培养基模拟灌装试验管理规

1 主题内容与适用范围

本文件规定了培养基模拟灌装试验的程序和要求。

本文件适用于培养基模拟灌装试验的管理。

2 引用标准

《药品生产质量管理规范》2010年修订

3 术语

培养基模拟灌装试验（以下简称试验）：英文名称MFT——Media Fill Test的英文缩写，是用一种模拟替代物质来模拟整个无菌生产过程，在所得的模拟产品中加注培养基，再对所得的全部培养基样品进行无菌培养。培养基模拟试验是无菌生产工艺的验证手段，是任何非最终无菌药品生产必须进行的一项验证。

最差条件：导致工艺及产品失败的概率高于正常工艺的条件或状态，即标准操作规程范围以内工艺的上限和下限。但这类最差条件不一定必然导致产品或工艺的不合格。

4 职责

4.1 生产部门负责试验方案的制定、组织实施、试验报告的撰写、偏差的报告等。

4.2 质监中心负责试验培养基的促生长试验、灌装物的培养等。

4.3 质量保证部负责试验过程的监督管理。

5 管理规定

5.1 试验目的：规范公司培养基模拟灌装试验，评估无菌原料药和无菌制剂的生产工艺，为所生产产品无菌性的可信限度达到可接受的合格标准提供证据，证明其具有生产无菌原料药和无菌制剂的能力并具有可重现性，符合现行GMP要求和相关技术指南要求。

5.2 试验要求

5.2.1 试验频次

培养基模拟灌装试验的首次验证，每班次应当连续进行3次合格试验。培养基模拟灌装试验按照生产工艺每班次半年进行1次，每次至少一批。单一规格品种再验证周期为半年，正常生产的多规格品种每一规格再验证周期为一年。每位无菌操作人员每年至少参加一次成功的培养基模拟灌装试验。空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后，应当重复进行培养基模拟灌装试验。

5.2.2 试验批量及容器的数量、装量

培养基灌装批量及容器的数量、装量应当足以保证评价的有效性。批量较小的产品，培

养基灌装的数量应当至少等于产品的批量。

无菌原料药容器数量不少于被模拟产品的实际包装量，模拟物装量尽量接近实际值，不超过容器体积的70%，培养基装量应能满足微生物的生长；

粉针制剂灌装数量每种规格不少于5000支。培养基装量不小于容器体积的10%，模拟物不少于10mg/1ml培养基，具体加量根据溶解性试验确定。

灌装体积的多少，应充分考虑容器倒转或旋转时，培养基能充分地接触到容器和密封件的内表面，不能达到此要求时应适当增加灌装体积。

5.2.3 试验染菌率的可接受度

培养基模拟灌装试验的目标是零污染，发生任何微生物污染时，均应当进行调查。应当遵循以下要求：

（一）灌装数量少于5000时，不得检出污染品。

（二）灌装数量在5000至10000时：

1.有1支污染，需调查，可考虑重复试验；

2.有2支污染，需调查后，进行再验证。

（三）灌装数量超过10000时：

1.有1支污染，需调查；

2.有2支污染，需调查后，进行再验证。

5.3 试验准备

5.3.1 试验开始前，除工艺验证、本验证外的其它验证已完成且验证合格。需完成的验证主要有：

a 厂房设施、设备、空调系统、水系统需经过确认和验证；

b 灭菌设备、除菌过滤器、直接接触无菌药品的设备、容器、管道、人员及无菌服的除菌灭菌效果经过验证；

c 清洁方法、检验方法等经过验证。

5.3.2 试验开始前，应确保环境已消毒、设备已清洁并灭菌，设施、设备、空调净化系统已经在预期的状态中受控运行。需建立的程序及无菌准备至少包括：

a 人流、物流、设备使用要求和参数的确定，无菌室消毒和维护的要求；

b 粒子和微生物监控的要求和频率：包括悬浮粒子、沉降菌、浮游菌、厂房、设备表面、人员洁净服外表面擦拭菌的采样点、采样频次；

c 直接接触无菌药品的内包材灭菌：铝桶、塑料袋、西林瓶、胶塞等；装载容器、用品及用具灭菌；无菌物料检测仪器、物品灭菌；蠕动泵、管道输送灭菌等。

5.3.3 试验开始前，明确对人员的要求，至少应包括：

a 参与试验的相关人员应进行培训，培训内容根据实际需要确定：更衣和无菌操作知识培训；取样和无菌检验知识培训；生产、检验、计量、设备等操作规程培训；相关设备检修人员的无菌设备维修知识培训等；

b 应把所有参与试验的操作者和主管人的姓名、员工参与次数以及相关事项记录在批生产记录里，包括进出次数等。操作者的操作任务应与正常灌装实施期间的任务相同。

c 试验期间所有进入生产区域的人员（包含执行环境监控人员在内）都必须正确着装。

d 试验的员工数量不得小于正常生产条件下该区域允许的最大员工数量。

5.3.4 培养基和模拟培养物

5.3.4.1 培养基的准备：胰蛋白酶酪胨大豆培养基（TSB）。

a 培养基的消毒：过滤灭菌 (0.2um filter)或蒸汽灭菌；

b 培养基的测试：促生长性能测试合格、无菌性测试合格；

灭菌后的培养基在百级层流下用西林瓶进行取样分装，共分装30支：

促生长性能试验：取10支分装好培养基的西林瓶接种枯草杆菌，接种量＜100CFU，接种后盖塞、封口，在30～35℃培养7天；另取10支接种白色念珠菌，接种量＜100CFU，接种后盖塞、封口，在23～28℃培养7天；7天内至少50%上述接种的西林瓶中出现明显的所接种微生物的生长。

无菌性试验：取10支分装好培养基的西林瓶分别加5ml符合无菌要求的水，盖塞、封口后先在23～28℃培养7天，然后在30～35℃培养7天，应无任何微生物生长。

5.3.4.2 模拟替代物的准备：惰性粉末

a 惰性粉末的选择

选材要求：无活性、易灭菌、易溶解、对培养基促进生长作用无副作用，易灌装，流动性要好；

种类：聚乙二醇系列(PEG 6000,PEG 8000）, 甘露醇，乳糖，碳酸钠等；

b 惰性粉末灭菌：伽马辐照灭菌（钴60辐照灭菌，用量15～25kGy）或干热灭菌；

c 惰性粉末测试：无菌性测试合格、无抑菌性测试合格，进行溶解性试验。

无菌性试验：用无菌操作方式取样，并按药典规定的无菌检验法检验其无菌性。

无抑菌性试验：将惰性粉末按无菌操作方式分别取样，用无菌蒸馏水制备成混悬液，加入培养基形成浓度分别为1.0%、2.5%、5.0%、10%（W/V）的样品液，将不同浓度的各种样品液分装于4个试管中，在其中2支试管内接种＜100CFU的枯草杆菌，在另2支试管内接种＜100CFU的白色念珠菌，对照品为空白培养基接种相同的枯草杆菌和白色念珠菌，全部样品、对照品在相适应的温度下培养7天。7天内所有样品、对照品试管内均应有明显的微生物生长。可证明所使用惰性粉末对枯草杆菌和白色念珠菌均无抑制作用。

溶解性试验：惰性粉末在一定浓度时，在轻微的搅拌下应能溶解于温度与培养温度相当的培养基中，若不能溶解则应在略低于该浓度下重新试验。一般使用浓度为5.0%～10%。

5.3.5 试验工艺范围及步骤

根据无菌产品的生产工艺，画出工艺流程图，选择恰当的试验范围。

通常情况下，无菌原料药的无菌工艺模拟以物料溶解开始进行模拟，主要模拟溶解、过