ISO 6888 食品和动物饲料的微生物学金黄色葡萄球菌检验

ISO 6888-1:1999食品和动物饲料的微生物学血清凝固酶阳性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌和其他球菌）

序

ISO是国际标准的全球性组织。准备国际标准这项工作通常由ISO技术联盟来完成。每一个团体成员负责各自的学科。与ISO有合作的国际性机构、政府与非政府机构，也有参与这项工作。ISO与国际电子组织（IEC）在电子标准化方面有着密切的合作关系。

国际性标准的起草原则在《ISO/IEC 细则》第三部分中有给出。

起草的国际性标准被技术委员会采用是通过全体成员投票决定的。发布一个国际性标准需要至少75％成员投赞成票。国际性标准ISO 6888-1 由ISO/IEC 34技术委员会（农产品，小组委员会SC9，微生物）起草的。ISO 6888-1的第一个版本，以及ISO 6888-2，取代ISO 6888：1983，做了计数上的修改。

ISO 6888由以下部分组成，一般标题为食品与动物饲料微生物学——一般方法计数血浆凝固酶阳性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌和其它种类）：

——第一部分：方法使用BP琼脂培养基；

——第二部分：方法使用兔血浆纤维蛋白琼脂培养基。

0. 绪论

0.1 由于食品与饲料的种类繁多，这个标准不一定适合某一类产品。在这种情况下，可使用不同的方法，但必须有绝对的技术上的理由。否则，要尽可能地完全遵循本标准。

当这个标准下一次回顾时，将会对这个标准的使用做数据统计，特殊产品偏离本标准使用也会做相关统计。

同一类产品的检测方法也有可能不统一，国际性标准和/或国家标准也不一定完全与本标准相符合。希望相关标准做回顾时，会遵循本标准做出相关的修改，以使只有已被证明的技术上的理由才能与本标准偏离。

0.2 ISO 6888描述了两种平行的方法（第一部分和第二部分）来检测血浆凝固酶阳性葡萄球菌，其中以证明该菌产生肠毒素。其中较大可能是金黄色葡萄球菌，也有可能是中间链球菌或猪葡萄球菌。

0.3 ISO 6888本部分的目的在于，葡萄球菌的证实基于血浆凝固酶的阳性反应，但也有研究证明一些受损的金黄色葡萄球菌会出现血浆凝固酶弱阳性。这种细菌可能会和其它种类的细菌混淆，但它能通过后续的试验区分开来，在本标准中没有做说明，例如溶葡球菌酶敏感性，产生溶血素、耐热核酸酶，发酵甘露醇产酸（见参考文献2）。

1 范围

本标准适用于检测人类食物或动物饲料产品的血浆凝固酶阳性葡萄球菌的检测，通过计数BP平板35℃或37℃培养后的菌落数。

2 参考标准

以下标准文件是本标准的参考标准。已过期的文献，后来改善或修订的，部分这种文献已经不适用。然而，有大部分学者正在争取发布最新版的文献如以下列出。对于无限期的文献，最新版本都是适用的。ISO和IEC成员保存当前有效国际性标准的记录。

ISO 6887-1，食物与动物饲料原料微生物学——样品准备原则，微生物检测样品原液及十倍法稀释——第一部分：样品原液和十倍法稀释的指导准则。

ISO 7218，食物与动物饲料原料微生物学——微生物检验指导准则。

3 术语与定义

本标准中使用的相关术语与定义如下。

3.1 血浆凝固酶样品葡萄球菌

在选择性平板上的典型和/或不典型菌落，按照本标准操作呈现凝固酵素阳性反应。

3.2 血浆凝固酶阳性葡萄球菌计数

按照本标准操作，得出血浆凝固酶阳性葡萄球菌每克或每毫升样品的含量。

4 原理

4.1 接种固体选择性培养基表面，做两个平行，如果为液体样品，接种一定体积的样品，如果是其它类型的样品，接种一定体积的样品悬液。在同样的条件下，接种样品或样品悬液的十倍稀释溶液，每个梯度两个平行。

4.2 在需氧条件下35℃或37℃培养，然后24h和48h检查。

4.3 计算每克或每毫升样品中血浆凝固酶阳性葡萄球菌的数量，稀释梯度的选择

和平板上典型与不典型菌落的数量都有重要的意义，并通过凝固酵素试验确证。 5 稀释液与培养基 5.1 概要

正确的实验室操作，参照ISO 7218。 5.2 稀释液

参照ISO 6887-1 和特殊产品的相关标准。 5.3 BP 琼脂培养基

注意：商业上可买到的培养基可以使用。必须参照厂商的说明书操作。 5.3.1 基础培养基 5.3.1.1 成分

5.3.1.2 准备

将所有成分或培养基干粉溶解于水中并煮沸。如需要，调整pH 值至7.2±0.2，在

25℃下。将培养基转移至适当容量的三角瓶中，每瓶100ml 。

121℃灭菌15min 。 5.3.2 配套试剂 5.3.2.1 亚碲酸盐钠 5.3.2.1.1 成分

5.3.2.1.2 准备

将亚碲酸盐钠充分溶解在水中，最小程度加热。固体粉末应该是易溶的。如

果有白色的不溶物出现，丢弃该粉末。过滤0.22µm孔膜灭菌。在3℃±2℃保存期不超过1个月。如有白色混浊，丢弃它。

5.3.2.2 蛋黄乳状液

注意：如果有商业的成品，可以使用。

使用有完整外壳的新鲜鸡蛋。用液体清洁剂将表面刷干净。在流动水下冲洗干净。然后在70％乙醇中浸泡30s消毒，自然晾干，或者喷射酒精后用火焰灭菌。

在无菌环境下，打开鸡蛋并将蛋黄从蛋白中分离出来。将蛋黄放入灭菌三角瓶中，加入四倍体积无菌水。充分混匀。在47℃水浴锅中加热2h，然后在3℃±2℃下保存18h～24h，使之形成沉淀物。无菌的收集澄清液体至无菌容器中待使用。该乳状液在3℃±2℃下最大保存期为72h。

5.3.2.3磺胺二甲嘧啶溶液

注意：该溶液仅使用于容易变化的样品中。

5.3.2.3.1 成分

5.3.2.3.2 准备

将磺胺二甲嘧啶溶解在氢氧化钠溶液中，用水稀释至100ml。过滤0.22µm 孔膜灭菌。在3℃±2℃保存期不超过1个月。

5.3.3 完全培养基

5.3.3.1 成分

5.3.3.2 准备

融化基础培养基，水浴冷却至47℃。然后，在无菌条件下，添加亚碲酸钠溶液和蛋黄乳状液，如有必要，添加将磺胺二甲嘧啶溶液。每一种溶液都必须水