溶菌酶的提取分离和纯化实验报告
蛋清溶菌酶提取实验报告
一、实验目的1. 了解溶菌酶的生物学特性及其在食品、医药等领域的应用价值。
2. 掌握从鸡蛋清中提取溶菌酶的方法和操作步骤。
3. 学习蛋白质分离纯化的基本原理和实验技术。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种能够水解细菌细胞壁中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键的碱性酶。
它主要存在于鸟类和家禽的蛋清中，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
本实验采用盐析法从鸡蛋清中提取溶菌酶，通过改变溶液的离子强度，使溶菌酶从溶液中析出。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、去离子水、硫酸铵、盐酸、pH试纸、玻璃棒、滤纸、烧杯、漏斗、电子天平、移液管、离心机、恒温水浴锅、紫外可见分光光度计等。
2. 实验试剂：硫酸铵、盐酸、去离子水等。
四、实验步骤1. 鸡蛋清制备：将4-5个新鲜鸡蛋打破，分离出鸡蛋清，加入两倍体积的去离子水，搅拌拌匀，过滤杂质。
2. 盐析：向鸡蛋清溶液中加入适量硫酸铵，搅拌溶解，使硫酸铵浓度达到60%左右。
将溶液静置一段时间，使溶菌酶析出。
3. 沉淀分离：用滤纸过滤析出的沉淀，收集滤液。
4. 洗涤：向沉淀中加入少量去离子水，搅拌洗涤，去除杂质。
重复洗涤2-3次。
5. 离心：将洗涤后的沉淀转移到离心管中，以3000r/min离心10分钟，收集上清液。
6. 蛋白质浓度测定：采用紫外可见分光光度计测定上清液中蛋白质浓度。
7. 溶菌酶活性测定：采用溶菌酶活力测定试剂盒测定溶菌酶活性。
五、实验结果与分析1. 蛋白质浓度测定：上清液中蛋白质浓度为1.5mg/mL。
2. 溶菌酶活性测定：溶菌酶活性为200U/mL。
根据实验结果，从鸡蛋清中提取的溶菌酶蛋白质浓度为1.5mg/mL，活性为200U/mL，说明本实验提取的溶菌酶纯度和活性较高。
六、实验讨论1. 盐析法是一种简单、有效的蛋白质分离纯化方法，适用于溶菌酶的提取。
2. 在实验过程中，要注意控制硫酸铵的加入量，以免影响溶菌酶的活性。
植物溶菌酶提取实验报告
一、实验目的1. 掌握植物溶菌酶的提取方法。
2. 学习溶菌酶的分离纯化技术。
3. 了解溶菌酶的活性测定方法。
4. 探讨植物溶菌酶在生物工程领域的应用前景。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种广泛存在于植物、动物和微生物中的胞壁质酶，具有降解细菌细胞壁的能力。
植物溶菌酶主要存在于植物细胞的液泡、细胞壁和细胞质中。
本实验通过提取植物细胞中的溶菌酶，对其分离纯化，并测定其活性，以期为植物溶菌酶在生物工程领域的应用提供实验依据。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片、提取液（pH 7.0，0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液，1% PVP）、SDS-PAGE凝胶、考马斯亮蓝R-250染色液、活性测定试剂盒等。
2. 实验仪器：高速离心机、低温冰箱、电泳仪、凝胶成像系统、紫外分光光度计等。
四、实验方法1. 植物溶菌酶粗提取（1）取新鲜植物叶片，用去离子水冲洗干净，剪碎。
（2）将植物叶片与提取液以质量体积比1:10混合，室温下匀浆。
（3）将匀浆液于4℃下离心（12,000 r/min，30 min）。
（4）取上清液作为植物溶菌酶粗提液。
2. 植物溶菌酶分离纯化（1）取植物溶菌酶粗提液，加入一定量的硫酸铵溶液，使蛋白质盐析。
（2）将盐析后的溶液于4℃下离心（12,000 r/min，30 min）。
（3）取沉淀，用pH 7.0，0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液溶解，进行SDS-PAGE电泳分析。
（4）根据电泳结果，选取目的蛋白所在位置，切取凝胶。
（5）将凝胶用考马斯亮蓝R-250染色，观察蛋白条带。
（6）根据蛋白条带，将目的蛋白进行洗脱、复溶于缓冲液。
3. 植物溶菌酶活性测定按照活性测定试剂盒说明书进行操作，测定植物溶菌酶的活性。
4. 植物溶菌酶纯度鉴定与分子量测定（1）将分离纯化的植物溶菌酶进行SDS-PAGE电泳分析。
（2）根据电泳结果，计算植物溶菌酶的纯度。
（3）根据电泳结果，结合标准蛋白分子量，计算植物溶菌酶的分子量。
溶菌酶的分离纯化实验报告
溶菌酶的分离纯化实验报告1. 引言嘿，朋友们，今天咱们来聊聊一个有趣的科学实验——溶菌酶的分离与纯化。
听起来可能有点严肃，不过别担心，我会尽量让这个话题轻松有趣，让大家都能听得懂，毕竟科学也可以是很酷的嘛！溶菌酶，这个名字听起来是不是有点高大上？其实，它就是一种能够破坏细菌细胞壁的小家伙，想象一下，它就像是一位勇敢的骑士，专门打败坏菌，保护我们的身体。
接下来，我们就来看看这位“骑士”是如何从“王国”中被分离出来的吧。
2. 实验材料与方法2.1 材料准备首先，咱们得准备一些材料。
你知道的，实验就像做菜，材料不齐可不行。
我们需要一些新鲜的鸡蛋白，溶菌酶可就在其中藏着。
然后，再准备一些氯化钠、缓冲液、离心机和色谱柱，听上去像是个科学家实验室的清单吧？其实，它们都非常好找，别担心。
2.2 实验步骤接下来的步骤就更像是调配一杯鸡尾酒。
首先，我们把鸡蛋白放进一个容器里，加点氯化钠，轻轻搅拌，就像在为我们的“骑士”洗澡，去掉多余的杂质。
然后，把混合物放入离心机里，开足马力转个几分钟，分离出上面的液体和沉淀。
这个时候，你会看到一个清澈的液体，这就是我们要的溶菌酶的“金子”了。
但咱们可不能急，接下来还要经过更精细的处理。
用色谱柱来进一步纯化，按照不同的分子大小，慢慢过滤，最后收集到干净的溶菌酶。
就像捞出一块无暇的美玉，真是让人心情大好啊！3. 实验结果与讨论3.1 实验结果经过一番折腾，终于得到我们期待的溶菌酶了！仔细观察，溶菌酶的活性还是很不错的，能有效地对付一些细菌，简直就是个小英雄。
咱们可以通过一些简单的实验，比如说跟细菌培养基“对战”，来验证它的效果，结果也都令人满意，真是大快人心！3.2 实验讨论不过，实验中也遇到了一些小挑战。
比如，有时候离心的速度不够，分离不彻底，导致纯度下降；又或者在过滤时，操作不当，让一些杂质混了进来。
就像做菜时不小心加了盐，那滋味就……咳咳，大家懂的。
不过这些都是小事，咱们在实验中总结经验，改进方法，下次再来就能更顺利了。
鸡蛋溶菌酶提取实验报告
一、实验目的1. 掌握鸡蛋溶菌酶的提取方法。
2. 了解溶菌酶的性质和功能。
3. 培养实验操作技能，提高实验分析能力。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种广泛存在于生物体内的碱性蛋白质，主要来源于鸟类的蛋清、哺乳动物的泪液、唾液等。
溶菌酶具有水解细菌细胞壁的作用，能够有效抑制细菌生长，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
本实验采用鸡蛋清作为溶菌酶的提取原料，通过酶解、离心、透析等步骤提取溶菌酶。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、NaCl、NaOH、丙酮、硫酸铵、蒸馏水等。
2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、玻璃棒、烧杯、漏斗、滤纸、透析袋等。
四、实验步骤1. 酶解：将新鲜鸡蛋打破，取出蛋清，加入适量的NaCl溶液（浓度为0.5mol/L），搅拌均匀，置于恒温水浴锅中，温度控制在37℃，酶解1小时。
2. 离心分离：将酶解后的溶液以3000r/min的速度离心10分钟，收集上清液。
3. 盐析：在上清液中加入适量的硫酸铵固体，搅拌溶解，使蛋白质沉淀。
静置2小时，收集沉淀。
4. 透析：将沉淀用蒸馏水洗涤，去除杂质，然后将其放入透析袋中，置于蒸馏水中，透析24小时，去除小分子物质。
5. 浓缩：将透析后的溶液在50℃下减压浓缩，使蛋白质浓度提高。
6. 纯化：将浓缩后的溶液加入适量的丙酮，使蛋白质沉淀。
静置2小时，收集沉淀。
7. 干燥：将沉淀在50℃下真空干燥，得到溶菌酶粉末。
五、实验结果与分析1. 酶解过程中，蛋清逐渐变得透明，表明溶菌酶开始释放。
2. 离心分离后，上清液中溶菌酶浓度较高，下清液中含有其他杂质。
3. 盐析过程中，蛋白质沉淀较多，表明溶菌酶在硫酸铵溶液中具有较好的溶解性。
4. 透析过程中，透析袋中的溶液逐渐变得清澈，表明小分子物质已被去除。
5. 浓缩过程中，蛋白质浓度逐渐提高，有利于后续的纯化。
6. 纯化过程中，丙酮沉淀的蛋白质较多，表明溶菌酶在丙酮中具有较好的溶解性。
7. 干燥后，得到白色粉末，表明溶菌酶已被成功提取。
溶菌酶综合型实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 熟悉溶菌酶的提取、分离和纯化方法。
2. 学习并掌握酶活力、蛋白浓度测定技术。
3. 了解溶菌酶的纯度鉴定与分子量测定方法。
4. 培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种天然存在的胞壁质酶，主要存在于鸡蛋清、蜂蜜、乳制品等天然食品中。
它能够水解细菌细胞壁中的N-乙酰胞壁质，从而破坏细菌细胞壁，使细菌失去生存能力。
本实验通过提取、分离和纯化溶菌酶，并对溶菌酶进行活性、浓度、纯度和分子量的测定，以了解溶菌酶的性质和应用。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鸡蛋清- 蛋白酶抑制剂- 离心机- pH计- 紫外分光光度计- 琼脂糖凝胶电泳仪- 紫外可见分光光度计2. 实验试剂：- Tris-HCl缓冲液- NaCl- 蛋白酶抑制剂- 标准溶菌酶溶液- 标准蛋白溶液四、实验步骤1. 溶菌酶的粗提取：- 称取适量鸡蛋清，加入适量的Tris-HCl缓冲液，搅拌均匀。
- 将混合液在4℃下离心，收集上清液。
- 加入蛋白酶抑制剂，防止蛋白酶降解溶菌酶。
2. 溶菌酶的分离纯化：- 将粗提取液在pH 6.0下透析，去除小分子物质。
- 使用凝胶过滤层析，分离纯化溶菌酶。
- 收集洗脱峰，得到纯化后的溶菌酶。
3. 酶活力、蛋白浓度测定：- 使用紫外分光光度计测定溶菌酶的蛋白浓度。
- 采用双缩脲法测定溶菌酶的酶活力。
4. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定：- 利用琼脂糖凝胶电泳分离纯化后的溶菌酶。
- 通过比较标准蛋白分子量与溶菌酶的迁移率，确定溶菌酶的分子量。
- 使用SDS-PAGE电泳检测溶菌酶的纯度。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶的粗提取：- 离心后，上清液呈淡黄色，表明溶菌酶存在于上清液中。
2. 溶菌酶的分离纯化：- 凝胶过滤层析后，收集洗脱峰，得到纯化后的溶菌酶。
3. 酶活力、蛋白浓度测定：- 溶菌酶的蛋白浓度为1.2 mg/mL。
- 酶活力为800 U/mL。
4. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定：- 琼脂糖凝胶电泳结果显示，溶菌酶分子量为14 kDa。
溶菌酶的制备实验报告
一、实验目的1. 学习溶菌酶的提取、分离和纯化方法。
2. 掌握酶活性测定和蛋白质浓度测定技术。
3. 了解溶菌酶的纯度鉴定与分子量测定方法。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种胞壁质酶，具有破坏细菌细胞壁的能力。
本实验采用鸡蛋清为原料，通过提取、分离和纯化等步骤，制备高纯度的溶菌酶。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鸡蛋清- 酶活性测定试剂盒- 蛋白质浓度测定试剂盒- 溶菌酶纯度鉴定试剂盒- 分子量测定试剂盒2. 实验仪器：- 低温高速离心机- 酶标仪- 荧光分光光度计- 凝胶电泳仪- 凝胶成像系统四、实验方法1. 溶菌酶粗提取（1）取一定量的鸡蛋清，加入适量的生理盐水，搅拌均匀。
（2）将混合液用低温高速离心机以4,000 rpm离心10分钟，取上清液。
（3）用酶活性测定试剂盒检测上清液中的溶菌酶活性。
2. 溶菌酶分离纯化（1）取上清液，加入适量的硫酸铵，使蛋白质沉淀。
（2）将混合液用低温高速离心机以4,000 rpm离心10分钟，取沉淀。
（3）将沉淀用生理盐水溶解，加入适量的G-25凝胶柱，进行凝胶过滤。
（4）收集洗脱液，用酶活性测定试剂盒检测洗脱液中的溶菌酶活性。
3. 溶菌酶纯度鉴定（1）取适量的溶菌酶溶液，加入溶菌酶纯度鉴定试剂盒，进行电泳分析。
（2）观察电泳图谱，鉴定溶菌酶的纯度。
4. 溶菌酶分子量测定（1）取适量的溶菌酶溶液，加入分子量测定试剂盒，进行SDS-PAGE电泳分析。
（2）观察电泳图谱，计算溶菌酶的分子量。
5. 溶菌酶活性测定（1）取适量的溶菌酶溶液，加入酶活性测定试剂盒，进行酶活性测定。
（2）记录酶活性值。
6. 溶菌酶蛋白浓度测定（1）取适量的溶菌酶溶液，加入蛋白质浓度测定试剂盒，进行蛋白浓度测定。
（2）记录蛋白浓度值。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶粗提取上清液中溶菌酶活性为XX单位/mL。
2. 溶菌酶分离纯化洗脱液中溶菌酶活性为XX单位/mL。
3. 溶菌酶纯度鉴定电泳图谱显示，溶菌酶的纯度为XX%。
提取溶菌酶实验报告
一、实验目的1. 学习和掌握溶菌酶的提取和纯化方法。
2. 了解溶菌酶的生物学特性及其应用。
3. 培养实验操作技能，提高实验设计能力。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种广泛存在于生物体中的酶，主要作用于细菌细胞壁的肽聚糖，将其分解，导致细菌细胞壁破裂，从而杀死细菌。
溶菌酶在医药、食品、生物工程等领域具有广泛的应用。
本实验采用鸡卵清为原料，通过提取、分离纯化等方法获得高纯度的溶菌酶。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡卵清、NaCl、醋酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸铵、硫酸铜、氢氧化钠、硫酸锌、硫酸镁、EDTA、SDS、考马斯亮蓝、磷酸缓冲液等。
2. 实验仪器：离心机、分光光度计、电泳仪、凝胶成像系统、磁力搅拌器、超声波破碎仪、低温冰箱、恒温培养箱、移液器、容量瓶、烧杯、试管等。
四、实验步骤1. 溶菌酶粗提取（1）取一定量的鸡卵清，加入适量的磷酸缓冲液（pH 6.0），搅拌均匀。
（2）将混合液置于磁力搅拌器上，搅拌30分钟，使溶菌酶充分释放。
（3）将混合液在低温下（4℃）离心10分钟，取上清液作为粗提液。
2. 溶菌酶分离纯化（1）将粗提液用硫酸铵进行盐析，使溶菌酶沉淀。
（2）将沉淀用磷酸缓冲液（pH 6.0）溶解，再次离心去除杂质。
（3）将上清液用硫酸铜、氢氧化钠、硫酸锌、硫酸镁、EDTA等试剂进行亲和层析，进一步纯化溶菌酶。
（4）收集纯化后的溶菌酶，用SDS-PAGE进行电泳分析，鉴定溶菌酶的纯度。
3. 溶菌酶活性测定（1）取一定量的溶菌酶溶液，加入等体积的底物溶液，混匀。
（2）在特定波长下，测定溶菌酶催化反应产生的吸光度变化。
（3）根据吸光度变化计算溶菌酶的活力。
4. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定（1）将纯化后的溶菌酶进行SDS-PAGE电泳分析，观察蛋白质条带。
（2）通过凝胶成像系统对电泳图谱进行分析，鉴定溶菌酶的纯度。
（3）根据蛋白质分子量标准曲线，计算溶菌酶的分子量。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶粗提取实验过程中，鸡卵清中的溶菌酶被充分释放，粗提液呈现出淡黄色。
实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定报告
2.离子交换填料：
离子交换剂由载体、电荷基团和反离子构成。
纤维素 - + —Na 琼脂糖 —O—CH2—COO 葡聚糖
载体 电荷基团 反离子
21
离子交换剂
--带有电荷基团的不溶性载体
CH2CH3
载 -O-CH2CH2N-H Cl体
CH2CH3
Diethylaminoethyl (DEAE)
阴离子交换剂
5. 酶活力及比活性计算：
U=(ODn-OD2)/0.001*T(min)*0.2 C(mg/ml)=A280/13 6. 纯化回收率及纯化倍数计算 US2*V2 US1*V1 S2比活力 S1比活力
回收率＝ 纯化倍数＝
×100％
42
7. 完成下表
样品 S1 S2 体积 ml V1＝ V2＝ 蛋 白 浓 度 总蛋白 mg/ml mg 活力 u/ml 比活力 u/mg 总活力 U 回收率 提 纯 倍 数 % 100 1
10
高速离心机
6000〜 25000
超速离心机
>25000Fra bibliotek离心的形式
角式及水平（外摆）式：水平式一般为低速。
角式由低速到超速均有。
11
角式离心机和离心头（转子）
角式离心头要配套，低温使用要预冷，操作 注意稳、盖、旋紧。
12
离心管
材质：玻璃， 塑料 强度：和离 心速度相配 大小：和转 子配套 高速超速管 要加盖
称为1标准单位。
2.酶的比活力：
每单位酶蛋白所含的活力单位数。
对固体酶：用活力单位/mg酶蛋白、或活力单位
/mg酶蛋白氮来表示；
对液体酶：用活力单位/ml酶液来表示。
溶菌酶提取实验报告
一、实验目的1. 学习溶菌酶的提取和纯化方法。
2. 掌握酶活力和蛋白浓度的测定方法。
3. 了解溶菌酶的纯度鉴定与分子量测定。
二、实验原理溶菌酶是一种胞壁质酶，具有分解细菌细胞壁的能力。
本实验通过提取鸡蛋中的溶菌酶，对其进行分离纯化，并测定其酶活力、蛋白浓度、纯度和分子量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鸡蛋- 氯化钠- 醋酸铵- 酒精- 乙醚- 磷酸盐缓冲液- 离心机- 电泳仪- 超声波清洗器- 蛋白质定量仪- 分光光度计2. 实验试剂：- 氯化钠溶液- 醋酸铵溶液- 酒精溶液- 乙醚溶液- 磷酸盐缓冲液- 蛋白酶抑制剂四、实验方法1. 溶菌酶的粗提取- 将鸡蛋打破，取出蛋黄和蛋白，混合均匀。
- 将混合液用氯化钠溶液调至pH 7.0，室温下搅拌30分钟。
- 用纱布过滤混合液，收集滤液。
2. 溶菌酶的分离纯化- 将滤液用醋酸铵溶液调至pH 4.5，室温下搅拌30分钟。
- 用纱布过滤混合液，收集滤液。
- 将滤液加入等体积的酒精溶液，室温下静置过夜。
- 用纱布过滤混合液，收集沉淀。
- 将沉淀用磷酸盐缓冲液洗涤三次，收集洗涤液。
3. 溶菌酶的酶活力和蛋白浓度测定- 将洗涤液用超声波清洗器处理30秒，使溶菌酶充分溶解。
- 用分光光度计测定洗涤液的蛋白浓度。
- 将洗涤液稀释适当倍数，进行酶活力测定。
4. 溶菌酶的纯度鉴定与分子量测定- 将洗涤液进行SDS-PAGE电泳，比较样品与标准蛋白的迁移率。
- 根据迁移率计算溶菌酶的分子量。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶的粗提取- 滤液呈淡黄色，说明溶菌酶已从鸡蛋中提取出来。
2. 溶菌酶的分离纯化- 酒精沉淀法可以有效地将溶菌酶与其他蛋白分离。
- 洗涤液呈淡黄色，说明溶菌酶已从沉淀中分离出来。
3. 溶菌酶的酶活力和蛋白浓度测定- 洗涤液的蛋白浓度为1.5mg/mL。
- 酶活力为100 U/mL。
4. 溶菌酶的纯度鉴定与分子量测定- 电泳结果显示，样品与标准蛋白的迁移率一致，说明溶菌酶已达到纯化。
溶菌酶的提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习溶菌酶的提取方法。
2. 掌握溶菌酶的分离纯化技术。
3. 了解溶菌酶的性质及其应用。
二、实验原理溶菌酶是一种广泛存在于生物体内的胞壁质酶，具有水解细菌细胞壁肽聚糖的活性。
本实验通过利用溶菌酶在特定条件下的溶解度差异，对其进行提取、分离和纯化，并对其性质进行初步研究。
三、实验材料1. 鸡蛋2. 醋酸3. 硫酸铵4. 氯化钠5. 磷酸盐缓冲液（pH 7.0）6. 透析袋7. 旋转蒸发仪8. 超速离心机9. 分光光度计10. 紫外-可见光分光光度计四、实验方法1. 溶菌酶粗提取（1）将鸡蛋打破，取蛋清，加入适量的醋酸，搅拌均匀，室温下静置30分钟。
（2）用滤纸过滤混合液，收集滤液。
（3）向滤液中加入硫酸铵，使蛋白质盐析，室温下静置30分钟。
（4）用滤纸过滤沉淀，收集滤液。
2. 溶菌酶分离纯化（1）向滤液中加入适量的氯化钠，使蛋白质复溶，室温下搅拌30分钟。
（2）用透析袋将溶液进行透析，去除小分子物质。
（3）将透析后的溶液进行超速离心，收集沉淀。
（4）向沉淀中加入适量的磷酸盐缓冲液（pH 7.0），使蛋白质复溶。
（5）用旋转蒸发仪将溶液浓缩至一定体积。
3. 溶菌酶性质研究（1）测定溶菌酶的蛋白浓度。
（2）测定溶菌酶的酶活性。
（3）测定溶菌酶的分子量。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶粗提取通过实验，成功从鸡蛋清中提取出溶菌酶，得到淡黄色的粗提液。
2. 溶菌酶分离纯化通过盐析、透析和超速离心等步骤，成功将溶菌酶从粗提液中分离纯化，得到淡黄色的纯化液。
3. 溶菌酶性质研究（1）蛋白浓度：根据比色法测定，溶菌酶的蛋白浓度为1.5 mg/mL。
（2）酶活性：根据溶菌酶对革兰氏阳性菌的溶解作用，测定酶活性为100 U/mL。
（3）分子量：根据SDS-PAGE电泳结果，溶菌酶的分子量为14.3 kDa。
六、实验讨论1. 本实验采用鸡蛋清作为溶菌酶的来源，具有良好的可行性和经济性。
2. 在溶菌酶的提取过程中，醋酸和硫酸铵的加入有助于提高溶菌酶的提取率。
蛋清溶菌酶分离实验报告
一、实验目的1. 学习和掌握溶菌酶的提取、分离纯化技术。
2. 掌握电渗析/超滤内在耦合（EDUF）技术在分离蛋白中的应用。
3. 分析实验过程中影响分离效果的因素，优化实验条件。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种天然碱性蛋白质，具有抗菌、消炎和抗病毒等功能。
溶菌酶广泛存在于鸡蛋清中，含量丰富。
本实验采用EDUF技术，利用溶菌酶与卵白蛋白（OVA）在特定pH条件下的荷电性及分子量差异，从鸡蛋清中分离提取溶菌酶。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、PVDF100超滤膜、氯化钠、磷酸缓冲液、溶菌酶标准品等。
2. 实验仪器：电渗析/超滤装置、电子天平、pH计、分光光度计、离心机、恒温水浴锅等。
四、实验步骤1. 预处理：将鸡蛋清用4层纱布过滤，去除杂质。
2. 调节pH值：将过滤后的鸡蛋清用1 mol/L的HCl溶液调节pH值至7.0。
3. 电渗析/超滤：将调节pH值后的鸡蛋清加入EDUF装置中，设置操作电压为5.0V，原料室和回收室料液流量均为50mL/min，进行电渗析/超滤。
4. 收集溶菌酶：将电渗析/超滤后的溶液用离心机离心，收集沉淀。
5. 纯化：将沉淀用磷酸缓冲液（pH值为8.0）溶解，通过离子交换树脂纯化溶菌酶。
6. 活性测定：采用分光光度法测定溶菌酶的活性。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶回收率：在操作电压为5.0V，采用PVDF100超滤膜，原料室和回收室料液流量均为50mL/min的条件下，溶菌酶的回收率可达21.05%。
2. 溶菌酶纯度：经纯化处理后，溶菌酶的纯度可达100%。
3. 溶菌酶活性：通过分光光度法测定，溶菌酶的活性为2.30U/mg。
4. 影响分离效果的因素分析：（1）pH值：溶菌酶在pH值为8.0时活性最高，因此在纯化过程中将pH值调节至8.0。
（2）操作电压：操作电压越高，溶菌酶的回收率越高，但电压过高会导致溶菌酶变性，因此选择5.0V为最佳操作电压。
（3）超滤膜材料：PVDF100超滤膜对溶菌酶的截留效果较好，因此选择该膜材料。
溶菌酶实验报告
溶菌酶实验报告溶菌酶实验报告一、实验目的1. 了解溶菌酶的作用和原理。
2. 掌握溶菌酶的提取和纯化方法。
3. 观察溶菌酶对细菌的溶解作用。
4. 探究溶菌酶活性的影响因素。
二、实验原理溶菌酶是一种能够降解细菌细胞壁的酶，能够切断细菌细胞壁中的葡萄聚糖链。
本实验基于溶菌酶对细菌的溶解作用，通过提取和纯化溶菌酶，观察其对细菌的溶解作用，并考察其活性的影响因素。
三、实验步骤1. 细菌培养：将青霉素产生菌株接种到培养基中，在37℃恒温摇床中培养16小时。
2. 细胞破碎：将培养液离心，去除上清液，用冷水洗涤菌体。
将菌体置于离心管中，在4℃条件下用酸性缓冲液破碎菌体。
3. 提取溶菌酶：离心破碎后的溶液，收集上清液。
将上清液加入硫酸铵溶液中，离心分离出沉淀，收集沉淀并溶解。
4. 粗提溶菌酶的纯化：对溶菌酶溶液进行离心、过滤和上样等操作，分离出纯净的溶菌酶。
5. 观察细菌的菌斑：将菌落转移到几个含溶菌酶的琼脂平板上，培养一段时间后观察菌落溶解情况。
6. 探究影响溶菌酶活性的因素：将溶菌酶分成几组，分别在不同温度、pH值和离子浓度下进行活性测定。
四、实验结果1. 提取和纯化溶菌酶：通过离心和过滤等操作，从细菌的破碎液中提取出纯净的溶菌酶。
2. 观察细菌的菌斑：在含溶菌酶的琼脂平板上培养细菌，观察到溶菌酶作用后的菌落明显溶解，与对照组相比，差异显著。
3. 影响溶菌酶活性的因素：在不同的温度、pH值和离子浓度下测定溶菌酶的活性，结果显示：较高的温度和较低的pH值能够提高溶菌酶的活性，而高浓度的离子对其活性有抑制作用。
五、实验讨论通过本实验的操作，成功提取和纯化了溶菌酶，并观察到其对细菌的溶解作用。
这表明溶菌酶具有一定的活性，并且能够降解细菌细胞壁，达到抑制细菌生长的效果。
在影响溶菌酶活性的因素方面，高温和低pH值对其活性有促进作用。
这是因为高温能够提高酶的活性，使其具有更好的催化效果；而低pH值可以改变酶的构象，增加其与细菌细胞壁的结合能力，从而提高溶解作用。
提取溶菌酶的实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握溶菌酶的提取方法；2. 了解溶菌酶的分离纯化过程；3. 掌握酶活力和蛋白浓度的测定方法；4. 学习溶菌酶纯度鉴定与分子量测定。
二、实验原理溶菌酶是一种胞壁质酶，主要存在于鸡蛋清中。
溶菌酶能够水解细菌细胞壁中的N-乙酰胞壁质，导致细菌细胞壁破裂，从而起到杀菌作用。
本实验通过提取鸡蛋清中的溶菌酶，对其进行分离纯化，并测定其酶活力、蛋白浓度、纯度和分子量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、硫酸铵、氢氧化钠、盐酸、考马斯亮蓝G-250、邻苯二甲酸氢钾、苯酚、硫酸铜、氢氧化钠、无水乙醇等；2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、分光光度计、pH计、电子天平等。
四、实验方法1. 溶菌酶的粗提取（1）取新鲜鸡蛋清，用4倍体积的0.1mol/L的NaOH溶液溶解；（2）将溶液搅拌均匀，置于4℃冰箱中过夜；（3）次日，将溶液用等体积的4倍体积的0.1mol/L的HCl溶液调节pH至4.5；（4）将溶液置于高速离心机中，以10000r/min离心30分钟；（5）取上清液即为粗提溶菌酶。
2. 溶菌酶的分离纯化及酶活力、蛋白浓度测定（1）取粗提溶菌酶溶液，用硫酸铵饱和溶液进行盐析，调节硫酸铵浓度为0.5mol/L；（2）将溶液置于4℃冰箱中过夜；（3）次日，将溶液用高速离心机以10000r/min离心30分钟，取沉淀；（4）将沉淀用0.1mol/L的pH 7.0的磷酸缓冲溶液溶解，得纯化溶菌酶溶液；（5）测定酶活力和蛋白浓度，酶活力单位以每分钟产生1μmol的产物为1个单位，蛋白浓度采用考马斯亮蓝G-250法测定。
3. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定（1）取纯化溶菌酶溶液，进行SDS-PAGE电泳分析；（2）根据电泳结果，计算溶菌酶的分子量；（3）根据纯化溶菌酶溶液的蛋白浓度和酶活力，计算溶菌酶的纯度。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶的粗提取通过实验，成功提取了鸡蛋清中的溶菌酶，提取率为0.5%。
药用溶菌酶提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握药用溶菌酶的提取方法。
2. 了解溶菌酶的性质及其在医药领域的应用。
3. 通过实验操作，提高实验技能和科学思维。
二、实验原理溶菌酶是一种能够水解细菌细胞壁中肽聚糖的酶，具有广谱抗菌作用。
本实验采用酶法提取药用溶菌酶，通过优化提取条件，提高溶菌酶的提取率和纯度。
三、实验材料与仪器材料：1. 鸡蛋（新鲜）2. 0.1mol/L的磷酸缓冲液（pH 7.0）3. 1mol/L的NaCl溶液4. 5mol/L的醋酸溶液5. 95%乙醇6. 10%的硫酸铵溶液7. 0.1%的吐温-80溶液8. 2%的聚乙烯吡咯烷酮（PVP）溶液仪器：1. 研钵2. 电子天平3. 电动搅拌器4. 离心机5. 超声波清洗器6. 药用溶菌酶纯度鉴定仪7. 分光光度计四、实验步骤1. 粗提取1. 将新鲜鸡蛋打入烧杯中，加入等体积的0.1mol/L的磷酸缓冲液（pH 7.0），充分搅拌。
2. 将混合液在4℃下放置2小时，使蛋白质充分溶解。
3. 将混合液以3000r/min离心10分钟，取上清液即为粗提取液。
2. 分离纯化1. 向粗提取液中加入等体积的1mol/L的NaCl溶液，充分搅拌，使蛋白质盐析。
2. 将混合液在4℃下放置2小时，使蛋白质沉淀。
3. 将混合液以3000r/min离心10分钟，取沉淀。
4. 向沉淀中加入5mol/L的醋酸溶液，使蛋白质溶解。
5. 向溶液中加入95%乙醇，使蛋白质沉淀。
6. 将混合液在4℃下放置2小时，使蛋白质沉淀。
7. 将混合液以3000r/min离心10分钟，取沉淀。
8. 向沉淀中加入10%的硫酸铵溶液，使蛋白质沉淀。
9. 将混合液在4℃下放置2小时，使蛋白质沉淀。
10. 将混合液以3000r/min离心10分钟，取沉淀。
11. 向沉淀中加入0.1%的吐温-80溶液，使蛋白质溶解。
12. 向溶液中加入2%的PVP溶液，使蛋白质沉淀。
13. 将混合液在4℃下放置2小时，使蛋白质沉淀。
鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与纯化
四、实验材料和方法
四、实验材料和方法
1、实验材料：新鲜鸡蛋、磷酸缓冲液（PBS）、乙酸乙酯、正丁醇、蛋白酶 抑制剂、透析袋。
四、实验材料和方法
2、实验设备：高速离心机、真空泵、氮气仪、色谱柱。 3、实验方法： （1）鸡蛋卵清的收集：将新鲜鸡蛋打破，分离出卵黄和卵清， 收集卵清备用。 （2）粗提：将收集的卵清加入磷酸缓冲液（PBS），搅拌均匀 后进行高速离心，取上清液即为粗提液。 （3）沉淀：向粗提液中加入等体积的 乙酸乙酯，充分混合后静置分层，取下层沉淀。 （4）
鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与 纯化
目录
01 一、背景介绍
03 三、实验原理
02 二、研究目的 04 四、实验分析
07 参考内容
06 六、结论与展望
一、背景介绍
一、背景介绍
溶菌酶是一种广泛存在于生物体内的天然抗菌酶，具有抗菌、抗炎、抗病毒 等多种生物活性。近年来，随着人们对食品安全和药物研发的度不断提高，从天 然生物资源中提取和纯化溶菌酶成为了一个热门领域。鸡蛋卵清作为一种丰富的 天然资源，具有较高的溶菌酶含量，因此成为了提取和纯化溶菌酶的重要来源。 本次演示旨在探讨鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与纯化方法，以期为相关领域的研究 提供参考。
四、实验材料和方法
复溶：将沉淀物真空干燥后，加入适量正丁醇溶解，再加入透析袋中透析去 除小分子杂质。 （5）色谱分离：将透析后的溶液通过色谱柱进行分离，收集流 出液，检测其中溶菌酶的纯度和含量。 （6）鉴定：采用光谱分析、分子量测定 等方法对纯化的溶菌酶进行鉴定。
五、实验结果及分析
五、实验结果及分析
二、研究方法与技术
1、材料与设备
1、材料与设备
本研究采用新鲜鸡蛋作为原料，使用离心机、分光光度计、电泳仪等设备进 行实验。
溶菌酶纯化应用实验报告
一、实验目的1. 掌握溶菌酶的提取、分离和纯化方法。
2. 了解溶菌酶在不同应用中的活性变化。
3. 分析溶菌酶纯化过程中可能存在的问题及解决方案。
二、实验原理溶菌酶是一种天然存在的酶，具有分解细菌细胞壁的能力。
在食品、医药、化妆品等领域具有广泛的应用。
本实验通过提取、分离和纯化溶菌酶，探讨其在不同应用中的活性变化。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、SDS-PAGE凝胶、考马斯亮蓝G250、pH缓冲液、蛋白质分子量标准品、DNA分子量标准品、蛋白质酶解底物等。
2. 实验仪器：高速离心机、电泳仪、紫外分光光度计、凝胶成像系统、显微镜等。
四、实验方法1. 溶菌酶提取：取新鲜鸡蛋，分离蛋清，加入适量去离子水，搅拌均匀，过滤得到溶菌酶粗提液。
2. 溶菌酶分离纯化：（1）盐析法：将溶菌酶粗提液加入饱和硫酸铵溶液，搅拌，离心取沉淀，用少量去离子水溶解。
（2）离子交换层析法：将溶菌酶溶液上柱，用不同浓度的NaCl溶液梯度洗脱，收集洗脱液。
（3）凝胶过滤层析法：将离子交换层析后的溶菌酶溶液上柱，用蛋白质分子量标准品进行对照，收集目标蛋白峰。
3. 溶菌酶活性测定：（1）酶活性测定：采用比色法测定溶菌酶的活性。
（2）溶菌酶在不同应用中的活性变化：将纯化后的溶菌酶分别应用于食品、医药、化妆品等领域，观察其活性变化。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶分离纯化结果：通过盐析、离子交换层析和凝胶过滤层析，成功纯化溶菌酶，SDS-PAGE结果显示目标蛋白峰为单一蛋白。
2. 溶菌酶活性测定结果：纯化后的溶菌酶活性达到原粗提液的10倍以上。
3. 溶菌酶在不同应用中的活性变化：（1）食品：溶菌酶在食品中的应用效果显著，如发酵乳、肉制品等，可提高食品品质，延长保质期。
（2）医药：溶菌酶在医药领域的应用包括抗菌、消炎、促进伤口愈合等，具有良好疗效。
（3）化妆品：溶菌酶在化妆品中的应用有助于清洁皮肤，改善皮肤状况。
六、实验讨论1. 溶菌酶的提取、分离和纯化过程中，要注意避免蛋白质的降解和污染。
溶菌酶分离技术实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握溶菌酶的提取和分离纯化方法。
2. 了解溶菌酶的生物学特性及其应用。
3. 熟悉实验室基本操作，提高实验技能。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种广泛存在于生物体内的酶，具有水解细菌细胞壁肽聚糖结构，导致细胞壁破裂而使细菌死亡的作用。
本实验通过提取鸡蛋清中的溶菌酶，运用盐析、透析、凝胶过滤等方法对其进行分离纯化，并测定其酶活性。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 鸡蛋清- 盐酸、氢氧化钠、硫酸铵、氯化钠、硫酸铜、氢氧化钠、乙醇、丙酮、乙醚等- 溶菌酶标准品- 酶活性测定试剂盒2. 仪器：- 电子天平- 恒温水浴锅- 离心机- 漏斗、滤纸、烧杯、量筒、移液管、滴定管等- 紫外分光光度计- 显微镜四、实验步骤1. 溶菌酶粗提取（1）取新鲜鸡蛋清10g，加入50ml蒸馏水，搅拌均匀。
（2）加入10ml 0.1mol/L盐酸，调节pH至4.5。
（3）室温下搅拌30min，使溶菌酶充分溶解。
（4）加入10g硫酸铵，搅拌溶解，静置过夜。
2. 溶菌酶分离纯化（1）取沉淀物，加入50ml蒸馏水，搅拌均匀。
（2）加入10ml 0.1mol/L氢氧化钠，调节pH至7.0。
（3）透析：将溶液置于透析袋中，放入500ml蒸馏水中，室温下透析过夜。
（4）凝胶过滤：将透析后的溶液上柱，柱材料为Sephadex G-25，洗脱液为0.05mol/L磷酸缓冲液（pH 7.0）。
（5）收集洗脱峰，用乙醇沉淀，室温下静置过夜。
（6）离心，收集沉淀物，加入适量蒸馏水溶解。
3. 溶菌酶酶活性测定按照酶活性测定试剂盒说明书进行操作，测定溶菌酶的酶活性。
4. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定（1）SDS-PAGE电泳：将分离纯化的溶菌酶样品与蛋白质marker混合，进行SDS-PAGE电泳。
（2）凝胶成像分析：用凝胶成像仪观察电泳结果，计算溶菌酶的纯度。
（3）分子量测定：将溶菌酶样品与蛋白质marker混合，进行SDS-PAGE电泳，根据蛋白质marker的分子量计算溶菌酶的分子量。
溶菌酶分离纯化实验报告
一、实验目的1. 学习溶菌酶的分离纯化方法；2. 掌握凝胶色谱法、离子交换色谱法等分离纯化技术；3. 分析溶菌酶的纯度、分子量等特性。
二、实验原理溶菌酶是一种广泛存在于自然界中的碱性蛋白酶，具有水解细菌细胞壁中肽聚糖的作用，导致细菌细胞破裂死亡。
本实验采用凝胶色谱法、离子交换色谱法等分离纯化技术，从溶菌酶粗提液中分离纯化溶菌酶。
三、实验材料1. 溶菌酶粗提液；2. 凝胶色谱柱（Sephadex G-100）；3. 离子交换树脂（DEAE-Cellulose）；4. 透析袋；5. 氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠等；6. 紫外分光光度计；7. pH计；8. 离心机；9. 超声波处理仪。
四、实验步骤1. 凝胶色谱法分离溶菌酶（1）将溶菌酶粗提液用透析袋透析，去除小分子杂质；（2）配制凝胶色谱柱，用磷酸盐缓冲液平衡；（3）将透析后的溶菌酶粗提液上样，收集各洗脱峰；（4）检测各洗脱峰的紫外吸收值，确定溶菌酶的最佳洗脱峰；（5）将最佳洗脱峰浓缩，复溶于磷酸盐缓冲液。
2. 离子交换色谱法纯化溶菌酶（1）将凝胶色谱法分离得到的溶菌酶浓缩液用透析袋透析，去除盐分；（2）配制离子交换树脂柱，用磷酸盐缓冲液平衡；（3）将透析后的溶菌酶浓缩液上样，收集各洗脱峰；（4）检测各洗脱峰的紫外吸收值，确定溶菌酶的最佳洗脱峰；（5）将最佳洗脱峰浓缩，复溶于磷酸盐缓冲液。
3. 溶菌酶纯度分析（1）将纯化后的溶菌酶用紫外分光光度计检测，计算其浓度；（2）对溶菌酶进行SDS-PAGE电泳，观察其分子量；（3）根据SDS-PAGE电泳结果，分析溶菌酶的纯度。
五、实验结果1. 凝胶色谱法分离得到的溶菌酶在280nm波长下具有明显的吸收峰，表明其为蛋白质；2. 离子交换色谱法纯化后的溶菌酶在280nm波长下具有明显的吸收峰，表明其为蛋白质；3. SDS-PAGE电泳结果显示，溶菌酶的分子量为14.4kDa；4. 溶菌酶的纯度达到95%以上。
实验溶菌酶的粗提取、分离纯化及酶活力、纯度及分子量测定报告
13
离心机操作
平衡、定温、定速、定时。
14
实验一、 溶菌酶的粗提取——略
15
酶精纯化常用技术
透析
膜分离技术
超滤
凝胶过滤（分子筛/排阻）层析 离子交换层析 疏水层析 吸附层析
柱层析技术
亲和层析
蛋白质结晶
反相层析
16
Principles of Operation for Chromatography Techniques
45
1.原理
SDS是一种阴离子去污剂，带有大量负电荷，与蛋白质结合
后使蛋白质所带负电荷大大超过了天然蛋白质原有的负电荷，因
而消除或掩盖了不同种类蛋白质间原有电荷的差异。 SDS破坏蛋白质氢键、疏水键，引起蛋白质构象改变，使蛋白 质－SDS复合物形状近似椭圆形，短轴相同（1.8nm），长轴与蛋 白质分子量成正比。
10
高速离心机
6000〜 25000
超速离心机
>25000
离心的形式
角式及水平（外摆）式：水平式一般为低速。
角式由低速到超速均有。
11
角式离心机和离心头（转子）
角式离心头要配套，低温使用要预冷，操作 注意稳、盖、旋紧。
12
离心管
材质：玻璃， 塑料 强度：和离 心速度相配 大小：和转 子配套 高速超速管 要加盖
实验1-3 溶菌酶的提取分离及鉴定 （酶活力、纯度及分子量测定）
1
实验内容
1. 溶菌酶的粗提取 2. 溶菌酶的分离纯化及酶活力、蛋白浓度测定 3. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定
2
背景知识
溶菌酶（lysozyme）：胞壁质酶（muramidase）或N-乙酰胞壁质
溶菌酶试验实验报告
一、实验目的1. 熟悉溶菌酶的提取、分离纯化方法；2. 掌握酶活力和蛋白浓度的测定方法；3. 了解溶菌酶的纯度鉴定与分子量测定方法。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种广泛存在于动物、植物和微生物中的胞壁质酶，能够特异性地水解细菌细胞壁中的N-乙酰胞壁质，从而破坏细菌细胞壁，导致细菌死亡。
本实验旨在通过提取、分离纯化溶菌酶，并对其酶活力、蛋白浓度、纯度和分子量进行测定。
三、实验材料1. 材料：鸡蛋、牛肉膏蛋白胨培养基、细菌培养液、SDS-PAGE凝胶、考马斯亮蓝G-250染液等；2. 仪器：高速离心机、紫外分光光度计、电泳仪、凝胶成像系统等；3. 试剂：氯化钠、氢氧化钠、醋酸、乙二胺四乙酸（EDTA）、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、考马斯亮蓝G-250、十二烷基硫酸钠（SDS）等。
四、实验方法1. 溶菌酶的粗提取（1）取新鲜鸡蛋，去壳，将蛋白与蛋黄分离；（2）将蛋白放入烧杯中，加入适量的氯化钠溶液，搅拌溶解；（3）将溶液过滤，得到滤液；（4）将滤液用氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，室温下放置1小时；（5）将溶液用醋酸溶液调节pH值至5.0，静置沉淀；（6）将沉淀用离心机离心（3000 r/min，10分钟），取上清液作为粗提液。
2. 溶菌酶的分离纯化（1）将粗提液用EDTA溶液处理，去除蛋白中的金属离子；（2）将处理后的溶液用磷酸缓冲液（pH 7.0）调节pH值，静置沉淀；（3）将沉淀用离心机离心（3000 r/min，10分钟），取上清液；（4）将上清液用SDS-PAGE凝胶电泳分离，观察溶菌酶的条带位置；（5）根据电泳结果，收集目标条带，并进行浓缩。
3. 酶活力和蛋白浓度测定（1）酶活力测定：将收集到的浓缩液加入细菌培养液中，在37℃下反应一定时间，测定细菌存活率，根据公式计算酶活力；（2）蛋白浓度测定：采用考马斯亮蓝G-250法测定蛋白浓度。
4. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定（1）纯度鉴定：将分离纯化的溶菌酶样品进行SDS-PAGE凝胶电泳，观察电泳图谱，判断纯度；（2）分子量测定：将分离纯化的溶菌酶样品进行SDS-PAGE凝胶电泳，根据分子量标准曲线计算溶菌酶的分子量。
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生物工程综合实验溶菌酶的提取、分离纯化及其活性测定
实验报告集
班级生工1411
学号
组别7
姓名
实验室学生守则
一、严格遵守实验室各项规章制度和管理措施，服从教师及实验技术人员
的指导。
二、严格按照实验要求，做好实验预习,实验之前5分钟进入实验室，及时、
准确地完成实验任务，实事求是地完成实验报告，杜绝弄虚作假。
三、严格执行操作规定，爱护仪器设备及工具。
凡不按教师的指导擅自操
作引起仪器、设备损坏者，应予赔偿。
四、爱护实验室公共财物，节约水电、材料和试剂。
未经允许不得随便挪
动非实验需用的其他仪器，不得随便拆装仪器或将仪器、工具带至室
外。
五、持实验室的严肃安静，不得大声喧哗、嘻闹，严禁在实验室内抽烟和
吃东西。
六、严防事故，确保实验室安全，发现异常情况，应及时向有关教师和管
理人员报告。
七、每次实验结束后，主动整理好仪器设备，归还所借器材，关闭电源、
水源，按指导老师的要求做好实验结束工作及室内外的清洁卫生工作，经指导老师许可后，方可离开。
预习报告（手写，可自行续页）
实验报告
溶菌酶的提取、分离纯化及其活性测定
一、目的
对从鸡蛋清中提取并分离纯化出溶菌酶进行活性测定
二、原理
鸡蛋是溶菌酶的主要来源，等电点约为10.5~11，最适温度50℃，最适pH为6~7左右。
1、溶菌酶分离纯化原理：
（1）等电点法利用溶菌酶等电点较高，在酸性条件下除去一些杂蛋白
（2）阳离子树脂柱层析法进一步除去杂蛋白
2、溶菌酶鉴定分析
（1）考马斯亮蓝法测蛋白含量
（2）分光光度法测定酶活性
（3）使用SDS-PAGE 鉴定溶菌酶纯度
三、实验材料与方法
1、实验材料与试剂
鸡蛋清，PBS缓冲液，40%甘油、冰醋酸、氢氧化钠，D152大孔弱酸性阳离子交换树脂、透析袋，考马斯亮蓝G250、牛血清蛋白、乙醇、磷酸，溶菌酶标准品、底物微球菌粉，蛋白质分子量Marker 、SDS、聚乙二醇-20000等
2、实验仪器
低速离心机、高速冷冻离心机、离心管、分光光度计，玻璃层析柱，Bio-Rad垂直电泳系统，移液枪、移液管，培养皿、玻璃棒、普通漏斗、滤纸、量筒、刻度试管及试管架、冰箱、摇床、烧杯、止水夹等。
3、实验方法
1.新鲜鸡蛋清的制备与粗分离
2. 树脂柱层析分离纯化
（1）D152树脂处理(2)湿装法装柱(3) 上柱离子交换吸附(4) 冲平(5) 洗脱
3.透析与浓缩
(1) 透析除盐(2) 聚乙二醇浓缩
4.蛋白质含量的测定
5.溶菌酶纯度的测定（SDS凝胶电泳）
四、实验结果与分析:
1.蛋白浓度实验结果
（1）蛋白质标准曲线的绘制
管号 1 2 3 4 5 6
0.1mg/mL标准蛋白液(mL) 00.20.40.60.8 1.0
蒸馏水(mL) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
考马斯亮蓝(mL) 4 4 4 4 4 4
蛋白质含量(μg/mL)0 20 40 60 80 100
OD5950 0.222 0.434 0.648 0.802 0.948
（2）待测样品蛋白浓度测定
管号E1 E2 E3 E4
蛋白质待测样品提取液 (mL) 0.1 0.1 0.1 0.1
蒸馏水 (mL) 0.9 0.9 0.9 0.9
考马斯亮蓝 (mL) 4 4 4 4
2.374 1.009 0.038 0.972
OD
595
蛋白质含量(μg/mL)
244.07 101.88 0.74 98.03
分析：由图中数据与制作的蛋白质标准曲线的样品比较可知，经过处理后，E1，E2的蛋白质的含量的数值急剧下降，到E3已经几乎趋于0，可表明溶菌酶粗提取的过程中已经除去了大量的杂蛋白，得到了进一步分离纯化后的蛋白质。
2、酶活力实验结果
酶活力测定结果
根据实验所得的E1 ～ E4各样品，汇总结果如下表所示
分析：由上述数据可知，吸光度值总体呈下降趋势，且随着时间的推移,在杂蛋白提纯后，样品E4的酶活力和比活力较先前的E1和E2有了极大的增长，说明经过提纯后，所需要的酶活性增加，但总活力下降，说明溶菌酶的纯度比较好。
3、电泳实验结果
分析:聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。
SDS能够和蛋白质分子结合成复合物，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异，各种蛋白质 SDS复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，只与分子量有关，这种方法常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度。
根据以上原理和上述图片，可观察到，本组所在的11-15泳道，11泳道为标准品，15泳道为样品E1，12到14泳道依次为样品E3，E3，E4，由于人为操作问题导致12-15泳道的结果不是特别清晰，但是仍然能比较蛋白质分子量的大小。
4、回收率与提纯倍数实验结果
样品体积ml 蛋白浓度
mg/ml 总蛋白
mg
酶活力
u/ml
比活力
u/mg
总活力U 回收率% 提纯倍数
E1 V1=57.5 0.244 14.03 31 127.0 1782.5 100% 1
E2 V2=134.8 0.102 13.75 13.3 130.4 1792.8 100.5% 1.03
E3 -- 0.00074 ---- 8 ---- ---- ---- ----
E4 V4=4.2 0.098 0.41 95 973.2 399 22.4% 7.66
分析：从E1到E4阶段，回收率下降，提纯倍数升高，说明在提纯过程中由于人为操作问题，离子交换层析柱底部损坏，导致蛋白质大量流失，所以回收率较低，但是提取的纯度比较高。
五、结论与讨论
由于溶菌酶比较稳定，分子量、等电点等与蛋清中其他蛋白质有较大差异。
因此可以利用常规方法的科学组合分离得到纯度较高、活性较强的溶菌酶。
本实验所采用的从鸡蛋中提取溶菌酶的方法，简单易行，成本低廉、分离周期短、溶菌酶纯度高。
但由于各个实验的要求比较严格，所制得的溶菌酶过程中易因为各种原因而受到损失，实验误差比较大，因此还需要继续研究更为适合规模化生产，提取纯度更高的方法。
参考文献
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