酿酒酵母DNA的制备
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制备的酵母 DNA 应有 2~4μg。此时，获得的 DNA 可用 PCR 或 Sorthern 杂交来分析，亦可用于构建亚克隆文库供 DNA 测序或其他用途。
酿酒酵母的生长及其 DNA 的制备
下述方案将介绍从携带重组 YAC 的酿酒酵母菌中提取总 DNA 的方法。用这一方法制备的 DNA 适用于琼脂糖凝胶电泳、Southern 印迹、亚克隆、基因组文库构建、PCR 或其他不需要完整 的高分子质量 DNA 的方法。
试剂
醋酸铵（10mol/L） 乙醇 酚：氯仿（1：1，V/V） TE（pH8.0）
100 mmol/L Tris-Cl（pH 8.0） 10 mmol/L EDTA（pH 8.0）
含 20μg/ml RNase 的 TE（pH8.0） Triton/SDS 溶液
10 mmol/L Tris-Cl（pH 8.0） 2%（V/V）Triton X-100 1%（m/V）SDS 100 mmol/L NaCl 1 mmol/L EDTA（pH 8.0）
入另一新的离心管中。小心操作，避免将两相界面外的物质吸入。
DNA 的分离
10. 加入 1 ml 乙醇到水相中，盖上管盖，将小管轻轻翻转数次，混匀。 11. 在微量离心机中以最大转速 4℃离心 2~5 min，使 DNA 形成沉淀。用移液器吸去上清。
再次进行短暂的离心（2s），除去离心管底部最后残余的乙醇。 12. 用 0.4 ml 含 RNase 的 TE（pH8.0）溶解核酸沉淀，然后在 37℃温育 5 min。 13. 加入等体积酚：氯仿溶液抽提经 RNA 酶消化后的溶液。最好用翻转离心管的方法混匀，
用 0.22μm 滤器过滤除菌，室温保存。
方法
细胞培养
1. 将一个含目的 YAC 克隆的酵母菌落接种到 10ml YPD 培养基中，30℃振摇过夜。
在此期间细菌数应达到������������600=2.0~3.0，约为 3× 107个细胞/ml。
2. 2000g 离心 5min 收集细胞。 3. 弃去培养基，加 1ml 无菌水，轻轻振动，使细胞悬浮于溶液中。 4. 按步骤 2 的方法收集细胞。 5. 去除上清，将细胞重悬于 0.5ml 无菌水，然后移入一 1.5ml 无菌离心管中。 6. 室温下在微量离心机中以最大转速离心 5s，去除上清，收集细胞。
DNA 的提取
7. 加入 0.2 ml Trinton/SDS 溶液于细胞中，轻叩离心管侧壁，使细胞沉淀重新悬浮。 8. 加入 0.2 ml 酚：氯仿。室温振荡 2 min。加 0.2 ml TE（pH8.0），稍加振荡，使体系混
匀。 9. 室温下，在微量离心机中以最大转速离心 5 min，使有机相和水相分开。将上层水相移
不要用涡旋振荡。室温下，在微量离心机中以最大转速离心 5 min，使水相和有机相分 层。将水相移入另一新离心管中。 14. 在水相中加入 80μl 10 mol/L 醋酸铵和 1 ml 乙醇。轻轻地翻转小管进行混匀。室温放 置 5 min。 15. 微量离心机离心 5 min 收集 DNA 沉淀。弃上清，用 0.5 ml 70%乙醇漂洗核酸沉淀。以最 大转速离心 2 min，用移液器吸去乙醇漂洗液。再次进行短暂的离心（2s），吸去离心管 底部最后残余的乙Leabharlann Baidu。将 DNA 沉淀在空气中干燥 5 min，然后用 50μl TE（pH8.0）溶解。
酿酒酵母的生长及其 DNA 的制备
下述方案将介绍从携带重组 YAC 的酿酒酵母菌中提取总 DNA 的方法。用这一方法制备的 DNA 适用于琼脂糖凝胶电泳、Southern 印迹、亚克隆、基因组文库构建、PCR 或其他不需要完整 的高分子质量 DNA 的方法。
试剂
醋酸铵（10mol/L） 乙醇 酚：氯仿（1：1，V/V） TE（pH8.0）
100 mmol/L Tris-Cl（pH 8.0） 10 mmol/L EDTA（pH 8.0）
含 20μg/ml RNase 的 TE（pH8.0） Triton/SDS 溶液
10 mmol/L Tris-Cl（pH 8.0） 2%（V/V）Triton X-100 1%（m/V）SDS 100 mmol/L NaCl 1 mmol/L EDTA（pH 8.0）
入另一新的离心管中。小心操作，避免将两相界面外的物质吸入。
DNA 的分离
10. 加入 1 ml 乙醇到水相中，盖上管盖，将小管轻轻翻转数次，混匀。 11. 在微量离心机中以最大转速 4℃离心 2~5 min，使 DNA 形成沉淀。用移液器吸去上清。
再次进行短暂的离心（2s），除去离心管底部最后残余的乙醇。 12. 用 0.4 ml 含 RNase 的 TE（pH8.0）溶解核酸沉淀，然后在 37℃温育 5 min。 13. 加入等体积酚：氯仿溶液抽提经 RNA 酶消化后的溶液。最好用翻转离心管的方法混匀，
用 0.22μm 滤器过滤除菌，室温保存。
方法
细胞培养
1. 将一个含目的 YAC 克隆的酵母菌落接种到 10ml YPD 培养基中，30℃振摇过夜。
在此期间细菌数应达到������������600=2.0~3.0，约为 3× 107个细胞/ml。
2. 2000g 离心 5min 收集细胞。 3. 弃去培养基，加 1ml 无菌水，轻轻振动，使细胞悬浮于溶液中。 4. 按步骤 2 的方法收集细胞。 5. 去除上清，将细胞重悬于 0.5ml 无菌水，然后移入一 1.5ml 无菌离心管中。 6. 室温下在微量离心机中以最大转速离心 5s，去除上清，收集细胞。
DNA 的提取
7. 加入 0.2 ml Trinton/SDS 溶液于细胞中，轻叩离心管侧壁，使细胞沉淀重新悬浮。 8. 加入 0.2 ml 酚：氯仿。室温振荡 2 min。加 0.2 ml TE（pH8.0），稍加振荡，使体系混
匀。 9. 室温下，在微量离心机中以最大转速离心 5 min，使有机相和水相分开。将上层水相移
不要用涡旋振荡。室温下，在微量离心机中以最大转速离心 5 min，使水相和有机相分 层。将水相移入另一新离心管中。 14. 在水相中加入 80μl 10 mol/L 醋酸铵和 1 ml 乙醇。轻轻地翻转小管进行混匀。室温放 置 5 min。 15. 微量离心机离心 5 min 收集 DNA 沉淀。弃上清，用 0.5 ml 70%乙醇漂洗核酸沉淀。以最 大转速离心 2 min，用移液器吸去乙醇漂洗液。再次进行短暂的离心（2s），吸去离心管 底部最后残余的乙Leabharlann Baidu。将 DNA 沉淀在空气中干燥 5 min，然后用 50μl TE（pH8.0）溶解。