西他沙星临床试验琼脂平板稀释法MIC测定

琼脂平板稀释法测定药物MIC

琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，

制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细

菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。本法优点是可在一个平板上同时作多株菌

MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。

1.培养基制备

使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础

加1%添加剂；其它链球菌使用含5%（V/V）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用

溶解的马血）。

2.含药琼脂平板制备

根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在

45~50℃水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。通常按1∶9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。配制好的含药琼脂平板应装入

密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可贮存5天。

3.接种物制备与接种

制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再1∶10稀释，以多点接种器吸取制

备好菌液（约1~2μl）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm

的菌斑。接种好后置35℃孵育16~20h（甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵

育时间应满24h），观察结果。奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置

微需氧环境中孵育。

4.结果判断

将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度

为MIC。在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。

如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药

物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。

耗材: 无菌平皿（自制）

MH琼脂（无菌自配）

细菌培养液（配制菌悬液用自备）

西他沙星（药片？纯药？厂家提供）

微量加样器、微量加样枪头、高压灭菌器、冰箱 (自备)