甲肝抗体IGM的检测课件
不同方法检测甲型肝炎病毒IgM抗体
不同方法检测甲型肝炎病毒 IgM抗体摘要:目的通过不同方法学检测甲型肝炎IgM抗体,总结一种提高特异性和敏感性,减少临床误诊和漏诊,便于推广普及,便于标准化管理和提高工作效率的方法。
方法甲型肝炎IgM抗体首先用化学发光法初筛,阳性标本再用胶体金法和酶联免疫法进行复检。
结果 2021年01月~2022年02月期间,在我院体检科办理健康证体检人群27463例,用化学发光法检测甲型肝炎IgM抗体初筛阳性15例;15例阳性标本再用酶联免疫法进行复测,结果酶联免疫法检测阳性4例。
结论化学发光法便于标准化操作和提高工作效率,也是未来发展方向,用化学发光法初筛,阳性标本再用酶联免疫法进行复测验证,可解决化学发光敏感性过高的问题,能更好的保证检测结果质量,减少误诊和漏诊。
关键词:甲型肝炎IgM抗体;化学发光法;酶联免疫法。
甲型病毒性肝炎简称甲肝,是由甲型肝炎病毒(HepatitisA Virus,HAV)引起的一种急性传染病,甲肝IgM(HAV-IgM)抗体检测是甲肝的诊断标准之一。
甲型肝炎在临床上为一种常见的急性传染病。
病原体主要为甲型肝炎病毒,感染形式主要为流行和散发等[1]。
在我国近些年来甲型肝炎病毒导致的流行相对较少,然而在临床上仍有甲型肝炎散发;此类疾病已经成为公共卫生问题。
在临床诊断中甲型肝炎IgM为早期特异性指标。
甲型肝炎病毒通过粪便排出体外,可对海产品、食物、水源等进行污染,会造成大流行或散发[2]。
与乙型肝炎病毒相比,甲型肝炎病毒具有较长的持续时间,一般不会由于注射和输血而传播。
甲型肝炎病毒属小核糖核酸病毒科,肝病毒属;只有一种血清型,7种基因型;对热、酸、干燥有抵抗性,是肝炎病毒中惟一能用细胞培养的一种。
经粪-口途径传播,潜伏期3~9周。
甲型肝炎儿童多见,黄疸型多见,经济不发达卫生条件差的地区多见;可散发或暴发流行。
甲型肝炎是一种自限性疾病,经常为亚临床状态,尤其是儿童,80%~90%为隐匿性感染,无明显临床症状[3]。
甲、戊肝抗体检测内容
HQBJS/MYXM-14-2014 HQBJS/MYXM-14-2014SOP文件B14.2【检测原理】甲型肝炎病毒IgM抗体检测试纸采用捕获法及胶体金免疫层析技术原理,在聚酯纤维(或无纺布)上预包被金标记HAV抗原和鼠单抗,在硝酸纤维膜检测线和质控对照线处分别包被抗人IgMu链单抗和抗鼠IgG抗体。
检测阳性标本时,血清(或血浆)样本中甲型肝炎病毒IgM抗体与胶体金中的甲型肝炎病毒抗原结合形成复合物,由于层析作用复合物延纸条向前移动,经过检测线时于预包被的抗人IgMu链单抗结合形成“ Au-HAVAg-HAVIgM Ab- 抗人IgM Ab”夹心物,从而在检测处显示紫红色条带,游离金标鼠单抗则于质控对照线处与抗鼠 IgG抗体结合,从而在质控线处显示紫红色条带。
阴性标本则仅在质控对照线处显示紫红色条带。
戊型肝炎病毒IgM抗体检测试纸采用捕获法及胶体金免疫层析技术原理,在聚酯纤维(或无纺布)上预包被金标记HEV抗原和鼠单抗,在硝酸纤维膜检测线和质控对照线处分别包被抗人IgMu链单抗和抗鼠IgG抗体。
检测阳性标本时,血清(或血浆)样本中戊型肝炎病毒IgM抗体与胶体金中的戊型肝炎病毒抗原结合形成复合物,由于层析作用复合物延纸条向前移动,经过检测线时于预包被的抗人IgMu链单抗结合形成“ Au-HEVAg-HEVIgM Ab- 抗人IgM Ab”夹心物,从而在检测处显示紫红色条带,游离金标鼠单抗则于质控对照线处与抗鼠 IgG抗体结合,从而在SOP文件质控线处显示紫红色条带。
阴性标本则仅在质控对照线处显示紫红色条带。
B14.3【样本要求】B14.3.1.在无菌条件下采集静脉血样本,尽快分离血清或血浆以避免溶血。
B14.3.2.检测时应尽量使用新鲜标本。
如标本不能及时检测,可在2-8 C 冷藏7天。
长期保存需冷冻于-20 C,反复冻融次数不超过3次。
B14.3.3.常规的 0.2mg/ml 肝素和 150mmol/L 的 EDTA-2Na及2.5 %枸橼酸钠抗凝剂不影响检测结果。
甲肝监测方案课件
进一步的实验室检测:如戊肝的检测
(一)流行病学监测
4、主动监测
责任单位:县级疾病预防控制机构 监测频次: 每10天,辖区内医院有关科室 监测方法和内容:
查阅门诊及出入院登记,及时发现有无漏报病例 特别要加强对托幼儿童、中、小学生甲肝病例的主动监测。
疾病预防控制机构及其执行职务的人员 报告时限: 24小时内进行网络报告 如果在短时间(如1周内)连续接诊多例甲肝
病例时,应详细询问病例有关情况,警惕暴 发疫情,并以最快的方式( 或派人)向县 级疾病预防控制机构进行报告。 医院防保科应认真核实本单位报告卡质量。
(一)流行病学监测
发现甲型肝炎病例后,根据病人症状、体征、 一般非特异性检查(如查体、血常规、尿常规、 X线检查)和特异性检查(如病原学检查、血 清学检查)等做出临床诊断病例或实验室诊断 病例的诊断。
(三)甲肝暴发疫情监测
2、甲肝暴发(流行)报告
行政报告:
报告单位:集体单位或医疗机构
报告时限:2小时内以 或最快的方式
向谁报告:
县级疾病预防控制机构
同级卫生
行政部门和上级疾病预防控制机构
乡级卫生院
农村或学校
网络报告:
对报告审核,确定真实性
按照《国家突发公共卫生事件相关信息报告管 理工作规范》进行报告。
(一)流行病学监测
2、病例调查 责任单位:县级疾病预防控制机构 时限要求: 48小时内 开展个案调查:
首先核实病例 调查内容包括病例的临床和流行病学特征、免疫史、
血清学检查结果、感染危险因素以及需要采取暴露 后预防措施的密切接触者的判定等。
甲肝死亡病例市级要进行现场调查核实
甲型肝炎病毒IgM抗体操作步骤
甲型肝炎病毒IgM抗体操作步骤1.检验目的:检测人血清或血浆中的抗HA V-IgM。
2.检测原理:本品系用抗人-IgM(u链)包被的微孔板,配以纯甲型肝炎抗原(HA V-Ag)和酶标记的甲型肝炎病毒抗体(抗HA V-HRP)及其它试剂,采用捕获法原理,检测人血清或血浆中的抗-HA V-IgM。
34.操作:4.1 配液:浓缩洗涤液配制前充分摇匀(如有结晶析出应充分溶解)浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用。
4.2 编号:将微孔条固定于支架,按序编号。
4.3 加样:待测样本用生理盐水作1:1000稀释,每个样本检测孔加入稀释样本100 uL。
设阴阳对照各1孔,每孔加入100 uL,并设空白对照1孔。
4.4 温育:置37℃温育20分钟,室温平衡2分钟。
4.5 洗涤:用洗涤液充分洗涤5次,洗涤完后扣干(每次应保持30-60秒的浸泡时间)。
4.6 加抗原、酶:每孔加入抗原(HA V-Ag)30 uL、酶标记抗体50uL(1滴),充分混匀。
4.7 温育:置37℃温育20分钟。
4.8 洗涤:用洗涤液充分洗涤5次,洗涤完后扣干(每次应保持30-60秒的浸泡时间)。
4.9 显色:每孔加底物A、B各50uL,轻拍混匀,置37℃暗置15分钟。
4.10 终止:每孔加终止液50uL,混匀。
4.11 测定:用酶标仪单波长450nm/630nm测定各孔OD值(用单波长测定需设定空白对照一孔,30分钟完成测定,并记录结果)。
5. 结果判定:5.1 临界值(C.O.)的计算:临界值=阴性对照孔OD均值N×2.1阴性对照OD值低于0.050←0.050计算,高于0.050按实际OD值计算。
5.2结果判定:样品OD值S/C.O.≥1者为HA V-IgM阳性样品OD值S/C.O.<1者为HA V-IgM阴性5.3 失效:如果阳性对照OD均值小于0.05,则表明不正常的操作或试剂盒已变质损坏。
在此情况下,应再次仔细阅读说明书,并用新的试剂盒重新测试。
免疫球蛋白检测及应用PPT课件
(三)注意事项 1. 部分单克隆冷球蛋白可在低于 10 ℃时 发生沉淀,故取标本时要保温 2. 部分冷球蛋白在冷的条件下可迅速沉淀, 但有的需要数天,故此应放置一周 3. 正常人血清也可含有冷球蛋白,但属多 克隆冷球蛋白的性质,且含量低 4. 冷纤维蛋白原、 C 反应蛋白 - 蛋白复 合物和肝素沉淀蛋白等也具有冷沉淀特性, 实验时应加以区别
思考题: 1.IgG、IgA、IgM的测定技术 2.体液中IgG、IgA、IgM测定的临床应用 3.IgE、IgD、的测定技术 4.异常免疫球蛋白的检测技术来自THANKYOU
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2019/4/14
(一)定性分析 分离血清作二支分装,一支置 4℃, 一支置37℃,直立,一般于24~72小时, 4℃一管可出现沉淀 (二)定量分析 将沉淀用冷 pH7.0 , 0.05mol/L 磷酸 盐缓冲液洗涤,然后将沉淀再溶解于 10 倍体积的 pH8.6 的 0.05mol 巴比妥 / 巴 比妥钠缓冲液中,置 37 ℃ 30min,进行 免疫电泳或免疫固定电泳进行型别鉴定
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2019/4/14
第四节 异常免疫球蛋白的检测
一、 M 蛋白的检测与鉴定 M 蛋白是一种异常单克隆免疫球蛋白,多 见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋 巴瘤。
(一)血清蛋白区带电泳 IgG 型多位于 α 区与慢 γ 区 IgA 型多位于慢 γ 区与 β 区 IgM 型多位于 β 2 区或 γ 区 IgD 型多位于 β 区或 γ 区 但最终鉴定需用特异性抗体,在轻链病 时 M 蛋白呈淡染区带常在 β 或 γ 区, 需与尿中本周蛋白检测或尿蛋白电泳同时 观察。
第三节 IgE 和 IgD 的测定
一、 IgE 的测定方法 1 、放射免疫法:固相抗 -IgE+IgE+ 125 I 标记抗人 IgE 2 、化学发光免疫分析法:固相抗 IgE+IgE+ 酶标抗 IgE+ 底物 3 、乳胶颗粒免疫浊度法 4 、酶免疫试验
教学查房甲肝PPT课件
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六、实验室检查
1血尿常规:外周血常规白细胞计数一般减少或在正 常范围,可伴有轻度淋巴细胞或单核细胞比例增高 ,病程早期尿中尿胆原增加,黄疸期尿胆红素及尿 胆原均增加。肝功能检查以血清ALT、AST、总胆红 素水平检测最为有用,有研究显示甲型肝炎患者的 ALT平均峰值可达1952IU/L,AST可达1442IU/L,多数
及炝虾等水产品被彻底纳入“禁食”行列。
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定义
甲型病毒性肝炎,简称甲型肝炎、甲肝,是由 甲型肝炎病毒(HAV)引起的,以肝脏炎症病变 为主的传染病,主要通过粪-口途径传播,临床上 以疲乏,食欲减退,肝肿大,肝功能异常为主要 表现,部分病例出现黄疸,主要表现为急性肝炎 ,无症状感染者常见。任何年龄均可患本病,但 主要为儿童和青少年。成人甲肝的临床症状一般 较儿童为重。冬春季节常是甲肝发病的高峰期。 本病病程呈自限性,无慢性化,引起急性重型肝 炎者极为少见,随着灭活疫苗在全世界的使用, 甲型肝炎的流行已得到有效的控制。此次教学查房
性感染。 1.急性黄疸型 (1)潜伏期 甲型肝炎潜伏期为15~45日,平均持续30天。患者在此期常无自 觉症状,但在潜伏期后期,大约感染25天以后,粪便中有大量的HAV排出,潜伏 期的患者的传染性最强。 (2)黄疸前期 起病急,急数患者有发热畏寒,体温在38~39℃之间。平均热 程3日,少数达5日,全身乏力、食欲不振、厌油、恶心、呕吐、上腹部饱胀感 或轻度腹泻。少数患者以上呼吸道感染症状为主要表现,尿色逐渐加深呈浓茶 色。本期持续5~7日。 (3)黄疸期 自觉症状好转,热退后黄疸出现,可见巩膜、皮肤不同程度黄染 ,肝区痛,肝脏肿大,有压痛和叩痛,部分患者有脾肿大。本期可有短期大便 颜色变浅,皮肤瘙痒。肝功能明显异常。持续2~6周。 (4)恢复期 黄疸逐渐消退,症状好转以至消失,肝脾回缩到正常,肝功能逐 渐恢复正常,IgG介导的免疫系统建立。本期持续2周至4月,平均1个月。
呼吸道感染病原体抗体(IgM)九联检检测及应用教学课件
呼吸道合胞病毒
呼吸道合胞病毒是一种RNA病毒,属于 副粘液病毒。
感染后临床症状不典型。 建议抗病毒治疗,重症病人可以使用三
氮唑核苷做雾化治疗。
流感病毒
该病毒呈季节性周期性流行爆发(12月4月)
甲型流感的流行每年都会发生。 乙型流感的流行只在每3-6年爆发一次,
感染人数超过总人口的25%。 流感病毒降低了人体抵御呼吸道感染的
12、人乱于心,不宽余请。2021/5/182021/5/ 182021/5/18T uesday , May 18, 2021
13、生气是拿别人做错的事来惩罚自 己。2021/5/182021/5/ 182021/5/182021/5/185/18/ 2021
14、抱最大的希望,作最大的努力。2021年5月18日 星期二 2021/5/182021/5/182021/5/ 18
固相化的复合体被冲洗掉; (4)加样量、反应时间、温度不够; (5)没有及时观察结果或判断有误。
检测注意事项
检测结果出现假阳性现象: (1)加样时操作不规范造成加样污染; (2)洗涤时发生交叉污染或洗涤不彻
底; (3)检查实验记录,是否严格按照操作
规程,是否忘记加IgG吸附剂; (4)判断有误; (5)试剂盒过期
腺病毒
3.急性呼吸道疾病(acute respiratory diseases,ARD) 这一综合征由咽炎、发 热、咳嗽和全身不适为特点,常在军队的新兵 中流行,多因突然紧张、劳累、聚集等所致。 此感染多由腺病毒4、7型引起,也可见于3型。
4、腺病毒肺炎约占儿童期肺炎的10%,多由 腺病毒3、7型引起;在青年人腺病毒肺炎的病 死率为8%~10%;肺炎也是新兵急性呼吸 道疾病的一种严重表现。
甲型肝炎IgM定性检测作业指导书
甲型肝炎IgM定性检测作业指导书1.检验目的血清抗HAV抗体IgM是HAV急性感染的标志,在感染的早期即已出现,是早期诊断甲型肝炎的依据。
感染后3个月内可维持较高滴度,6个月后逐渐消失。
2.方法原理采用ELISA架桥法,反应板的琼脂微孔包被兔抗人-IgMμ链,加入待测样本,同时加入HAVAg、抗-HAV-HRP,当样本中有抗-HAV-IgM时,会与包被在板上的兔抗人-IgMμ链结合,并被HAVAg 捕获、再与抗-HAV-HRP联接成复合物,加入底物TMB产生显色反应,反之则无显色反应。
3.性能指标此方法快速简便、特异性强、检测灵敏度度0.5ng/ml。
4.标本收集4.1 标本类型:静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本(抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA,抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯,使用的比例以厂家推荐为准);其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本,但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。
4.2标本留取:以空腹为宜,收到标本后最好立即离心留取血清或血浆(凝固血应待其充分凝固后收集血清),不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝,使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。
4.3 标本保存:留取的标本最好在3小时内检测,不能立即检测的应放置于2-8℃最长达14天(可以含有凝块但要密闭以防蒸发),或者-10℃最长达14天(不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞)。
4.4标本容器:盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管4.5标本外送:如涉及到需要外送的标本,必须以规定的容器(0.5ml塑料离心管)存放并密封,并根据邮寄规则和要求进行包装,运送时还要放入冰袋(2-8℃)或干冰(-10℃)由专人运送至指定地点指定接收人。
4.6拒收标本:凡与4.1-4.5所述内容不符的标本,检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因,并提出解决的方案或建议。
甲型肝炎病毒IgM抗体检测SOP北京现代
甲型肝炎病毒IgM抗体检测试(北京现代)一、检验目的规范实验室人员操作,保证检验结果的准确性二、预期用途本试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆样本中甲型肝炎病毒的特异性IgM抗体。
人群未注射甲肝疫苗者对HAV普遍易感,在我国,15岁以下的儿童及青少年最容易患甲型肝炎,而患过甲型肝炎或感染过甲型肝炎病毒的人可以获得持久的免疫力。
甲型肝炎的潜伏期为15-45天,主要表现为急性肝炎,仅少数表现为急性甲型肝炎而出现发热、畏寒、食欲下降、乏力、肝肿大及肝功能异常等症状。
特异性血清学检测抗HAV-IgM抗体是早期确诊甲型肝炎的重要指标。
三、检验原理本试剂盒利用免疫层析作用原理,在硝酸纤维素膜的检测线处包被鼠抗人IgM单克隆抗体,在质控线处包被兔抗HAV抗体,在金标垫上固定胶体金标记细胞培养的纯化甲肝病毒抗原(HAV-Ag)".检测时,如为阳性样本,样本中的抗HAV-igM抗体可与金标垫上的胶体金标记的HAV-Ag发生结合,形成免疫复合物,并在层析作用下沿膜移动,经过检测线时与预包被的鼠抗人IgM单克隆抗体发生结合而凝聚显色,游离的胶体金标记HAV-Ag在质控线处与兔抗HAV抗体发生结合而凝聚显色。
如为阴性样本,则只在质控线处发生结合而凝聚显色。
四、主要组成成分1、检测卡/条主要组分a、硝酸纤维素膜( NC膜)b、金标垫c、鼠抗人IgM单克隆抗体d、细胞培养的纯化甲肝病毒抗原(HAV-Ag)e、兔抗HAV抗体2,样本稀释液:1瓶,主要组分为0.05M PBS缓冲液(pH 7.4).五、储存条件及有效期4~30℃避光密封干燥保存,有效期为12个月。
生产日期及失效日期详见标签。
检测卡/条开封后,相对湿度低于40%时,需在60分钟内检测;相对湿度高于40%时,开封即用。
六、样本要求样本应为血清或者血浆。
血清样本按常规方法由静脉采集制作。
适用于本试剂盒检测的血浆样本需采用肝素、枸橼酸钠或EDTA进行处理。
5天内检测的样本可放置4℃保存,5天后检测的样本需放置在-20℃以下冷冻保存。
甲型肝炎抗体检测
不适宜人群
暂无禁忌人群。
不良反应与风险
暂无相关并发症和危害。
感谢观看
抗-HAVIgG:当急性甲型肝炎患者出现症状时,血清中即可检出抗-HAVIgG,初期滴度低,以后逐渐升高,病 后3月达高峰,1年内维持较高水平,低水平在血中可维持数十年甚至终身。如双份血清的抗-HAVIgG滴度,恢复 期血清有4倍以上增高,可诊断甲型肝炎。常因患者就诊较晚,采不到早期血清,也得不到抗体滴度增长4倍的结 果,所以临床上基本不用此诊断方法。抗-HAVIgG主用于检测人群免疫水平流行病学调查。
抗-HAVIgM:甲型肝炎特异性抗体-(抗-HAVIgM)出现早,一般在发病数日即可检出,黄疸期达到高峰,1~2 月抗体滴度下降,3~4月大部分消失。是甲型肝炎早期诊断的重要指标。常用方法有酶联免疫吸附试验(ELISA) 和固相放射免疫试验(SPRIA),其灵敏度高,特异性强。为急性肝炎患者检测的常规项目。类风湿因子阳性标本 可出现抗-HAVIgM假阳性,应引起注意。
甲型肝炎抗体检测
介绍
01 正常值
03 注意事项 05 不适宜人群
目录
02 临床意义 04 检查过程 06 不良反应与风险
甲型肝炎由甲型肝炎病毒(HAV)所引起,正常值
抗-HAIgM阴性。
临床意义
抗-HAIgM阳性可诊断为甲型肝炎,若检得低滴度时,应隔2周复测,但应注意风湿因子所致假阳性。抗HAIgG阳性提示曾受过HAV感染,但双份抗-HAIgG滴度4倍以上增长,也有诊断意义。
《igma测量阶段》课件
准确性和一致性。
3
测量数据获取
使用测量仪器进行数据获取并记录结
数据处理
4
果。
分析和处理测量数据,提取有用的信 息和见解。
数据展示与分析
数据的可视化展示
使用图表、图形和图像等工具将数据可视化,使 得数据更加易于理解和分析。
数据的解释和分析
解释测量数据的含义并进行详细的分析,发现关 键趋势和突出问题。
Q A /Q C
1 质量控制
2 误差处理
确保测量过程的准确性和可靠性,通过质 量控制措施消除潜在的误差。
识别和纠正任何测量误差,确保数据的准 确性和可靠性。
总结
IGMa测量阶段的重要 性
IGMa测量阶段对业务的发 展和持续改进至关重要, 它提供了有力的数据支持。
待改进之处
我们将继续努力改进IGMa 测量阶段的效率和准确性, 以满足不断变化的需求。
应用领域
IGMa广泛应用于各行各业, 包括制造业、金融业和医 疗保健等领域。
测量环境设置
1 准备工作
确保测量环境干净、整洁,并预先清除任何可能影响测量结果的因素。
2 测量仪器使用
使用适当的测量仪器和设备,确保准确测量并记录数据。
测量步骤
1
样本准备
选择适当的样本并准备好进行测量。
测量参数设定
2
根据测量要求设定正确的参数,确保
后续工作计划
制定后续工作计划,继续 优化和发展IGMa测量阶段, 以实现更好的结果。
《igma测量阶段》PPT课 件
欢迎参加《igma测量阶段》PPT课件!IGMa测量阶段是一个重要的环节,让 我们一起探索它的意义和步骤。
IGMa是什么
定义
甲型肝炎病毒微生物学及其检验PPT教案
第5页/共31页
第6页/共31页
肝硬化外观
第7页/共31页
慢性活动性肝炎
第8页/共31页
病毒性肝炎——历史的观点
“传染性”肝炎
甲
人传人,粪口途径
戊 经肠道传播
病毒性肝炎
非甲非乙
“血清性”肝炎 输血传播
乙丁
丙 肠道外传播
己肝、庚肝 ? 其它
第9页/共31页
引言
根据传播途径的不同分类 粪口途径
第18页/共31页
口—口咽部/唾液腺(增值)—肠黏膜、 局部淋巴结(大量增殖)—血液(病毒 血症)—肝脏
第19页/共31页
潜伏期15—50天 转氨酶升高前5—6天
血液 粪便 发病两周 血清及肠道中产生—HAV IgG/IgM 粪便中午病毒排出
第20页/共31页
皮肤黄疸
第21页/共31页
巩膜黄染
第13页/共31页
二 培养特性
1.动物培养 : 静脉注射或经口---发
生肝炎-----粪便(早期)、血清(恢复期)
2. 细胞培养:
第14页/共31页
★ 病毒感染血清标志物的临床检测
病毒培养及电镜检测目前在临床上均不能常规开展 ●ELISA法检测抗HAV-IgM是目前诊断急性甲肝最可
靠、最敏感、应用最广的方法。 ●抗HAV-IgG检测:主要用于人群感染率的调查
第15页/共31页
病毒感染的临床检测
病毒培养及电镜检测目前在临床上均 不能常规开展
ELISA法检测抗HAV-IgM是目前诊断急性 甲肝最可靠、最敏感、应用最广的方法。
抗HAV-IgG检测:主要用于人群感染率的调 查
也可进行PCR、核酸杂交,但也不常用
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ELISA类型
夹心法 间接法测抗体 竞争法 捕获法
捕获法测IgM抗体
血清中针对某些抗原 的特异性 IgM 常 和特异 性IgG同时存在,后者会 干扰IgM 抗体的测定 。 因此测定 IgM 抗 体多用 捕获法
➢ 包被抗体:用抗人μ链抗体包被固相载体上,形成固相抗 人μ链;
➢ 加入病人的血清标本; ➢ 加入特异性抗原试剂;, ➢ 加入针对特异性抗原的酶标抗体, ➢ 加底物显色.
抗HAV总抗体 抗HAV-IgM
临床意义
• 血清中抗HAVIgM出现于感染的早期(发病后数日)抗体的效价很快升 到峰值并持续较长时间(2-4周),经1-2个月后抗体的效价和阳性率明 显不降,于3个月后消失.因此抗HAVIgM阳性,尤其是效价较高时,表明 处于感染的早期,被公认为早期诊断甲肝的依据,是区别是急性感染 还是慢性感染的有力佐证。
甲型肝炎病毒IgM抗体的测定 (捕获法)
黄艳
酶联免疫吸附试验(ELISA法)
将抗体(抗原)包被在固相表面后,按不同的步骤加入 待测抗原(抗体)和酶标抗体(抗原),充分反应后用洗涤的方 法,使固相上形成的抗原抗体复合物与其他物质分离,洗 去游离的酶标抗体(抗原),最后加入底物,根据酶对底物 催化的显色反应程度,而对标本中的抗原(抗体)进行定性 或定量。
操作步骤
1.将微孔条固定在支架上,按顺序编号。 2.分别将待测标本,阴、阳性对照100μl(2滴)加入相应的 孔中,设空白对照孔。置37℃20分钟。 3.洗涤:甩去孔内液体,用洗涤液注满各孔,静置5秒,共 三次,每次洗后均需扣干。 4.每孔加HA·Ag50μl,酶结合物50μl(空白对照除外),振 荡混匀,置37℃20分钟。 5.洗涤:重复上述3 6.显色:每孔加显色剂A液50μl,再加显色剂B液50μl,振荡 混匀,置37℃15分钟。 7.每孔加终止液50μl
λ型
➢ 正常人κ:λ≈2 :1
➢ 重链(H链):根据其抗原性的差异,人类Ig的H链分为
链 链 链 链 链
➢ 重链决定Ig类别
IgG IgA IgM IgD IgE
捕获法
主要用于 血清中某种抗体亚型成分(如IgM)的测定。
实验原理
• 用抗人μ链抗体包被酶标板,用以捕获血清中IgM类抗体, 然后用特异性HAVAg与IgM抗体结合,再加酶标抗HAV抗体 ,最后加底物显色,显色深浅与HAVIgM的含量成正相关 。
Cut off value(临界值)
Cut off value(临界值):阴阳性判断值,简称Байду номын сангаасO值。 ➢ 夹心法:若S/CO值>1,为阳性;
S/CO值<1,为阴性; ➢ 竞争抑制法:若S/CO值<1,为阳性;
S/CO值>1,为阴性。
要点: 1. HAV的传播途径(粪—口) 2. HAV的潜伏期(30天±2周) 3. 血清标志物出现的规律 4. 免疫学检测指标—HAV Ag
免疫球蛋白的结构
➢ 基本结构:四肽链结构
由两条相同的轻链 (Light Chain)和 两条相同的重链 (Heavy chain)通 过链间二硫键连结 形成。
分子式为:H2L2
四条肽链两端游离 的NH2和COOH方 向一致分别命名为 N端和C端
(一)轻链和重链
➢ 轻链(L链) κ链
λ链
➢ 轻链决定型别 κ型