玉米成分转基因检测知识
PCR扩增检测转基因大豆、玉米
【实验步骤】 基因组DNA浓度和纯度的鉴定
取5μL样品溶于95μL三重蒸馏水中，用 Biophotometer分 析DNA的浓度，通过它对提取大豆DNA测OD值。并记 录数据。由OD260nm/OD280nm判定基因组DNA的浓度， 其比值在1.7~2.0之间较好，符合PCR检测要求。
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是 一种选择性体外扩增DNA的方法，其基本原理类 似 于 DNA 的 天 然 复 制 过 程 。 它 包 括 : 变 性 (Denature) 、 退火(Anneal)和延伸(Extension)三个基
外源基因( EPSPS)特异性扩增 12 3 4567M 12
外源终止子(NOS) 特异性扩增
外源启动子(CaMV35S)特 异性扩增
1 未加模板对照 2 转基因大豆、玉米 3~7 非转基因大豆、玉米
PCR假阳性结果 1． 引物设计不当，应调换引物 2． 循环参数不合适，导致非特异性扩增 3． 靶序列的交叉污染
大豆凝集素(Lectin)基因、玉米特异性内源基
因IVR为内参 ？
西医学是最近三四百年来建立在解 剖学、 生物学 及现代 科学技 术基础 上、发 展起来 的一门 以“解 剖人、 肉体人 ”为概 念的、 新兴的 现代医 学科学 理论体 系。主 要采用 科学实 验方法 ，从宏 观到微 观，直 至目前 的分子 基因层 次水平 ，发展 极为迅 速，超 过其它 任何一 门医学 科学， 成为世 界医学 史上的 主流。 医学、比较医学、后现代医学、行为 医学等 所谓“ 医学” ，都称 不上一 门独立 的医学 科学， 关于这 一点在 灵魂医 学有关 章节中 将有相 关点评 。
【实验步骤】
大豆、玉米DNA 提取--改良的CTAB法
玉米转基因成分筛查方法比较
http ：//hljnykx ・ haasep. cnDOI ： 10.11942/j ・ issnl002-2767・ 2020.09・ 0078■黑龙江农业科学2020(9):78-84Heilongjiang Agricultural Sciences张海波，肖长文，刘冰，等•玉米转基因成分筛查方法比较[J].黑龙江农业科学,2020(9):78-84.玉米转基因成分筛查方法比较张海波⑺，肖长文3,刘冰⑺，张田1显，张英1，2(1.陕西省种子工作总站，陕西西妥710018；2.农业农村部农作物种子质量监督检验测试中心(西安)，陕西西安710018；3.黑龙江省种业技术服务中心，黑龙江哈尔滨150008)摘要：玉米转基因成分的筛查可联合利用CaMV35S 启动子(P-35S)和NOS 终止子(T-NOS)两个元件的组 合，但P-35S.T-NOS 有多组可供选择的检测方法。
本文通过检测标准查询、序列比对、特异性试验和灵敏度试验验证等方式，比较了检测标准中P-35S 、T-NOS 三组检测方法。
结果表明：3组标准检测方法对转基因玉 米的筛查表现出较强的特异性，检测灵敏度均可达到1 g ・kg"。
3组筛查方法可对玉米中的转基因成分进行快速、准确的筛查。
关键词：转基因检测；标准方法；CaMV35S 启动子；灵敏度玉米是中国重要的粮食作物和经济作物。
2018年全国玉米产量25 717. 39万t,是我国产 量最高的粮食作物「口。
中国的玉米产量仅次于美 国，为满足国内消费，中国每年仍需进口大量玉 米⑵，其中大部分是转基因玉米。
截至目前，获准作为加工原料进口到中国的转基因玉米转化体, 有耐除草剂玉米 T25、NK603、GA21、40278、 MON87427,抗虫玉米 血176、MON89034、MIR604、MON810、MLR162、TC1507、Bill, 5307.59122,抗虫耐除草剂玉米Btll X GA21、MON88017、4114,品种改良玉米 Event 3272 和 耐旱玉米MON87460&4],转基因技术的应用已成为国内外玉米育种的重要手段囚。
玉米中转基因成分的筛查检测策略
玉米中转基因成分的筛查检测策略作者：王培珍来源：《农民致富之友》2020年第24期玉米作为禾本科一年生的草本植物，其营养成分丰富，提供大量的碳水化合物。
转基因的玉米具有较强的耐寒性、耐旱性、耐贫瘠性等优良性质，容易种植。
但转基因玉米也存在着一定安全隐患，转基因检验受到广大消费者的重视。
基于此，本文将主要论述玉米中转基因成分的筛查检验策略。
一、玉米中转基因成分的筛查检测的重要性转基因成分检验技术是转基因生物研究和安全管理的基础，检验人员通过技术手段判断目的基因导入到玉米受体细胞中，并检验玉米受体细胞是否成功表达相关性状。
目前已经有65个国家和地区对转基因产品采取强制的标志性管理，2015年10月开始实行的中华人民共和国安全法第69条中明确规定了转基因食品应该明确标注。
转基因检验行业快速发展，因此建立一个迅速准确的基因检验方法，是当前检测技术所面临的关键问题。
截止到2018年中国玉米产量25733万吨，中国的转基因玉米转化事件有16个，转基因玉米种类过多，同时存在变异亚种，检验人员应该综合DNA序列分析，选取合适的基因元件，确定转基因玉米的筛查方法。
二、玉米中转基因成分的筛查检测技术1、PCR检验技术PCR检验技术是一种灵敏度高，目前发展较为成熟的转基因检验方法，根据特异性主要分为筛查基因特异性、翻译产物特异性等。
PCR检验的主要基因包括调控基因、标记基因、及导入到玉米细胞中的目的基因。
其中调控基因主要包括基因中前端和后端的启动子与终止子，标记基因主要包括抗草丁膦基因、抗卡那霉素基因。
PCR技术在玉米转基因成分检验中有很大的应用，但由于转基因玉米中含有多个目的基因，往往需要多重PCR进行检验，其快速提高检验效率，同时保证玉米中转基因成分的特异性。
2、环介导等温扩增检验技术环介导等温扩增检验技术作为一种新兴的DNA扩增方法，这种技术主要利用了特异性的核糖核苷酸引物，综合应用DNA聚合酶，促进DNA在常温下快速增殖，完成核酸的快速扩增。
抗除草剂转基因玉米的快速鉴定方法
抗除草剂转基因玉米的快速鉴定方法作者：王莹袁英来源：《江苏农业科学》2014年第04期摘要：以含不与除草甘膦结合的突变型5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因除草剂筛选标记的转基因玉米为材料，通过叶片喷雾和叶片离体平板培养等试验，建立快速非分子生物学抗除草剂转基因玉米的鉴定方法。
结果表明：用5 000 mg/L草甘膦叶片喷雾和用70 mg/L草甘膦叶片离体培养可快速准确地鉴定是否转入除草剂基因。
关键词：转基因玉米；抗除草剂；草甘膦；鉴定方法中图分类号： S513.01 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0054-03收稿日期：2013-08-15基金项目：吉林省财政厅育种项目。
作者简介：王莹（1982—），女，吉林长春人，硕士，讲师，从事生物技术方向研究。
Tel：（0431）84602461；E-mail：grammy1981@。
通信作者：袁英，硕士，研究员，从事作物遗传转化研究。
Tel：（0431）87063098；E-mail：32854085@。
随着转基因作物商业化生产的发展，转基因作物种植面积从1996年的170万hm2增加到2012年的1.7亿hm2，增长了99倍，这是前所未有的突破，其中抗除草剂作物种植面积最大[1]。
在植物转基因研究过程中，通常采用选择性标记基因提高筛选效率，而除草剂基因是较常用的筛选标记基因，而5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶（EPSPS）基因最常用。
目前，国际上种植面积最大的抗除草剂转基因玉米是转EPSPS基因抗农达除草剂玉米[2]。
近几年，国内对抗除草剂转基因玉米和抗除草剂筛选方法的研究也取得了很大的成功[3-11]。
在转基因研究和安全评价等过程中对转基因植株的鉴定是必不可少的环节[12]，传统上初步鉴定转基因的方法是利用聚合酶链反应（PCR）鉴定目的基因DNA片段是否存在；但是PCR方法步骤繁琐，做大量鉴定运用时有一定的局限性。
利用筛选标记基因的农艺性状，建立快速有效的非生物鉴定方法非常必要。
转基因玉米识别
转基因玉米识别转基因玉米是一种经过基因工程技术改变了自身基因组的玉米品种。
转基因技术的应用在农业领域极为广泛，其目的是为了提高作物产量、增强抗病抗虫能力等。
然而，转基因食品引发的争议从未停止，其中转基因玉米识别成为一个非常重要的问题。
本文将从转基因玉米的定义、转基因玉米识别的方法和技术以及转基因玉米识别的重要性等方面展开讨论。
首先，转基因玉米指的是经过人为改变的基因组的玉米品种。
通常转基因玉米与传统玉米相比，会加入一些来自其他物种的基因，从而使其具备更好的抗虫抗草的特性。
通过这种基因改变，转基因玉米可以在不利环境中生长更健壮，产量更高。
然而，由于转基因食品与传统食品存在风险差异，转基因玉米的识别变得极为重要。
其次，转基因玉米的识别可以通过多种方法和技术来实现。
目前最常用的方法是基因检测技术，例如PCR和ELISA等。
PCR技术可以通过目标基因的扩增来检测是否存在转基因成分，而ELISA则是通过特异性抗体的结合来检测是否含有特定的蛋白质。
此外，还可以利用基因芯片和DNA测序等技术来实现转基因玉米的识别。
这些识别技术能够准确、快速地检测出转基因成分，为转基因食品监管提供科学依据。
然而，转基因玉米的识别具有重要的意义。
首先，它是保障消费者权益的重要手段。
许多消费者对转基因食品持怀疑态度，希望能够自主选择是否食用。
因此，转基因玉米的识别可以帮助消费者明确是否存在转基因成分，从而保护消费者的选择权。
其次，转基因玉米的识别对于食品安全具有重要意义。
尽管转基因食品在经过一系列严格的安全评价后才能上市，但依然存在一定的风险。
转基因玉米的识别可以及早发现转基因成分，帮助监管机构实施安全措施，保障公众的健康。
然而，转基因玉米的识别也存在一定的挑战。
首先，转基因玉米的识别技术需要不断更新和改进。
随着转基因技术的不断发展，可能会出现新的转基因品种或新的转基因成分，因此转基因玉米的识别技术需要与时俱进。
其次，转基因玉米的混合问题也需要解决。
转基因玉米的鉴别方法
转基因玉米的鉴别方法近些年来，转基因技术已被广泛应用于生物学研究领域。
其优势在于能够大大提高种子性状和抗病能力，以及更加持久地改变植物结构。
转基因玉米是它的一个典型例子。
为了更好地获得转基因玉米的品质，必须鉴别其真实身份。
本文讨论了转基因玉米的鉴别方法。
转基因玉米鉴别方法一般分为实验室和田间两种。
实验室鉴别方法包括PCR法、测序法以及染色体分析法。
PCR法是通过分析转基因玉米的特定DNA序列来鉴别其真实身份的方法。
测序法是通过翻译和序列比对来确定转基因玉米的真实身份的方法。
染色体分析法是通过检测植物染色体的数目和形状来判断转基因玉米的真实身份。
除了实验室鉴别方法外，转基因玉米还有一种田间鉴别方法。
这种方法需要在田间观察植株的形态特征，以及收获的玉米穗的外观特征。
一般来说，转基因玉米植株的外观特征有：籽粒大小明显较大，形状均匀，而非转基因玉米植株则有较多的尖尖玉；收获的玉米穗有非常明显的穗颈，籽粒大小更大，形状均匀，表皮较硬。
转基因玉米的鉴别方法在获取优良品种和植物生物学研究方面具有重要意义。
把实验室鉴别方法和田间观察方法多结合起来，可以更精确地鉴别转基因玉米的真实身份，从而获得较为优良的品种。
但是，无论实验室还是田间鉴别方法，都需要具备一定的专业技能才能得到准确结果，因此应该在有专业背景的人员的指导下进行。
综上所述，转基因玉米的鉴别方法一般分为实验室鉴别方法和田间鉴别方法。
实验室鉴别方法包括PCR法、测序法以及染色体分析法；田间鉴别方法主要是通过观察植株的形态特征以及收获的玉米穗的外观特征来鉴别。
为了获得更优良的品种，应该将实验室鉴别方法和田间观察方法结合，并在有专业背景的人员的指导下进行。
转基因玉米最简单的辨别方法
转基因玉米最简单的辨别方法什么是转基因玉米？转基因玉米是经过基因工程技术改变了其基因组的玉米品种。
通过引入外源基因，转基因玉米可以表现出与传统玉米不同的特点。
转基因技术的引入旨在改善玉米的耐虫性、耐草药性、抗病性等，以增加产量和改善农作物的质量。
转基因玉米的辨别方法由于转基因玉米与传统玉米的性状非常相似，传统的肉眼观察往往无法直接区分。
然而，科学家们通过不断的研究和发展，已经开发出一些有效的方法来鉴定转基因玉米。
以下是一些可以用于辨别转基因玉米的简单方法。
DNA检测方法通过检测玉米中的DNA序列，可以准确地判断玉米是否为转基因品种。
以下是一些常用的DNA检测方法：1.PCR（聚合酶链反应）：PCR是一种扩增DNA序列的技术，可以通过特定引物扩增转基因DNA的片段。
通过检测扩增产物的大小和特征，可以判断玉米是否为转基因品种。
2.实时荧光PCR：实时荧光PCR结合了PCR技术和荧光检测技术，可以在扩增过程中实时监测DNA的数量和特征。
通过比较样本和参考样品的荧光信号，可以判断玉米是否为转基因品种。
3.基因芯片技术：基因芯片技术利用微阵列芯片上固定的DNA探针，可以同时检测多个基因。
通过比较样本和参考样品的信号强度和特征，可以判断玉米是否为转基因品种。
蛋白质检测方法转基因玉米通常会在其基因组中表达外源基因，并产生相应的蛋白质。
通过检测玉米中的特定蛋白质，可以判断玉米是否为转基因品种。
以下是一些常用的蛋白质检测方法：1.ELISA（酶联免疫吸附试验）：ELISA是一种常用的免疫检测方法，可以通过特定的抗体检测目标蛋白质。
通过比较样本和参考样品的吸光度值，可以判断玉米是否含有转基因蛋白质。
2.质谱法：质谱法是一种分析样品中蛋白质的方法，通过测量蛋白质的质量和带电量，可以确定蛋白质的特征。
通过比较样品和参考样品的质谱图谱，可以判断玉米是否含有转基因蛋白质。
生理学和形态学特征除了分子方法外，还可以通过观察玉米的生理学和形态学特征来推测其是否为转基因品种。
转基因和非转基因玉米鉴别方法
转基因和非转基因玉米鉴别方法近年来，转基因技术在农业领域的应用日益广泛，转基因作物也成为人们关注的热点话题。
而在转基因作物中，转基因玉米占据着非常重要的地位。
但是，对于一般用户来说，很难直接通过外观来区分转基因玉米和非转基因玉米，因此鉴别方法显得尤为重要。
1. 外观鉴别法我们可以通过外观鉴别法来区分转基因玉米和非转基因玉米。
转基因玉米通常会在玉米颗粒表面有一些特殊标记，这些标记往往与转基因技术的相关信息有关。
而非转基因玉米则没有这些特殊标记。
我们还可以通过玉米颗粒的大小、颜色、形状等方面来进行外观鉴别。
2. 检测鉴别法检测鉴别法是一种比较客观和准确的鉴别方法。
通过在实验室中使用专门的设备和试剂，可以检测玉米颗粒中是否含有转基因成分。
这种方法的优势在于可以直接获取到玉米中的遗传物质信息，从而准确判断是否为转基因玉米。
3. 生物学鉴别法生物学鉴别法也是一种常用的鉴别方法。
通过对玉米的生长特性、抗病性、产量等方面进行观察和测量，可以初步判断出玉米是否为转基因种。
转基因玉米往往具有一些特殊的生长特性，这些特性可以被用来区分转基因玉米和非转基因玉米。
4. 分子生物学鉴别法分子生物学鉴别法是一种高级的鉴别方法。
通过采集玉米样品中的DNA，利用PCR等分子生物学技术分析其中是否含有特定的转基因序列，可以准确判断玉米是否为转基因种。
这种方法准确性高，但需要专业的实验室和技术支持。
通过上述的鉴别方法，我们可以比较准确地鉴别出转基因玉米和非转基因玉米。
但需要注意的是，不同的鉴别方法有其各自的优缺点，需要根据具体情况选择合适的方法进行鉴别。
由于转基因技术的不断发展和演变，鉴别方法也需要不断更新和完善。
对于用户来说，鉴别转基因玉米和非转基因玉米是一项重要的工作。
只有进行有效的鉴别，才能真正保障我们的饮食安全，以及促进农业可持续发展。
希望通过各种鉴别方法的研究和应用，能够为用户提供更加安全、健康的食品选择。
在进行转基因和非转基因玉米鉴别时，我们还需要考虑一些其他因素和方法。
转基因玉米最简单的辨别方法(一)
转基因玉米最简单的辨别方法(一)转基因玉米最简单的辨别方式在如今的食品市场中，转基因食品的存在越来越多，其中转基因玉米也成为了人们关注的焦点。
因此，辨别转基因玉米的方法变得尤为重要。
下面是一些简单有效的辨别方法：1. 标签查看法直接查看产品包装上的标签信息，如果产品为转基因玉米，则一般会在成分表或标签上注明“转基因玉米”或“转基因成分”。
这种方法简单快捷，但也容易被商家掩盖，不够可靠。
2. 识别标志法在一些国家或地区，转基因食品往往需要在产品上贴上特定的标志，如欧盟会在转基因产品上贴上“转基因”标识。
通过查找产品上的特定标志，可以快速辨别转基因玉米。
3. 检测方法借助科学技术，可以通过一些检测方法来辨别转基因玉米。
这些方法主要通过基因检测、蛋白质检测和特定标记物检测来判断是否为转基因玉米。
•基因检测：通过提取玉米DNA，进行PCR扩增，然后进行凝胶电泳分析，可以检测出是否存在转基因标记基因。
•蛋白质检测：通过提取玉米中的蛋白质，使用特定抗体或质谱分析等方法，可以检测转基因蛋白质的存在。
•特定标记物检测：某些转基因玉米品种会被添加特定的标记物，如GMO品种中常用的CaMV35S启动子、NOS终止子等，通过检测这些标记物的存在来辨别转基因玉米。
4. 联系厂家法如果对某个品牌的玉米产品是否为转基因玉米有疑问，可以主动联系厂家或品牌官方进行查询。
询问产品是否为转基因玉米，一般可以得到准确的答复。
5. 专业机构认证法对于一些通过认证的食品，可以查看是否取得了相关机构的认证，如“无转基因认证”、“绿色食品认证”等。
这些认证机构通常会对产品进行严格的检测和认证，可以提高对转基因玉米的识别率。
综上所述，辨别转基因玉米最简单的方法是查看标签信息和识别标志，但这些方法容易被掩盖或不够准确。
对于更加准确的结果，可以借助科学检测、联系厂家或购买通过认证的食品。
在购买食品时，消费者可以根据自己的需求和选择对各种辨别方法进行综合运用，以更好地保障自己的饮食健康。
转基因玉米的鉴别方法
转基因玉米的鉴别方法转基因玉米的鉴别可以采用许多复杂的技术，如分子标记分析，流式细胞术，实时定量PCR（qPCR）分析，蛋白分析，原位杂交等。
不过，可能也需要结合抗性检测或外部鉴别等方法。
其中常用的鉴定方法包括：（1）PCR 技术：它是利用脱氧核糖核酸（DNA）特异序列引物以及Taq 酶在反转录-聚合酶链反应（PCR）对转基因玉米的标志基因位点进行检测的一种技术，可以在体外快速、准确的鉴定不同的转基因玉米类型。
（2）分子权重（w）分析：它是利用核酸序列的分子量（mw）或分子量值来鉴定转基因玉米的一种技术，通过比较转基因玉米基因组DNA的分子量值与对照群体完全不同的DNA分子量值之间的差异，从而可以发现转基因玉米特有的特征。
（3）DNA 指纹：它是一种利用一系列剪接酶来生成特定基因组DNA片段的技术，可以用来鉴别转基因玉米的品种和基因组结构的变化。
（4）十二碳溴代酰胺（DCC）方法：它是一种利用基因片段中的三磷酸核苷（ATP）酶活性来鉴定转基因玉米特征的技术，可以利用电泳和有机溶剂中和镜翻转作为反应条件来鉴定基因片段的ATP 活性构成和构成比例，从而进行结果判断。
二、临床应用检测转基因玉米被广泛应用于药用植物、食物营养研究中，以及转基因产品的供应链及食品中的安全性研究中。
1. 检测转基因玉米的安全性研究：主要用于分析转基因玉米中毒性和敏感性的机制、治疗疾病进程及临床应用前的安全性评价等。
2. 转基因产品的供应链管理及检测：通过检测转基因玉米以及它在从种子到品牌食品所处的每个环节可以发掘出转基因物质在食品中是否合法。
3. 营养食品研发：通过系统地建立序列和功能数据库以及筛选和鉴别转基因玉米中的营养物质和抗耐性基因，找到一种能健康滋养身体的有效营养物质，用于营养食品的研发。
以实时荧光定量PCR 技术检测转基因玉米MON8801
1.4
标准曲线制作 将已知浓度的标准分子经系列稀释 , 制备成不同浓
度的标准品 , 稀释液为 TaKaRa 公司的 TB 溶液。首先将 已知浓度的标准分子溶液稀释成 1.0×1013 拷贝 μL1, 取 100 μL 上述标准分子溶液加入 900 μL TB 溶液稀释 , 充分 混匀 , 再次取其混合液 100 μL 加入 900 μL TB 溶液稀释 , 充分混匀 , 其他浓度依次等比稀释。稀释后的标准分子浓 度分别为 1.0×106、1.0×105、1.0×104、1.0×103、1.0×102 拷 贝 μL1, 每个浓度重复 4 次 , 分别以内标准基因和特异性 序列引物及探针进行实时定量 PCR 反应 , 以拷贝数的自 然对数值为横坐标 , 以 Ct 值 (荧光值达到指定阈值时的循 环次数 ) 为纵坐标 , 绘制内标准基因和特异性序列标准曲 线 , 并求解回归方程。实时荧光定量 PCR 所用的内标准 基因及特异性序列引物及探针见表 1。 反应体系 (50 μL)含 2×Premix Ex Taq 25 μL, forward primer (10 μmol L1) 2 μL, reverse primer (10 μmol L1) 2 μL, TaqMan probe (10 μmol L1) 2 μL, 50×ROX Reference Dye 1 μL, DNA 模板 2 μL, ddH2O 16 μL。扩增反应条件为 95℃预变性 30 s; 95℃变性 5 s, 60℃退火 /延伸 30 s; 共计 40 个循环。 1.5 待测样品 MON88017 转基因成分含量测定 分别以内标准基因和特异性序列进行 5 个待测样品 实时荧光定量 PCR 反应 , 根据标准曲线检测得到 5 个含 量不同的待测样品 Ct 值, 分别计算出内标准基因和侧翼序 列的拷贝数 , 根据以下公式计算出待测样品中 MON88017 成分含量。 转基因成分含量计算公式为转基因 Mon88017 含量 = 外源期刊拷贝数 /内标准基因拷贝数 ×100%。
玉米转基因检测标准
玉米转基因检测标准
1. PCR检测方法，PCR（聚合酶链式反应）是目前最常用的转基因检测方法之一。
检测标准通常会规定PCR反应的条件、引物设计、阳性对照、负性对照等内容，以确保检测的准确性和可靠性。
2. 适用范围，检测标准会明确适用于哪些类型的转基因玉米，比如Bt玉米、抗除草剂玉米等，以及不同的转基因基因型。
3. 检测灵敏度和特异性，标准通常会规定检测方法的灵敏度和特异性要求，确保可以检测到极低水平的转基因成分，并且不会对非转基因玉米产生误检。
4. 样品处理和前处理，标准通常会包括样品的处理方法，比如样品的提取、纯化等，以及前处理步骤，确保样品中的转基因成分可以被有效地检测出来。
5. 质控要求，检测标准通常会包括质控要求，比如实验室的质控体系、质控样品的使用、实验人员的技术要求等，以确保检测结果的准确性和可靠性。
此外，国际上也有一些相关的组织和机构发布了转基因玉米检测标准，比如国际标准化组织（ISO）和美国食品药品监督管理局（FDA）等。
这些标准通常会受到各国法律法规的影响和认可，对于确保转基因玉米产品的安全性和合规性起着重要作用。
总的来说，玉米转基因检测标准涉及到多个方面，包括检测方法、适用范围、灵敏度和特异性、样品处理和前处理、质控要求等内容，以确保转基因玉米产品的质量和安全。
这些标准的制定和执行对于保障食品安全和消费者权益具有重要意义。
玉米转基因方法(精编课件).ppt
扬州大学农学院 作物遗传育种暨应用生物技术系
邓德祥
精品课件
（一）、分子育种的概念
精品课件
分子育种是指在DNA水平上实施作物改良计划 的理论和方法。与以往其它常规育种技术相比，其实 质性的进步在于使作物育种真正实现了对基因的操作； 其鲜明的特点可以概括为通用性和精确性的完美结合。
精品课件
通用性是指它突破了物种之间生殖隔离的障碍， 实现了基因在物种之间的交流，其技术体系朝着整个 生物界共用同一个基因库的方向发展；精确性是指他 直接以目的基因为操作对象，使育种目标同育种素材 精确配对，能有效地打破遗传连锁的累赘，提高育种 效率。
精品课件
二、玉米转基因育种技术概述
精品课件
（一）、直接的遗传转化方式
农杆菌介导的遗传转化方法出现较早，并很快成 为双子叶植物遗传转化的常规方法。以后发明了一系 列直接的遗传转化方法打开了单子叶植物特别是玉米 等作物转基因研究的大门。
精品课件
这些方法是采用简单的外力冲击或某些物理学原理，将携 带外源DNA片段的质粒载体直接导入植物细胞，然后随机地整 合进受体基因组。例如采用电激法、PEG法等转化玉米的原生 质体，采用超声波材料、脂质体包裹法和花粉管介导法和子房 注射法将外源基因导入受体细胞等。但是转化技术大多需要经 过原生质体或组织培养阶段，转化周期长，转化受体受到基因 型的较大限制，同时也不适于大规模转基因育种的要求。
精品课件
子房注射法是转基因育种工作中经常使用的方法之一。 子房注射法是一种微量注射法，使用一种特制的微量注射器将 含有目的基因载体的DNA溶液直接注射入玉米处于减数分裂时 期的子房中，以便使外源基因能整合进玉米的基因组。丁群星 等（1993）用此法获得了正常的转化体。由射法的最突出优点有两个： 一是不需要复杂的仪器设备，操作简便； 二是转化受体不受基因型的限制，这对于优良
玉米中转基因成分的定性PCR检测
引 物 的设 计 以 Ｎ Ｂ ｅｅ ａｋ序 列 为 基 础 而 设 计 Ｃ ＩＧ ｎＢｎ
的。实 验所 需 特 异性 引 物 由 宝 生 物 工 程 （ 连 ） 大 有 限公 司合成 ， 引物序 列 、 检测 基 因片段 的长度 及 各 所
自动凝 胶成 像分 析 系 统 、 台式 高 速 离 心机 、 Ｖ ｕ．
（ ． ｍ ｌＬｐ ． ） ２ ０ ５ ｏ Ｈ ８ ０ ；ｇ十 六 烷 溴 化 （ Ｔ Ｂ） ８ ２ｇ ／ Ｃ Ａ ；． Ｎ Ｃ ， 容 至 １０ ｍ 。使 用 前 需 要 １０℃ 灭 菌 ａ ！定 ０ Ｌ ２
３ ０ｍ ｉ ｎ。
障 。本 实验 通过 Ｐ Ｒ检测 市 场常见 玉 米产 品 ， 果 Ｃ 结
１ １ ２ 试 剂 ． ．
ｄＮＴＰ Ｍｉ ｔ ｒ 、 １ Ｘ Ｐ ｘｕｅ ０ ＣＲ ｂ ｆ ｒ ０ ｕｆ 、５ ｂｐ ｅ ＤＮＡ
种 植 面积 仅 次 于转 基 因 大豆 ， 达到 ２３ ０万 平 方 公 ０
顷， 占转 基 因 作 物 总 面 积 的 ２ ． ％ 。在 转 基 因 ２５
理 ， 障 人 类 健 康 和 动 植 物 、 生 物 安 全 ， 护 生 保 微 保
态 环 境 ， 科 学 的 对 转 基 因产 品 进 行 长 期 有 效 的 应
监 控 ， 立 快 速 、 效 的 检 测 方 法 体 系 ， 也 是 对 建 有 这 食 品 环境 、 类 、 物 和 可持 续 农 业 发 展 的 重 要 保 人 动
冰机 、 自动三 重 纯 水 蒸 馏 器 、 液 枪 （ ０ 、０ 、 取 １ Ｌ ２ Ｌ ２ ０ 、０ ０ｖ ） 玻璃 器皿 （ 钵 、 杯 、 璃 棒 、 ０ １０ ， 、 Ｌ 研 烧 玻 容 量瓶 ） 消耗性 器材 （ ｐ ｅ ｄ ｆ管 、 、 Ｅ ｐｎｏ 各种 规格枪 头 ）
玉米转基因成分的检测探讨
玉米转基因成分的检测探讨作者：周恪驰何长安纪春学王辉张恒来源：《吉林蔬菜》2021年第04期摘要：本文以实时荧光PCR检测技术为例，对于玉米转基因成分进行分析。
在具体处理中，会组建实验来完成阳性质粒、调控元件、目的基因、标记基因等内容的检测，从而积累有价值的数据信息，为后续同类型检测活动的顺利开展奠定基础。
关键词：阳性质粒;转基因成分;荧光PCR检测技术转基因作物由于抗逆性强或产量高的优点，在全球范围内得以广泛种植。
近年来，随着转基因作物种植面积的不断增加，关于其在食品和环境安全等方面存在的争议也越来越多，急需通过加强检测来为监管提供基础数据。
荧光PCR技术具有实时动态、灵敏度高、精密度高、定量准确等优点，将其应用到玉米转基因成分检测当中，可以提升检测效率和检测精准度，从而为食品安全性的不断提升奠定基础。
1 实验组建要点1.1 材料和仪器在此次实验过程中，所使用到的材料为转基因玉米样品和非转基因玉米样品。
而使用到的如下：①Probe q PCR Super Mix，为提升实验结果准确性，需评估合作公司，筛选综合实力最强的公司进行试剂的购买。
②核酸蛋白质分析仪，可选择Nanodrop 2000c这一型号，以满足相应的分析需求。
③实时荧光PCR扩增仪，选用7300plus型号仪器，使用前做好调试，确保后续活动的顺利推进。
④高速台式离心机，结合实际情况进行选择，以满足后续应用要求。
1.2 实验方法1.2.1 进行DNA提取在对DNA进行提取时，多使用溴化十六烷三甲基铵来作为提取载体，从而获取到转基因玉米与非转基因玉米的DNA基因组。
对于提取后的DNA基因组，也需要利用核算蛋白质分析仪来检测具体浓度，此过程中也会提前将母液稀释到100ng/μl，随后将其放置在定量PCR 模板中，并且在-20℃环境中进行保存。
1.2.2 阳性质粒的构建作为阳性质控的阳性质粒对于转基因检测至关重要，阳性质控的检出属于非常重要的内容，这也是顺利完成转基因检测的基础条件。
玉米成分转基因检测知识
玉米成分转基因检测知识转基因玉米就是利用现代分子生物技术，把种属关系十分遥远且有用植物的基因导入需要改良的玉米遗传物质中，并使其后代体现出人们所追求的具有稳定遗传性状的玉米。
转基因食品有很多优点：增加作物产量、降低生产成本；增强作物抗虫害、抗病毒等的能力；提高农产品耐贮性。
但转基因食品作为一种新物种，其对人体健康、生态平衡是否具有危害还未确定：可能通过基因漂流影响其他物种；转基因食品可能会引起过敏等等。
比如说水果玉米，就是那种吃起来带甜味的。
颗粒大小差不多，金黄色栗粒的，一般路边烧烤的那种玉米。
彩色玉米，就是栗粒有紫色白色黄色的哪种，这是最原始的转基因玉米了。
下列是对于其它相关转基因成分物质：◆大豆◆马铃薯◆木瓜◆青椒◆食用菌◆小麦◆烟草◆油菜籽◆棉花◆植物性饲料◆调味品◆食用油脂◆食品半成品、食品成品◆水稻及其产品◆植物及其加工产品下面我们来看一下实时荧光PCR反应体系：试剂名称终浓度ЧL/反应10×PCR反应缓冲液1× 5MgCl2（25m mol/L） 2.5 m mol/L 5dATP(10 m mol/L) 200 n mol/L 1dGTP(10 m mol/L) 200 n mol/L 1dCTP（10 m mol/L）200 n mol/L 1dTTP(10 m mol/L) 100 n mol/L 0.5dUTP(10 m mol/L) 200 n mol/L 1UNG酶（1 U/чL）0.5U 0.5上游引物（10чmol/L）200 n mol/L 1下游引物（10чmol/L）200 n mol/L 1探针（5 чmol/L）100 n mol/L 1Taq酶（5U/чL） 2.5U 0.5DNA模板（40 ng/чL~50ng/чL）- 5补水至- 50注：表中DNA模板为原料的模板量，加工产品可视加工程度适当增加模板量；也可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当调整。
一种新型玉米转基因成分的物理检测方法
一种新型玉米转基因成分的物理检测方法我折腾了好久一种新型玉米转基因成分的物理检测方法，总算找到点门道。
我一开始啊，真的是瞎摸索。
我就想啊，既然是物理检测方法，那肯定有些物理特性可以利用。
我最先想到的就是观察玉米的外观。
我觉得吧，转基因玉米可能和普通玉米在大小、形状或者颜色上有区别。
我就找了好多玉米，有普通的，也有疑似转基因的，放在一块儿看。
但是这可难了，大部分玉米看起来都是普普通通的，通过外观根本没法准确判断。
这算是我前期一个失败的尝试吧。
然后我就想，密度这个物理性质肯定不同。
我就像那种做实验的疯狂科学家一样，把玉米一个一个称重，再找个容器测体积，算密度。
可这个方法有个大问题，玉米的个体差异太大了，就算是同一品种的普通玉米，密度可能都不完全一样，受到成长环境、饱满程度等因素影响。
于是这个方法虽然有点道理，但实际操作起来根本不实用。
后来我学到一个新的方法。
我发现转基因成分可能会影响玉米内部结构。
我开始尝试用显微镜来观察玉米的切片。
这就像我们去检查一个小物件一样，得把它切开才行。
我费了好大劲学会切片，切片切厚了根本看不清楚细节，薄了又容易破。
但是一旦成功切好片放在显微镜下，就像打开了一个新世界。
我能看到细胞啊这些结构。
不过这个方法也不是万无一失的，因为我不确定是不是有些微观结构的区别只是因为偶然因素，或者是其他非转基因相关的变化。
我现在还在研究这个方法怎么改进。
我还试过用一种类似磁场的装置，看玉米在磁场里的反应。
我脑海里就想着像磁铁吸铁一样，要是转基因玉米有特殊成分，也许会和磁场有特殊的相互作用。
但这些尝试结果都不明确，到现在也不知道这个方向对不对。
反正这一路走来，做检测的时候一定要小心仔细，比如说样本的采集一定要多样且有代表性。
至于未来呢，我还是打算继续尝试各种方法，找出更好的物理检测这种新型玉米转基因成分的方法。
玉米转基因完整流程
农杆菌菌株的培养及感受态细胞的制备挑取根癌农杆菌LBA4404单菌落于3ml的YEB液体培养基（链霉素100mg/ml），28℃振荡培养过夜取过夜培养菌液500μl接种于50mlYEB（链霉素100mg/ml）液体培养基中，28℃振荡培养至OD600为0.5 左右。
5000rpm离心5min，集菌。
加10ml0.15MNaCl悬浮细胞，5000rpm离心5min，加10ml预冷的20mMCaCl2悬浮细胞，冰浴，24小时内使用，或分装成每管200μl，液氮中速冻1min，置于-70℃保存备用。
植物表达载体向农杆菌感受态细胞的转化取200ml 感受态细胞，加入1μg构建好的质粒DNA加入到，混匀后，冰浴30min。
液氮中速冻2-3min，37℃水浴5min，接着冰浴3min。
加入1mlYEB培养基，28摄氏度慢速震荡培养4h。
5000rpm离心5min，弃上清，集菌。
加入0.1mlYEB培养基重新悬浮细胞，涂布于含有100mg/ml Kan和125mg/ml Sm的YEB 平板上，28℃培养阳性克隆的鉴定挑取平板上长出的单菌落，接种于含有100mg/ml Kan和125mg/ml Sm的YEB液体培养基中，28℃振荡培养过夜，小量提取质粒DNA，以质粒DNA为模板进行PCR扩增鉴定。
农杆菌菌液的制备挑取继代2d后的农杆菌单菌落，在加有相应抗生素的液体YEB培养基中，在28℃黑暗条件下震荡培养16-20h（OD600为0.6-0.8）将菌液置于离心管中，18-20℃，5000rpm离心5min收集菌体。
将收集到的菌体用2mlD-inf液体培养基悬浮进行洗涤，以去除残余的YEB培养基18-20℃，5000rpm离心10min收集菌体，将菌体用2mlD-inf液体培养基，加入1‰AS，备用（放1h）农杆菌感染玉米幼胚初生愈伤及共培养将加入到D-inf（含AS）的菌液稀释到OD600为0.3-0.5放置1h以上，将幼胚或愈伤用D-inf（不含AS）洗一次，再浸入菌液中，用手上下颠倒30s，并放置5min，观察幼胚无明显伤口时，取出，用无菌滤纸吸干，放到D-AS固体培养基上，25℃黑暗条件下共培养3d，同时设对照。
转基因玉米的鉴别方法
转基因玉米的鉴别方法转基因玉米品种是指由转基因技术培育的玉米新品种。
现在市场上有很多玉米颜色多彩和个头特别饱满匀称的。
那么，如何辨别转基因玉米呢?以下是小编为大家整理推荐关于转基因玉米的鉴别方法，希望对大家有所帮助。
转基因玉米的鉴别方法判断转基因食品的几个标准：1、个头。
按照传统，西红柿也有一定个头的，比如：像大拇指头那么一点大的小西红柿绝对是转基因。
再比如大豆，也叫黄豆，就是做豆腐，豆浆那种豆子，形状应该像动物内脏：腰的样子，有点扁，可现在的大豆，全是圆圆的、大不少、就像豌豆一样的大豆，产量很高，就是转基因。
2、色彩。
与传统的不一样的绝对是转基因，比如彩色棉花、彩色辣椒。
3、产量。
转基因作物一般在开始几年，其产量要比传统作物高不少。
4、季节。
除了大棚蔬菜外，其它的反季节食品容易是转基因的。
5、害虫。
凡是害虫喜欢光顾的作物就是没转基因的，凡是害虫害怕，也就是没有害虫，或很少害虫的作物，就是转基因。
甜玉米是转基因玉米吗甜玉米的不同之处在于，它的胚乳中可不只有淀粉，还有相对含量很高的水溶性多糖，这就赋予了其不同于普通玉米的甜味。
究其背后的原因，是在甜玉米控制淀粉合成的一系列基因中，有一个或几个基因发生了自然的突变，处于纯合隐性状态，切断了部分还原性糖向淀粉转化的过程。
这点“小缺陷”反而促成了甜玉米可口的味道。
甜玉米并不是最近才有的新作物，它的真正起源时间虽然无法考究，但有文献记载的最早的甜玉米品种是1779年欧洲殖民者从美洲的易洛魁人那里收集到的Papoon玉米，据此可以肯定甜玉米的出现时间还要更早。
要知道，那时候可还压根没有转基因这一说。
现在的甜玉米品种虽然和几百年前的不完全相同，但它同样不是转基因的产物，而是在自然突变的甜玉米品种的基础之上，通过传统育种技术——选育自交系、组配杂交种的办法培育出的新的甜玉米品种。
最近几年，与甜玉米有关的几个基因序列和与其关联的分子标记都已经被找到，育种家还可以依靠分子标记辅助选择技术来加快育种进程。
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玉米成分转基因检测知识
转基因玉米就是利用现代分子生物技术，把种属关系十分遥远且有用植物的基因导入需要改良的玉米遗传物质中，并使其后代体现出人们所追求的具有稳定遗传性状的玉米。
转基因食品有很多优点：增加作物产量、降低生产成本；增强作物抗虫害、抗病毒等的能力；提高农产品耐贮性。
但转基因食品作为一种新物种，其对人体健康、生态平衡是否具有危害还未确定：可能通过基因漂流影响其他物种；转基因食品可能会引起过敏等等。
比如说水果玉米，就是那种吃起来带甜味的。
颗粒大小差不多，金黄色栗粒的，一般路边烧烤的那种玉米。
彩色玉米，就是栗粒有紫色白色黄色的哪种，这是最原始的转基因玉米了。
下列是对于其它相关转基因成分物质：
◆大豆◆马铃薯◆木瓜◆青椒
◆食用菌◆小麦◆烟草
◆油菜籽◆棉花◆植物性饲料
◆调味品◆食用油脂◆食品半成品、食品成品
◆水稻及其产品◆植物及其加工产品
下面我们来看一下实时荧光PCR反应体系：
试剂名称终浓度ЧL/反应
10×PCR反应缓冲液1× 5
MgCl2（25m mol/L） 2.5 m mol/L 5
dATP(10 m mol/L) 200 n mol/L 1
dGTP(10 m mol/L) 200 n mol/L 1
dCTP（10 m mol/L）200 n mol/L 1
dTTP(10 m mol/L) 100 n mol/L 0.5
dUTP(10 m mol/L) 200 n mol/L 1
UNG酶（1 U/чL）0.5U 0.5
上游引物（10чmol/L）200 n mol/L 1
下游引物（10чmol/L）200 n mol/L 1
探针（5 чmol/L）100 n mol/L 1
Taq酶（5U/чL） 2.5U 0.5
DNA模板（40 ng/чL~50ng/чL）- 5
补水至- 50
注：表中DNA模板为原料的模板量，加工产品可视加工程度适当增加模板量；也可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当调整。
1×25
TaMan R Universal PCR Master
Mix(2×)
上游引物（10 чmol/L）150 nmol/L 0.75
下游引物（10чmol/L）150 n mol/L 0.75
DNA模板（40 ng/Чl~50 ng/чL）- 4.0
探针（5 чmol/L）50 nmol/L 0.50
补水至- 50
注：表中DAN模板为原料的模板量，加工产品可视加工程度适当增加模板量；也可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当调整。
实时荧光定量PCR的反应参数为：50℃PCR前去污染2min；预变性95℃15s，60℃1min，45个循环。
待测样品外源基因检测Ct值大于或等于40，内源基因检测Ct值小于或等于24，设置的对照结果正常者，则可判定该样品未检出×××基因；
待测样品外源基因检测Ct值小于或等于36，内源基因检测Ct值小于或等于24，设置的对照结果正常者，则可判定该样品检出×××基因；
待测样品外援基因检测Ct值在36~40之间，应重做实时荧光PCR扩增。
再次扩增后的结果Ct值仍小于40，且设置的对照结果正常，则可判定该样品检出×××基因；再次扩增后结果Ct值大于40，且设置的对照结果正常，可判定该样品未检出×××基因。