认（OQ）
安装确认（IQ） 设计确认（DQ）
国家大容量注射剂工程技术研究中心
验证开始前的准备工作
设备设施确认
HVAC及压空系统（或氮气）的确认 设备的在线清洗和灭菌CIP P,SIP
灭菌工艺验证
湿热、干热灭菌工艺 除菌过滤验证及空气过滤器的完整性检测 容器/胶塞密封完好性测试
人员培训
|
无菌更衣确认
环境监控符合要求
17 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
不同区域玻瓶破碎 设备故障 更换灌装针头 灌装针头位置调整 自动称量故障 自动加塞故障
24 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
5、培养基灌装试验的频率
新建的或生产工艺、设备、人员等重大变更后的无菌工艺生 产线，必须经至少连续三批合格的培养基灌装试验
常规生产条件下的再验证频率，培养基模拟试验通常按生产 工艺每班次半年进行1次，每次至少一批。
11 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
培养基模拟灌装试验 试验设计
|
12 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
1、试验涵盖范围
模拟必须包括产品成为无菌状态后的所有的无菌生产工艺步 骤(如转运, 灌装, 装载/卸载, 冻干, 加塞, 轧盖) 模拟必须包括所有的无菌处理(如灌装线的设置, 无菌连接, 人员的干扰操作) 培养基灌装研究不包括非无菌混合操作或产品的除菌工艺( 如无菌过滤) 培养基的制备和灭菌可以与产品的
常用替代品 – 聚乙二醇Polyethylene glycol 系列(PEG 6000,PEG 8000）, 甘露醇Mannitol，乳糖Lactose等
|
– 事先需要伽马辐照灭菌（钴60，用量约15～25kGy） – 应进行无菌性、抑菌性和溶解度的测试
28 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
培养基的适应性检查
2010版GMP附录一：无菌制剂
第四十七条 无菌生产工艺的验证应包括培养基模拟灌 装试验。
应根据产品的剂型以及培养基的选择性、澄清度、浓度 和灭菌的适用性选择培养基。应尽可能模拟常规的无菌生产工 艺，包括所有对产品的无菌特性有影响的关键操作，及生产中 可能出现的各种干预和最差条件。
培养基模拟灌 | 装试验的首次验证，每班次应连续进行3次 合格的试验。空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更 后，应重复进行培养基模拟灌装试验。培养基模拟灌装试验通 常应按生产工艺每班次半年进行1次，每次至少一批。
全面反映整个生产过程采用无菌工艺生产无菌产品 的能力。 |
各国药品法规要求的基本内容。
5|
国家大容量注射剂工程技术研究中心
培养基模拟灌装试验 相关法规要求
|
6|
国家大容量注射剂工程技术研究中心
US FDA和EU GMP的要求
FDA CGMP 无菌工艺药品指南
An aseptic processing operatio on should be validated using a microbiological growth mediu um in place of the product. This process simulati ion, also known as a media fill.
生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到上述目 标的关键因素
无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法及规 程进行
|
处理或成品检验。
பைடு நூலகம்
3|
国家大容量注射剂工程技术研究中心
无菌特性组成
容器密封 质空量调保系证统 质公量用控设制施 质生量产受设权人备
过程控制
|
无菌药品
风险分析为基础
清洁消毒 更资质衣质量确职保认责证
比如，设施或设备的变化、生产线配置的变动、人员重
|
环境监控异常和无菌检查结果阳性等。
26 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
6、实验用培养基和培养温度的选择
培养基选择
适应广谱微生物生长，包括细菌和真菌
较好的澄明度，较小的粘度
液体培养基易于除菌过滤
常用培养基：3％大豆胰蛋白肉汤（TSB）
厌氧培养基仅在特殊情况下使用（FTM）
非正常的—非正常情况才会发生（设备故障，灌封线堵塞，轨 道调节，拆卸/替换破损的部件） SOP中应列出哪些干预是容许的，非正常的干预至少每年模 拟一次
|
干预的次数应该等于正常生产时发生的次数
23 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
干预举例—冷冻干燥工艺
设备组装 加入胶塞 取出卡住的胶塞 取走倒下的玻瓶 手工装载到冻干机 放置热电偶 | 环境监测-放置和取走培养皿 操作人员进出及更衣
最差条件的设计（1）
储存时间的验证
灌装设备、部件、储罐、无菌物料、药液在实际灌封前 能够放置的最长时间
– 1. 灌封设备、灌封部件、储罐、无菌物料需要再灭菌（除菌 ）的时间间隔
• 用超出单项验证后确定的最长保存时间的设备部件、储 罐、无菌物料参与培养基灌装试验
– 2. 产品从无菌过滤到灌封加塞完成所需要的时间 | • 无菌过滤后存放在中间储罐内的培养基模拟实际生产时产 品的最大储存时间后再灌封
无菌工艺验证 培养基模拟灌装试验
国家大容量注射剂工程技术研究中心 葛均友
Cont tents
1
培养基灌装相关法规要求
2
如何设计培养基灌装方案
3
培养基灌装的评价与调查
4
| 常见问题及FDA 483缺陷
2|
国家大容量注射剂工程技术研究中心
无菌药品基本理念
无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应最大限 度降低微生物、各种微粒和热原的污染。
有1支污染，需调查，可考虑重复试验； 有2支污染，需调查后，进行再验证。 （3) 灌装数量超过10000支时： 有1支污染|，需调查； 有2支污染，需调查后，进行再验证。 （4）发生任何微生物污染时，均应进行调查。
9|
国家大容量注射剂工程技术研究中心
注册申报要求
SFDA 化学药品注射剂基本技术要求（2008）
|
– 任何干扰操作都应在培养基灌装时进行 – 在正常生产过程中所需的最长时间，包括可能发生的事件，人员的
换班等
22 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
最差条件的设计（3）
干预的设计
所有干预都应是预先设定和进行记录
正常的—每班次都会发生（灌封线装配，称量调节，加胶塞/ 铝盖，处理倒瓶，中控取样，环境监测，手工补充轧盖等）
培养基适应性检查
应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检 查培养基灌装试验前或同时进行。 必须用药典要求的标准微生物或工厂特定微生物（分离 自环境人员监测及无菌试验）来进行 通常为枯草芽孢杆菌、白色念珠菌，菌液浓度控制约在 100个菌/ml 加入的菌液应小于100 CF FU/单位
|
生长良好，判该培养基的适应性检查符合规定
产品在灌装后密封前的储存时间
21 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
最差条件的设计（2）
最长灌装的持续时间 最保守的设计：在培养基灌封试验中，模拟生产用时最长的 批量所需要的时间，其中包括正常的干扰时间（换班、设备 维修）。（一般不采用）
其他的设计：
1 1.在生产完成后接着进行培养基灌封实验
2.为了减少灌封瓶数，在每批试验开始、中间及结束前均灌装培养基，
29 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
生产线生产不同规格的无菌产品，则应考虑不同规格的产品 的因素，培养基灌装试验的最差状况进行评估。
|
员，保证每年至少参加一次成功的培养基灌装试验。
25 |
国家大容量注射剂工程技术研究中心
变更后培养基模拟灌装试验
变更及其评估
对产品或生产线的每一种变更，均应根据书面的变更控 制系统进行评估 。
如果通过评估认为此项变更会影响到无菌生产工艺产品 的无菌保证水平，则需要进行增补性培养基模拟灌装实 验。
8|
国家大容量注射剂工程技术研究中心
2010版GMP附录一：无菌制剂
培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性。批量较小的 产品，培养基灌装的数量应至少等于产品的批量。培养基模拟灌装 试验的目标是零污染，应遵循以下要求：
（1）灌装数量少于5000支时，不得检出污染品； （2）灌装数量在5000至10000支时：