菌落总数测定
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2、液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品 置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水 的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无 菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的 样品匀液。
（（一一））、、样样品品的的稀稀释释及及做做平平板板
3、用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖 端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。
2、平板菌落计数的选择
（1）、选取菌落数在30～300之间的平 板，若有二个稀释度均在30～300之间 时，比值小于或等于2取平均数，比值 大于2则其较小数字。
（2）、如均大于300，则取最高稀释度的平均 菌落数乘以稀释倍数报告
（3）、如均小于30，则以最低稀释度的平均菌 落数乘稀释倍数报告
（4）、如菌落数有的大于300，有的又小于30， 不在30～300之间，以最接近300或30的平均 菌落数乘以稀释倍数报告
（5）、如所有稀释度均无菌落生长，则应按小 于1乘以最低稀释倍数报告。
3、菌落数的报告
菌落数在1～100时，按实有数字报告， 1) 如大于100时，则报告前面两位有效数字，第三
位数按四舍五入计算。 2) 固体检样以克（g)为单位报告， 3) 液体检样以毫升（ml）为单位报告， 4) 表面涂擦则以平方厘米（cm2）报告。
3、琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平 板，按1、条件进行培养。
（三）计数和报告
到达规定培养时间，应立即 计数。如果不能立即计数，应将 平板放置于0－4℃，但不得超过 24h。
1、菌落的选择
（1）、单个菌做一个菌落计 （2）、呈链状生长的菌落之间无任何明显界
限，作为一个菌落计，如存在有几条不同来 源的链，则每条链均应按一个菌落计算。 （3）、如片状菌落不到平板一半，而另一半 又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2 代表全平板的菌落数。
1ml
1ml
l样品
加入46℃营养琼脂12~15ml
注意：检样从开始稀释到 倾注最后一个平皿所用时间 不宜超过20min，以防止细菌 有所死亡或繁殖。
（二）培养
1、待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h。水产品30 ℃±1 ℃培养 72 h±3 h。
2、如果样品中可能含有在琼脂培养基表面 弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表 百度文库覆盖一薄层
（（一一））、、样样品品的稀稀释释及及做做平平板板
6、及时将15 mL～20 mL 冷却至46 ℃ 的平板计数琼脂培养基（可放置于 46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾 注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
1ml 1ml 1ml
生理盐 水
1:10
1:100 1:1000 1:10000
1ml
25g/m 1ml
1、固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛 有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无 菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均 质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀 释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器 拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
（一）、样品的稀释及做平板
性选择培养温度和时间？
资料源自网络
mL 刻度）或微量移液器及吸头。 • 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。 • 无菌培养皿：直径90 mm。 • pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 • 放大镜或/和菌落计数器。
四、平板倾注法测定菌落总数
检验步骤(程序)： 检样→稀释处理→做平板→培养→菌落
计数→报告结果
（一）、样品的稀释及做平板
6、稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍 数愈低菌落数愈多。如出现逆反现 象，不可作为检样计数报告的依据。
复习题
1、什么是菌落总数？ 2、测定食品、饮料等产品的菌落总数有什么
意义？ 3、画出平板倾注法测定菌落总数的示意图。 4、在测定菌落总数时，如何选择菌落进行计
数？ 5、在菌落总数的检验中，要注意哪些事项？ 6、在菌落总数的检验中，如何根据样品的特
4、上述 操作程序，制备10 倍系列稀释样品 匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无 菌吸管或吸头。
（（一一）、、样样品品的的稀稀释释及及做做平平板 板
5、根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样 品可包括原液），在进行10 倍递增稀释 时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内， 每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸 取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内 作空白对照。
食品中菌落总数的测定
一、菌落总数
• 食品检样经过处理，在一定条件下 （如培养基、培养温度和培养时间等） 培养后，所得每g（mL）检样中形成的 微生物菌落总数。
二、菌落总数测定的意义
1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。 2、预测食品存用的期限长短。 3、了解细菌在食品中的繁殖动态。
三、设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设 备和材料如下：
• 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。 • 冰箱：2 ℃～5 ℃。 • 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 • 天平：感量为0.1 g。 • 均质器。 • 振荡器。 • 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1
(四)、检验注意事项
1、对照平板出现几个菌落时，要追加对照 平板；
2、吸管进出瓶子或试管时，吸管口不得触 及瓶口、管口的外围部分；
3、吸管插入试样液内的深度不得小于2.5cm, 调整时要使管尖与容器内壁紧贴;
4、进行稀释时,吸管口不得与稀释液接触;
5、检样从开始稀释到倾注最后一个平 皿所用时间不宜超过20min.
（（一一））、、样样品品的的稀稀释释及及做做平平板板
3、用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖 端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。
2、平板菌落计数的选择
（1）、选取菌落数在30～300之间的平 板，若有二个稀释度均在30～300之间 时，比值小于或等于2取平均数，比值 大于2则其较小数字。
（2）、如均大于300，则取最高稀释度的平均 菌落数乘以稀释倍数报告
（3）、如均小于30，则以最低稀释度的平均菌 落数乘稀释倍数报告
（4）、如菌落数有的大于300，有的又小于30， 不在30～300之间，以最接近300或30的平均 菌落数乘以稀释倍数报告
（5）、如所有稀释度均无菌落生长，则应按小 于1乘以最低稀释倍数报告。
3、菌落数的报告
菌落数在1～100时，按实有数字报告， 1) 如大于100时，则报告前面两位有效数字，第三
位数按四舍五入计算。 2) 固体检样以克（g)为单位报告， 3) 液体检样以毫升（ml）为单位报告， 4) 表面涂擦则以平方厘米（cm2）报告。
3、琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平 板，按1、条件进行培养。
（三）计数和报告
到达规定培养时间，应立即 计数。如果不能立即计数，应将 平板放置于0－4℃，但不得超过 24h。
1、菌落的选择
（1）、单个菌做一个菌落计 （2）、呈链状生长的菌落之间无任何明显界
限，作为一个菌落计，如存在有几条不同来 源的链，则每条链均应按一个菌落计算。 （3）、如片状菌落不到平板一半，而另一半 又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2 代表全平板的菌落数。
1ml
1ml
l样品
加入46℃营养琼脂12~15ml
注意：检样从开始稀释到 倾注最后一个平皿所用时间 不宜超过20min，以防止细菌 有所死亡或繁殖。
（二）培养
1、待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h。水产品30 ℃±1 ℃培养 72 h±3 h。
2、如果样品中可能含有在琼脂培养基表面 弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表 百度文库覆盖一薄层
（（一一））、、样样品品的稀稀释释及及做做平平板板
6、及时将15 mL～20 mL 冷却至46 ℃ 的平板计数琼脂培养基（可放置于 46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾 注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
1ml 1ml 1ml
生理盐 水
1:10
1:100 1:1000 1:10000
1ml
25g/m 1ml
1、固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛 有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无 菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均 质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀 释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器 拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
（一）、样品的稀释及做平板
性选择培养温度和时间？
资料源自网络
mL 刻度）或微量移液器及吸头。 • 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。 • 无菌培养皿：直径90 mm。 • pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 • 放大镜或/和菌落计数器。
四、平板倾注法测定菌落总数
检验步骤(程序)： 检样→稀释处理→做平板→培养→菌落
计数→报告结果
（一）、样品的稀释及做平板
6、稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍 数愈低菌落数愈多。如出现逆反现 象，不可作为检样计数报告的依据。
复习题
1、什么是菌落总数？ 2、测定食品、饮料等产品的菌落总数有什么
意义？ 3、画出平板倾注法测定菌落总数的示意图。 4、在测定菌落总数时，如何选择菌落进行计
数？ 5、在菌落总数的检验中，要注意哪些事项？ 6、在菌落总数的检验中，如何根据样品的特
4、上述 操作程序，制备10 倍系列稀释样品 匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无 菌吸管或吸头。
（（一一）、、样样品品的的稀稀释释及及做做平平板 板
5、根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样 品可包括原液），在进行10 倍递增稀释 时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内， 每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸 取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内 作空白对照。
食品中菌落总数的测定
一、菌落总数
• 食品检样经过处理，在一定条件下 （如培养基、培养温度和培养时间等） 培养后，所得每g（mL）检样中形成的 微生物菌落总数。
二、菌落总数测定的意义
1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。 2、预测食品存用的期限长短。 3、了解细菌在食品中的繁殖动态。
三、设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设 备和材料如下：
• 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。 • 冰箱：2 ℃～5 ℃。 • 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 • 天平：感量为0.1 g。 • 均质器。 • 振荡器。 • 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1
(四)、检验注意事项
1、对照平板出现几个菌落时，要追加对照 平板；
2、吸管进出瓶子或试管时，吸管口不得触 及瓶口、管口的外围部分；
3、吸管插入试样液内的深度不得小于2.5cm, 调整时要使管尖与容器内壁紧贴;
4、进行稀释时,吸管口不得与稀释液接触;
5、检样从开始稀释到倾注最后一个平 皿所用时间不宜超过20min.