分离胶的配方
分离胶浓缩胶配置
2.6 5.37.910.613.2123451.3 2.5 3.85 6.30.050.10.150.20.250.050.10.150.20.250.0040.0080.0120.0160.022.34.6 6.99.311.51.3 2.745.36.71.3 2.5 3.85 6.30.050.10.150.20.250.050.10.150.20.250.0030.0060.0090.0120.0151.94 5.97.99.91.7 3.35 6.78.31.3 2.5 3.85 6.30.050.10.150.20.250.050.10.150.20.250.0020.0040.0060.0080.011.6 3.3 4.9 6.68.22468101.3 2.5 3.85 6.30.050.10.150.20.250.050.10.150.20.250.0020.0040.0060.0080.011.1 2.3 3.4 4.6 5.72.557.51012.51.3 2.5 3.85 6.30.050.10.150.20.250.050.10.150.20.250.0020.0040.0060.0080.01各种组分名称ComponentsTEMED5% stacking gels for denaturing SDS-PAGEVolume of components(ml)per gel molH2O30%Acrylamide1.5M Tris-HCL(pH8.8)10%SDS 10%过硫酸铵30%Acrylamide1.5M Tris-HCL(pH8.8)10%SDS 10%过硫酸铵TEMED15%Gel10%SDS 10%过硫酸铵TEMED12%GelH2OTEMED10%GelH2O30%Acrylamide1.5M Tris-HCL(pH8.8)H2O30%Acrylamide1.5M Tris-HCL(pH8.8)10%SDS 10%过硫酸铵30%Acrylamide1.5M Tris-HCL(pH8.8)10%SDS 10%过硫酸铵TEMED8%Gel分离胶10ml/块 浓缩胶3ml/块 marker 7ul 样品30ul各种凝胶体积所对应的各种组份的5ml 10ml 15ml 20ml 25ml6%GelH2O0.68 1.4 2.1 2.7 3.40.170.330.50.670.830.130.250.380.50.630.010.020.030.040.050.010.020.030.040.050.0010.0020.0030.0040.005适宜凝胶浓度246812341.9 3.8 5.77.60.050.10.150.20.050.10.150.20.0040.0080.0120.0161.7 3.35 6.71.3 2.74 5.31.9 3.8 5.77.60.050.10.150.20.050.10.150.20.0030.0060.0090.0121.3 2.74 5.31.7 3.35 6.71.9 3.8 5.77.60.050.10.150.20.050.10.150.20.0020.0040.0060.008123424681.9 3.8 5.77.60.050.10.150.20.050.10.150.20.0020.0040.0060.008Components碧云天各种组分名称H2O30%Acrylamide1M Tris-HCL(pH8.8)10%SDS 10%过硫酸铵TEMED1M Tris-HCL(pH8.8)10%SDS 10%过硫酸铵TEMED12%Gel10%过硫酸铵TEMED10%GelH2O30%Acrylamide8%GelH2O30%Acrylamide1M Tris-HCL(pH8.8)10%SDS H2O30%Acrylamide1M Tris-HCL(pH8.8)10%SDS 10%过硫酸铵TEMED10-40各种凝胶体积所对应的各种组份的5ml 10ml 15ml 20ml6%Gel10到3012%20-80＜1015%12-60＞1008%50-15030-10010%30-901.5M Tris(pH6.8)10%SDS 10% ammonium persuifate TEMED Protein(KD)碧云天Protein(KD)1ml 2ml 3ml 4ml 5mlH2030%acryl-bisacrylamide mix0.51 1.522.557.5101.9 3.8 5.77.60.050.10.150.20.050.10.150.20.0020.0040.0060.0081.42.1 2.70.330.50.670.250.380.50.020.030.040.020.030.040.0020.0030.004CapG 38KDCapG-EGFP 67KD 故分离胶应选10%，我做的第一次选用了15%GapDH 36KD30%acryl-bisacrylamide mix 1M Tris(pH6.8)10%SDS 10% ammonium persuifate TEMED Components10%过硫酸铵TEMED碧云天5% stacking gels for denaturing SVolume of components(ml)pe1ml 2ml 3ml 4mlH2015%GelH2O30%Acrylamide1M Tris-HCL(pH8.8)10%SDS组份的取样量30ml 40ml 50ml15.921.226.568107.51012.50.30.40.50.30.40.50.0240.0320.0413.918.523.2810.713.37.51012.50.30.40.50.30.40.50.0180.0240.0311.915.919.81013.316.77.51012.50.30.40.50.30.40.50.0120.0160.029.913.216.51216207.51012.50.30.40.50.30.40.50.0120.0160.026.99.211.51520257.51012.50.30.40.50.30.40.50.0120.0160.02 l mold volume of6ml 8ml 10ml4.15.56.81 1.3 1.70.751 1.250.060.080.10.060.080.10.0060.0080.01适宜凝胶浓度6%8%10%12%15%组份的取样量30ml 50ml122061011.4190.30.50.30.50.0240.041016.7813.311.4190.30.50.30.50.0180.03813.31016.711.4190.30.50.30.50.0120.02610122011.4190.30.50.30.50.0120.0235152511.4190.30.50.30.50.0120.02ing SDS-PAGEml)per gel mold volume of5ml 6ml 8ml 10ml4.15.56.81 1.3 1.70.751 1.250.060.080.10.060.080.10.0060.0080.01。
SDS-PAGE分离胶-浓缩胶配方
SDS-PAGE1、SDS-PAGE：聚丙烯酰胺凝胶电泳2、Acr：丙烯酰胺；配胶时用30%Acr（质量比Acr：Bis=29:1）3、Bis：甲叉双丙烯酰胺4、DDW：超轻水5、SDS：十二烷基硫酸/磺酸钠，阴离子去污剂（配胶时用10%）6、APS：过硫酸铵NH4S2O4配胶时用10%7、TEMED：四甲基乙二胺，促凝剂8、Tris-Hcl：3羟基氨基甲烷盐酸缓冲液，配胶时（分离胶ph=8.8，浓缩胶ph=6.8）9、DTT：二硫苏糖醇，DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。
10、IMA：碘乙酰胺，碘代乙酰胺用于有机合成，在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂，用于多肽测序以及酶抑制剂等，蛋白组学级试剂。
CH>2ICONH>2，是和碘乙酸一样，可通过下列反应不可逆地抑制SH酶类的物质。
1)根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)：注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。
1)按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)：TBST 缓冲液每2L体积中含：1)抗体去除液每50mL抗体去除液中含：SDS-PAGE电泳的基本原理：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
03_SDS-PAGE分离胶配方表
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分离胶的成分及作用
分离胶的成分及作用分离胶是一种用于分离混合物中不同组分的方法，它通过利用各组分在特定条件下的物理和化学性质的差异，将混合物分离成单个组分或纯度较高的组分。
分离胶的成分及其作用对于实现高效、高精度的分离过程起着重要的作用。
一、分离胶的成分1. 硅胶：硅胶是一种多孔性材料，它的主要成分是二氧化硅。
硅胶具有高度的吸附性能，可以将混合物中的有机化合物、水分子等吸附在其表面。
硅胶通常以颗粒状或块状存在，可以用于柱层析、薄层色谱等分离技术中。
2. 凝胶：凝胶是一种由固体颗粒悬浮于液体中形成的胶状物质，其主要成分可以是聚丙烯酰胺、聚丙烯酸、聚乙烯醇等。
凝胶的主要作用是提供一个适当的支撑结构，用于固定分离物质的位置。
凝胶通常用于凝胶电泳、凝胶过滤等技术中。
3. 离子交换树脂：离子交换树脂是一种具有特定功能团的高分子材料，其主要成分可以是聚苯乙烯、聚丙烯酸酯等。
离子交换树脂的主要作用是通过与混合物中的离子发生离子交换反应，实现对离子的选择性吸附和分离。
离子交换树脂广泛应用于离子交换色谱、水处理等领域。
4. 吸附树脂：吸附树脂是一种具有高度吸附性能的材料，其主要成分可以是聚苯乙烯、聚苯乙烯酰胺等。
吸附树脂的主要作用是通过非共价相互作用（如静电作用、范德华力等）吸附混合物中的目标组分。
吸附树脂广泛应用于吸附色谱、吸附分离等领域。
二、分离胶的作用1. 吸附作用：分离胶中的硅胶、吸附树脂等具有较高的吸附性能，可以将混合物中的目标组分吸附在其表面，从而实现对目标组分的分离。
2. 离子交换作用：离子交换树脂具有特定的离子交换功能团，可以与混合物中的离子发生离子交换反应，实现对离子的选择性吸附和分离。
3. 毛细管作用：分离胶中的凝胶具有多孔性结构，可以通过毛细管作用实现对混合物的分离。
毛细管作用是指液体在细小孔隙中上升或下降时，由于表面张力的作用而产生的液体升降现象。
4. 柱层析作用：柱层析是一种基于差异分配原理的分离技术，分离胶中的硅胶、凝胶等可以作为固定相填充在柱子中，与流动相一起，通过目标组分在固定相和流动相之间的分配差异，实现对混合物的分离。
SDS-PAGE分离胶配方表-及其原理
SDSPAGE电泳原理：之袁州冬雪创作聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (简称Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状平面布局的凝胶，并以此为支持物停止电泳.聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据分歧蛋白质分子所带电荷的差别及分子大小的分歧所发生的分歧迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带.SDS是一种阴离子概况活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子连系成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超出其自己原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差别.因此，各种蛋白质SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数.这种电泳方法称为SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）.由于SDSPAGE 可设法将电泳时蛋白质电荷差别这一因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常常使用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级布局的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级布局的蛋白质，那末SDS—PAGE 后，就只出现一条蛋白质区带.TEMED：通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合.过硫酸铵（AP）：提供驱动丙烯酰胺与双丙烯酰胺所必须的自由基.SDS—PAGE 可分为圆盘状和垂直板状、持续系统和不持续系统.本实验采取垂直板状不持续系统.所谓“不持续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH 和凝胶孔径等所组成.在不持续电泳系统中，含有上、下槽缓冲液(Tris—Gly，pH8.3)、稀释胶缓冲液(Tris—HCl，pH6.8)、分离胶缓冲液(Tris—HCl，pH8.8)，两种凝胶的浓度(即孔径)也不相同.在这种条件下，缓冲系统中的HCl 几乎全部解离成Cl－，两槽中的Gly (pI＝6.0，pK a=9.7)只有很少部分解离成Gly 的负离子，而酸性蛋白质也可解离出负离子.这些离子在电泳时都向正极移动.C1—速度最快(先导离子)，其次为蛋白质，Gly 负离子最慢(尾随离子).由于C1—很快超出蛋白离子，因此在其后面形成一个电导较低、电位梯度较陡的区域，该区电位梯度最高，这是在电泳过程中形成的电位梯度的不持续性，导致蛋白质和Gly 离子加快移动，成果使蛋白质在进入分离胶之前，快、慢离子之间稀释成一薄层，有利于提高电泳的分辨率.蛋白质离子进入分离胶后，条件有很大变更.由于其pH 升高(电泳停止时常超出9.0)，使Gly 解离成负离子的效应增加；同时因凝胶的浓度升高，蛋白质的泳动受到影响，迁移率急剧下降.此两项变更，使Gly 的移动超出蛋白质，上述的高电压梯度不复存在，蛋白质便在一个较均一的pH 和电压梯度环境中，按其分子的大小移动.分离胶的孔径有一定的大小，对分歧相对分子质量的蛋白质来讲，通过时受到的阻滞程度分歧，即使净电荷相等的颗粒，也会由于这种分子筛的效应，把分歧大小的蛋白质相互分开. SDSPAGE电泳胶配制：SDSPAGE试剂配制：。
SDSPAGE分离胶配方表及其原理
S D S P A G E分离胶配方表及其原理The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020SDS-PAGE电泳原理：聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (简称Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。
聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。
SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。
因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。
这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。
由于SDS-PAGE 可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么SDS—PAGE 后，就只出现一条蛋白质区带。
TEMED：通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。
过硫酸铵（AP）：提供驱动丙烯酰胺与双丙烯酰胺所必须的自由基。
SDS—PAGE 可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。
本实验采用垂直板状不连续系统。
所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH 和凝胶孔径等所组成。
1.蛋白样品浓缩效应在不连续电泳系统中，含有上、下槽缓冲液(Tris—Gly，、浓缩胶缓冲液(Tris—HCl，、分离胶缓冲液(Tris—HCl，，两种凝胶的浓度(即孔径)也不相同。
SDS-PAGE配方
.SDS-PAGE1)根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)：SDS-PAGE分离胶浓度最佳分离范围胶6%50-150kD8%胶30-90kD10%胶20-80kD胶12%12-60kD15%胶10-40kD.'.成分分离胶所需各成分的体积（毫升）配制不同体积SDS-PAGE胶。
即可配制成非变性注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加10%SDSPAGE 冰箱放两周，但是最好新鲜配置效果好。
10%过硫酸铵配好后可以在4D ：(也称堆积胶、积层胶或上层胶)按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶1)1L电泳缓冲溶液5XTris-Glycine0.5% W/V SDS ，1.25M Glycine 0.125M Tris，Tris 15.1 gGlycine 95 gSDS 5.0 g.'.5X SDS-PAGE 加样缓冲液：5ml250mM Tris-HCl (pH6.8), 10% SDS, 0.5% BPB, 50% glycerol, 5% 2-ME 1M Tris-HCl (pH6.8): 1.25 mLSDS：0.5 gBPB: 25mgGlycerol: 2.5ml2-ME: 使用时加入小份（25微升），新鲜使用。
TBST 缓冲液每2L体积中含：1M TrisHCL(pH7.5) 100mLNacl 16g0.4g KCL1ml吐温1)抗体去除液50mL抗体去除液中含：每6.25mL pH6.80.5M TrisHCL（）10mL 10%SDS0.175mL Beta-ME33.75mL 水.'.SDS-PAGE电泳的基本原理：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。
SDS-PAGE分离胶配方表-及其原理
SDS-PAGE电泳原理：聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。
聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。
SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。
因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。
这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。
由于SDS-PAGE 可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么SDS—PAGE 后，就只出现一条蛋白质区带。
TEMED：通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。
过硫酸铵（AP）：提供驱动丙烯酰胺与双丙烯酰胺所必须的自由基。
SDS—PAGE 可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。
本实验采用垂直板状不连续系统。
所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH 和凝胶孔径等所组成。
1.蛋白样品浓缩效应在不连续电泳系统中，含有上、下槽缓冲液(Tris—Gly，、浓缩胶缓冲液(Tris—HCl，、分离胶缓冲液(Tris—HCl，，两种凝胶的浓度(即孔径)也不相同。
在这种条件下，缓冲系统中的HCl 几乎全部解离成Cl－，两槽中的Gly (pI＝，pK a=只有很少部分解离成Gly 的负离子，而酸性蛋白质也可解离出负离子。
(完整版)SDS-PAGE分离胶-浓缩胶配方
SDS-PAGE1、SDS-PAGE：聚丙烯酰胺凝胶电泳2、Acr：丙烯酰胺；配胶时用30%Acr（质量比Acr：Bis=29:1）3、Bis：甲叉双丙烯酰胺4、DDW：超轻水5、SDS：十二烷基硫酸/磺酸钠，阴离子去污剂（配胶时用10%）6、APS：过硫酸铵NH4S2O4配胶时用10%7、TEMED：四甲基乙二胺，促凝剂8、Tris-Hcl：3羟基氨基甲烷盐酸缓冲液，配胶时（分离胶ph=8.8，浓缩胶ph=6.8）9、DTT：二硫苏糖醇，DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。
10、IMA：碘乙酰胺，碘代乙酰胺用于有机合成，在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂，用于多肽测序以及酶抑制剂等，蛋白组学级试剂。
CH>2ICONH>2，是和碘乙酸一样，可通过下列反应不可逆地抑制SH酶类的物质。
1)根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)：注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。
1)按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)：TBST 缓冲液每2L体积中含：1)抗体去除液每50mL抗体去除液中含：SDS-PAGE电泳的基本原理：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
SDS-PAGE分离胶配方表-及其原理
SDS-PAGE电泳原理：聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。
聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。
SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。
因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。
这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。
由于SDS-PAGE 可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么SDS—PAGE 后，就只出现一条蛋白质区带。
TEMED：通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。
过硫酸铵（AP）：提供驱动丙烯酰胺与双丙烯酰胺所必须的自由基。
SDS—PAGE 可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。
本实验采用垂直板状不连续系统。
所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH 和凝胶孔径等所组成。
1.蛋白样品浓缩效应在不连续电泳系统中，含有上、下槽缓冲液(Tris—Gly，、浓缩胶缓冲液(Tris—HCl，、分离胶缓冲液(Tris—HCl，，两种凝胶的浓度(即孔径)也不相同。
在这种条件下，缓冲系统中的HCl 几乎全部解离成Cl－，两槽中的Gly (pI＝，pK a=只有很少部分解离成Gly 的负离子，而酸性蛋白质也可解离出负离子。