血清二氧化碳酶试剂法测定法

血清二氧化碳酶试剂法测定法

1. 实验原理

使用磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC)和稳定的NADH 类似物的酶检测终点法。 磷酸烯醇丙酮酸+ HCO 3

- 草酰乙酸 + H 2PO 4-

草酰乙酸 + NADH 类似物 + H + 苹果酸 + NAD +

类似物

上述反应会破坏下列平衡：

CO 2 + H 2O H 2CO 3 H + + HCO 3-

促使CO 2向HCO 3-的转换，由此可以检测出血清或血浆中总CO 2的浓度。

在405nm 或415nm 波长处检测吸光度的下降，反映还原型的辅因子NADH 类似物的减少，和样品中的总二氧PEPC ＋Mg 2+

MDH

化碳浓度呈比例。

2. 标本：

2.1 病人准备：无特殊。

2.2 类型：血清、肝素血浆。

3. 标本存放：应尽快分离血清或血浆，并保存于2～8℃。不可将标本暴露于空气。分离的样品需密闭保存，防止二氧化碳的损失，并在收集后的最短时间内完成检测。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：超时送检的、细菌污染的标本。

6. 实验材料

6.1 试剂奥林巴斯CO2测定试剂盒（货号：1 0950 99 10 试剂6×100ml）

6.1.1 试剂组成

试剂（R）：

缓冲液pH 7.5

磷酸烯醇丙酮酸(PEP) 12.5mmol/L

磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC) > 400U/L

苹果酸脱氢酶(MDH) > 4100U/L

NADH类似物0.6mmol/L

活化剂、稳定剂、表面活性剂、防腐剂适量

6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5注意事项：应采取必要的预防措施使用试剂。

6.2 校准品：建议使用DiaSys公司提供的TruCal Bicarbonate标准品对自动分析仪进行校准。校准稳定期：10天。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品：每批样品检测时，建议使用DiaSys公司提供的TruLab Bicarbonate控制品进行内部质量控制。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪

8. 操作步骤

8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件

8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件

9. 检验结果的判断与分析

10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控（DR0061&62）做为未知标本进行分析，以2S 为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以TruCal Bicarbonate标准品碳酸氢盐浓度校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。

12. 参考值范围[1]：成年人：22～29mmol/L

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13. 临床意义[1,2]：二氧化碳检测用于血液酸-碱平衡的诊断。检测值的升高和降低表明代谢和呼吸系统酸-碱平

衡失调。

14. 操作性能

14.1 线性范围：4～50mmol/L。

14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

批内精密度

n=20

x

(mmol/L)

s

(mmol/L)

CV

(%)

样品1 20.8 0.31 1.48

样品227.5 0.43 1.56

样品345.5 0.53 1.16

14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂

盒(x)，同时对92个样品进行CO2检测，将检测结果作方

法学比较，其统计结果如下：y=0.96x+0.56 mmol/L；

r=0.984。

14.4 灵敏度：本试剂的检测限为1mmol/L。

14.5 病人结果可报告范围：4～50 mmol/L

15. 超出范围结果处理：本法对二氧化碳的检测范围为4～50 mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1+ 1稀释后，重新测定，结果乘以2。

16. 病危报警值的处理

17. 方法局限性

17.1 本法对二氧化碳的检测范围为4～50mmol/L。当样

品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+ 1稀释后，重新测定，结果乘以2。

17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤1704 μmol/L ，结合胆红素浓度≤ 860 μmol/L，游离胆红素浓度≤ 684 μmol/L，血红蛋白浓度≤ 5.00g/L，甘油三酯浓度≤15.8mmol/L时没有观察到干扰。

18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家

进行维修。

19 参考文献

1.M uller-Plathe O. Acid base balance and blood gases. In: Thomas L, editor. Clinical laboratory