6酸性α-醋酸萘酚酯酶染色液(ANAE)(ICSH推荐法)

1.检验原理

盐酸副品红与亚硝酸钠反应生成六偶氮副品红（重氮盐），底物α-醋酸萘酚在酯酶的作用下分解产生α-萘酚，α-萘酚与六偶氮副品红结合生成棕红色沉淀，定位于细胞浆中，本染色液对酯酶染色无特异性，故又称非特异性酯酶染色。

2.主要组成成分

组成主要成分

2.1、固定剂（A液）甲醛

2.2、偶氮溶液（B液）副品红

2.3、亚硝酸钠溶液（C液）亚硝酸钠

2.4、磷酸盐缓冲溶液（D液）磷酸盐

2.5、α-醋酸萘酚溶液（E液）α-醋酸萘酚

2.6、甲基绿溶液（F液）甲基绿

2.7、NaF溶液氟化钠

3.储存条件及有效期

有效期：一年（十二个月）。

储存条件：本试剂盒应储存于2～8℃低温环境。

4.样本要求

新鲜的骨髓细胞涂片及血液细胞涂片。

5.检验方法

5.1. 工作液配制：

5.1.1. 浸染工作液配制（一份浸染工作液量为33ml,至少可同时放置8-10张涂片）：

5.1.1.1、重氮盐溶液的准备：B液1ml与C液1ml彻底混匀，静置2分钟；

5.1.1.2、染缸（自备染液缸）内加入D液30ml;

5.1.1.3、将重氮盐溶液倒入染缸内，混匀；

5.1.1.4、再加E液1ml入染缸内，轻轻混匀。

B液C液D液E液 NaF液

A染缸1ml 1ml 30ml ml ——

B染缸（抑制试验）1ml 1ml 30ml 1ml 40mg

5.1.2. 滴染工作液配制（一份滴染工作液量为1.65ml）；

使用器材：一次性塑料试管、微量移液器、一次性吸嘴、滴管。

操作：于试管内加B液50ul、C液50ul 、混匀，静置1分钟；再加D液1.5ml,E液50ul，混匀，静置2分钟备用（NaF抑制试验加NaF液1滴）。

B液C液D液E液 NaF液

A染缸50μl 50μl 1.5ml 50μl ——

B管（抑制试管）50μl 50μl 1.5ml 50μl 1滴

注：100Tests中的15mlD液（浓缩缓冲液）用蒸馏水稀释成150ml缓冲液使用。

5.2.染色步骤：

5.2.1、干燥涂片，直接滴加工作液做第二步或滴加A液固定涂片30秒，蒸馏水冲洗，待干编写：杨松钱审核：黄萱批准：白云辉页码：17

或滤纸吸干。（涂片不固定直接做ANAE染色，阳性反应强于固定者）

5.2.2、滴加或浸入工作液布满涂片（37℃）孵育30分钟，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干。

5.2.3、F液复染1～2分钟，蒸馏水冲洗，待干后镜检。

6.临床意义

6.1.阳性:单核细胞和组织细胞呈强阳性,但可被氟化钠抑制;巨核细胞及血小板呈阳性;早幼粒细胞白血病时早幼粒细胞可阳性,且不受氟化钠抑制.

6.2.弱阳性及阴性:粒细胞,淋巴细胞一般为阴性,若有弱阳性也可被氟化钠抑制.

6.3.临床鉴别:主要用于鉴别急性单核细胞性白血病与急性粒细胞性白血病,前者NSE阳性,且受氟化钠(NaF)抑制;而后者NSE阴性,若有阳性也不受氟化钠抑制.

7.注意事项

7.1、5Tests只限滴染使用。

7.2、本染色又名酸性非特异性酯酶染色。

7.3、使用前应恢复室温，用前请摇匀试剂；B、C液请充分混匀，所用容器必须洁净。

7.4、工作液临用前新鲜配制，应采用新鲜涂片做染色。

7.5、每次试剂使用后，请迅速盖好密封保存，以免挥发及影响效果。

7.6、本品应由专业人士使用及进行结果的判读。

7.7、使用前应详细阅读使用说明书及产品包装标识，在有效期内使用，并做好个人卫生防护。

7.8、生产批号、有效期见外包装。

7.9、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。

8.参考文献

8.1、中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程〔M〕.第3版.南京：东南大学出版社，2006

8.2、Gradwohl’s Clinical Laboratory Methods And Diagnosis,8th,ed.

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