固定与固定液

一、固定与固定液
(一)固定：将新鲜的活组织从生物体取下后，立即投入固定剂中，借助化学药品的作用，使细胞保持原有形态、结构的一种手段。
1.目的
(1)迅速防止细胞死亡后的变化,防止自溶、腐败，尽量保持生长状态结构。
(2)使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持生前的形态。
(3)使组织内各种物质成分产生不同的折光率，便于观察和鉴定。
(4)使不同组织成分对染料有不同的亲和力，便于染色。
(5)防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。
2.时期
(1)有丝分裂：有丝分裂主要发生在根尖、茎生长点及幼叶等部位的分生组织，根尖取材容易，操作和鉴定方便。
(2)减数分裂：选取适当大小的花蕾是观察花粉母细胞减数分裂的关键性的第一步。此时的植株形态及花蕾大小依植物的类别及品种有所不同。
小麦：在植株开始挑旗，旗叶与下一叶的叶耳间距为3-4cm，花药长度大致在1-2mm左右，黄绿色时取材最好。如花药为绿色时则为时过早，花药为黄色，则已过时。一般上午8-10点为取材最佳时间。
玉米：一般夏玉米在7月份取材，以上午7-8点为好。在玉米雌穗未抽出前的7-10天手摸植株上部(喇叭口下部)有松软感觉，表明雄花序即将抽出。用刀在顶叶近喇叭口处纵向划一刀，切口长10-15cm，剥出雄花序，顶端花药长3-5mm，花药尚未变黄时取材。
蚕豆：从现蕾开始，上午10-11点可选取2-3mm大小的花蕾或一小段花序。蚕豆开花的次序是由下而上，由外而内。
3.固定时的注意事项
(1)固定液量：20倍于材料的体积，以免固定液被稀释。
(2)选择合适的固定液：渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中，又不使组织过度收缩或膨胀。
(3)固定的时间要合适：
与材料的大小和温度有关：材料大则时间长，材料小则时间短；温度高则时间短，温度低则时间长。
经固定的材料如不及时使用，可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时，再换入一次70%酒精，在0-4℃冰箱内可保存半年。经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次，效果较好。
(二)固定液 固定液包括简单固定液和混合固定液两种。简单固定液就是用一种药品作为固定液，如乙醇、甲醛、冰醋酸、升汞等。简单固定液只对细胞的某种成分固定效果较好，而不能将所有的成分都保存下来。混合固定液是指两种或两种以上的化学物质的混合液，如卡诺氏固定液等。
1.固定液的条件
(1)迅速渗入组织,杀死原生质。在杀死的短时期中,细胞形态不致有所变化。
(2)必须具有渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。
(3)尽可

能避免使组织膨胀或收缩。
(4)使细胞内的成分凝固或沉淀。
(5)增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。
(6)增加媒染作用和染色能力。
(7)使组织变硬，具有一定的硬度。
(8)固定以后能起到保存的作用。
(9)在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不致于因以后的处理而使固定的原生质变形。
2.常用的几种固定液
(1)酒精：有固定、硬化和脱水的作用。可以固定白蛋白、球蛋白、核蛋白，但对核蛋白固定效果较差(亲和力小且易自溶)。酒精固定的特点是杀死快，渗透力强，对组织收缩较大(可收缩20%左右)，可使材料变硬。酒精常用于混合固定液中，但由于它本身是一种还原剂，很容易氧化成乙醛，甚至氧化成醋酸，因此最好不与三氧化铬、重铬酸钾及锇酸等氧化剂配合使用。但与甲醛、醋酸或丙酸配合，用作固定效果很好。酒精能溶解脂肪及凝脂，故不宜用来固定脂类材料。
(2)甲醛水溶液：甲醛在水中的溶解度为37-40%，渗透力强，固定均匀，对组织收缩作用小，一般用于固定大材料。市售溶液中含量下降，因形成三聚甲醛而失效。
(3)冰醋酸：纯醋酸在温度稍变低时即形成冰晶，所以又称为冰醋酸。常用0.3-0.5%的浓度作为固定液。冰醋酸对材料有膨胀作用，对核蛋白固定好，可与水、酒精、氯仿混合。
(4)AF液：90ml乙醇+10ml甲醛 用于固定大块组织。
(5)卡诺氏固定液： 冰醋酸:氯仿:无水乙醇=1:3:6
改良卡诺氏固定液: 冰醋酸:无水乙醇=1:3



根尖固定时，固定液可迅速杀死细胞，并保持细胞不变形，维持生活时的状态。


小资料

一、细胞器的分配问题：

细胞的有丝分裂中，细胞核内染色体的“复制和均分”，从而使亲子代体细胞保持染色体数目恒定。那么，有丝分裂细胞质中的细胞器又是如何分配呢？

实验证明：细胞分裂成两个子细胞时，不仅获得了成套染色体，也获得了细胞中的各种细胞器。子细胞获得的细胞器，只能通过原有的细胞分裂增生，它们不能在细胞质中重新产生。

例如，线粒体在细胞分裂时也分裂一次，子细胞就得到一份线粒体。高尔基体和内质网是在细胞分裂时，破成碎片或小泡，再分别进入子细胞中。

各种细胞器的增生，都是在细胞分裂之前的间期发生的。细胞器在子细胞中的分配不是平均的。

二、细胞固定和固定液：

观察植物细胞有丝分裂常用洋葱根尖做实验材料。为保证实验时能观察到较多的有丝分裂各期的分裂相，必须在根尖细胞处在分裂高峰时剪取。但往往实验课时间与分裂高峰期不合，如分裂相很少，必然影响观察效果。为此，可将处于分裂

高峰时的新鲜洋葱根尖进行固定处理，留待实验时随时使用。

固定液的种类很多，制作洋葱根尖细胞分裂装片，使用的是卡诺固定液。配方是：3份95％酒精与1份冰醋酸配制而成。把根尖投入盛有固定液的容器内，盖上盖子固定12～24小时，然后从固定液中取出，用90％酒精漂洗，最后放入70％酒精中保存，备用。

根尖固定时，固定液可迅速杀死细胞，并保持细胞不变形，维持生活时的状态。

三、碱性染料：

碱性染料的显色基团含有阳离子或本身为阳离子，能与组织或细胞中呈酸性的结构（如细胞核）发生化学结合或吸附作用，使其染上一定颜色的染料。常用于植物细胞核染色的碱性染料有：龙胆紫洋红等。

龙胆紫溶液的配制：将0．5克龙胆紫溶解在100毫升，2％醋酸溶液中配制成0．5％龙胆紫溶液。

醋酸洋红溶液的配制：将1克洋红与100毫升冰醋酸混合后煮沸，煮时可加锈铁钉一枚，略具铁质的1％醋酸洋红染液能增强染色效果。