影响血凝和血凝抑制试验结果的几个重要因素
禽流感血凝和血凝抑制试验的影响因素分析
与 血 液 中脂 类 含量 过 高有 关 。处理 办法 是 用一 根 洁 净 的玻璃 或 塑 料 棒 将胶 冻 样 的血 清挑 起 ，在管 壁 上挤 压 几下 ，用适 当的转 速 和 时 间离 心 ，即得到 供抗 体检 测 的血清 样 。 １ ． ４ 血清 的保 存 在５ ｄ 内测 定 的血清 样 品可放 置 于４ ℃的冰 箱 中冷藏 。样 品待 检 时 间超 过 １ 周 的 ，需 低 温冰冻 保存 。保 存 的血 清样 品一 定要 作好 标 记 和 封 闭 。有 时冷 冻保 存 的 血清 样 品需 要 多次 检测 ，血 清需 要 反 复 冻 融 ，这 时要 注 意 ，检 测结 果 已不准 确 。笔 者选 择 免 疫抗 体水 平 较 高 的３ Ｏ 份 血清 ，平 均 分成 Ａ、Ｂ、ｃ ３ 组 ，Ａ 组 被检 血 清反 复 冻 融 ，Ｂ 组 检 测抗 原 反 复 冻融 ，Ｃ 组 为 对 照组 。３ 个 试 验组 同时 做血
禽流感血凝和血凝 抑制试验 的影 响因素分析
郭 新 钢
（ 乌鲁木齐经济技术 开发区 （ 头屯河 区 ）畜牧兽医站 ，新疆乌鲁木齐
摘 要 ：在进 行禽 流感 血 凝 和血 凝 抑制 试 验 时 ，要严 格 按 照操 作 规 程 ，考 虑 多方 面 的 因素 ， 地 进 行操 作 ，尽量 消 除 不利 影 响 ，减 少误 差 ，确 保 试验 结 果 的准 确 性 。 关键 词 ：禽 流感 血凝 ；血 凝抑 制 ；试 验
影响禽流感血凝和血凝抑制试验的因素及对策
影响禽流感血凝和血凝抑制试验的因素及对策作者：郑海玲来源：《兽医导刊》 2017年第8期常用试验方法可以用于鉴定流感病毒分离株HA 亚型，也可以对禽血清中是否存在抗原亚型相同的免疫抗体进行检测。
这种方法操作简单、方便、灵敏度高，在基层动物防疫部门得到广泛应用。
但是很多因素会导致HA-HI 试验结果失真，难以取得预期检测效果，下面将对相关影响因素与对策具体探究。
一、处理与保存血清1. 溶血。
很多因素影响下会使溶血形成，比如，注射器清洁不当，容器不干燥或者受到污染；穿刺方法不正确，损伤了组织；长时间的淤血；过快的抽血速度；将血液向容器中注入，未能将针头取下或者过快的注入速度使大量泡沫产生，久而久之会形成溶血；过于剧烈的震荡，这些都需要在操作中格外注意。
可以在采血时应用一次性注射器，让血清在注射器中自然析出，可以降低溶血发生率。
2. 血清分离。
采集完的血液呈45 ～ 60o 角于室温（20 ℃ ～25 ℃）下放置约2 ～ 3h 即可分离出血清，条件允许时可先将采好的血液呈45 ～ 60o 角于4℃冰箱放置约1h，然后用低速离心机离心3 ～ 5min，转速为3000 ～ 5000 转。
3. 胶冻样血清。
在采集血样中，因为血液中存有过多脂肪会出现胶冻样血清，处理这种血清的方法是应用干净的玻璃棒或者塑料棒挑起胶冻样的血清，在管壁上挤压，直到胶冻样消除为止，然后快速离心，这样可以快速获得检测用的血清样。
4. 保存血清。
血清通常在冰箱中冷藏，5℃为适宜温度。
如果检测用的样品需要保存1 周，需要放置冷冻箱中。
保存好的血清一定要做好标记与封闭处理，避免弄混。
有的血清样品需要反复检测，就需要多次冻融，这样将难以确保检测结果准确。
有研究人员将30 份抗体水平较高的血清作为试验样本，分为①组、②组和③组，①组为被检测血清反复冻融，②组为检测抗原，也反复冻融，③组为对照组。
3组均做血凝抑制试验，结果显示：①组抗体水平较对照组低1 个滴度，②组抗体水平较对照组低2 个滴度。
浅析影响血凝和血凝抑制实验的原因
４ 加样
如果短时间内不能检测 ，应放在一 ２ Ｏ ℃ —． ８ Ｏ ｃ 冰箱内保存 ，运送 病毒悬液和红细胞悬液在使用前一定要摇匀 ，以保证每一 血清 时 应将 血 清放 在 盛有 冰 块 的保 温设 备 中运 送 。被 检血 清 应避 孔 中加 入 的浓 度 准确 一致 ，避免 加 入 的浓 度高 低不 一 ，人 为造 成 免反 复 冻融 ，反 复冻 融 的血 清抗 体效 价 会 降低 。 血清 保存 不 当 ， 误 差 。摇晃 红 细胞 悬 液 时力 度不 宜 过大 ，防止 红 细胞 的结 构被 破 腐 败 变质会 严 重影 响试 验结 果 。 坏 ，造 成溶血 。 加液体时 ，避免吸头与反应板孔接触造成污染。尤其是在最 （ １ ）反 应 板 应 选 择 一 次 性 使 用 ９ ６ ￣ Ｌ ｖ 型 板 ，要保 持 板 面及 后加入红细胞悬液 时，孔 内已有稀释液 、血清 、单位抗原等 ，如 凹孔 的 干净 ，板 面应 水平 ，不能 弯 曲 、倾 斜 ，使用 不 合格 的反应 果 吸头 接触 到 孔 内混 合液 ，会造 成 各个 孔 内液 体相 互 污染 ，导致 板 会 严 重影 响结 果 。板 孔 倾斜 的角度 会 影 响红 细胞 的 沉降 速度 ， 试 验 结果 出现 误差 。所 以 ，在 使 用 移液 器 时 ，一定 要保 持 加样 器 角度 过 小 ，红 细胞 沉 降加 快 ，血 凝价 偏 低 ，血 凝抑 制 价偏 高 。角 吸 头与 凝集 板 孔 间 的距 离 ，以保 证 每个 凝集 孑 Ｌ 内液 体 数量 和浓 度
１ 被检样品
种 ，应— ２ ０ ｏ Ｃ 保存 。在进 行抗 原效 价 的测定 时 ，同一种 抗原 最好
１ ． １ 采样 两 瓶 以上 混合 后使 用 ，并做 重复 试 验 ，取 其平 均值 ，减 少误 差 。 （ １ ）随 机 采集 的被 检 样 本要 能够 代 表 整个 鸡 群 。一 般条 件 抗 原 的凝集 价 在外 界 不稳 定 ，冷 藏 保存 或反 复 冻融 时 其 血凝 价降
血凝和血凝抑制试验影响因素分析
血凝和血凝抑制试验影响因素分析张智鹏【摘要】血凝和血凝抑制试验是检验新城疫、禽流感等疫病抗体效价的一种常用方法,该方法具有经济、简便、灵敏、快速等优点,已被许多市、县级动物疫病预防控制机构实验室所采用,但该试验影响因素很多,常常导致试验结果不准确.作者从试剂的配制、器材的选择及操作中容易出现的问题等方面进行分析,从而避免或减少不利因素的影响,提高试验的准确性.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2010(037)010【总页数】3页(P224-226)【关键词】血凝;血凝抑制;影响因素;分析【作者】张智鹏【作者单位】汉中市动物疾病预防控制中心,汉中,723000【正文语种】中文【中图分类】S854.4+3某些病毒(如禽流感病毒和新城疫病毒)能凝集禽类的红细胞,这个现象称为病毒的血凝(HA),可以用来检测样品中病毒的有无和含量的多少,这不是一个特异性反应,这种现象可以被特异性抗体所抑制,即血凝抑制试验(HI),具有特异性。
因此,血凝—血凝抑制试验可用于鉴定病毒、诊断病毒性疾病和抗体效价的监测。
1 样品的采集与处理1.1 样品的采集采血时环境温度最好在20～25℃之间,利于血液凝固。
禽类一般在翅静脉采血。
用一次性注射器每只采集大约2.5 mL血液,去掉针头,缓慢注入清洁灭菌的青霉素瓶中或塑料离心管中,平放,使血液面最大限度与空气接触。
放置40 min左右,等血液凝固后包扎、整理,放在冷藏室内过夜。
第2天即可析出清亮的血清,将上层血清倒在塑料离心管中。
血液样品在运输过程中防止剧烈震动,产生溶血,影响结果判定。
也可将全血立即进行2000～3000 r/min离心10 min,倒出上层血清。
离心后的血清个别呈胶冻样,可能是因为血内的脂类成分过高所致(刘奇峰等,2009)。
在试验前用牙签挤压,就可将血清挤出。
1.2 样品的处理1.2.1 样品的储藏一般情况下,在5 d内测定的血清样品,可放置于4℃冰箱中冷藏,待检时间超过1周的样品需冷冻保存。
影响禽流感血凝-血凝抑制试验的主要因素
可用 于禽 流感亚 型抗 体水平 的检 测和 流感 分离 株
Ｈ Ａ亚 型鉴 定 。该试 验 因其 具有 简便 、 快速、 准确、 实用 的特 点 ，在县 级兽 医实验 室被广 泛 应用 于禽 流 感亚 型抗体 水平 的检测 。 但 在试 验过 程 中， 人 为 因素 的影 响很 大 ， 常 常 因为操作 不规 范等 ， 导 致试 验 结果不 准确 ， 甚至 失败 。 现 就试 验过 程 中常见 的
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ３ － １ ０ － １ ８
影响禽流感血凝 一 血凝抑制试验的主要 因素一钟蕴珠， 等
经 验 交流 ・ ５ １ ・
图２
非 特 异性 凝集 现 象
０ ． ５ ｍ Ｌ的 血 清 中 加 入 ０ ． ０ ２ ５ ｍ Ｌ的鸡 红 细 胞 ， 轻
滴 度 上升 。
１ ． ３ ４个血凝 单位 （ Ｈ ＡＵ ） 抗 原 的配制
２ 非 特 异 性 凝 集 因子
在 进行 鸭 、 鹅 等水 禽 的禽 流感 抗体 检 测 时， 若 使 用鸡 而非相 应 的鸭或 鹅 的红细 胞悬 液 ，则水 禽
血清 中可 能存在 的 ，对 鸡红 细胞 有非特 异 性凝 集
几个 主要 问题 总结 如下 。
０ ． ０ ２ ５ ｍ Ｌ弃之 ；每孔 均加 入 ０ ． ０ ２ ５ ｍ Ｌ １ ％ 鸡红 细 胞悬 液 。振荡 混匀 ， 室温 下静 置约 ４ ０ ｍ ｉ ｎ后观 察 结 果—— 若前 ２孔 完全 凝集 （ 第 ２孔 为完 全凝集
的终 点） ， 则视 为抗 原配 置正确 （ 见图 １ ） 。
影响禽流感血凝及血凝抑制试验结果的因素及操作规范
2021年3月第38卷第3期影响禽流感血凝及血凝抑制试验结果的因素及操作规范高爱萍，刘胜宇（江苏省徐州市畜牧兽医站，江苏徐州221000）禽流感病毒、鸡新城疫病毒均能凝集鸡的红细胞，这种红细胞凝集现象可以被特异性免疫血清抑制，可用于检测禽注射疫苗后抗体应答水平及证实是否曾感染，广泛应用于禽流感等重大动物疫病防控中。
HA-HI 试验经济、方便，结果可靠，作为WHO 采用的全球禽流感监测方法，也被纳入我国高致病性禽流感诊断技术的国家标准。
在实际操作中，多种因素均会影响血凝抑制试验结果，从而导致试验结果不准确。
笔者长期从事实验室检测工作，参考行业相关资料，现将影响HA-HI 试验结果的因素作一分析。
一样品因素正确采集被检禽的新鲜血液，及时分离血清，避免溶血及腐败变质（有些样品凝固后呈胶冻样，影响检测结果，应避免喂食后立即采集），并做好样品标记及采样记录。
血清分离后及时检测或放置在4°C 冰箱保存。
若暂不检测，可冷冻保存（-20°C 以下），血清测定前须恢复至室温，并充分摇匀。
二1%红细胞因素配制1%的红细胞，最好采集至少3只SPF 公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康鸡的血液。
最好采集成年公鸡的血液制作红细胞供体，太小的鸡红细胞稳定性差，会影响检测结果。
在HA-HI 试验过程中，有时用鸡红细胞检测鸭或鹅等血清样品时会出现非特异性凝集现象，因此，在试验过程中尽量选择与检测样品相同来源的非免疫禽的红细胞。
采集好的血液与等体积的阿氏液混合，或加入3.8%柠檬酸钠，肝素作为血液抗凝剂可能对红细胞凝集反应有影响。
采集好的血液尽快送至实验室，用pH 7.20.01mol/L PBS 洗涤3次，每次以1000r/min 离心10分钟后倒掉上清液，尽可能吸去红细胞表层的白细胞，然后再加入20~30体积的pH 7.20.01mol/L PBS ，重新悬浮红细胞。
洗涤后用PBS 配成体积分数为1%的红细胞备用。
血凝试验和血凝抑制试验的影响因素及应对措施
液 、 原 、 清等 ， 抗 血 如果 管嘴 接触 到孔 内混 合 液 ， 会造 成各 个 孔 内液体 相互 污染 。 以在使 用移 液器 时 ， 定要 保持 所 一 加样 器管嘴 与凝集 板孔 间的距离 ， 以保证每 个凝集 孔 内液 体数量 和浓度准确 。
摘 要 ： 绍 了血凝试验 （Ａ 和血 凝抑制试验 （Ｉ 中的常见 问题 ， 介 Ｈ） Ｈ） 主要 包 ： 照孔凝 集； 括 对 全部凝 集； 细胞 全部 下 红 沉； 标准 阳性对照血 清的抗体 效价与原 结果误 差大于 １ 个滴度 ； 泪滴状流 淌 （ 完全血 凝抑制） 细等； 线 结果 出现 慢或 结果 出现快 ， 且整板无凝 集现 象等 。 并 分析 了其影 响 因素 ， 并提 出了应对措 施 。
滴 度 ； ５） 状流淌（ （ 泪滴 完全 血凝抑 制） 细 ；６） 线 （ 结果 出现慢 或结果 出现快 ， 且整板 无凝集 现象 ；７） 并 （ 凝集 板 出现 跳孔 现 象 ； ８凝 集不 明显 ， （） 无法 判定结果 。
（） １在使用 微量 移液器 时 ， 液体 加入量 发生 误差 。 使 在
年公鸡 的血 ， 一般 要求 用非 免 疫公 鸡 ， 如果 用 免疫 公鸡 代 替 ， 应增加洗涤次 数和时 间。 但
ｌ 血凝试验 （Ａ 和 血凝抑制试验 （ 中的常见 问题 Ｈ） …）
血凝试 验（ Ａ） Ｈ 和血凝 抑制 试验（ ） ＨＩ 中的常 见 问题 主
（ ） 集板 不干 净 。 ４凝 目前 ， 验单位 和基 层多 使用一 次 实
而成为我 国各 地动物 防疫监督 机构和养殖场户 进行 流行病 学调查 、 免疫程序制定及 免疫效果监测 等的主要手段之 一。 尽 管此监测方法操作简便 、 快捷 、 准确 和实用 ， 但是在实践 中 由于某些 因素的影响， 导致试 验结果不 准确， 甚至无法判定 。 笔者根据多年的实践操作将实验中的影 响因素浅析如下。
不同因素对禽流感病毒H7亚型血凝——血凝抑制试验的影响
202310263试验研究不同因素对禽流感病毒H7亚型血凝—血凝抑制试验的影响张蕾蕾（珠海市斗门区动物卫生监督所，广东珠海 519000）摘要：本文分别从抗体稀释液、红细胞悬液、孵育温度、抗体作用时间等不同因素分析禽流感病毒H7亚型血凝血凝实验效果的影响，在操作、方法、人为等因素进行规范，从而避免血凝抑制试验的失败和实验准确性，进而提高免疫抗体的监测准确性、可靠性、稳定性，为一线疫病监测特别是流感检测提供可鉴之资。
关键词：血凝抑制实验；禽流感病毒H7亚型；抗体监测；影响因素中图分类号：S858.31 文献标志码：B 文章编号：1003-8655（2023）10-0010-03高致病性禽流感对禽类养殖业的危害性非常大，目前最常用最有效的预防及控制该类疫病发生的主要途径是进行疫苗的免疫，对于经过免疫后家禽的抗体水平的监测结果直接影响着整个群体的免疫效果、疫病防控、养殖厂的经济效益。
血凝和血凝抑制试验被广泛应用于监测禽流感病毒抗体效价、病毒鉴定、监测病毒抗原的变异、流行病原学调查、动物群体疫情的监测等。
本研究主要研究稀释液、红细胞悬液、温度、抗原—血清作用时间、反应板类型，对禽流感病毒H7亚型血凝—血凝抑制试验的影响，为禽流感血凝—血凝抑制试验的进一步研究和应用奠定基础。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 动物材料采集珠海市斗门区家禽批发市场的肉用鸡血样20头份，离心分离血清编号，作为试验用血样；6只非免疫肉鸡。
1.1.2 试剂和仪器96孔微量反应板、加样槽、移液枪、枪头、烧杯、离心管；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、葡萄糖、柠檬酸钠、柠檬酸、氢氧化钠、盐酸均为国产分析纯；H7血凝抑制抗体检测抗原，H7阳性对照血清、阴性对照血清均为哈尔滨维科生物技术有限公司；酸度计，上海仪电；TG16W高速离心机，长沙湘智；恒温培养箱，上海精宏；微量振荡器，江苏新康；小面板磁力搅拌器，德国IKA；超纯水仪，Direct Q5；高压灭菌锅，重庆雅玛拓。
禽流感病毒血凝与血凝抑制试验影响
20 ·2021.24Experimental research | 试验研究0 引言血凝（HA ）是指有些病毒的血凝素使一些动物的红细胞产生凝集。
而血凝抑制（HI ）则是抗体特异性地附着在HA 分子的抗原位点上，干扰HA 与红细胞受体的结合，抑制HA 凝集红细胞的能力。
这两种方法应用在病毒鉴定、抗原变异、抗体效价监测以及病毒性疾病的诊断等方面，也是新城疫免疫效果以及禽流感疫情的主要监测手段，操作简单，反应速度快，灵敏度较高，可批量化监测。
但操作过程中很容易受其他因素的影响，导致检测结果不准确。
因此，为保证检测结果准确性，应避免各种因素的影响。
1 影响因素血凝和血凝抑制试验影响因素主要有以下几个方面：红细胞、抗原配制、稀释液（PBS ）、试验温度 、试验耗材、加样操作、稀释操作、反应时间、非特异凝集素等。
1.1 红细胞 红细胞悬液浓度是影响试验准确性的重要因素之一，不同个体对抗原敏感性不同。
为避免鸡只红细胞发生自凝，在配制1%红细胞悬液时，要求至少使用3只SPF （Specific Pathogen Free ，无特定病原）级或无禽流感和新城疫抗体的健康成年公鸡。
制备红细胞悬液时，采集抗凝血液与阿氏液等体积混合，使用PBS 缓冲液，以2 000 r/min 离心5～10 min ，重复3次。
一定要保证冲洗干净血液中的白细胞，否则会增加非特异性反应，影响试验结果。
洗涤后按照1份红细胞和99份缓冲液的比例配制成悬液，于4 ℃保存备用。
但是配制好的1%红细胞悬液不能长期保存，超过3 d 后，需另行配制。
若配置好的红细胞悬液出现溶血，一定要重新配置，不能继续使用[1]。
1.2 抗原配制1.2.1 4单位抗原配制配制浓度必须准确，抗原浓度高，抗体效价偏低；抗原浓度低，抗体效价偏高。
配制4单位抗原时，配制人员需检查血凝价是否准确，然后进行系列稀释，使最终稀释度为1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6和1∶7。
影响血凝抑制实验的因素
影响血凝抑制实验的因素目前，县级实验室做的最多的要数血凝试验和血凝抑制试验。
经过反复操作，不断摸索，逐渐找出一些影响血凝抑制试验的因素。
现列举出来，以便日后引以为戒。
1 红细胞悬液浓度：来源于不同个体鸡的红细胞，对抗原的敏感性不尽相同。
因此实验时最好用3-4只未免疫鸡。
配制红细胞时，红细胞浓度低，HI滴度就会下降；红细胞浓度高，HI滴度就会上升。
有实验表明，红细胞浓度增加一倍，HI滴度就会上升20.7-0.9，因此，红细胞浓度以1％为宜。
2 抗原的稀释倍数：配制抗原时，浓度必须准确。
当抗原浓度高时，HI抗体效价就下降；当抗原浓度抵时，HI抗体效价就上升。
3 实验用的稀释液（PBS）：稀释液的pH值对实验有影响。
稀释液的pH值5.8以下，红细胞容易产生自凝现象；pH值在7.8以上凝集图形易消失，也会造成实验误差。
而pH值为7.0时，红细胞沉降最充分，图形最清晰，HI效价也最高，因此实验时用ph7.0-7.2的稀释液。
4 实验时的温度：实验时的温度，从4-37℃，随着温度上升，HA与HI滴度提高，但在37℃时，凝集的红细胞易洗脱；4℃以下红细胞易产生自凝，故操作常用18-22℃。
（以上所阐述的是实验室操作过程中存在的几点因素，在实际工作中，也存在着其他诸多原因，如采样的时间、采样的数量、以及由疫苗产生的影响等第。
）血凝抑制试验：一些动物红细胞(如鸡、豚鼠等)以及人“O”型血红细胞上有流感病毒受体，遇流感病毒可产生红细胞凝集现象，简称血凝。
若将特异性抗体与流感病毒(血凝素)预先作用后再加入红细胞则不产生凝集，称为血凝抑制现象。
用定量血凝素与不同稀释度血清抗体作用后，能完全抑制血凝的最高稀释度，即为血凝抑制抗体效价。
血凝抑制试验主要材料：1 大孔塑料板，1mL吸管或1mL移液器。
2 双份血清收集及处理：急性期血清于发病3d内采取，恢复期血清于发病后2～4周采取。
取0.1mL已分离的血清加入0.9(或0.4)mL霍乱滤液(RDE)(即1∶10或1∶5稀释)摇匀，于37℃水浴中过夜，以去除血清中的非特异性抑制素，次日置56℃水浴50min以灭活多余的RDE。
血凝影响因素实验报告
血凝影响因素实验报告血凝影响因素实验报告引言：血液凝固是人体保持正常生理功能的关键过程之一。
血液凝固的失调可能导致出血或血栓形成等严重疾病。
为了深入了解血凝的影响因素，我们进行了一系列实验来研究血液凝固的机制和调节因素。
实验一：温度对血凝的影响在这个实验中，我们分别将两个试管中的血液置于不同的温度下，并观察血液凝固的时间。
一个试管放置在室温下，另一个试管则放置在冰箱中冷却。
结果显示，在较低的温度下，血液凝固的时间明显延长。
这表明温度是一个重要的影响血凝的因素之一。
较低的温度可能会减缓凝血因子的活性，从而影响血液的凝固过程。
实验二：pH值对血凝的影响我们调整了两个试管中的血液的pH值，一个试管中的血液pH值为7.4（生理正常范围），另一个试管中的血液pH值为6.0（较低）。
实验结果显示，在较低的pH值下，血液凝固的时间明显延长。
这说明血液的酸碱度对血凝过程有一定的影响。
较低的pH值可能会降低凝血因子的活性，从而延缓血液的凝固。
实验三：离子浓度对血凝的影响我们分别在两个试管中添加了不同浓度的钠离子，一个试管中的钠离子浓度为正常范围（135-145mmol/L），另一个试管中的钠离子浓度为高浓度（>145mmol/L）。
实验结果显示，在高浓度的钠离子存在下，血液凝固的时间明显缩短。
这表明离子浓度对血凝有一定的影响。
高浓度的离子可能会促进凝血因子的活化，从而加速血液的凝固。
实验四：药物对血凝的影响我们在两个试管中分别添加了肝素和阿司匹林，观察其对血液凝固的影响。
实验结果显示，肝素显著延长了血液凝固的时间，而阿司匹林则显著缩短了血液凝固的时间。
这说明药物对血凝有着不同的影响。
肝素是一种抗凝血药物，可以抑制凝血因子的活性，从而延缓血液的凝固。
而阿司匹林是一种抗血小板药物，可以抑制血小板的聚集，从而减少血栓的形成，加速血液的凝固。
结论：通过这一系列实验，我们发现温度、pH值、离子浓度和药物等因素都对血液凝固有着明显的影响。
影响血凝及血凝抑制试验结果的因素
2021年第07期血凝和血凝抑制试验是目前县级疫控中心兽医实验室进行禽流感、新城疫动物疫病监测最常用的试验方法之一。
但血凝和血凝抑制试验在实际操作中经常受到多种因素的影响,增加了试验误差,甚至改变了试验结果,本文结合实际工作,将影响试验结果的因素进行总结分析。
1被检样品对试验结果的影响因素采样后将样品倾斜放置2~4h (防止暴晒),让其自然析出血清(夏天放在室内,冬天可以放置在37℃温箱内析出)。
避免摇晃,防止溶血。
采血后尽量避免马上离心,防止分离后的血清形成胶冻状或不完全胶冻样。
特殊情况需要分离血清时,需1500~2000转/m i n ,离心5m i n 。
采样后要及时送检,不能在24h 内送到的,全血要分离出血清,将血清冷冻后送检。
分离的血清在冷藏温度下(4℃)存放不能超过5d ,冷冻温度下(-20℃)不能存放时间过久(6个月为宜),冷冻后的血清不能反复冻融(不宜超过3次),会直接导致抗体效价降低。
血清样品保存不当,无论是运送中还是检验中,腐败变质会严重影响试验结果。
2鸡红细胞的制备对试验结果的影响因素实验室应准备3只SPF 公鸡,条件不足的也可选免疫过禽流感和新城疫疫苗的的健康公鸡,但应比正常洗涤血球次数增加3~5次,洗去红细胞表面的抗体,以减小结果误差。
给大公鸡采血时要做到无菌操作,用一次性注射器(10m L 、9号针头)可在一个大容器内先加入抗凝剂,采血后拔下针头将容器倾斜,沿着容器壁将血缓缓打入,注意速度不要太快,以免挤破红细胞。
抗凝剂要适量添加(可以实际经验为准),加入的过多会影响红细胞的结构,抑制凝集现象产生,加入过少则血液出现凝集块,影响试验观察,引起误判使得凝集价偏低,凝集抑制价偏高。
同样抗凝剂加入的时间、方法不当同样会产生血凝块,影响检测结果。
采血后将采出的3只公鸡血混合再离心,这样配出的红细胞均匀一致。
红细胞的浓度对血凝及血凝抑制试验的结果有很大影响,采用国家标准规定1%的鸡红细胞。
血凝和血凝抑制实验常见问题及解决方法
血凝和血凝抑制实验常见问题及解决方法作者：李晓菲来源：《健康周刊》2017年第26期【摘要】随着社会经济经济的不断发展，科学技术也日新月异，以及互联网的普及，对我国的医学事业起到了极大的促进作用。
血凝和血凝抑制实验就是取得一个巨大进步的表现。
血凝和血凝抑制实验是实验室中进行动物免疫检测最常见的方法。
生活中发挥了巨大的作用。
但是由于操作过程受到很多因素的影响。
所以它的实验结果可能会出现较小或者较大的偏差，本文举例出了血凝和血凝与抑制实验中常见的问题，比如在试验过程中血细胞调配的浓度不够，以及检测中，抗原血凝单位存在着误差的现象，还有实验中加样的方式缺乏规范性等等的问题。
并相应的提出了它所对应的解决办法，不断的进行深入研究，让血凝和血凝抑制实验，更好地为社会服务。
【关键词】血凝和血凝抑制实验；常见问题；解决办法1 血凝和血凝抑制实验的常见问题1.1 实验中血细胞的调配浓度不够在血凝和血凝抑制实验操作过程中，受到许多外来因素的影响，血细胞的浓度就是影响其实验结果的一个重要因素。
红细胞在一定程度上影响血凝抑价的高低，而在实验的过程中工作人员对血细胞浓度的调配，并不能进行非常精准的把握，在稀释的过程中会出现偏差，从而导致血细胞的浓度低于实验要求的浓度，进而影响实验的结果。
这个稀释的过程中，并不能完全的用装置进行，所以主导的还是医学工作人员，其实验结果所存在的误差，主要也是归结为工作人员的操作误差，所以在实验中血细胞的调配浓度不够，从而影响血凝和血凝抑制实验的实验结果的主要原因是人为原因。
但随着科学技术的不断进步，实验中学习宝的调配办法也会不断的更新和进步，从而实验的精确性也会不断的提高。
1.2 检测中抗原血凝单位存在着误差现象血细胞浓度调配不够，只是影响血凝和血凝抑制实验结果的其中一个因素，而另一个影响血凝和血凝抑制实验的因素，是检测中抗原血凝单位存在着误差。
对缓冲液的配置不当可能会影响血凝和血凝抑制实验结果，在实验的过程中，检测抗原血凝单位的数据对血凝和血凝抑制实验有着至关重要的影响。
血凝与血凝抑制试验的操作细节浅析
健康养殖·诊疗畜牧业环境 2020.2484摘 要：血凝和血凝抑制试验原理是病毒抗原中的血凝素能凝集动物红细胞，形成血凝现象；血凝和血凝抑制试验操作简便、结果快速准确、试验仪器设备少等特点，使其成为区县级兽医实验室检测禽流感与鸡新城疫免疫效果最常用的检测方法之一。
笔者结合自身参加实验室检测工作的实践经验，从对其需要注意的细节进行了归纳分析。
关键词：血凝和血凝抑制试验；操作细节；经验1 检验样品的集采和保存血凝和血凝抑制实验中检测样品为动物血清，血清质量是影响试验的重要因素。
禽类血液样品采用方法以翅下静脉采血为主，采样人员动作要缓慢平稳，避免血管塌陷或刺穿血管，注意每个动物更换一次采血器材；血液样品必须用采样器材从静脉中直接采集，禁止使用屠宰后接取血样或刺穿血管后采集血管溢出血液，造成采集血液出现气泡、红细胞破裂等情况发生，进而影响血清质量。
通过血清自动分离或离心方法获得血清后，要及时开展检测；4d内开展检测的可放在4℃中冷藏保存，同时要确保保存血清容器密闭性良好；超过5d开展检测的要放在-20℃环境下冷冻，在开展检测前，按照检测数量要求，将待检血清取出在室温下使之溶解，避免血清反复冻融。
2 96孔V型板的选用有机玻璃的血凝板可以重复使用，但在检测后V型板会受到污染，所以在试验后要进行仔细清洗，同时要确保动作轻柔，避免孔内因长期摩擦清洗受损，影响以后试验结果；一次性V型板可以避免因清洗不净、反复清洗等原因影响实验结果，但是应选用的一次性反应板要表面平整、无弯曲、无二次压痕、内壁光滑的优质塑料反应板，每次实验前应尽量选择新拆开的一次性反应板，避免长期开放式存放造成污染，影响实验结果。
3 移液器枪头的选用试验操作时应选择密封性好、无弯曲、嘴口尖的一次性优质枪头，防止因添加液体的剂量不准确、液体滞留外壁、液体溢出反应孔等现象造成试验结果不准确。
4 PBS缓冲液的配制PBS缓冲液有缓冲酸碱物质维持反应体系pH值的作用，配制的PBS缓冲液pH值控制在7.0～7.2之间。
影响血凝和血凝抑制试验结果的因素分析
出现误差，或是导致检验结果的错误判定。
３讨 论
运用血 清抗 体进行 的血凝 与血凝抑 制试验对于动物 传播疾病 的免
疫监 测与疫情 的控制 是非常必要 的。然而在检测过程 中 ，各种 因素 的
当病毒的悬液中先加入特异性抗体 ，且这种抗体的量足以抑制病毒
颗粒 或 其 血 凝 素 时 ，则 红细 胞 表 面 的受 体 就 不能 再 与病 毒 颗 粒 或
干 扰可能使结果 出现假 阳性等不真 实的现象 ，从 而影响 了医 院工作 人 员对 疾病 的确诊 。 目前也有许多有 关血凝与血凝抑 制试验影响 因素 的 分析 的文献 】 。因素本文通过对检验２ ０ ６ 例 检验样本的资料进行 分析 ， 通 过分析和总结 ，影响血凝和血凝抑 制试验结果 的因素较为复杂 主要
２ ． １样 品采集和处理
为 ：样品采集和处理、试剂的配制与储藏、器材的选择和使用、单位
抗 原的配制、加样、温度 、结果判定等 。 综上 所述 ，在检验 过程 中针 对 影响血 凝和 血凝 抑制 试验 结果 的 因素进 行注 意和避 免 ，能够 有效 的提 高检验 的 准确性 。这就 要 求在 样 本 的采集 和样 本处理 过程 中 ，应严格 遵 守各项 操作 流程 ，在试 剂 的配制 和储 备 、器 材 和设备 的使 用过 程 中、对加 样的 频率 、温度 的 控制和 结果 的判 定均 应注 意依据 操作 规程进 行 ，应尽量 提 高检验 结
１血 凝和血 凝 抑制试 验理 论和 方 法 血 凝抑 制试 验和 血凝 主要 是对 血清 抗体 的检 测试 验 。血凝 原理 是病 毒或者 是病 毒 的血凝 素 ，对 一种 或是 几种 动物血 清 红细胞 产生 凝集反应 。具体 的方法是标 准抗原 同鸡 红细胞 。血凝抑制反 应（ Ｈ Ｉ ） ：
血凝和血凝抑制作用的名词解释
血凝和血凝抑制作用的名词解释血凝和血凝抑制作用的名词解释血凝和血凝抑制作用是生物体内一种极为重要的生理现象，它们在维持血液循环、保护机体免受外部伤害以及预防出血等方面发挥着至关重要的作用。
了解血凝和血凝抑制作用对于我们深入理解人体健康和疾病的发生发展具有重要意义。
1. 血凝血凝是一种生理性的过程，它在机体受到创伤后，能够迅速形成血栓，堵塞血管口以防止出血，促进伤口愈合。
血凝的过程主要包括三个步骤：血管收缩、血小板黏附和凝血蛋白形成网状结构。
血管收缩能够缩小受伤处的血管口，减缓出血速度；血小板黏附使得血小板在受伤处迅速聚集，形成血栓的基础；凝血蛋白形成网状结构能够加强血栓的稳定性，防止进一步出血。
2. 血凝抑制作用血凝抑制作用是指机体内一类生物化学物质或生理机制，能够抑制血凝的过程，使得血液保持稀薄状态，避免异常的血栓形成。
这类物质或机制包括但不限于抗凝血酶、纤溶酶、血管内皮细胞抑制因子等。
它们能够调节血栓形成的速度和程度，保持血液的流动性，防止血栓性疾病的发生。
在我们的日常生活中，血凝和血凝抑制作用可能会受到多种因素的影响，比如饮食、运动、疾病等。
我们需要关注这些因素对血凝和血凝抑制作用的影响，保持适当的生活方式和良好的健康习惯。
总结回顾：血凝和血凝抑制作用是人体内一种重要的生理现象，它们相互协调，维持着血液的正常循环和机体的健康状态。
在健康知识普及的过程中，了解血凝和血凝抑制作用对我们保持健康、预防疾病具有重要的意义。
个人观点：作为文章写手，通过深入研究血凝和血凝抑制作用，我对人体生理机制有了更深刻的理解，也更加重视平时的饮食和生活方式。
在撰写本文的过程中，我也对相关知识有了更为全面的了解，这将对我的生活产生积极的影响。
希望本文能给读者们带来新的思考和启发，引起对健康知识的关注和学习。
血凝和血凝抑制作用是生物体内一种极为重要的生理现象，通过它们的协调作用，我们能够保持正常的血液循环和健康的体内环境。
血凝试验和血凝抑制试验的影响因素及质量控制
１ 血凝试验 （ Ｈ Ａ ）和血凝抑制试验 （ … ）中的常见问题
（ １ ） 对 照孔 凝集 ； （ ２ ）全部 凝集 ； （ ３ ）红细 胞全 部下 沉 ；
（ ２ ）在 稀释 血 清 时 ，产生 气 泡移 液 器 。使 用 时有 ２ 个 阻力 位 置 ，压 到第 １ 个 阻力 位置 为所 调刻度 的量值 ，为 吸取 液体 时使 用 ，
（ ４） 标 准 阳性对 照 血 清 的抗体 效 价 与原 结果 误 差 大 于１ 个滴度； 压 到第２ 个 阻力位 置 为释放 液体 时使 用 。 因此 ，不要 在吸 取液 体 时 （ ５）泪滴 状 流淌 （ 完全 血 凝抑 制 ） 线细 ； （ ６） 结 果 出现 慢 或结 将移 液器 压 过第 １ 个 阻力位 置 ，这样 会造 成 吸取 液体 偏多使 试 验结
缓冲液 （ Ｐ Ｂ Ｓ ） 尽可能现配现用 ，浓度和酸碱度要准确 ，可用 要 慢 ，往 往 需要 超 过 ４ ０ ｍ ｉ ｎ 才 能 出现 清 晰 的结果 ， 当试 验 温 度低 Ｈ Ｃ １ 和№ Ｏ ｝ 啵 调 节酸碱 度 ，并用 ［ 试纸 进行测 试到ｐ Ｈ 值 合适 为止 。 于４ 。 ｃ 时红 细胞 有时 会发 生 自凝现 象 。当试 验过 程 中 的环 境 温度超 稀释液的ｐ Ｈ 值５ ． ８ 以下 ，红细胞容易产生 自凝现象 ；ｐ Ｈ 值在７ ． ８ 以 过 ３ ０ ℃时 ，试 验结 果 出现 的就 快 ，往 往在 １ ５ ｍ ｉ ｎ 左 右 就可 读 数 ； 上凝集图形易消失 ，也会造成实验误差 。而ｐ Ｈ 值为７ ． ０ 时 ，红细胞
血凝和血凝抑制试验常见问题及解决方法
血凝和血凝抑制试验常见问题及解决方法作者：赵昂来源：《今日健康》2016年第03期【摘要】随着社会经济文化的不断进步与发展，国家综合国力日益提升，在科学技术日渐更新和网络信息化时代的基础上，医学卫生事业也取得显著的进步。
在医学发展进程中，血凝和血凝抑制试验是当前我国医疗卫生发展的重要项目，同时也是我国各地区域开展疫病诊断和疫病调查的重要手段之一。
在血凝和血凝抑制试验中涉及到了关于红细胞和抗原体的反应，因此试验过程容易受诸多因素的影响，而造成试验结果的偏差。
本篇文章主要对血凝和血凝抑制试验常见的问题进行分析，同时着重探讨血凝和血凝抑制试验常见问题的解决措施。
【关键词】血凝抑制试验常见问题解决方法前言血凝和血凝抑制的试验，对于医学事业的发展具有十分重要的影响，尤其是对于当前社会中相关疫病的检查和检测，能够起到一定的积极作用。
本文关于血凝和血凝抑制试验常见问题及解决方法研究意义，着重体现在实践研究意义上，主要是由于本文在研究血凝和血凝抑制试验过程中，针对当前血凝和血凝抑制试验常见的问题进行了深入的分析，并探讨其相应问题产生的原因，从而提出相关的解决血凝和血凝抑制试验常见问题的对策，能够为当前存在血凝和血凝抑制试验问题的单位，提供宝贵的建议。
1 血凝和血凝抑制试验常见的问题分析1.1 试验中的血细胞浓度调配不够合理血凝和血凝抑制试验发展进程中，受诸多因素的影响，其在试验过程中存在诸多的问题，首先体现在试验中的血细胞浓度调配不够合理。
在血凝和血凝抑制试验过程中，红细胞的浓度是对于血凝和血凝抑制的试验结果是十分重要的，红细胞能够在一定程度上影响血凝抑价的高低。
就当前血凝和血凝抑制试验的发展现状而言，在试验中的血细胞浓度调配度存在不够合理的现象，通常情况下，在红细胞洗后并且吸取血细胞稀释配制时，要将吸头放置在装有血细胞管的底部进行稀释配制，但是当前试验中存在部分的工作人员对于此种稀释配制的方法和浓度调配不够合理，致使血细胞浓度偏低现象的产生。
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影响血凝和血凝抑制试验结果的几个重要因素血凝（HA）及血凝抑制（HI）试验是目前我国对禽类疾病进行流行病学调查、疫病诊断、防疫监测等工作的主要手段。
各大养殖场、兽医门市、动保实验室、兽药疫苗生产厂家均可进行操作。
该试验虽然操作简便，但每疏忽一步都会直接影响最终结果的判定。
本文总结了笔者在工作及学习中所整理的一些最为重要的影响因素。
1.红细胞悬液的影响
差值法配制1%鸡红细胞悬液：采集2-6月龄SPF健康公鸡的血液，与等量阿氏液混合，将血液配平放入离心机中，2000转／分钟离心10分钟。
共离心三次，第一次和第二次离心结束后，将上清液倒掉，第三次离心结束后，不要晃动离心管，用注射器、吸管或移液枪将上清液除去，尽量去除干净。
用1000ul移液枪向离心管中加入5ml生理盐水（或PBS），然后混匀离心管中的液体。
用1000ul移液枪将离心管中的液体移入干净的瓶子中，记下毫升数A。
A与5的差值B就是鸡红细胞的数量，按照1%比例向瓶子中加入相应量的生理盐水（或PBS），配成1%的鸡红细胞悬液。
如果红细胞浓度偏高，则血凝价可能偏低，血凝抑制价可能偏高；如果红细胞浓度偏低，则血凝价可能偏高，血凝抑制价可能偏低。
2.抗原凝集价的测定
血凝试验测抗原凝集价：在微量板上，从第1孔至12孔或所需之倍数孔，用移液器每孔加入PBS（生理盐水）25ul 。
用移液器吸取被测抗原25ul，从第1孔起，依次做2倍系列稀释，至第11个孔弃去移液器内25ul液体。
每孔加入1%鸡红细胞悬液25ul，在最后1列设不加样品的红细胞对照孔，立即在微量板振摇器上摇匀，置室温20~40分钟或置2~8℃40~60分钟。
当对照孔中的红细胞呈显著钮扣状时判定结果。
以使红细胞完全凝集的最高稀释度作为判定终点。
抗原凝集价的测定直接影响下一步试验中4HAU血凝素配制的准确程度。
3.4HAU血凝素的影响
将配制好的4HAU血凝素用PBS（生理盐水）稀释，使其稀释度为1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7，在每一稀释度的25ul体系中加入25ul PBS（生理盐水），再加入1%鸡红细胞悬液25ul，摇匀，置室温20~40分钟或置2~8℃40~60分钟判定结果。
如果前2孔100%凝集，第三孔50%凝集，说明4HAU血凝素准确。
如果4HAU的血凝素液偏高，则测定的血清抗体效价可能偏低；如果4HAU的血凝素液偏低，则测定的血清抗体效价可能偏高。
4.血凝抑制试验结果判定的影响
试验过程中，建议在微量板的中间划一条竖线以便于读数时能快速识别结果所对应的列数。
当红细胞对照孔中的红细胞流淌到血凝抑制平板底部时，马上读数，只要血清样品中的红细胞流淌的状态没有达到红细胞对照孔的标准，则不予读取。
读数速度要快且只能读取一遍。
5.试验过程中移液器使用的影响
（1）容量设定：
移液器在容量设定时，当我们从大值调整到小值时，刚好就行;但从小值调整到大值时，就需要调超三分之一圈后再返回，这是因为计数器里面有一定的空隙，需要弥补。
（2）预洗吸头：
在我们安装了新的吸头或增大了容量值以后，应该把需要转移的液体吸取、排放两到三次，这样做是为了让吸头内壁形成一道同质液膜，确保移液工作的精度和准度，使整个移液过程具有极高的重现性。
其次，在吸取有机溶剂或高挥发液体时，挥发性气体会在白套筒室内形成负压，从而产生漏液的情况，这时就需要我们预洗四到六次，让白套筒室内的气体达到饱和，负压就会自动消失。
（3）吸液：
先将移液器排放按钮按至第一停点，再将吸头垂直浸入液面，浸入的深度为：P2、P10小于或等于1毫米，P20、P100、P200小于或等于2毫米，P1000小于或等于3毫米，P5ML、P10ML小于或等于4毫米(浸入过深的话，液压会对吸液的精确度产生一定的影响，当然，具体的浸入深度还应根据盛放液体的容器大小灵活掌握)，平稳松开按钮，切记不能过快。
（4）放液：
放液时，吸头紧贴容器壁，先将排放按钮按至第一停点，略作停顿以后，再按至第二停点，这样做可以确保吸头内无残留液体。
如果这样操作还有残留液体存在的话，就应该考虑更换吸头了。
千里之堤，溃于蚁穴，小小的误差，积少成多便是错误，试验的结果也将截然不同。
所以在血凝及血凝抑制试验中，一定要细致耐心，严格按照SOP进行操作，同时综合考虑各方面因素，发现问题及时纠正处理，这样才会获得满意的、准确的结果，才能为客户提供更加完美的服务！。