细胞生物学实验讲义(学生教材)
细胞生物学实验技术一 ppt课件
• 分化现象减弱 • 形态功能趋于单一化 • 一定时间后死亡或者转化获得不死性
细胞生物学实验技术一
• 体外培养的细胞仍具有研究的意义
– 许多性状仍与体内相同
• 如体外培养的心肌细胞仍可博动，
– 细胞在培养中的表现，存在相应基因关闭／ 开启引起的现象，在培养的细胞中某些特定 功能的丧失，可为该基因的表达与调控提供 线索。
细胞生物学实验技术一
• 成纤维细胞型
– 梭型或不规则三角形，生长时呈放射状。 – 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，
如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。 – 凡培养中形态与成纤维类似时皆可称为成纤维细胞。
细胞生物学实验技术一
细胞生物学实验技术一
– 上皮型细胞： • 扁平不规则多角形，彼此紧密相连。生长时呈膜状移动， 细胞很少单独行动。 • 起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化 管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。
细胞生物学实验技术一
细胞生物学实验技术一
组织块接种：牛胎儿成纤维细胞
细胞生物学实验技术一
• 传代期：
– 原代培养细胞一经传代后便改称做细胞系 （Cell Line）。此期的持续时间最长。
– 在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并 能维持二倍体核型。
– 为保持二倍体细胞性质，细胞应在原代培养 期或传代后早期冻存。
• 特点
– 细胞群是异质的（Heterogeneous） – 细胞克隆形成率（Cloning Efficiency）低，即细胞独立生
存性差。 – 由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很
细胞生物学讲义
细胞生物学实验室规则与操作要求为获得较好的实验结果，避免发生差错与意外事故，特制定以下规则与要求，希望实验者能严格遵守。
（一）显微镜的使用及保护①显微镜是细胞生物学实验的主要观察工具，使用时必须注意保持外观整洁、防湿、防高温、防药品侵蚀，使用时勿使染液或其它溶液沾污镜头，一旦沾污，及时用擦镜纸蘸上镜头清洗液（无水乙醚：无水乙醇＝7：3）轻轻擦拭干净。
②带光源的显微镜待电压稳定后，将电源的光亮度调节器调至最小，再打开显微镜的电源，缓慢调节光亮度适当进行量度观察，观察完毕后，则先将光亮度调节器调至最小，然后再关闭显微镜电源开关。
③镜头的清洗：实验完毕后，镜头的清洗很重要。
用擦镜纸蘸取少量镜头清洗液，先从镜头的中央开始清洗，轻轻旋转擦至镜头的边缘部分，如此重复2－3次。
④载物台必须保持清洁，必要时亦可用擦镜纸蘸少量清洗液擦试载物台。
聚光器上的污物的去除亦可采用类似的方法。
⑤使用完毕后，玻片一律取下，套上布袋.放回原处。
本桌的显微镜一律不准搬离本实验桌。
若需使用者，可到该桌使用，使用后务必保持该显微镜的清洁。
如若发现违章使用情况，必追究使用者责任，本次实验作零分计。
（二）实验时，实验室内，一律不准高声喧哗整洁，保持室内安静，认真操作，仔细做好各项观察与记录。
（三）实验室内的一切仪器、物品必须爱护。
节约材料、药品，取用时不要过量。
公用物品不得独自占用，用后归还原处。
（四）注意安全。
使用有毒物品、强酸、强碱等，应严格按照操作规程。
易燃物品远离火源。
禁止湿手拿取电源开关或接触电源。
如发生触电等事故，及时报告。
（五）取用各种试剂，要用及时盖上瓶盖。
按献宝取出所需之药品或溶液后，不得将原液倒回瓶内。
滴管、玻棒、吸管不可混用。
（六）实验中如有丢失、损坏仪器设备及用具，及时登记并报告，凡违反操作规程造成不应有的损失者，视其情节轻重，态度好坏，按有关规定处理。
（七）本实验室欢迎各位实验者对每一实验本身提出新的看法与做法，至于能否采用，视具体情况而定。
2011级细胞生物学实验讲义
2011级细胞生物学实验讲义实验一细胞膜通透性观察一、实验目的1.了解细胞膜对物质通透性的一般规律。
2.了解溶血现象及其发生机制。
二、实验原理细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。
它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。
细胞膜的通透性孔径不会大于0.5-1.0nm，并非所有的物质都能通过。
各种物质出入细胞的方式是不同的，带电的物质通常同水结合形成一个水合的外壳，这不仅增加了它们的分子体积，同时也大大降低了脂溶性，因此带电荷的分子（离子），不管多小，都不能自由扩散。
各种非电解质进入细胞的快慢，决定于分子量的大小和极性。
相对分子质量大的物质进入细胞慢，非极性分子比极性分子容易穿膜。
在细胞膜上有专门的水通道-水孔蛋白、和运输特定物质的载体蛋白，它们的运输方式为易化扩散。
水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。
渗透作用是细胞膜的主要功能之一。
将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。
将红细胞放在某些等渗盐溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，膜两侧的渗透压平衡会发生改变，也会发生溶血现象。
各种非电解质溶液，只要单位面积中所含的分子数相同，就具有相同的渗透压。
将红细胞置于乙二醇、丙三醇、葡萄糖等摩尔浓度的高渗液中，分子进入红血细胞，导致水的摄入，使细胞膨胀、破裂发生溶血。
溶血现象发生的快慢与进入细胞的物质的分子量有关，相对分子质量大的进入细胞慢，发生溶血所需的时间也长。
因此，发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。
本实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化。
二、实验仪器、材料和试剂1、仪器、用具：小烧杯、试管、试管架、刻度吸管、秒表。
2、材料：含适量阿氏液的鸡血或兔血。
《细胞生物学实验》PPT课件
养瓶，在培养过程中不断地转动，使培养的细胞始终处于悬浮状态
之中而不贴壁。
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群体培养（左）和克隆培养（右）
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目前实验室中常用的几种细胞 系
细胞系
• 3T3 • HeLa • BHK21 • PtKl • L6 • PCI2 • SP2 • SP2／0 • CHO
名称细胞类型
• 另一种是克隆培养（clonal culture），将高度稀释的游离细胞悬 液加入培养瓶中，各个细胞贴壁后，彼此距离较远，经过生长增殖 每一个细胞形成一个细胞集落，称为克隆（clone）。一个细胞克 隆中的所有细胞均来源于同一个祖先细胞。
• 此外，为了制取细胞产品而设计了转鼓培养法，使用大容量的圆培
按结构成分分为细胞培养(cell culture) 组织培养(tissue culture) 器官培养(organ culture)。 3.细胞株(系)与克隆
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二、细胞培养定义：
1. 原代培养 （primary culture）：从动物机体取出 的进行培养的细胞群。原代培养的细胞生长比较缓慢， 而且繁殖一定的代数后（一般10代以内）停止生长， 需要从更换培养基。
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3.分别在下列等渗溶液中进行实验，步骤同2。
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五、实验结果
将观察到的现象记录，并进行分析、比较：
1. 试管内液体分两层：上层浅黄色透明，下
层红色不透明为不溶血（－），镜检红细胞 完好呈双凹盘状。
2. 如果试管内液体混浊，上层带红色者，称
不完全溶血（＋或＋＋），镜检有部分红细 胞呈碎片。
（1ml）和10（10ml）份0.17mol/L 氯 化钠溶液，形成一种不透明的红色液 体，此即稀释的鸡血。
细胞生物学实验指导讲义
实验一细胞的基本形态结构的观察实验原理与目的（1）通过观察动、植物细胞，了解细胞形态的多样性并掌握光镜下细胞的基本形态结构。
（2）初步掌握临时制片技术和显微绘图的方法。
实验原理细胞是生命活动的基本结构单位和功能单位。
构成人体或其他高等动物或植物的细胞种类繁多，形态各异。
细胞的形态都与它们的功能相适应。
如具有运输O2和CO2功能的红细胞为双凹盘状；具有感受刺激与传导功能的神经细胞呈星芒形，附有长短不等的树枝状突起；上皮细胞是柱形或扁平形；巨噬细胞则呈不规则形状，并能伸出伪足，以利于为执行吞噬和消灭外源的病原微生物的功能。
虽然细胞在形态上多种多样、大小不同，但却具有共同的基本结构特点，即都是由细胞膜（cell membrane）、细胞质(cytoplasm)和细胞核(nucleus)组成。
实验用品1．器具：显微镜、载玻片、盖玻片、推片、吸管、镊子、牙签、擦镜纸、吸水纸、小剪刀。
2．材料：洋葱、人口腔上皮细胞、鸡血液、人血细胞涂片、蟾蜍血细胞涂片。
3．试剂：2 %碘液、Giemsa 染液。
试剂配制1．2 %碘液：称取碘片2g，碘化钾5g，蒸馏水100ml 混匀溶解即可。
2．吉姆萨(Giemsa) 染液：吉姆萨粉(Giemsa stain) l.0g甘油(AR) 66ml甲醇(AR) 66ml将Giemsa粉放入研钵中，先加入少量甘油，研磨至无颗粒为止，然后再将全部甘油倒入，放56℃温箱中2h后，加入甲醇，将配制好的染液密封保存棕色瓶内(最好于0~4℃保存)。
内容与方法一、洋葱鳞茎表皮细胞制片与观察：1. 临时制片：取一擦净的载玻片，在玻片中央滴一滴2%的碘液，将洋葱茎用小刀分为几块，取一块肉质鳞叶，用镊子在其表面轻轻撕下一小块膜质表皮，再用剪刀剪成3～4mm2的小块，置于载玻片的染液中铺平，染色2～3分钟，盖上盖玻片，用吸水纸吸去盖玻片周围多余的染液。
2. 观察：将标本置于低倍镜下观察，可见许多长柱状排列整齐、彼此相连的细胞，选择其中较典型的细胞移至视野中央，然后换成高倍镜观察以下结构：1）细胞壁：在每两个细胞相连处，可看到二层壁状结构，是相邻细胞各自的细胞壁，有纤维素构成。
《细胞生物学实验》PPT课件
备注
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实验四 叶绿体的分离与荧光观察
一、实验目的：
1.通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器 分离的一般原理和方法；
2.观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟 悉荧光显微镜的使用方法。
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二、 实验原理
组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是 分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降 速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以 及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一 时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依 次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中 的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部， 分批收集即可获得各种亚细胞组分。
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实验内容与实施过程
4、植物原生质体的分离和培养（ 课内完成，180min） ①取充分展开的嫩叶，用自来水冲洗干净； ②将叶片在0.1%升汞溶液中浸泡灭菌10min，然后用无 菌蒸馏水漂洗5次； ③用镊子撕去叶的下表皮，然后将叶放有酶液的培养 皿或带盖三角瓶，每10ml酶液放2g叶片；
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②原生质体分离纯化或融合后，在适当的 培养基上应用合适的培养方法，能够再生细胞 壁，并启动细胞持续分裂，直至形成细胞团， 长成愈伤组织或胚状体，再分化发育成苗。其 中，选择合适的培养基及培养方法是原生质体 培养中最基础也是最关键的环节。
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三、实验仪器
台式离心机、 高压灭菌锅、 倒置显微镜、 超净工作台
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③詹纳斯绿B：詹纳斯绿B能专一的对线粒 体进行活体染色。线粒体中细胞色素氧 化酶使染料保持氧化状态，即有色状态， 呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被 还原，成为无色状态
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三、实验仪器
显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、 双面刀片、解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖 玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
本科《细胞生物学实验》讲义
（3）载物台：戴物台为方形（多数）和圆形的平台，中央有一光孔，孔的两侧各装1个夹片，载物台上还有移动器（其上有刻度标尺），可纵向和横向移动，移动器的作用是夹住和移动标本用。
（4）镜臂：镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。镜臂有固定式和活动式 （可改变倾斜度）两种。
（5）滤光片：自然光由各种波长的光组成，如只需某一波长的光线，可选用合适的滤光片，以提高分辨率，增加反差和清晰度。滤光片有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等颜色。根据标本颜色，在聚光器下加相应的滤光片。
图1.普通光学显微镜
五、实验步骤及内容
1．低倍镜的操作
（1）置显微镜于固定的桌上。窗外不宜有障碍视线之物。
2．高倍镜的操作
（1）使用高倍镜前，先用低倍镜观察，发现目的物后将它移到视野正中处。
（2）旋动转换器换高倍镜，如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动，说明原来低倍镜就没有调准焦距，目的物并没有找到，要用低倍镜重调。如果调对了，换高倍镜时基本可以看到目的物。若有点模糊，用细调节器调就清晰可见。
3．油镜的操作
4．用铅笔分别绘出各种细菌的形态图。
六、数据整理
七、实验过程中应注意事项及心得
1.取、送显微镜时要轻拿轻放，一定要一手握住弯臂，另一手托住底座。显微镜不能倾斜，以免目镜从镜筒上端滑出。不可把显微镜放在实验台的边缘，以免碰翻落地。取拿显微镜罩子的时候也一定轻取，以免将目镜从镜筒上带出摔坏。
2.显微镜的光学部分只能用特殊的擦镜纸擦拭，切忌乱用他物擦拭，更不能用手触摸透镜，以免汗液玷污透镜。
实验一、光学显微镜的基本使用方法
一、实验目的
1. 了解光学显微镜的结构、原理和保养方法；
细胞生物学实验讲义(新)
细胞生物学实验讲义吴锦程梁杰编莆田学院环境与生命科学系生物技术专业2021年2月目录1.前言 (3)2. 实验一普通光学显微镜及暗视野显微镜的使用 (4)3. 实验二荧光和相差显微镜及其使用.............. .164. 实验三细胞膜的渗透性.................................................. .235. 实验四细胞凝集反响...................................................... .276. 实验五叶绿体的别离与荧光观察 (29)7. 实验六线粒体与液泡的超活染色与观察 (32)8. 实验七酸性磷酸酶的显示方法(选做〕....................... .369. 实验八植物细胞原生质流动及其影响因素(选做〕 (39)10. 实验九植物细胞骨架的观察(选做〕 (41)前言细胞生物学是当前生命科学中核心学科之一，也是重要的专业根底课，其理论与实验技术已广泛地用于研究细胞的形态结构、基因表达与克隆、病毒、细菌、胚胎发育、远缘杂交、人类疾病的发病机制、药物机理等领域，随着分子生物学的研究渗入，分子细胞生物学也得到了突飞猛进的开展。
目前许多综合大学、农业、医学及药科大学把细胞生物学作为本科生和研究生的必修课或根底理论课，同时也开设了专门的细胞生物学实验课，学生们通过实验，进一步地加深了对理论课的理解，也为今后的专业实验课和毕业论文实验奠定了根底。
本讲义精心选择了细胞生物学中的常规实验，作为教材面向本系生物技术专业本科生进行讲授。
实验一普通光学显微镜及暗视野显微镜的使用一、实验目的1. 强化普通光镜结构和使用技能的知识，掌握让其发挥最正确效能的方法。
2. 了解暗场显微镜的构造和原理，并掌握它们使用方法。
二、实验用品1. 材料与标本：载玻片、盖玻片、牙签，香柏油、生物永久装片、擦镜纸、洋葱。
细胞生物学实验讲稿 (22)
视频4.5 细胞培养结果分析
同学们好！
我们在前面的视频中，学习了“鸡胚原代细胞的获取与培养”和“贴壁细胞的传代培养”。
因细胞培养效果对细胞形态和性能影响很大，需要经常检查细胞培养物，分析培养物状态。
细胞培养物的常规检查：（1）培养液酸碱度；（2）培养物有无微生物污染；（3）培养细胞生长状态。
1、培养液酸碱度检查
因培养液中加有酚红指示剂，可通过看颜色检查酸碱度。
橙色：pH7.0左右。
黄色：pH﹤6.8，偏酸。
红色：pH﹥8.0，偏碱。
当培养液颜色变黄时就需要换液。
2、培养物微生物污染常规检查
肉眼检查：有无真菌菌落；培养液是否浑浊。
显微镜观察：
真菌：可看到真菌菌落和菌丝。
细菌：可见微小、闪光的球形或杆状小颗粒，有时可见明显的运动。
酵母：可见卵形或球形酵母细胞，有的细胞表面出有小芽。
3、培养物细胞观察
（1）贴壁细胞生长状态
状态良好的细胞：明亮、透明而饱满，轮廓不清。
状态不良的细胞：形态不规则，轮廓增强、透明性降低，胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质，严重者贴壁细胞脱壁悬浮。
（2）贴壁细胞贴附比例：细胞贴附比例高的培养物中，细胞基本呈贴壁生长，有少量明亮的圆形细胞，为处于分裂期的贴壁细胞；细胞贴附比例低的培养物，可看到大量漂浮的圆形细胞。
其中，深色、灰暗细胞，一般为因消化过度而死亡的贴壁细胞；明亮饱满细胞，则是混入原代贴壁细胞培养物的悬浮细胞。
细胞生物学实验讲义
程而损坏仪器设备及物品者要按有关规定赔偿。 6．在实验过程中仪器设备发生故障或损坏时，应首先切断电源，并立即报告任课教
师及时处理。 7．使用贵重仪器设备，一定要在老师的指导下操作，使用完毕，要进行登记。 8．实验中使用易燃、易爆、有毒试剂及传染性强的物品时，应严格操作，注意自我
的像再次放大，没有辨析能力。物镜一般有：4×、10×、 图1 显微镜的光路
40×和油镜(100×)，它们各有一定的放大率，不仅可以 放大标本，而且有辨析能力。
2.问：什么是光学显微镜？它的各部名称是什么？ 答：一般的普通光学显微镜如下图 2。它的各部名称如图 3 所示。镜座、镜柱、 镜臂、镜筒、物镜转换器(旋转器)、镜台(载物台)、调节器：粗调节器(粗螺 旋)和细调节器(细螺旋)、反光镜、集光器、显微镜目镜、显微镜物镜、开关、 光源等。
细胞生物学实验讲义
上海大学生命科学学院
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实验须知
一、实验须知 1．每个学生必须遵守实验室规则。 2．实验时不准迟到、早退或无故缺席，有病或有事需向任课教师请假。 3．进入实验室后要保持安静，不得在室内喧哗、打闹；不得抽烟、吃东西、随地吐
痰、乱丢纸屑和其他杂物。 4．不得将与实验无关的物品带入实验室；不得将实验物品带出实验室；不允许在食
1.问：在细胞生物学实验中，为何要使用光学显微镜？ 答：（1）所要观察的对象细胞的个体很微小，绝大多数细胞， 直径一般为 10-100 微米（1 微米＝1 / 1000 毫米），动物 的细胞更小，一般只有 10 微米左右，而细菌只是一个细 胞，这种细胞比动物细胞还小。所以肉眼无法看到这些微 小的生命体。 （2）人眼所能看到的物体的大小和人眼与该物体的距离有 关。视力 1.0（即对数视力表 5.0）的眼睛的分辨率是 1'； 2.0 的眼晴的分辨率是 0.5'。这样你就可以算出在一定距 离下人眼所能看到的物体的最大长度是多少了。一般肉眼 的分辨距离在 0.2mm 左右。 （3）视角过小时需要借助放大镜、显微镜或望远镜等加以 放大，才能看清物体了。光学显微镜：0.2um （4）显微镜有目镜和物镜。目镜一般有：8×、10×、15 ×、16×等种不同的放大倍数的目镜。目镜只能把物镜成
细胞生物学实验讲义
细胞生物学实验讲义细胞内DNA和RNA的显示一、目的要求1、掌握显示细胞内DNA和RNA的方法。
2、熟悉细胞内DNA和RNA的分布位置。
二、实验原理核酸是酸性的，它们对于碱性染料派洛宁和甲基绿具有亲和力。
利用这两种染料的混合液处理细胞，可使其中的DNA和RNA呈现出不同的颜色，这种颜色上的差异由DNA 和RNA聚合程度的不同所引起，因为甲基绿分子上有两个相对的正电荷，它与聚合程度较高的DNA分子有较强的亲和力，可使DNA分子染成蓝绿色；而派洛宁分子中仅一个正电荷，可与低聚分子RNA相结合使其染成红色。
这样细胞中的DNA和RNA可被区别开来。
三、器材与试剂1、器材：光学显微镜、载玻片、盖玻片、染色缸、染色架、注射器。
2、材料：鸡血。
3、试剂：0.2mol/L醋酸缓冲溶液、2%甲基绿染液、1%派洛宁染液、甲基绿·派洛宁混合染液。
4、试剂的配制（1）2mol/L醋酸缓冲溶液：用2ml注射器抽取1.2ml冰乙酸加入到98.8ml蒸馏水中，混匀。
再称取醋酸钠（NaAC·3H2O）2.72g 溶于100ml蒸馏水中，使用时按2：3的比例混合两液即成。
（2）2%甲基绿染液：称取 2.0g去杂质甲基绿溶于100ml0.2mol/L的醋酸缓冲溶液中即成。
甲基绿粉中往往混有影响染色效果的甲基紫，它们必须预先除去，其方法是将甲基绿溶于蒸馏水中，放在分液漏斗中加入足量的氯仿（三氯甲烷）用力振荡，然后静置，弃去含甲基紫的氯仿，再加入氯仿重复数次，直至氯仿中无甲基紫为止，最后放入40 C温箱中干燥后备用。
（3）1%派洛宁染液：称取1g派洛宁（吡罗红）溶于100ml0.2/L醋酸缓冲溶液中混匀。
（4）甲基绿派洛宁混合染液：将2%的甲基绿液和1%的派洛宁液以5：2的比例混合均匀即可。
该液应现配现用，不宜久置。
四、内容与方法1、取鸡血一小滴在干净的载玻片一端，用另一载玻片的一端紧贴血滴，待血液沿其边缘展开后，以30~400角向玻片的另一端推去，制成较薄的血涂片，室温下晾干。
细胞生物学实验讲义
植物组织培养一、实验目的1、掌握植物细胞无菌培养技术。
2、了解不同激素对细胞的不同诱导作用。
二、实验原理植物组织培养是20世纪60年代以来植物细胞生物学中发展起来的一项生物技术。
它是借用无菌操作方法，培养植物的离体器官，组织或细胞，使其在人工合成的培养基上，通过细胞的分裂、增殖、分化、发育，最终长成完整的再生植株。
植物组织培养技术的研究，不仅具有重大的理论意义，而且在生产实践中也已显示了广阔的应用前景。
组织分化与形态建成问题，快速繁殖与去除病毒，花药培养与单倍体育种，幼胚培养与试管受精，抗体突变体的筛选于体细胞无体系变异，悬浮细胞培养与次生物质生产以及超低温种质保存等方面的深入研究与实际应用，都必须借助植物组织培养技术的基本程序和方法，深刻理解植物细胞的全能性。
三、实验用品1、材料半夏无菌苗。
2、仪器卧式灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养箱或培养室。
3、用具镊子、刀、牛皮纸、marker笔、棉线。
4、器皿试剂瓶(50、100、1000ml)、三角瓶(100ml)、刻度吸管(0.5、1、5、10ml)、培养皿(直径9～11cm)。
5、药品与试剂1).药品(见下表)2).70％酒精四、实验方法1、培养基的配制配制培养基前先要配制母液。
母液分大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四类。
(各类成分浓度、用量详见下表)。
表1 MS培养基母液配制(单位：mg)1).大量元素母液(10倍液)分别称取10倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约800ml热的(60～80℃)蒸馏水中。
一种成分完全溶解后再加入下一种，最后加水定容至1000ml后装入试剂瓶中，冰箱内贮存备用。
2).微量元素母液(100倍液)分别称取100倍用量的微量无机盐，依次溶解于800ml重蒸水中，加水定容至1000ml。
3).铁盐母液(100倍液)称取100倍用量的Na2-EDTA(乙二胺四乙酸钠)和FeSO4·7H2O溶于800ml重蒸水中，最后定容到1000ml。
《细胞生物学实验》课件
05
结论与讨论
实验结论
01 02
实验结论总结
通过本次实验，我们成功地观察到了细胞分裂的各个阶段，验证了细胞 周期的存在和细胞分裂的机制。实验结果与预期一致，进一步证实了细 胞生物学理论的正确性。
实验结果的意义
本实验结果对于深入理解细胞分裂和增殖的机制具有重要意义，为后续 的细胞生物学研究和应用提供了有力支持。
《细胞生物学实验》 ppt课件
目录
CONTENTS
• 实验概述 • 实验材料 • 实验操作 • 实验结果 • 结论与讨论
01
实验概述
实验目的
掌握细胞培养技术
通过本实验，学生将熟悉并掌握细胞培养的基本技术和方法，了 解细胞在体外生长和繁殖的条件和要求。
理解细胞形态与功能的关系
通过观察不同类型细胞的形态和生长特点，学生将进一步理解细胞 形态与其功能之间的关系。
培养实践操作能力
本实验将提供实际操作的机会，培养学生的实验技能和动手能力， 提高其解决实际问题的能力。
实验原理
细胞培养的生物学基础
细胞生长与增殖的过程
介绍细胞培养的基本概念、发展历程 和应用领域，为学生提供相关的生物 学基础知识。
解释细胞在体外生长和增殖的过程， 包括细胞周期、分裂方式、接触抑制 等基本概念。
03
实验结论的应用
实验结论可应用于教学、科研和实际生产中，有助于提高人们对细胞生
物学领域的认识和理解。
结果分析
数据分析方法
在实验过程中，我们采用了显微 观察、图像处理和统计分析等多 种方法，确保实验结果的准确性
和可靠性。
实验误差分析
在实验过程中，可能存在一些误 差，如观察角度、显微镜倍数等 因素可能影响实验结果。我们通 过多次重复实验和交叉验证等方
xu《细胞生物学实验》教案
《细胞生物学实验》教案第一章：细胞生物学实验原理1.1 实验目的理解细胞生物学实验的基本原理和方法。
掌握实验操作的基本技能。
1.2 实验原理介绍细胞生物学实验的基本原理，如细胞培养、显微镜观察等。
1.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器。
1.4 实验步骤详细描述实验操作的步骤。
1.5 实验报告要求要求学生对实验结果进行分析和讨论。
第二章：细胞培养与观察2.1 实验目的掌握细胞培养的基本方法。
学会使用显微镜观察细胞。
2.2 实验原理介绍细胞培养的基本方法和步骤。
讲解显微镜的使用方法和观察技巧。
2.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器。
2.4 实验步骤详细描述实验操作的步骤。
2.5 实验报告要求要求学生对实验结果进行分析和讨论。
第三章：细胞染色与观察3.1 实验目的学习细胞染色的基本方法。
掌握染色后细胞的观察技巧。
3.2 实验原理介绍细胞染色的原理和方法。
讲解染色后细胞的观察技巧。
3.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器。
3.4 实验步骤详细描述实验操作的步骤。
3.5 实验报告要求要求学生对实验结果进行分析和讨论。
第四章：细胞增殖与观察4.1 实验目的学习细胞增殖的实验方法。
观察细胞增殖过程。
4.2 实验原理介绍细胞增殖的实验原理和方法。
4.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器。
4.4 实验步骤详细描述实验操作的步骤。
4.5 实验报告要求要求学生对实验结果进行分析和讨论。
第五章：细胞凋亡与观察5.1 实验目的学习细胞凋亡的实验方法。
观察细胞凋亡过程。
5.2 实验原理介绍细胞凋亡的实验原理和方法。
5.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器。
5.4 实验步骤详细描述实验操作的步骤。
5.5 实验报告要求要求学生对实验结果进行分析和讨论。
第六章：细胞膜透性与物质运输6.1 实验目的理解细胞膜的透性及其功能。
学习物质在细胞膜上的运输方式。
6.2 实验原理介绍细胞膜透性的概念和影响因素。
细胞生物学实验讲稿 (4)
视频2.2 涂片法制备血细胞标本片及瑞氏染色同学们好！涂片法是用一张载玻片将细胞悬液均匀地涂布在另一张载玻片上制备细胞标本片的方法。
广泛用于血细胞及其他各种悬浮细胞材料标本片的制备。
实验原理：一定浓度的细胞悬液，用一张载玻片涂布于另一张载玻片后，可在载玻片上形成密度适可的单层细胞标本。
实验材料及用品有：抗凝全血；普通光学显微镜；酒精棉球缸；载玻片；吸水纸；蜡笔；吸管；废液缸；瑞氏染液；pH6.4的PBS缓冲液。
实验操作环节有：清洁载玻片——加样——涂片——干片——镜检涂片效果——瑞氏染色——细胞显微观察。
操作细节：1、清洁载玻片：用酒精棉球反复擦拭清洁载玻片；用吸水纸吸干表面水分和酒精。
2、加样：将载玻片平放在实验台上，用吸管吸取血液后与载玻片长轴一端距离边缘约1cm处接触，挤出1小滴血液。
3、涂片：另取一张载玻片，用其一侧短边接触加有血滴的载玻片；向后拖动使与血滴前沿接触；稍等，让血滴沿边缘展开；单方向匀速推动血样至载玻片另一侧。
4、干片：在空气中晃动细胞涂片，使其迅速干燥。
5、镜检涂片效果：显微镜下细胞应呈均匀分布的单层，密度适可。
6、瑞氏染色：用蜡笔在血涂片上画一个约3cm×2cm的椭圆形圈，作为堤防；向圈内连续快速滴加瑞氏染液至液面呈拱凸形；静置1min，使细胞固定；向瑞氏染液中缓慢滴加相同滴数的PBS缓冲液；水平轻轻旋动载玻片，至液面浮现一层黄色金属样物质；静置染色15~20min；蒸馏水冲洗标本除去浮液；用吸水纸吸干表面水分。
7、细胞显微观察。
注意事项1、要等血涂片干透后再进行染色。
否则，细胞在染色过程中容易脱落。
2、用蜡笔作堤防时切记画的圈要完整，以免染料从缺口处流失。
3、滴加瑞氏染液时要快速连续，并且一定要形成拱凸液面，以免因溶剂挥发至干导致染料颗粒沉积在血膜上。
细胞生物学实验讲义
《细胞生物学》实验指导目录实验一细胞大小测定和生物绘图法（验证性）2实验二细胞中过氧化物酶的显示（验证性）2实验三细胞内糖类的显示（验证性）2实验四细胞Feulgen反应（验证性）2实验五动物细胞培养（综合性）4实验六细胞膜通透性的观察和细胞活力测定（创新性）4实验一细胞大小测定和生物绘图法一、实验目的1. 掌握用测微尺测定细胞大小的原理和方法。
2. 掌握生物绘图的基本方法。
二、实验原理（一）测微尺的原理测微尺分物镜测微尺（简称物微尺或台微尺）和目镜测微尺（简称目微尺），两尺配合使用，可以测量细胞大小。
目微尺是一个可以放在目镜内的特制玻璃圆片，圆片中央刻有一条直线，此线分为若干格。
物微尺为一载玻片中央封固的小尺，长1mm，被等分为100格，长为0.01mm（10um）。
当测量细胞大小时，不能用物微尺直接测量细胞，而只能使用目微尺。
因目微尺测量的细胞是经物镜放大后的像，而它每格所代表的实际长度随物镜的放大率而变，在测量时需要先用物微尺来测定，求出某一放大率时目微尺每格所代表的实际长度，然后再用以测定细胞大小。
将物微尺放在显微镜的载物台上，小心转动目镜测微尺，移动物微尺使两尺平行，起点线重合，然后找出另一处两尺刻度重合处，记录起点线到重合线之间的各尺的刻度数（格数），按下式计算，在该放大系统下目微尺每格所代表的实际长度：物测微尺格数目微尺每格所代表的实际长度= ×10um目测微尺格数例如：目微尺是100倍，其对应的物微尺使80格，则目微尺每格所代表的实际长度为80/100=8um。
测量某一细胞时，如果目微尺测得其横径为5倍，则此细胞横径为8×5=40um。
（二）生物绘图的基本要求1. 具有高度的科学性，不得有科学性错误。
形态结构要准确，比例要正确，要求真实感，立体感，精美而美观。
2. 图面要力求整洁，铅笔要保持尖锐，尽量少用橡皮。
3. 绘图大小要适宜，位置略偏左，右边留着注图。
4. 绘图的线条要光滑、匀称，点点要大小一致。
细胞生物学实验讲义(学生教材)
《细胞生物学实验》实验一细胞分裂相的观察（3 学时）一、实验目的：1、掌握减数分裂标本的制备方法。
2、掌握生殖细胞减数分裂发生过程及各个时期的染色体和细胞变化特点.3、了解植物生殖细胞的形成过程。
二、实验原理减数分裂是生殖细胞发生的一种特殊细胞分裂方式，特点是染色体复制一次，细胞分裂两次，形成4个子细胞，每个子细胞染色体数目减半。
经过受精作用后，染色体数目恢复，这样在物种延续过程中保证了遗传的相对稳定性和基因的多样性。
三、实验仪器、材料和试剂（一）仪器、用具：眼科镊子、解剖针、刀片、吸水纸、显微镜、载玻片、盖玻片（二）材料：普通小麦(Triticum aestivum,2n=2x=42)幼穗、大葱（Allium fistolosum, 2n=2x=16，花序外包绿色总苞者，长2-3cm）、黑麦（Secale cereale, 2n=2x=14，穗长约6-9cm，旗叶与倒耳叶距离3-5cm）；大麦(Hordeum sativum, 2n=2x=14)；玉米(Zea mays, 2n=2x=20)（三）试剂：苯酚品红、醋酸洋红、结晶紫A液：碱性品红 3g 溶于100ml 70%乙醇中（4℃冰箱中长期保存）B液：取A液10ml，加入90ml 5%苯酚水溶液（两周内使用）取B液45ml，加6ml冰醋酸和6ml 37%甲醛四、实验方法与步骤：1、取材：当小麦处于孕穗或期时，选取约3-5cm的幼穗，取材时间在上午6—9时为好。
2、固定：新鲜幼穗可直接观察，也可剥去外部叶鞘，剪下幼穗，投入Carnoy固定液中固定4-24小时后，倒掉固定液用95%、85%酒精换洗2次，每次1h，然后转入70%酒精中保存备用。
3、涂片与染色：取出一段幼穗，置于盛有蒸馏水的培养皿中，剥下一个小穗，取其中一朵小花，夹取其中一个花药置于清洁的载玻片上，用刀片切去花药的两端，加一滴苯酚品红染液，边染色边用镊子、解剖针用力涂抹挤压花药，挤出花粉母细胞，去掉花药等杂物，盖上盖玻片，用吸水纸吸取四周多余染液，即可观察。
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《细胞生物学实验》实验一细胞分裂相的观察（3 学时）一、实验目的：1、掌握减数分裂标本的制备方法。
2、掌握生殖细胞减数分裂发生过程及各个时期的染色体和细胞变化特点.3、了解植物生殖细胞的形成过程。
二、实验原理减数分裂是生殖细胞发生的一种特殊细胞分裂方式，特点是染色体复制一次，细胞分裂两次，形成4个子细胞，每个子细胞染色体数目减半。
经过受精作用后，染色体数目恢复，这样在物种延续过程中保证了遗传的相对稳定性和基因的多样性。
三、实验仪器、材料和试剂（一）仪器、用具：眼科镊子、解剖针、刀片、吸水纸、显微镜、载玻片、盖玻片（二）材料：普通小麦(Triticum aestivum,2n=2x=42)幼穗、大葱（Allium fistolosum, 2n=2x=16，花序外包绿色总苞者，长2-3cm）、黑麦（Secale cereale, 2n=2x=14，穗长约6-9cm，旗叶与倒耳叶距离3-5cm）；大麦(Hordeum sativum, 2n=2x=14)；玉米(Zea mays, 2n=2x=20)（三）试剂：苯酚品红、醋酸洋红、结晶紫A液：碱性品红 3g 溶于100ml 70%乙醇中（4℃冰箱中长期保存）B液：取A液10ml，加入90ml 5%苯酚水溶液（两周内使用）取B液45ml，加6ml冰醋酸和6ml 37%甲醛四、实验方法与步骤：1、取材：当小麦处于孕穗或期时，选取约3-5cm的幼穗，取材时间在上午6—9时为好。
2、固定：新鲜幼穗可直接观察，也可剥去外部叶鞘，剪下幼穗，投入Carnoy固定液中固定4-24小时后，倒掉固定液用95%、85%酒精换洗2次，每次1h，然后转入70%酒精中保存备用。
3、涂片与染色：取出一段幼穗，置于盛有蒸馏水的培养皿中，剥下一个小穗，取其中一朵小花，夹取其中一个花药置于清洁的载玻片上，用刀片切去花药的两端，加一滴苯酚品红染液，边染色边用镊子、解剖针用力涂抹挤压花药，挤出花粉母细胞，去掉花药等杂物，盖上盖玻片，用吸水纸吸取四周多余染液，即可观察。
如果染色过深，可加上一滴70%酒精分色，然后用吸水纸吸去多余染液再观察。
4、减数分裂时相的观察：先在低倍镜找着细胞，然后用高倍镜观察分裂相，绘图。
5、对于好的压片，可永久制片保留：（1）揭片：将玻片置于-20℃冰箱冷冻30min结冰，或放入液氮处理45～60s，用镊子或解剖刀直接揭开盖片，将有材料面朝上，37℃干燥，将晾干的载片及对应的盖片。
（2）脱水与透明：用由低浓度到高浓度（70％-80％-90％-100％）的梯度酒精冲洗1～2min，或在染缸中脱水2～5min，晾干。
注意：整个脱水透明过程中，必须保持载玻片和盖玻片原来相对的方向和位置，同时注意操作轻巧，以免造成玻片上材料漂失。
（3）封片：在中性树胶中加入1/5～1/4的二甲苯进行稀释，滴一小滴稀释胶在脱水透明后的载玻片中央，将盖玻片盖回原来位置封片。
注意：覆盖盖玻片时，按定位位置水平盖下，使之随着树胶的扩展自然下沉，切不可施加压力或移动盖玻片。
如发现封片中树胶有气泡，应让其自然逸出或用针尖烧热后烫一下，使气泡逸出。
如树胶滴得过多而逸出盖玻片四周，待树胶凝固后，用脱脂棉蘸二甲苯轻轻擦净逸出的树胶。
封片后平放晾干，镜检，物象清晰符合要求的保存，并贴上标签，注明标本名称、作者姓名和制片日期。
五、实验结果：六、作业：1、绘出你观察的细胞减数分裂相图。
注意：构图和布局、勾画轮廓、点点映衬、标注（右侧，引线平直，下方写图题，加括号表面放大倍数）2、简述减数分裂各时期的特征七、附：减数分裂过程的分期及特征1．前期I细线期：染色体呈细长的染色线，螺旋卷曲分散在细胞核内，沿着整条染色线分布着许多染色粒，形似念珠。
在细胞核内，核仁清晰可见。
偶线期：同源染色体彼此接近，发生联会。
在细线期末，偶线期初，染色体或染色丝在细胞千的部位发生变化。
在植物细胞中，染色丝凝集成块，偏于细胞核的一边，称为凝线期，在这—时期，还出现染色质(丝)穿壁转移运动。
在动物细胞中，染色丝的一端聚集到核的一侧，而另一端呈放射状扩散，呈花束状，特称花束期。
凝线期或花束期一直延续到偶线期结束粗线期开始为止。
粗线期：同源染色体完成配对，成为二价染色体(或成对的同源染色体)，染色体由于螺旋卷由的结果而缩得很短，每一粗线期的染色体具有两条并列的染色单体，成对的同源染色体含有四条染色单体，称为四分体，核仁附着于特定的染色体上。
双线期：同源染色体之间彼此开始分离，但是在一个或多个点上互相交叉而又保持在一起，形似麻花。
在该期，同源染色体的两个染色单体之间发生交换。
终变期：染色体缩得更短，交叉移向染色体的户间或末端，呈现V型、8型、O型或X型。
染色体常移到核的周围靠近核膜的地方，是统计染色体的最好时期。
该期结束时，伴随着核膜的破裂和核仁的消失。
2．中期I核膜和核仁已消失，染色体排列在赤道面上，两极出现纺锤体并与染色体的看丝点相连。
此时所有四分体都排列在纺锤体的中部。
3．后期I每个四分体中的两各同源染色体，由于着丝粒的作用而彼此分离．逐渐向两极移动，形成两组染色体。
4. 末期I当两组染色体移动到两极后又聚集起来，核膜重新出现。
在第一次核分裂之后，有些物种紧接着就进行胞质分裂，如百合、洋葱等，但有些物种则不接着进行胞质分裂，而是在第二次核分裂后才进行胞质分裂，如蚕豆、聚合草等。
5．间期当减数第一次分裂后，两个子细胞(或核)经过一个很短的问期(即中间期)，便进入减数第二次分裂。
随着物种的不同，间期的长短不一，有些物种的细胞完全没有间期。
6．前期II一末期II分裂情况与有丝分裂相同。
在减数第二次分裂后，紧接着进行胞质分裂。
至此，一个母细胞分裂成染色体数目减半的四个子细胞。
在植物中，减数分裂后，每个小孢子(花粉)母细胞成为四分孢子，每个小孢子脱离母细胞壁成为游离的小孢子，以后继续发育成为成熟花粉(二核或三核花粉)。
在动物中，减数分裂结束时．一个精母细胞成为四个精子，每个精子细胞经过一系列的分化，转变成为精子。
在雌性方面，—个大孢子母细胞(植物)或卵母细胞(动物)经减数分裂产生”卵及三个极体。
实验二DNA的细胞化学检测方法—Feulgen反应（4学时）一、实验目的了解Feulgen反应的原理，掌握Feulgen染色的方法。
二、实验原理DNA经弱酸（1M HCl）水解，其上的嘌呤碱基和脱氧核糖之间的键打开，使脱氧核糖的一端形成游离的醛基，这些醛基在原位与Schiff试剂反应，形成紫红色化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。
紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色基团，所以具有颜色。
对照组不经过酸水解或预先用热的三氯醋酸或DNA酶处理，得到的反应是阴性的，从而证明了Feulgen反应的专—性。
(吸水纸。
(二) 材料：洋葱鳞茎或普通小麦根尖。
(三) 试剂（1) 1 M盐酸的配制：取82.5ml密度1.19g／m1的浓盐酸加蒸馏水至1000m1。
（2) Schiff试剂的配制及保存：称取0.5g碱性品红加入到100m1煮沸的蒸馏水中(用三角烧瓶)，时时振荡，继续煮5min(勿使之沸腾)，使之充分溶解。
然后冷却至50℃时用滤纸过滤到磨口棕色试剂瓶中，滤液中加入10ml l M HCl，冷却至25℃时，加入0．5g K2S2O5(偏重亚硫酸钾)．充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h(有时需2—3d)，使其颜色退至淡黄色，然后加入0.5g活性炭，剧烈振荡lmin，最后用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封严瓶塞，外包黑纸。
滤液应为无色也无沉淀．贮于4℃冰箱中备用。
如有白色沉淀，就不能再使用，如颜色变红，可加入少许偏重亚硫酸钾，使之再转变为无色时，仍可再用。
（3）10％偏重亚硫酸钾（4）亚硫酸水：取200ml自来水，加10 ml 10％偏重亚硫酸钾水溶液和10m1 lM HCl ，三者于使用前混匀。
（5）5％三氯醋酸四、实验方法与步骤(1) 将小麦根尖或鳞茎内表皮放在l M HCl中，加热到60℃水解8－10min。
(2) 蒸馏水水洗。
(3) Schiff试剂遮光染色30mm。
(4) 用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗3次，每次1min。
(5) 水洗5min。
(6) 将根尖放在载玻片上，镊子捣碎，盖上盖玻片，压片（洋葱内表皮不用压片）(7) 显微镜检查，细胞中凡有DNA的部位应呈现紫红色的阳性反应。
对照片方法一：CK1:先将材料放在5％三氯乙酸中90℃水浴15min，主要把DNA抽提掉，然后按步骤(2)-(7)制片观察。
方法二：CK2:材料不经l M HCl 水解，直接放在Schiff试剂中染色，然后按步骤(2)-(7)制片观察。
方法三：CK3:材料经l M HCl 水解30 min，直接放在Schiff试剂中染色，然后按步骤(2)-(7)制片观察。
五、实验结果：六、作业：(1) 绘图示细胞DNA的分布部位。
(2) 说明设立对照的必要性。
实验三细胞膜的渗透性（3学时）一、实验目的：1、了解细胞膜的选择渗透性（即半透膜）的特性。
2、了解不同性质溶液对细胞膜透性的影响。
二、实验原理将红细胞放入等渗溶液或高渗溶液中，由于红细胞细胞膜对各种溶质的透性不同，有的可以溶质渗入，有的溶质不能渗入，渗入的溶质能提高红细胞内渗透压，促使水分子进入红细胞，引起溶血，由于溶质透入的机制和速度不同，因此溶血时间也不同。
溶血现象可作为测量物质进入红血细胞速度的一种指标。
溶血现象发生的快慢与加入细胞的溶质脂溶性大小、极性与非极性、分子量大小有关，具有以下规律：1、脂溶性物质、非极性物质比水溶性物质、极性物质穿膜快。
2、分子量大、分配系数大的非极性、脂溶性物质穿膜比分子量小、分配系数小的快。
3、疏水的小分子O2、CO2、N2、苯和小的不带电荷的极性分子如尿素、甘油、H2O可自由穿膜。
4、其他大的不带电荷的极性分子和带电无机离子，如葡萄糖、蔗糖、氨基酸、核苷酸、Na+、K+、Cl-等则要通过简单扩散、协助扩散（载体蛋白、通道蛋白）、主动运输等多种方式完成穿膜，穿膜的机制不同，溶血速度差异较大，情况复杂。
非极性化合物易溶于脂溶剂，但在水中溶解度很小。
分子量越大，碳链越长，脂溶性越大。
一种化合物在脂溶剂中的溶解度与其在水中溶解度之比，称为分配系数。
电解质溶液（如NaCl）与非电解质（如葡萄糖）分子数相等时，电解质产生的渗透压要大的多。
具有相同渗透压的某非电解溶液与某电解质溶液浓度之比，称为等渗系数。
用i来表示： i＝（葡萄糖的等渗物质的量浓度／NaCl的等渗物质的量浓度）。
发生溶血者为低渗液，所以把发生溶血的前一管溶液的浓度近似视为红细胞等渗。
三、实验仪器、材料和试剂：(一)仪器、用具：小烧杯、试管、试管架、(二)材料：含适量肝素（20mg×140U/1mlH2O=2800U/ml,用量15U/1ml血液，0.5ml肝素水溶液/50ml 血）的兔血。