细胞的换液与传代培养1

一、传代培养（passage）
❖无论是否稀释，将细胞从一个培养 瓶转移或移植到另一个培养瓶，也 称再培养（subculture）
二、单层培养细胞的一般传代步骤:
倒出旧液 PBS洗涤 胰蛋白酶消化 倾出消化液 培养 稀释 计数 吹散细胞 加入培养液
三、原代培养物需要换液和传代 (subculture)的指标
3．贴壁生长细胞传代
培
ห้องสมุดไป่ตู้
采用酶消化法传代。常用的消化液有0.1-
养
0.25％的胰蛋白酶液。
五、消化法传代培养的步骤
动 物 细 胞 传 代 培 养
看细胞传代小视频,排序并挑出毛病
动 1.pH值下降（红变黄色）；
物 细
2.细胞浓度；
胞 3.细胞类型；
传
代 4.细胞形态学；细胞核四周充满颗
培
粒，细胞质呈空泡化，细胞变圆，
养
或出现细胞与底物脱离时。
四、细胞传代方法
动 1．悬浮生长细胞传代
物 直接传代法：静置数分钟，悬浮细胞沉淀在
细 瓶壁时，将上清培养液去除l／2一2／3，然
胞 后加入等量的新鲜培养基用吸管直接吹打形
传 代
成细胞悬液再传代。
培 离心法传代：离心（1000转/分）去上清，
养 沉淀物加新培养液后再混匀传代。原代细胞
传代按1：2接种，细胞系传代按1：3-4接种。
动
2．半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）
物 细
此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不
胞
牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，
传
进行传代。
代
细胞的换液与传代培养
细胞系cell line：原代培养物经首次传代后即成。 有限细胞系finite cell line: 不能继续传代或传代数有限。 连续细胞系continuous cell line：可连续传代的细胞系， 即已建成的细胞系。 细胞株cell strain：通过选择法和克隆形成法从原代培 养物或细胞系中获得的具有特殊性质和标志的培养物。