第四章 药物定量分析
第四章 药物定量分析与分析方法验证
1、含卤素有机药物
含卤素有机药物是指分子结构中所含卤素直接与芳环
如果测得理论板数低于规定的最小理论板数， 应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色 谱柱填充的优劣等），使理论板数达到要求。
(2)分离度(R)
在定量分析时，要求定量峰与其他峰 或内标峰之间有较好的分离度。除另有规定 外，分离度应大于1.5。
分离度（R）的计算公式见下式：
R 2 t R2 t R1
含量（CX）= f
AX AS / CS
式中，AX为供试品峰面积或峰高；CX为供
试品的浓度 。
丙酸睾酮含量测定采用高效液相法：取本品 对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成 每lmL中约含1mg的溶液。精密量取该溶液 和内标溶液（1．6mg/ml苯丙酸诺龙甲醇溶 液）各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至 刻度，摇匀，取10μl注入液相色谱仪，记录
例
取盐酸麻黄碱0.1532g，精密称定， 加冰醋酸10ml溶解后，加醋酸汞试液 2ml与结晶紫指示液1滴，用HClO4滴 定至绿色，用去0.1022mol/L的高氯 酸滴定液7.50m1，空白试验消耗高氯 酸滴定液0.08ml。已知每1ml高氯酸 滴定液（0.1mol/L）当于20.17mg的 C10H15ON·HCl。试计算盐酸麻黄碱 的百分含量？（99.80％）
1.分离原理
吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 排阻色谱
吸附色谱
根据填充剂吸附活性 对样品的吸收系数不 同而分离
充填剂：硅胶
分配色谱
根据固定相与流动相的极性不同而分为 正相分配色谱和反相分配色谱 两者的区别如下图所示：
固定相
流动相
正相分配
极性
药物分析第04章定量分析样品前处理与分析方法验证
例1 三氯叔丁醇的测定
原理 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解， 氯元素全部转变成氯化钠，然后用剩余滴定法，即于 水解液中加硝酸酸化，再加入定量过量的硝酸银滴定 液，使Cl-生成AgCl沉淀，过量的硝酸银，以Fe3+为指 示剂，用硫氰酸铵液回滴定。
23
例1 三氯叔丁醇
CCl3—C(CH3 ) 2— OH + NaOH (CH3 ) 2 CO+NaCl + HCOONa
Sb5 2KI H Sb3 I2 2K I2 2Na 2S2O3 2NaI Na 2S4O6
21
（二） 经水解后测定法
1.碱水解测定法
将含卤素的有机药物溶于适当溶剂（如乙 醇）中,加氢氧化钠溶液或硝酸银溶液后,加热回 流使其水解,将有机结合的卤素,经水解作用转变 为无机的卤素离子,然后选用间接银量法进行测 定。
为终点。
43
实例- 碘苯酯的含量测定
I
CH3
C (CH2)8 COOC2H5
样品 O2/Pt NaOH-H2O Br2-HAc 甲酸 空气 燃烧 吸收 KI 0.02mol/L Na2S2O3 淀粉作指示剂 终点：蓝色消失
44
溴-醋酸的作用：将碘化物全部转为碘酸盐。 甲酸的作用：除去过量的溴
Br2 HCOOH HBr CO2
CHO COO-
OCH -OOC
葡萄糖酸锑钠
14
含金属或卤素有机药物定量分析 前的处理方法有两大类：
➢1.不经有机破坏的分析方法(3种方法) 直接测定法;经水解后测定法;经还原后测定
法；
➢2.经有机破坏的分析方法(2种方法) 湿法破坏(硝酸-高氯酸法;硝酸-硫酸法;硫酸-
硫酸盐法等);干法破坏。
第04章药物定量分析与分析方法验证
A = ECL
吸收系数：摩尔吸收系数ε —— 研究分子结构 1% E 百分吸收系数 1cm —— 含量测定
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3.仪器的校正和检定 波长的校正：汞灯中的几根较强的谱线或用仪器自身 所带的氘灯的特定谱线为参照进行校正 吸收度准确性的检定：重铬酸钾的硫酸溶液，规定波
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测得量(mg) 40.18 36.17 31.36 32.52 39.85
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回收率（%） 统计学处理 100.10 x 99.88% 98.60 100.10 RSD=0.55% 98.91 100.20
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三波长分光光度法测定连蒲双清片中盐酸小檗碱的含量
回收率试验 取连蒲双清片粉适量（约相当于盐酸小檗碱40mg)
Байду номын сангаас
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3.百分含量的计算
（1）直接滴定法 设至终点时，消耗滴定液体积为V ml 则药物理论质量为V· T C实际 浓度校正因数 F＝ C规定
实测药物质量 V FT 含量%＝ 100 ％＝ 100 ％ 供试品取样量 W
W：供试品取样量
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（2）间接滴定法 1）生成物滴定法 滴定剂 药物 + A → B 滴定 2）剩余滴定法（回滴法） 药物 + A（定、过量） →················ 剩余的 A + B →·······（回滴）· · · · · · V 空白试 验· · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · V 0 （V －V）FT
药物分析课件 第四章 药物定量分析与分析方法验证_OK
③要有防爆措施 ④氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色
炭化物 ⑤燃烧产生的烟雾要被完全吸收
充分振摇和放置都是为了保证吸收完全 例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟
雾颜色完全消失后，即表示吸收完全 ⑥测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶
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4、应用
含卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、杂 质的检查及含量测定
100%
注射剂：标示量％＝
V0
V T 标示量
100%
V VO
T F 标示量
100%
VO : 量取注射剂的体积， ml
36
(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供试品＋试剂 A 化合物 B
化合物 B＋滴定液 C 化合物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量 计算同直接滴定法
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2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定
10
（一）湿法破坏
（1） 硝酸-高氯酸法 适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有
机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一 般呈高价态。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏
干法灼烧法 11
（2） 硝酸-硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的
无机金属离子均为高价态。 不能用于含碱土金属有机药物的破坏
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氧瓶燃烧
第四章药物定量分析
第四章药物定量分析第四章药物定量分析第四章药物定量分析第一节定量分析样品的前处理方法常用的处理方法：药物分析中常用的分析方法1.不经有机破坏的分析方法2.经有机破坏的分析方法一．不经有机破坏的分析方法（1）直接测定法。
如富马酸亚铁( 用于各种原因引起的缺铁性贫血) 溶于热稀矿酸，采用铈量法，邻二氮菲作指示剂富马酸亚铁的含量测定:取本品约0.3g，精密称定，加稀硫酸15ml，加热溶解后，放冷，加新沸过的冷水50ml与邻二氮菲指示液2滴，立即用硫酸铈滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。
每1ml硫酸铈滴定液(0.1mol/L)相当于16.99mg。
（2）经水解后测定法1. 直接回流后测定法. 例如：三氯叔丁醇的含量测定CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH = (CH3)2CO +3NaCl + HCOONa +2H2ONaCl+AgNO3= AgCl + NaNO3 AgNO3+ NH4SCN = AgSCN + NH4NO32. 用硫酸水解后测定法. 例如：硬脂酸镁的含量测定Mg(C17H35COO)2 + H2SO4 =MgSO4 + 2C17H35COOH H2SO4+2NaOH =Na2SO4 + 2H2O取本品约0.1g，精密称定，精密加硫酸滴定液(0.05mol/L)50ml，煮沸至油滴澄清,继续加热10min，放冷至室温，加甲基橙指示液1-2滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。
每1ml 硫酸滴定液(0.05mol/L)相当于2.016mg 的MgO 。
（3）经氧化还原后测定法1. 碱性还原后测定例如：泛影酸（用于泌尿系造影）的含量测定(曙红钠指示剂)2. 酸性还原后测定(硫酸铁铵指示剂) 例如：碘番酸（口服胆囊造影剂）的含量测定 Zn 还原后银量法3. 利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量（1）含锑药物例如：葡萄糖酸锑的含量测定Sb5+ +2KI =Sb3+ + 2K+ + I2 I2 +2Na2S2O3 =2NaI +Na2S4O6 （连四硫酸钠）2）含铁药物 2Fe3+ + 2KI =2Fe2+ + 2K+ + I2 I2 +2Na2S2O3 =2NaI + Na2S4O6二、经有机破坏的分析方法药物分析中常用的有机破坏的方法有干法破坏湿法破坏氧瓶燃烧法(一)湿法破坏HNO3-HClO4法；HNO3-H2SO4法；H2SO4-硫酸盐法；HNO3-H2SO4-HClO4法；H2SO4-H2O2；H2SO4-KMnO4COOH I I I NHCOCH 3CH 3CONH COOH H 2N NH 2+ 11NaOH + 3Zn + 3NaI + 2CH 3COONa + 3NaZnO 2 + 3H 2O NaI + AgNO 3 AgI + NaNO 3(二)干法破坏（加Na2CO3或MgO以助灰化；温度控制在420℃）本法系将有机物灼烧灰化以达分解的目的。
药物分析药物定量分析与分析方法验证 ppt课件
单质溴还原为溴负离子。
测定含碘药物时，分解产生的碘化氢可被氧
气进一步氧化，其燃烧产物主要为单质碘，
并 含 有 少 量 的 五 价 碘 （ HIO3 ） 与 一 价 碘
吸
（HI）。当使用AgNO3滴定法测定含量时，
收 液 的
用H2O-NaOH溶液-SO2饱和溶液作为吸收液， 上述不同价态的碘均转变为负一价的碘
H2O2与水的混合液作为吸收液，燃烧产物经
吸收转变为H2SO4，加入盐酸溶液并煮沸除
去剩余的过氧化氢后，加入BaCl2，使硫酸生
吸
成BaSO4，以重量法测定含量。
收 液
含磷药物（有机膦酸类）的燃烧产物为P2O5，
的 以水为吸收液，加入少量硝酸溶液并经煮沸
选 择
使焦磷酸（H4P2O7）和偏磷酸[(HPO3)n]转 化为磷酸后，采用钼蓝比色法测定含量。
f. 砷盐的检查：有机结合的砷经与无水Na2CO3或 Ca(OH)2 、 Mg(NO3)2 共 热 （ <700℃ ） 转 化 为 无机砷酸盐后，依法检查。本法主要用于高分子 化合物（如：右旋糖酐铁）或植物提取物（如： 大豆油）中砷盐的检查，亦应用与少数有机药物 （如吡罗昔康、布美他尼等）.
② 氧瓶燃烧法：
1. 湿法破坏
适用于含氮有机合成药物分析的前处理，在生物制 品分析中用于氮（包括蛋白质）、磷、硫柳汞及氯 化钠测定法的前处理； 亦可用于生物样品中金属元素测定时生物基质的去除。 主要分解剂：硫酸 辅助分解剂：硝酸、高氯酸、过氧化氢。 湿法破坏可分为：硫酸-硝酸法、硫酸-高氯酸法、 硫酸-硫酸盐法、硝酸-高锰酸钾法。
选 （ NaI ） ； 若 使 用 间 接 碘 量 法 测 定 时 ， 用
择
H2O-NaOH溶液为吸收液，此时吸收液中的
药物分析第四章定量分析与分析方法验证
标准偏差
三、专属性 系指在其它成份（如杂质、降解产物、辅料等） 系指在其它成份（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在 采用的方法能准确测定出被物的特性。 下，采用的方法能准确测定出被物的特性。 四、检测限（LOD） 检测限（ ） 指试样中被测物能被检出的最低浓度或量。 指试样中被测物能被检出的最低浓度或量。 五、定量限（LOQ） 定量限（ ） 指样品中被测物能被定量测定的最低量， 指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果具有 一定的准确度和精密度。 一定的准确度和精密度。 六、线性 系指在设计的范围内， 系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接 呈正比关系的程度，相关系数R-->1 ,用软件可得回归方程 用软件可得回归方程. 呈正比关系的程度，相关系数 用软件可得回归方程
VT 含量% = × 100% W
T—滴定度 滴定度;V—消耗滴定液体积 消耗滴定液体积;W—供试品取量 滴定度 消耗滴定液体积 供试品取量 校正因子F: 校正因子 当滴定液浓度与药典中规定浓度不相同时,要校正 要校正: 当滴定液浓度与药典中规定浓度不相同时 要校正 实际摩尔浓度 F= 规定摩尔浓度 在药检部门实验里的试剂瓶子一般不标浓度,而是 值 在药检部门实验里的试剂瓶子一般不标浓度 而是F值. 而是 实际滴定度:T’=TF 实际滴定度
二、光谱分析法 光照在物质上，物质内部发生能级跃迁而产生辐射， 光照在物质上，物质内部发生能级跃迁而产生辐射，利用 光谱进行定性或定量的结构分析称为光谱分析法。 光谱进行定性或定量的结构分析称为光谱分析法。 1、紫外-可见分光光度法（200nm—760nm) 、紫外 可见分光光度法 可见分光光度法（ (1)朗伯 比耳定律 朗伯-比耳定律 朗伯 A=ELC A-吸光度；L-液层厚度；C-溶液浓度；E-吸收系数 吸光度； 液层厚度 液层厚度； 溶液浓度 溶液浓度； 吸收系数 吸光度 （2）百分吸收系数 ）百分吸收系数E 1% 溶液浓度为1%（ 溶液浓度为 （W/V）厚度为 ）厚度为1cm的吸收度 E1cm 的吸收度 A （3）吸收系数法测含量 ） ×D 1% E1cm 含量%= ×100% W × l ×100 A-供试品吸光度；D-供试品稀释倍数； 供试品吸光度； 供试品稀释倍数 供试品稀释倍数； 供试品吸光度 W-供试品取量（标示量）（ ）； 液层厚度（cm） 供试品取量（ ）（g）； 液层厚度（ ） 供试品取量 标示量）（ ）；L-液层厚度
药物分析 第四章—药物定量分析与分析方法验证
方法进行鉴别、检查或含量测定。
（5）注意事项
①充氧气要充分
使样品燃烧完全,一般急速通氧气1~2分钟,
燃烧完全时没有黑色炭化物。
②防爆
样品燃烧时,温度很高,燃烧瓶内压力很大,
有爆炸的可能性,必须采取防护措施。
防护措施:戴防护眼睛；瓶外包湿毛巾
③ 吸收完全 Clˉ、Fˉ 一般振摇30’,燃烧瓶看不到烟雾。 白色烟雾
燃烧瓶容积大小的选择。通常取样量为10－20mg， 使用500ml燃烧瓶;加大样品取样量（200mg）时可选用 1000或2000ml的燃烧瓶。
氧瓶燃烧装置与样品包装操作图
（ 2）吸收液的选择
吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、
氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态。
（四）分离、纯化与浓集
液—液萃取 ( LLE)
• 亲脂性的药物与强极性的内源性水溶性物质，通过有机 溶剂可以除去大部分干扰性物质。 • 注意： 1）所用溶剂对被测组分溶解度大，与水不混溶，无毒， 化学稳定，不易乳化。 常用：乙醚、叔丁基甲醚、氯仿、乙酸乙酯等 2）有机相：水相=1:1（2:1） 3）水相最佳PH值的选择与药物的pKa有关。
相对标准偏差(RSD)（变异系数，CV）表示。
偏差（d）：测量值与平均值之差：
d xi x
标准（偏）差（SD或S）：
S
x
i
x
2
n 1
相对标准（偏）差（RSD） 也称变异系数（CV）：
RSD
S x
100 %
1. 重复性
在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果 的精密度；在规定的范围内，至少用9次测定结果评 价，如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓 度当作100%，至少测6次进行评价。
第4章-药物定量分析
验证分析方法的具体内容
鉴 别 准确度 重复性 精密度 中间精密度 专属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性 － ＋ － － － － ＋ ＋* ＋ －** ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ － － － ＋ ＋* ＋ － － ＋ ＋ ＋ － － 杂质检查 定量 ＋ ＋ 限度 － － 含量测定及 溶出度测定 ＋ ＋
系统适用性试验
色谱柱的理论塔板数 分离度 重复性 拖尾因子
色谱柱的理论塔板数
N = 5.54 (tR/W1/2)2 = 16(t/W)2 改变柱长、内径、固定相牌号、固定 相颗粒粒径等
分离度
定量峰与其它峰或内标峰之间的分离度 R应大于1.5
重复性
取各品种项下的对照品溶液，连续进样5 次，其峰面积测量值的RSD不应大于 2.0% 配制相当于80%，100%，120%的对照品 溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种 不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平 均校正因子，其RSD不应大于2.0%
全血（加抗凝剂） 测定血样中平均分布于细 胞内和细胞外的药浓
• 种类：
硫酸-硝酸法 硫酸-高氯酸法 硫酸-硫酸盐法 硝酸-高锰酸钾法
凯氏定氮法
（二）干法破坏
1.高温炽灼法
---- 将有机物灼烧灰化 • 适用于湿法不易破坏完全的有机药物及 某些不能用硫酸破坏的有机药物 • 不适用于含易挥发金属有机药物的破坏 （砷、汞） • 常加入无水碳酸钠或轻质氧化镁助灰化
二．精密度
1．表示方法 • 标准偏差SD
• 相对标准偏差
relative standard deviation RSD
即变异系数 coefficient of variation CV
2. 重复性
• 在相同操作条件下，由同一个分析人员 测定同一种样品所得结果的精密度。
药物分析基础第四章药物的定量分析和分析方法的验证
• 免疫分析——灵敏、专属——前处理要求简单 • 光谱分析——灵敏、选择性差——前处理要求高 • 色谱分析——准确、精密，专属———除蛋白质
前处理方法
• 去除蛋白质 目的：
• 使药物从结合状态下释放出来 • 减少提取过程中的乳化 • 消除干扰，保护色谱柱
常用去蛋白方法：
加入与水相混溶的有机溶剂——使蛋白质分子
tR保留时间
tR保留时间 进
样
点
t0死时间
峰面积（或峰高）——定量
类型 特点
分离效能高 （理论板数 n）
HPLC 104～105
GC
填充柱 >103 毛细管柱=106
分析速度快 几分钟～几十分钟 几分钟～几十分钟
灵敏度高 （最小检出量）
UVD 10-9g FD 10-13g
TCD 10-8g FID 10-13g
T 值越接近于1.0 色谱峰的对称性越好，测量的准确度 越高。采用峰高法测量时，应检查待测峰的T是否符合规 定。除另有规定外，T应在0.95～1.05之间。
C Cl O2 点燃 HCl
NaOH溶液 NaCl
适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析
仪器装置
样品
透
明
胶
无灰滤纸
纸
硬质玻璃 燃烧瓶
铂金丝燃烧、催化称 Nhomakorabea 燃烧分解操作（通O2 1-2 min，燃烧）
吸收液
水-NaOH（含碘、溴、氯药物） 例盐酸胺碘酮、碘苯酯、甲状腺粉
含量测定
•标准曲线法（多点对照） 绘制对照液浓度－吸光度标准曲线（3-5点） 拟合回归方程，求出供试液浓度
标准曲线
•计算分光光度法 多波长校正计算分光光度法
4药物定量分析与分析方法验证
本法特点是简便、快速、破坏 完全，尤其适用于微量样品的分析
（ 2） 仪器与材料
①仪器装置 燃烧瓶为500、1000或
2000ml无色、磨口、厚壁、 硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空 心，底部熔封铂丝一根， 下端呈螺旋状或网状
②称样用材料及称样 A. 固体样品 无灰滤纸 B. 液体样品 纸袋 C. 软膏类样品：将适量样品置不含 被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层 再用无灰滤纸包裹
本法适用于含卤素有机药物结构中 卤素原子结合不牢固的药物（如卤原 子和脂肪碳原子相连者）。
CH3 CH3 C CCl3
OH
例：三氯叔丁醇的测定 ChP （2005） 原理
➢三氯叔丁醇在NaOH溶液中加热回流水解， 氯元素全部转变成NaCl， ➢用剩余滴定法，即于水解液中加HNO3酸化， ➢再加入定量过量的AgNO3滴定液，使Cl-生 成AgCl沉淀， ➢过 量 的 AgNO3 ， 以 Fe3+ 为 指 示 剂 ， 用 NH4SCN液回滴定。
结构特点：C—X
（一）卤原子的活泼性
1. 卤原子与碳原子直接相连，卤原 子的活泼性和它直接相连的烃基的结 构有很大关系
（1）乙烯型卤和芳卤 不活泼
CH2 CH X
X
（2）烯丙型卤和苄卤 活泼
CH2 CH CH2 X
CH2X
（3）卤代烷型 介于两者之间
CH2 CH (CH2)n X
n≥2
2. 分子中所含卤原子的个数
例 碘苯酯的含量测定 ChP（2005）
原理 碘苯酯系有机碘化物，用氧瓶燃烧分 解，转变为碘化物，继而氧化为游离的I2， 并被定量地吸收于吸收液中，和NaOH反应，
生 成 I- 与 IO3- ， 加 入 Br2-CH3COOH 溶 液 ， 使全部转变为IO3- ，过量的溴以HCOOH及 通空气去除。加入KI，使与IO3-反应析出 游离I2，用Na2S2O3液滴定， I2与淀粉结合
第四章 药物定量分析与分析方法验证(药物分析)学习参考资料
案例的实施和实验操作
案例选择：选择具有代表性的药物品种和相应的分析方法 实验设计：根据药物品种和分析方法，设计合理的实验方案 实验操作：按照实验设计进行实验，注意实验操作的规范性和准确性 数据分析：对实验数据进行处理和分析，评估方法的可行性和可靠性
案例的总结和经验教训
案例分析：介绍具体的药物定量分析与分 析方法验证案例，包括实验设计、操作过 程、结果分析和结论。
生产控制：药物定量分 析可确保生产过程中的 药物成分一致，提高产 品质量和生产效率。
药品质量控制：通过药 物定量分析，可对药品 进行质量控制，确保药 品的安全性和有效性。
临床应用：药物定量 分析有助于医生根据 患者的病情制定合理 的用药方案，提高治 疗效果。
药物分析方法验证的定义和目的
定义：药物分析方法验证 是通过一系列实验，证明 所建立的分析方法是否符 合药品质量控制的要求和 标准的过程。
解释
实验设计的目的和原则
目的：确保药物分析方法的准确性和可靠性 原则：对照原则、重复原则、随机原则、均衡原则
实验操作的流程和注意事项
实验前准备：确保实验室环境、 仪器和试剂符合要求，制定详 细的实验计划和操作步骤。
样品处理：根据实验需要，对 药物样品进行适当的处理，如 溶解、稀释、离心等。
仪器操作：按照仪器说明书进 行操作，确保仪器处于正常状 态，并记录仪器使用情况。
注意事项：确保 实验操作规范， 避免误差，保证 实验结果的准确 性和可靠性
实验数据分析和处理的方法
实验数据的收 集和整理：确 保数据的准确
性和完整性
数据分析方法 的选择：根据 实验目的和数 据类型选择合
适的方法
数据处理流程： 对数据进行预 处理、统计分 析和可视化处
药物定量分析
3.剩余滴定法
含量% T （V空白－V供） F S 100%
V空白 V供试
与药物反应消耗的试液
未反应的试液
空白
供试
空白试验的作用： 1. 求出滴定液与药物反应的消耗量
2. 校正操作上的误差（供试与空白液
必/碘口服液
I ~ Na2 S 2O3 ~ I ~ AgNO3
nI nNa2 S2O3 nAgNO3 ( NaI )
T V F I%＝ 100% S
KI%
(C AgNO3 VAgNO3－C Na2S 2O 3 VNa2S 2O 3 ) M KI W
100%
m X供试 ( AX / AS ) 供试 ( AR / AS ) 对照 m R对照
C X供试
( AX / AS ) 供试 ( AR / AS ) 对照
C R对照
（供试品与对 照品体积相同）
R：对照品
S：内标物
X：供试品
c) 校正因子法（常用）
（A内标 / C内标 ） ） 对照 （A内标 / C内标 供试 f ( A对 / C 对 )对照 ( A供 / C X )供试
=198.17。
（ 9.8－0 ） 100 198.17 含量％＝ 100%＝11.3% 52.75 2 90 180.16
样品分析的前处理方法
一、不经有机破坏的前处理方法
1. 水解法：酸水解、碱水解
2. 还原法
二、经有机破坏的前处理方法
1. 湿法破坏
（1） 硝酸-高氯酸法 （2） 硝酸-硫酸法
λ2
λ1
测定波长 λ1下：A样1 = A药1 + A杂1
第四章药物定量分析与分析方法验证课件
Ar W
含量%= Ax×D ×100%(原料）
E×100×W
3.计算分光光度法 a.解线性方程组法，b.双入测定法 c.系数倍率法，d.导数法
片剂和注射剂
Ax×Cr×D×W 标示量%= ————————×100%
Ar×W样×标示量
A×D×W 标示量%=—————————————
E 11c%m×100×W样×标示量
(1).内标加校正因子 对照品+内标：进样
f= As/Cs( 内）
Ar/Cr(外）
供试液+内标
Cx=f Ax
As’/Cs’
1）一般两次进样量相同 2）两次所加内标量相同
HPLC. 测定（用A或h定量）
(2).外标法：
12))标单准点曲比线较法法：：C回x归=C方r AA程xr ，相关系数，求Cx
NaOH/H2O,Br用H2O/NaOH/H2O2,S用H2O2/H2O, Se用AgNO3
氧瓶燃烧 . (2)操作
称样于无灰滤纸中包好，并固定在铂丝下端， 露出尾巴。
在燃烧瓶中加入规定吸收液，快速通氧使之充 满瓶子。
点燃滤纸包尾部，迅速放入燃烧瓶，按紧瓶塞， 少量水封住瓶口。
燃烧完后，振摇，使烟雾全部吸收于吸收液中。 用适当方法测定，同时做空白。
+ 2KBrO3
3 N
+3N2+3H2O+2KBr
含量计算
1. 直接滴定：
原料：含量= T.V(mg) ×F×100%
W
F: C/C0(浓度系数）
T·V·F×W 片剂的标示量%=———————×100%
W×标示量
2.间接滴定
(1)置换滴定
待测物与化合物A反应, 生成B, 再用标准滴定液
第四章药物定量分析与分析方法验证
(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供 试 品 ＋ 试 剂A 化 合 物 B 化 合 物 B＋ 滴 定 液 C 化 合 物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量
计算同直接滴定法
2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴 定液A，使它和样品反应，等反应结束后，再 用另一种滴定液B来回滴剩余的滴定液A。
含有机结合的卤素
间接银量法测定
例：三氯叔丁醇的含量测定
2、水解后测定法 例：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4
定量、过量
△
MgSO4 + 2 C17 H35COOH
Na2SO4 + 2H2O
2NaOH + H2SO4
过量剩余
(三)经氧化还原后测定法
1、酸性或碱性还原后测定
（1）对照品比较法 供试品的浓度为：
AX CX Cr Ar
原料药：
Ax C r D CX D 含量% 100%＝ 100% W Ar W
Ax C r D 平均片重 片剂：标示量 ＝ % 100% Ar W 标示量
Ax C r D V 液体制剂：标示量 ＝ % 100% Ar V 标示量
1% E1cm ②
：一定波长下，溶液浓度为1%（W/V）， 液层厚度为1cm时，物质的吸收度- -定量依据
两者间的关系：
M 1% E1cm 10
或
E
1% 1cm
10 M
2、对溶剂的要求 溶剂的截止波长：使用范围不能小于截止
使用波长
溶剂的纯度：检查所用溶剂在检测波长处
是否符合要求
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第四章药物定量分析第四章药物定量分析第一节定量分析样品的前处理方法常用的处理方法：药物分析中常用的分析方法 1.不经有机破坏的分析方法2.经有机破坏的分析方法一．不经有机破坏的分析方法（1）直接测定法。
如富马酸亚铁( 用于各种原因引起的缺铁性贫血) 溶于热稀矿酸，采用铈量法，邻二氮菲作指示剂富马酸亚铁的含量测定:取本品约0.3g，精密称定，加稀硫酸15ml，加热溶解后，放冷，加新沸过的冷水50ml与邻二氮菲指示液2滴，立即用硫酸铈滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。
每1ml硫酸铈滴定液(0.1mol/L)相当于16.99mg。
（2）经水解后测定法1. 直接回流后测定法. 例如：三氯叔丁醇的含量测定CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH = (CH3)2CO +3NaCl + HCOONa +2H2ONaCl+AgNO3= AgCl + NaNO3 AgNO3+ NH4SCN = AgSCN + NH4NO32. 用硫酸水解后测定法. 例如：硬脂酸镁的含量测定Mg(C17H35COO)2 + H2SO4 =MgSO4 + 2C17H35COOH H2SO4+2NaOH =Na2SO4 + 2H2O取本品约0.1g，精密称定，精密加硫酸滴定液(0.05mol/L)50ml，煮沸至油滴澄清,继续加热10min，放冷至室温，加甲基橙指示液1-2滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。
每1ml 硫酸滴定液(0.05mol/L)相当于2.016mg 的MgO 。
（3）经氧化还原后测定法1. 碱性还原后测定例如：泛影酸（用于泌尿系造影）的含量测定(曙红钠指示剂)2. 酸性还原后测定(硫酸铁铵指示剂) 例如：碘番酸（口服胆囊造影剂）的含量测定 Zn 还原后银量法3. 利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量（1）含锑药物例如：葡萄糖酸锑的含量测定Sb5+ +2KI =Sb3+ + 2K+ + I2 I2 +2Na2S2O3 =2NaI +Na2S4O6 （连四硫酸钠 ）2）含铁药物 2Fe3+ + 2KI =2Fe2+ + 2K+ + I2 I2 +2Na2S2O3 =2NaI + Na2S4O6二、经有机破坏的分析方法药物分析中常用的有机破坏的方法有 干法破坏 湿法破坏 氧瓶燃烧法(一)湿法破坏 HNO3-HClO4法； HNO3-H2SO4法 ；H2SO4-硫酸盐法； HNO3-H2SO4-HClO4法；H2SO4-H2O2；H2SO4-KMnO4COOH I I I NHCOCH 3CH 3CONH COOH H 2N NH 2+ 11NaOH + 3Zn + 3NaI + 2CH 3COONa + 3NaZnO 2 + 3H 2O NaI + AgNO 3 AgI + NaNO 3(二)干法破坏（加Na2CO3或MgO以助灰化；温度控制在420℃）本法系将有机物灼烧灰化以达分解的目的。
将适量样品置于瓷、镍、铂坩埚中，常加无水碳酸钠或轻质氧化镁等以助灰化，混合均匀后，先小火加热，使样品完全炭化，然后放入高温炉中灼烧，使其灰化完全，即可.(适用于湿法不易破坏完全的有机物（如含氮杂环类有机药物）以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物)(三)氧燃瓶燃烧法(oxygen flask combustion method)原理：将有机药物放入充满氧Array气的密闭的燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或测定含卤素有机药物或含硫、氮、硒等其它元素的有机药物。
1.仪器装置500ml, 1000ml, 2000ml, 磨口、硬质玻璃锥形瓶;2. 称样：固体样, 液体样;3. 燃烧分解操作法;4. 吸收液的选择用于X、S、Se等的鉴别、检查、含量测定时多数是H2O或H2O-NaOH；少数为H2O-NaOH-H2O2应用示例：碘苯酯（脊髓蜘蛛膜下腔造影剂，诊断药）的测定第二节定量分析方法特点一、容量分析法容量分析法的特点：操作简单、快速；比较准确（RSD＜0.2%）；仪器普通易得。
（二）、容量分析法的计算问题1. 滴定度(T）：每毫升滴定溶液相当于被测物质的量(mg/mL)。
2. 滴定度的计算aA + bB =cC + dD T = MA×b/a×V B（B 指标液，A指被测物）3. 百分含量的计算：（1）直接滴定法D% = V×F ×T/W×100% F= 实际标定的浓度/规定的浓度（滴定液浓度校正因子）（2）间接滴定法（回滴定法；剩余滴定法）D% = （V O –V B) ×F×T/W×100%二、光谱分析法（一）紫外-可见分光光度法（200nm～760nm)1. 特点：灵敏度高，可达10-4g/ml～10-7g/ml 准确度高，RSD（%）为2%～5% 仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用范围广。
2.朗伯-比耳定律A = ECL ,E1%1cm = ε×10/M5. 测定方法要求供试品溶液的A应在0.3 ～0.7 常用方法：对照品比较法：C x=(A x/A r)C r; 含量%=C x×D/W×100 %；吸收系数法：含量%= (E1%1cm )x/(E1%1cm )r ×100 %；计算分光光度法：V A的三点校正法[（1）供试品中干扰物质（有关物质及稀释用油）的吸收在310~340nm的波长范围内呈线性，且吸收度随波长的增大而下降。
即在维生素A最大吸收波长附近，干扰物质的吸收几乎呈一直线。
（2）物质对光的吸收具有加和性，即在供试品溶液的吸收曲线上，各波长处的吸收度是维生素A的吸收与无关吸收的加和值，吸收曲线也是两者吸收曲线的叠加。
]（二）荧光分光光度法( 在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC ) 1.特点：灵敏度高，可达10-10g/ml ～10-12g/ml ；在低浓度进行测定,防止F与C不成正比及自熄灭作用; 用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减; 灵敏度高，但干扰因素多;制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性用样品量少，操作简单，方法快速，应用范围较广2. 荧光分析仪有二个单色光器—激发单色光器与发射单色光器；且激发光源、样品池和检测器成直角3. 含量测定常用的方法对照品比较法:C i = (R i-R ib)/(R r-R rb) ×C r ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片三、色谱分析法方法分类按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；HPLC。
（一）HPLC法1.对HPLC仪器一般要求色谱柱、流动相按品种项下要求。
2.系统性试验色谱柱的理论板数：n= 5.54(t R /W h/2)2. 分离度：R = 2（t R1 –t R2)/(W1 + W2); 要大于1.5;拖尾因子：T = W0.05h/2d1 应在0.9 ～1.053. 测定方法:内标法加校正因子测定供试品中主成分含量, 外标法测定供试品中主成分含量(标准曲线法，外标一点法) 应用示例：RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用标准曲线法，如头孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢唑啉钠用外标一点法..（二）GC法1.对GC仪器一般要求载气为氮气；色谱柱为填充或毛细管柱2. 系统性试验同上述HPLC法，测定方法亦同应用示例：Ch.P(2000)收载的月桂卓酮、维生素E及其片剂、注射剂、甲酚皂溶液等均采用GC法中的内标法加校正因子测定含量。
四、方法的选择和应用药品常用含量的测定方法有容量分析法、光谱法和色谱法，各法具有不同的准确度、专属性和灵敏度，应根据样品中被测组分含量高低及共存组分干扰程度等因素选择合适的分析方法。
原则：主药量大，附加成份不干扰- 容量法或重量法测定;主药可溶于有机溶剂提取后测定- 光谱法;主药量少- 光谱法或色谱法.1、化学原料药纯度较高，限度严格，如果杂质可严格控制，选择方法时可侧重准确性。
2、中药材及其成方制剂成分复杂，被测组分一般含量较低，共存组分干扰严重，选择方法时应侧重于方法的专属性和灵敏度。
3、化学药物制剂种类较多，选择分析方法时应根据制剂中被测组分的含量高低、复方制剂中共存组分影响以及辅料成分的干扰程度进行选择。
（见教材)4、应用实例。
（见教材)第三节药品质量标准分析方法验证一、准确度指用该方法测定结果与真实值接近的程度，用回收率(比值）表示(指在实际样品中加入已知量的标准物质和样品于相同条件下进行测量,用所得结果计算.)（一）含量测定方法的准确度1.原料药：可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确度的另一方法测定的结果进行比较。
2. 制剂要考察辅料对回收率的影响。
采用在空白辅料中加入原料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共9个数据来评价回收率的RSD＜2%；用UV 和HPLC发时，一般回收率可达98%～102%；容量法可达99.7%～100.3% 回收率% = （测定平均值—空白值）/加入量×100%二、精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果之间的接近程度。
（一）精密度表示方法1. 偏差(deviation , d) d= 测得值-平均值=X i-X2. 标准偏差（standard deviation, SD或S）S =[(∑X i –X)2/(n-1)]1/23. 相对标准差(relative standard deviation, RSD)也称变异系数(coefficient of variation, CV) RSD=标准偏差/平均值×100%=S/X ×100%（二）重复性、中间精密度及重现性1. 重复性在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果的精密度.2. 中间精密度在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。
3. 重现性在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。
三、专属性是指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。
鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性。
（一）鉴别反应应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分的样品均应呈现负反应。
四、检测限（limit of detection, LOD) 是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量，是限度检验指标。
它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。