固定与固定液

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固定液和组织的比例依据

固定液和组织的比例依据

固定液和组织的比例依据
固定液和组织的比例是根据所需固定的组织的大小和类型来确定的。

一般而言,常用的固定液和组织的比例是10:1,即10部分的固定液与1部分的组织混合。

然而,不同的组织类型可能需要不同的比例。

以下是一些常用的组织固定液比例:
1. 大体组织:对于较大的器官或动物组织,通常使用10%缓冲福尔马林溶液(10% buffered formalin)固定。

这意味着将10部分的缓冲福尔马林溶液和1部分的组织混合。

2. 细胞和细胞簇:对于大部分细胞和细胞簇的固定,一般使用4%缓冲福尔马林溶液。

这意味着将4部分的缓冲福尔马林溶液和1部分的细胞或细胞簇混合。

3. 骨骼组织:对于骨骼组织的固定,常用的固定液是10%缓冲福尔马林溶液或中性缓冲福尔马林溶液。

需要较长的固定时间。

除了以上常用的固定液比例外,还有其他特殊组织和细胞类型可能需要不同的固定液比例。

此外,固定时间和固定温度也会影响固定效果,需要根据具体实验要求进行调整。

因此,最好根据实验需要和参考相关文献确定合适的固定液和组织比例。

常用固定液及其配制

常用固定液及其配制

一、常用固定液及其配制固定液分单纯固定液和混合固定液。

1.甲醛(formaldehyde)是无色气体,易溶于水成为甲醛溶液。

易挥发,且有强烈刺激气味,常用得是37%~40%得甲醛溶液,商品名为福尔马林(formalin)。

用作固定的浓度习惯为10%福尔马林(即1份甲醛溶液加9份水配制而成),实际含甲醛4%。

10%福尔马林渗透力强,固定均匀,对组织收缩少。

对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好,是最常用的固定剂。

经福尔马林固定时间长的组织,易产生黑色的沉淀,称福尔马林色素。

2.乙醇无色液体,易溶于水,它除可作为固定剂外,还可作为脱水剂,对组织有硬化作用。

固定用一般是80%~95%浓度,乙醇渗透力校弱,它能溶解脂肪,核蛋白被沉淀后,仍能溶于水,因此核的着色不良。

3.中性甲醛液(混合固定液)甲醛(浓)120ml,加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)4g,磷酸氢二纳(Na2HPO4)13g。

此液固定效果比单纯10%福尔马林要好。

4.AF液(混合固定液)95%乙醇90ml,甲醛(浓)10ml。

也有配方是95%乙醇85ml,甲醛(浓)10ml,冰醋酸5ml。

此液除有固定作用外,兼有脱水作用,因此,固定后可直接入95%乙醇脱水。

以上4种固定液中,以中性甲醛为首选,其次为10%福尔马林,乙醇应尽量不用。

二、组织脱水脱水用的乙醇浓度一般从70%~75%开始,然后依次80%→95%→100%,即由低浓度逐步到高浓度。

脱水的时间与组织大小、厚薄有很大关系、组织厚大,脱水时间要长些;而小薄的组织脱水时间相对的可以短些。

组织脱水时间在低浓度乙醇中可以长些(如70%~80%),而在高浓度乙醇中要短些,这是因为高浓度的乙醇渗透力不强,延长脱水时间无益,相反高浓度乙易使组织收缩、变脆,致使以后切片和观察困难。

⑴70%乙醇1h。

⑵80%乙醇1h。

⑶95%乙醇Ⅰ1h。

⑷95%乙醇Ⅱ1h。

⑸95%乙醇Ⅲ1h。

(七)固定液和保存液

(七)固定液和保存液

(七)固定液和保存液)固定液和保存液定液固定动植物整体或它的一部分组织和气管等,能保存组织内细胞的形态、结构及其组成,尽量使它近于生活状液一般有防腐和保存的作用,分为单纯固定液和混合固定液。

单纯固定液中最重要的有乙醇、福尔马林、醋酸、苦味、重铬酸钾、升汞等,前两种固定液是中学生物实验室常用的。

单纯固定液的优点是简便,缺点是有一定的局限性到理想的固定要求。

混合固定液有几种不同的药液按一定的比例混合而成,使各自的优缺点相互补充,成为较完美。

这种固定液的制备虽比较麻烦,但是效果比较好。

常用的混合固定液是醋酸-酒精混合液、福尔马林-醋酸-酒精液固定液等。

的保存液大致跟固定液相同,主要是福尔马林、酒精、甘油以及由这些药物按比例配制成的各种混合液。

有时按特需要,再保存液中增加某些药品(如原生标本的保存液)。

尔马林马林在固定组织标本时杀菌能力强,所以防腐性强,渗透力大,固定得快。

永福尔马林固定精细的解剖标本时,要酒精、石炭酸等混合使用。

液常用的浓度是5~10%(根据材料的大小、性质和数量而定)。

液常用的浓度是5~10%。

用福尔马林作保存液,效果好且价格低廉。

制福尔马林溶液(固定液或保存液)时,应将37~40%的甲醛作为整个溶质来配。

例如配制5%福尔马林是取市售37~溶液5毫升跟95毫升蒸馏水混合。

实际上甲醛含量只有1.9~2%,这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。

事项:福尔马林业在长期贮存中会产生蚁酸,可适量的加入碳酸钙()或碳酸镁()等碱性物质进行中和。

福尔马林业作为保存液会慢慢挥发而致使浓度降低,并且福尔马林液再保存中往往形成多聚甲醛,使浸液变浊,影所以,根据一定保存期的情况,可适当增加福尔马林液的浓度或更换新液,以防标本变坏。

其中如有白色沉淀物,使它溶解。

市售的福尔马林液常带有酸性,能腐蚀石灰质,因此,最好不用福尔马林液浸制有石灰质外壳的动物。

精(乙醇)也是常用的固定液,它有强烈的杀菌作用,对组织材料的渗透力较大,固定的快。

小标本的固定、脱水、包埋技巧

小标本的固定、脱水、包埋技巧

小标本的固定、脱水、包埋技巧
固定技巧
在进行标本制作之前,固定是非常重要的一步。

以下是一些固定技巧:
•使用合适的固定液进行固定,如福尔马林、乙醛等。

•根据标本类型和需要,选择适当的固定时间。

•确保标本完全浸泡在固定液中,以确保固定效果。

•对于较大的标本,可以使用注射器或针筒将固定液注入其内部。

脱水技巧
在固定完成后,需要进行脱水处理。

以下是一些脱水技巧:
1.使用逐渐浓度递增的酒精溶液进行脱水,如70%、80%、90%、95%和
100%。

2.每个脱水浓度的时间可以根据标本的大小和类型进行调整。

3.确保标本充分浸泡在脱水溶液中,并且脱水过程中避免震动和剧烈搅拌。

4.注意安全,使用酒精时要远离明火。

包埋技巧
经过固定和脱水处理后,标本需要进行包埋以便进行切片观察。

以下是一些包埋技巧:
•选择合适的包埋剂,如石腊、聚乙二醇等。

•根据需要,将标本放置在合适的包埋模具中。

•倒入适量的包埋剂材料,确保标本完全覆盖。

•根据包埋剂的要求,进行固化处理。

•使用切片机或显微镜切片仪对包埋后的标本进行切片。

电镜材料固定方法

电镜材料固定方法

1、固定液固定(固定液体积是固定材料的十倍以上)
3%戊二醛in 0.1M PBS ,ph7.2,室温5-6h,后4°C保存
(取材:先整个材料放入固定液中,之后用锋利的双面刀片分割,不能撕扯材料,分割成小块后1*1mm,置于固定液中,抽气~20min,让材料沉入固定液中)
2、0.1M PBS Ph7.2 充分漂洗3-4次,20-30Min/次
3、1%锇酸固定in 0.1M PBS,4°C overnight
4、0.1M PBS Ph7.2 充分漂洗3-4次,20-30Min/次
5、乙醇系列脱水:30%-50%-70%(4°C, overnight,可以停下)
-80%-90%-95%-100%-100%(每级20-30分钟,不同材料时间不同)
注意:100%乙醇时不要吸干,防止材料干了。

用丙酮置换乙醇:
乙醇:丙酮=1:1,纯丙酮2次,每级20-30分钟
6、丙酮:树脂=2:1,1:1(可以停下了,overnight),1:2 2-3h/级
纯树脂12h,
换纯树脂12h (从进入树脂开始就要防潮!)
7、包埋
8、聚合60°C 24hr
注意:免疫电镜时不用锇酸固定,树脂换成LRWhite等水溶性树脂,固定液可以是25%戊二醛+1.25%多聚甲醛in 0.1M PBS Ph 7.2。

固定液总结

固定液总结

固定液总结什么是固定液?固定液是一种化学试剂,主要用于固定组织或细胞以保持其形态和结构。

固定液可以阻止生物材料的腐败和变性,防止其在处理和染色过程中失去结构和功能。

固定液在组织学、细胞学和病理学等领域中广泛应用,有助于观察和研究生物组织和细胞的形态、结构和功能。

常见的固定液福尔马林(Formalin)福尔马林是一种常见的固定液,广泛用于组织学研究和病理学诊断中。

它是一种含有37%甲醛的溶液,能够固定组织并保持其形态和结构。

福尔马林固定的组织可用于组织切片制备、免疫组化染色等进一步的实验。

福尔马林固定组织的优点是固定效果好、保存时间长,能够保存大部分的组织结构和抗原表达情况。

然而,福尔马林固定液会对细胞核和某些蛋白质产生交联作用,可能导致染色效果差,同时还有潜在的致癌风险,因此在使用福尔马林固定液时需要注意安全操作和废液处理。

乙醛(Glutaraldehyde)乙醛是一种常用的电子显微镜固定液,主要用于固定细胞和亚细胞结构以进行电子显微镜观察。

与福尔马林不同,乙醛固定液能够更好地保持细胞和细胞器的形态和结构,有利于观察细胞内部的细节。

乙醛固定液的使用需要注意浓度和固定时间的控制,过高的浓度和过长的固定时间可能会导致组织和细胞的变性和损伤。

此外,乙醛固定液对某些酶和蛋白质具有灭活作用,因此在使用乙醛固定液时需要根据实验需要选择合适的条件。

缓冲盐水(Buffered Saline)缓冲盐水是一种用于固定组织和细胞的温和固定液。

它通常由含有适当浓度的盐水和缓冲剂混合而成,能够保持组织和细胞的形态和结构,并且对某些抗原和酶具有较好的保存效果。

缓冲盐水固定液的优点是温和、安全、易于制备和使用,适用于一些对固定条件要求较宽松的实验。

然而,由于其固定效果不如福尔马林和乙醛固定液,保存时间较短,因此在实验设计时需要根据实验目的和需求来选择合适的固定液。

固定液的使用注意事项使用固定液需要注意以下几个方面:1.安全操作:固定液常常含有有害化学物质,使用时需要佩戴防护手套、口罩等个人防护装备,避免直接接触和吸入液体或气体,注意实验室通风。

病理制片中固定液的选择-2019年精选文档

病理制片中固定液的选择-2019年精选文档

病理制片中固定液的选择由于病理学诊断是诊断的金标准,是辅助临床诊断的主要把关口,也是最后的宣判性诊断。

做好病理诊断,层层步骤就显得尤为重要,包括组织的取材,固定,脱水,浸蜡,包埋及染色。

组织的固定是一个关键的过程,因为没有好的固定就没有好的制片,没有好的制片就不会有好的成品,一张好的切片与固定有着密切的关系。

1固定的目的固定的概念是将采取的活体组织置于化学性溶媒(固定液)中,使其不发生自溶与腐败,保持被采取时的形态。

固定的目的是在于尽量使组织和细胞保持与生活时相仿的成分和形态,迅速防止组织、细胞的死后变化,防止自溶与腐败,使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶性物质,使组织中的各种物质沉淀和凝固起来,而产生不同的折射率,成光学上的差异,以便染色后易于鉴别和观察。

因此,固定的组织愈新鲜愈好,固定组织时,应使用足量的固定液。

其固定液的量一般小于组织块总体积的4 倍以上。

2固定液的选择固定液必需要有较强的渗透能力,能迅速地渗入组织内部,不会使组织过度收缩或膨胀,并且能使组织内易观察的成分可以凝固为不溶性物质,能使组织达到一定的硬度,获得较佳的折光率和对染料具有较强的亲和力。

组织细胞中不至于因固定引起人为的改变,因为在凝固原生质以后,增加了细胞对于各种穿透的抵抗力,不至于因以后的处理而使固定后的原生质变形,并尽可能地避免使组织膨胀或收缩,使细胞内的成分(蛋白质)凝固沉淀下来,由正常的半液体状(胶体)变为半固体状(凝胶),增加媒染作用和染色能力,使组织能够得到充分的固定,便于以后的蜡块保存。

固定液的种类很多,分为单纯固定液和混合固定液,其中混合固定液比较常用。

2.1 常用单纯固定液2.1.1 甲醛(formaldehyde)为非沉淀性固定剂,是一种约有40%重量溶于水的气体,易挥发,市售的为40%的甲醛水溶液,也称为福尔马林液(formalin)。

此液久存自行分解,形成白色沉淀为副醛(三聚甲醛或多聚甲醛)。

固定液原理

固定液原理

固定液原理
固定液原理是一种将气体或液体中的污染物质固定在固体载体上的技术。

它基于吸附剂与污染物质之间的物质相互作用,通过将污染物质固定在载体上来实现其去除或回收利用。

固定液的原理可以归纳为两个方面:吸附和化学反应。

对于吸附来说,载体表面的吸附剂具有很高的吸附能力,可以吸附和固定污染物质,从而使其从气体或液体中被分离出来。

而化学反应方面,吸附剂也可以与污染物质发生化学反应,形成不溶于液相的产物,从而实现污染物质的固定。

固定液技术中,常用的吸附剂包括活性炭、分子筛、树脂等。

这些吸附剂具有高比表面积和丰富的孔隙结构,能够提供多个吸附位点,从而增加与污染物质之间的接触面积和吸附能力。

在实际应用中,固定液技术被广泛用于环境污染物的治理和资源回收利用。

例如,气体净化领域常用的固定液技术包括活性炭吸附、吸附塔和湿式洗涤等方法,可以有效去除空气中的有机物、气体污染物和异味等。

而在水处理领域,固定液技术也被用于有机废水和重金属废水的处理,通过吸附剂将污染物质固定在固体载体上,实现其去除或回收。

总的来说,固定液原理是通过吸附和化学反应的方式将污染物质固定在固体载体上,从而对气体或液体中的污染物质进行去除或回收利用。

这种技术具有高效、可控和经济等优点,在环境治理和资源利用领域具有广泛的应用前景。

免疫组化固定剂的选择(看到楼下有兄弟 这个问题)(固定剂,免疫组化,固定液,抗原)

免疫组化固定剂的选择(看到楼下有兄弟 这个问题)(固定剂,免疫组化,固定液,抗原)

免疫组化固定剂的选择(看到楼下有兄弟这个问题)(固定剂,免疫组化,固定液,抗原)相关疾病:脱水固定是免疫组化的第一步,很多人都忽视了这一步,认为用福尔马林就行,其实学问也挺大的用于免疫组织化学的固定剂种类较多,性能各异,在固定半稳定性抗原时,尤其重视固定剂的选择,介绍如下。

1.醛类固定剂双功能交联剂,其作用是使组织之间相互交联,保存抗原于原位,其特点是对组织穿透性强,收缩性小。

有人认为它对IgM、IgA、J链、K链和λ链的标记效果良好,背景清晰,是常用的固定剂。

关键词: 固定液固定剂抗原甲醛免疫组化冰醋酸戊二醛固定是免疫组化的第一步,很多人都忽视了这一步,认为用福尔马林就行,其实学问也挺大的用于免疫组织化学的固定剂种类较多,性能各异,在固定半稳定性抗原时,尤其重视固定剂的选择,介绍如下。

1.醛类固定剂双功能交联剂,其作用是使组织之间相互交联,保存抗原于原位,其特点是对组织穿透性强,收缩性小。

有人认为它对IgM、IgA、J链、K链和λ链的标记效果良好,背景清晰,是常用的固定剂。

(1)10%钙-福尔马林液(浓甲醛10ml,饱和碳酸钙90ml)。

(2)10%中性缓冲福尔马林液(浓甲醋10ml,0.01mol/l pH7.4 PBS 90ml)。

(3)4%多聚甲醛磷酸缓冲液pH7.4(多聚甲醛40g,0.1mol/L PBS液pH7.4500ml,两者混合加热至60℃,搅拌并滴加1n NaOH至清晰为止,冷却后加PBS液至总量1000ml)。

(4)戊二醛-甲醛液(戊二醛1ml,浓甲醛10ml,蒸馏水加至100ml)。

戊二醛是二醛基化合物,交联结合力比甲醛大,Bullock认为交联过强,可出现组织改变和空间遮蔽现象,影响组织的抗原性。

但McDonald等认为,该试剂用于PAP法免疫酶标记效果仍满意。

(5)甲醛升汞固定液(即B5固定液。

浓甲醛10ml,氯化汞6g,醋酸钠1.25g ,蒸馏水90ml)。

有人认为此固定液悬液是较理想的固定液,标记IgA、IgM、IgG等抗原效果良好。

licent固定液固定原理

licent固定液固定原理

licent固定液固定原理
固定液是一种在生物学和组织学实验中常用的试剂,用于固定细胞和组织样本,以保持其形态结构和化学组成的稳定性。

固定液的固定原理主要涉及以下几个方面:
1. 交联作用,固定液中的化学物质(如甲醛、戊二醛等)能够与细胞和组织中的蛋白质、核酸等分子发生交联反应,形成稳定的化学键,从而固定细胞和组织的结构。

2. 蛋白质沉淀,固定液中的某些成分(如醋酸、乙醇等)能够沉淀蛋白质,使其在细胞和组织中形成固定的沉淀物,从而保持其形态结构。

3. 细胞膜透性改变,固定液中的某些成分(如甲醛)能够改变细胞膜的透性,使得细胞内外的分子无法自由交换,从而固定细胞内的分子组成。

4. 防止腐败和降解,固定液中的一些成分(如甲醛)具有杀菌和防腐作用,可以抑制细胞和组织的腐败和降解,保持其原有的形态和结构。

需要注意的是,不同的固定液具有不同的固定原理和适用范围。

选择适合的固定液需要考虑样本类型、实验目的以及后续实验的要
求等因素。

此外,在使用固定液进行样本固定时,需要控制固定液
的浓度、固定时间和温度等条件,以确保固定效果的稳定和可靠性。

细胞固定及常用的固定液

细胞固定及常用的固定液

细胞固定及常用的固定液•取材后的组织需立刻投于固定剂中–固定使组织和细胞的蛋白质凝固,终止内源性或外源性酶反应,防止组织自溶或异溶,以保持原有结构和形态;–对免疫组化而言更有原位保存抗原的作用,避免抗原失活或弥散。

•常用固定液:固定剂品种很多,但大多属于醛类和醇类。

其固定原理不同,各有优缺点。

–醛类(常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛)–醇类(常用乙醇)–其它(丙酮)(1) 醛类•甲醛(福尔马林)应用最广–原理:形成分子间的交联,影响蛋白构型而使之固定。

–优点:形态结构保存好,且穿透性强,组织收缩少。

–缺点:•甲醛放置过久可氧化为甲酸,使溶液pH降低,影响染色;•醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍;•分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露。

可造成假阴性的染色结果。

–注意事项:• C),为此组织块不宜过厚。

缩短固定时间,降低固定温度•改用中性缓冲福尔马林,以pH值7.2~7.4 0.01mol/L的磷酸盐缓冲液配制成10%甲醛固定液,减少固定液pH的变化。

•固定后充分水洗以减少分子间交联。

•切片在作免疫组化染色前,先经预处理使抗原再现(抗原修复)。

•戊二醛:–穿透性强,微细结构保存好,但对抗原有一定影响,常与其他固定剂联合用作免疫电镜固定液。

•多聚甲醛(常用4%):–可用于免疫电镜;也可用于免疫荧光染色。

•主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原,例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等。

(2) 醇类•最常用的醇类固定剂是乙醇。

–其固定作用:使细胞内蛋白、糖类发生沉淀。

–优点:穿透性强、抗原性保存好。

–缺点:•脱水性强,易引起组织收缩、变硬,影响切片质量,因而乙醇固定时间不宜过长(2h内)。

•乙醇使蛋白变性的作用轻,固定后可再溶解;染色过程中,温育时间长,抗原可流失而减弱反应强度。

(3) 其它固定剂•丙酮:–对抗原性的保存好,但脱水性更强,较少用于组织标本,但细胞爬片常用丙酮固定。

脑类器官固定方法

脑类器官固定方法

脑类器官的固定方法通常涉及使用固定液,如10%的福尔马林,其中甲酸含量为3.6%-4%。

固定液的配制方法是取市售37%-40%的甲醛溶液与蒸馏水按1:9混合。

在实际工作中,可以根据标本体积的大小与固定液体积的比例,适当调整加水的比例至1:5-1:8。

固定时,固定液一般不少于器官组织总体积的10倍。

次日应更换新鲜固定液继续固定数日,以得到较好的效果[4]。

对于脑组织的固定,需要注意避免因压迫导致变形,可以使用细线穿过基底动脉,将脑单独放入一个带盖的容器内,用容器盖住细线两端,使脑呈悬浮状固定。

对于有蛛网膜下腔出血的脑,应在固定前先拍照,然后使用流水冲洗,清除血液后仔细检查脑底动脉环及邻近脑动脉,同时注意检查椎动脉有无破裂并寻找破裂口[4]。

以上就是关于脑类器官固定方法的一些基本信息。

在进行固定时,一定要遵循相应的操作规程,以确保固定的效果达到最佳。

固定液主要成分

固定液主要成分

固定液主要成分
固定液的种类很多,根据配制成分可分为简单型与混合型。

1. 切片标本以一种化学药品配制的固定液叫做简单固定液。

常用的简单固定液有:酒精(乙醇)、福尔马林(甲醛)和醋酸。

其中,酒精穿透力强,固定时间常在1小时以内,高浓度酒精有使材料收缩的作用。

福尔马林固定液一般不单独作固定,而与其他液体混合使用。

醋酸以与水和酒精配成各种比例的溶液,所用浓度为0.2~5%,也常与其他固定剂配合使用。

醋酸穿透性很强,单独使用,有使原生质膨胀的作用,故常与酒精,甲醛等合用,醋酸为固定染色体的优良固定液,因此固定染色体的固定液中,几乎都含有醋酸。

2. 手术标本固定液成分包括:缓冲剂、醛固定剂。

此外,还有一种特殊类型的固定液叫做卡诺氏液,又名卡诺氏固定液,是1886年由比利时细胞学家让·巴蒂斯特·卡诺伊发明的一种固定液。

它是一种由乙醇和乙酸(也可以加入三氯甲烷,即氯仿)配制而成的非水相固定剂,需现配现用。

卡诺氏液主要适用于一般植物组织和细胞的固定,也可以用于手术切除角化囊肿后的局部治疗。

如需了解更多关于固定液的成分,建议咨询专业化学家或查阅化学书籍。

常用的组织固定液及配制

常用的组织固定液及配制

常用固定液‎及其配制固定液分单‎纯固定液和‎混合固定液‎。

1甲醛(forma‎l dehy‎d e)是无色气体‎,易溶于水成‎为甲醛溶液‎。

易挥发,且有强烈刺‎激气味,常用得是3‎7%~40%得甲醛溶液‎,商品名为福‎尔马林(forma‎l in)。

用作固定的‎浓度习惯为‎10%福尔马林(即1份甲醛‎溶液加9份‎水配制而成‎),实际含甲醛‎4%。

10%福尔马林渗‎透力强,固定均匀,对组织收缩‎少。

对脂肪、神经及髓鞘‎、糖等固定效‎果好,是最常用的‎固定剂。

经福尔马林‎固定时间长‎的组织,易产生黑色‎的沉淀,称福尔马林‎色素。

2 乙醇无色液体,易溶于水,它除可作为‎固定剂外,还可作为脱‎水剂,对组织有硬‎化作用。

固定用一般‎是80%~95%浓度,乙醇渗透力‎校弱,它能溶解脂‎肪,核蛋白被沉‎淀后,仍能溶于水‎,因此核的着‎色不良。

3 中性甲醛液‎(混合固定液‎)甲醛(浓)120ml‎,加蒸馏水8‎80ml,磷酸二氢钠‎(NaH2P‎O4?H2O)4g,磷酸氢二纳‎(Na2HP‎O4)13g。

此液固定效‎果比单纯1‎0%福尔马林要‎好。

4 AF液(混合固定液‎)95%乙醇90m‎l,甲醛(浓)10ml。

也有配方是‎95%乙醇85m‎l,甲醛(浓)10ml,冰醋酸5m‎l。

此液除有固‎定作用外,兼有脱水作‎用,因此,固定后可直‎接入95%乙醇脱水。

以上4种固‎定液中,以中性甲醛‎为首选,其次为10‎%福尔马林,乙醇应尽量‎不用。

yzbai‎wrote‎:(1)10%甲醛:对组织渗透‎性强,固定均匀。

对组织膨胀‎约5%,经酒精脱水‎时有较大的‎收缩。

能保存脂肪‎,不能沉淀核‎蛋白及白蛋‎白,长期用其固‎定的组织使‎组织变为酸‎性,不利于染色‎,特别是细胞‎核的着色。

经自来水冲‎洗6~24小时后‎,可以使其酸‎碱中和,并减少结晶‎。

(2)4%多聚甲醛:对组织穿透‎性好,组织收缩小‎,对大多数抗‎原物质保存‎较好,特别是对脂‎肪和各种酶‎的固定效果‎更好。

组织固定液与固定方法选择的探讨

组织固定液与固定方法选择的探讨

“固定”是指将组织浸入适当的化学试剂中,使组织细胞内的物质尽量接近其取材时的形态结构和位置的过程[1]。

固定能使组织中的各种物质沉淀和凝固起来,终止或抑制外源性和内源性酶的活性,防止细胞自溶,保持细胞形态[2]。

固定是制作大体标本和显微镜切片标本的关键,良好的固定有利于切片标本的制作和染色,使组织产生不同的折射率,造成光学上的差异,以便观察、鉴别和硬化组织[3-4]。

固定液可以抑制组织自溶,保持离体组织细胞与生活时的形态相似,使细胞内一些蛋白质等沉淀或凝固,有利于固定后物质的确切定位,是保存组织器官用于病理诊断的必需过程[5-6]。

不同固定液对组织细胞的穿透力不同,可导致细胞内黏多糖、蛋白质、核酸、脂类和低分子质量物质等不同程度的丢失,由固定液因素导致组织细胞形态的改变,对病理诊断产生很大影响,比其他技术操作因素引起的组织细胞形态改变更难把握。

而选取良好的固定液可使组织固定均匀、收缩小、结构清晰,利于保存组织细胞的抗原性,为免疫组化、电镜观察等奠定坚实的基础[7-8]。

本研究就组织固定液和固定方法的选择作如下探讨。

1固定液1.1固定液成分甲醇:为沉淀类固定剂,对组织渗透性强,能迅速沉淀清蛋白、球蛋白和核蛋白[9]。

可以固定核染色质及其部分内容物、核膜、细胞质及胶质等[10],且固定后核浆对比鲜明,组织结构清晰,能基本保持细胞的正常形态[11]。

乙醇:是一种可溶解脂肪和类脂的脂溶剂,穿透力缓慢,长时间浸泡可使组织硬化,细胞核变形,细胞质收缩,蛋白质变性,糖原沉淀[12]。

乙醇对组织细胞既有固定作用又有脱水作用,一般固定组织以80%~95%浓度为好[13]。

丙酮:是一种易燃易挥发的无色液体,对组织渗透力强,能使蛋白质沉淀,但不能很好地保存糖原,且在部分组织中对核的固定效果欠佳[14-16]。

戊二醛:是一种具有双重作用的醛类。

对糖原、糖蛋白、微管内质网和细胞基质等有较好的固定作用可使组织保存良好,适合电镜和酶组织标本的固定,但其穿透力较弱[12,17]。

简述气液色谱固定相中对于固定液的要求

简述气液色谱固定相中对于固定液的要求

气液色谱固定相对于固定液的要求是指在气液色谱过程中,用作固定相的物质对于固定液的要求。

气液色谱是一种高效、精密的分析技术,其分离效果和分析准确性直接受固定相的影响。

固定相对于固定液的要求至关重要。

1. 清洁度在气液色谱中,固定相的清洁度是至关重要的。

固定相必须要求具有较高的纯度,不含杂质,避免在色谱分析过程中对样品产生干扰。

固定相的选择要求必须是清洁的。

2. 稳定性固定相对于固定液的要求还包括其稳定性。

在色谱分析过程中,固定相应该是稳定的,要能够在一定的温度和压力下保持其特性不变。

这样才能够保证色谱分离的准确性和重现性。

3. 选择性固定相对于固定液的要求还包括其选择性。

固定相应该具有良好的选择性,能够对不同成分具有较好的分离效果。

只有具有良好的选择性的固定相才能够适用于不同的色谱分析。

4. 适应性固定相对于固定液的要求还包括其适应性。

固定相必须要求能够适应不同的分析条件和样品特性,具有一定的通用性和灵活性。

气液色谱固定相对于固定液的要求是多方面的,需要具备清洁度、稳定性、选择性和适应性。

只有具备这些要求的固定相才能够保证色谱分析的准确性和可靠性。

在我看来,气液色谱固定相对于固定液的要求是非常重要的,它直接影响了色谱分析的结果。

在选择固定相时,需要根据实际分析的样品和情况来综合考虑其清洁度、稳定性、选择性和适应性。

只有这样才能够确保色谱分析的精确性和可靠性。

气液色谱固定相对于固定液的要求是色谱分析中至关重要的一环。

固定相的选择将直接影响到色谱分离的效果和分析结果的准确性,因此需求具备一定的特性来满足实际分析的需要。

固定相的清洁度是非常重要的。

清洁的固定相能够避免杂质对样品的干扰,保证色谱分析结果的准确性。

在选择固定相的时候,需要考虑其纯度和是否具有良好的清洁性能。

一般来说,固定相的生产厂家通常会对固定相进行严格的纯度检测和清洁处理,以确保固定相的清洁度符合要求。

固定相的稳定性也是至关重要的。

在色谱分析过程中,固定相需要能够在一定的温度和压力下保持其特性不变,以确保色谱分离的准确性和重现性。

组织固定固定液的选择

组织固定固定液的选择

组织固定固定液的选择影响标本固定的因素很多,如组织与固定液的比例、固定时间、固定温度等;除此之外,固定液本身也很重要,若所选固定液不当,细胞内蛋白质、脂类、核酸等成分将会有不同程度地损失。

固定剂最好随配随用,并注意其浓度和酸碱度。

因此根据实际工作的目的,选用合适的固定液非常重要。

下面是一些常用固定液的配制方法及适用范围。

1.单纯固定液(1)4%中性甲醛固定液:最常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。

一般无特殊要求的病理标本均适用。

尤其值得注意的是,中性甲醛是以 pH7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。

此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不超过一个月。

甲醛(40%) 100 ml无水磷酸氢二钠 6.5 g磷酸二氢钠 4.0g蒸馏水 900 ml(2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。

(3)4%的多聚甲醛:主要用于培养细胞的固定。

2.混合固定液(1)乙醇一甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。

该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。

甲醛(40%) 100 ml95%乙醇 900 ml(2)B5(醋酸钠一升汞一甲醛)固定液:多用于固定淋巴组织。

染色前应进行脱汞沉淀处理。

无水醋酸钠 1.25 g升汞 6.0 g蒸馏水 90 ml使用前加入甲醛 10 ml(3)Bouin固定液:特别适用于睾丸活检组织的固定。

Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。

需现配现用。

饱和苦味酸水溶液(约1.22%) 75 ml甲醛 25 ml冰醋酸 5 ml(4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。

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三、碱性染料:
碱性染料的显色基团含有阳离子或本身为阳离子,能与组织或细胞中呈酸性的结构(如细胞核)发生化学结合或吸附作用,使其染上一定颜色的染料。常用于植物细胞核染色的碱性染料有:龙胆紫洋红等。
龙胆紫溶液的配制:将0.5克龙胆紫溶解在100毫升,2%醋酸溶液中配制成0.5%龙胆紫溶液。
小麦:在植株开始挑旗,旗叶与下一叶的叶耳间距为3-4cm,花药长度大致在1-2mm左右,黄绿色时取材最好。如花药为绿色时则为时过早,花药为黄色,则已过时。一般上午8-10点为取材最佳时间。
玉米:一般夏玉米在7月份取材,以上午7-8点为好。在玉米雌穗未抽出前的7-10天手摸植株上部(喇叭口下部)有松软感觉,表明雄花序即将抽出。用刀在顶叶近喇叭口处纵向划一刀,切口长10-15cm,剥出雄花序,顶端花药长3-5mm,花药尚未变黄时取材。
1.固定液的条件
(1)迅速渗入组织,杀死原生质。在杀死的短时期中,细胞形态不致有所变化。
(2)必须具有渗透力,对组织各部分的渗透力相等,可使组织内外完全固定。
(3)尽可能避免使组织膨胀或收缩。
(4)使细胞内的成分凝固或沉淀。
(5)增加细胞内含物的折光程度,易于鉴别。
(6)增加媒染作用和染色能力。
固定液的种类很多,制作洋葱根尖细胞分裂装片,使用的是卡诺固定液。配方是:3份95%酒精与1份冰醋酸配制而成。把根尖投入盛有固定液的容器内,盖上盖子固定12~24小时,然后从固定液中取出,用90%酒精漂洗,最后放入70%酒精中保存,备用。
根尖固定时,固定液可迅速杀死细胞,并保持细胞不变形,维持生活时的状态。
蚕豆:从现蕾开始,上午10-11点可选取2-3mm大小的花蕾或一小段花序。蚕豆开花的次序是由下而上,由外而内。
3.固定时的注意事项
(1)固定液量:20倍于材料的体积,以免固定液被稀释。
(2)选择合适的固定液:渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中,又不使组织过度收缩或膨胀。
(3)固定的时间要合适:
与材料的大小和温度有关:材料大则时间长,材料小则时间短;温度高则时间短,温度低则时间长。
经固定的材料如不及时使用,可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时,再换入一次70%酒精,在0-4℃冰箱内可保存半年。经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次,效果较好。
(二)固定液 固定液包括简单固定液和混合固定液两种。简单固定液就是用一种药品作为固定液,如乙醇、甲醛、冰醋酸、升汞等。简单固定液只对细胞的某种成分固定效果较好,而不能将所有的成分都保存下来。混合固定液是指两种或两种以上的化学物质的混合液,如卡诺氏固定液等。
各种细胞器的增生,都是在细胞分裂之前的间期发生的。细胞器在子细胞中的分配不是平均的。
二、细胞固定和固定液:
观察植物细胞有丝分裂常用洋葱根尖做实验材料。为保证实验时能观察到较多的有丝分裂各期的分裂相,必须在根尖细胞处在分裂高峰时剪取。但往往实验课时间与分裂高峰期不合,如分裂相很少,必然影响观察效果。为此,可将处于分裂高峰时的新鲜洋葱根尖进行固定处理,留待实验时随时使用。
一、固定与固定液
(一)固定:将新鲜的活组织从生物体取下后,立即投入固定剂中,借助化学药品的作用,使细胞保持原有形态、结构的一种手段。
1.目的
(1)迅速防止细胞死亡后的变化,防止自溶、腐败,尽量保持生长状态结构。
(2)使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质,以保持生前的形态。
(3)使组织内各种物质成分产生不同的折光率,便于观察和鉴定。
(2)甲醛水溶液:甲醛在水中的溶解度为37-40%,渗透力强,固定均匀,对组织收缩作用小,一般用于固定大材料。市售溶液中含量下降,因形成三聚甲醛而失效。
(3)冰醋酸:纯醋酸在温度稍变低时即形成冰晶,所以又称为冰醋酸。常用0.3-0.5%的浓度作为固定液。冰醋酸对材料有膨胀作用,对核蛋白固定好,可与水、酒精、氯仿混合。
实验证明:细胞分裂成两个子细胞时,不仅获得了成套染色体,也获得了细胞中的各种细胞器。子细胞获得的细胞器,只能通过原有的细胞分裂增生,它们不能在细胞质中重新产生。
例如,线粒体在细胞分裂时也分裂一次,子细胞就得到一份线粒体。高尔基体和内质网是在细胞分裂时,破成碎片或小泡,再分别进入子细胞中。
(4)使不同组织成分对染料有不同的亲和力,便于染色。
(5)防止细胞过度收缩或膨胀,失去原有的形态结构。
2.时期
(1)有丝分裂:有丝分裂主要发生在根尖、茎生长点及幼叶等部位的分生组织,根尖取材容易,操作和鉴定方便。
(2)减数分裂:选取适当大小的花蕾是观察花粉母细胞减数分裂的关键性的第一步。此时的植株形态及花蕾大小依植物的类别及品种有所不同。
(4)AF液:90ml乙醇+10ml甲醛 用于固定大块组织。
(5)卡诺氏固定液: 冰醋酸:氯:无水乙醇=1:3:6
改良卡诺氏固定液: 冰醋酸:无水乙醇=1:3
根尖固定时,固定液可迅速杀死细胞,并保持细胞不变形,维持生活时的状态。
小资料
一、细胞器的分配问题:
细胞的有丝分裂中,细胞核内染色体的“复制和均分”,从而使亲子代体细胞保持染色体数目恒定。那么,有丝分裂细胞质中的细胞器又是如何分配呢?
(7)使组织变硬,具有一定的硬度。
(8)固定以后能起到保存的作用。
(9)在凝固原生质以后,增加细胞对于各种穿透的抵抗力,不致于因以后的处理而使固定的原生质变形。
2.常用的几种固定液
(1)酒精:有固定、硬化和脱水的作用。可以固定白蛋白、球蛋白、核蛋白,但对核蛋白固定效果较差(亲和力小且易自溶)。酒精固定的特点是杀死快,渗透力强,对组织收缩较大(可收缩20%左右),可使材料变硬。酒精常用于混合固定液中,但由于它本身是一种还原剂,很容易氧化成乙醛,甚至氧化成醋酸,因此最好不与三氧化铬、重铬酸钾及锇酸等氧化剂配合使用。但与甲醛、醋酸或丙酸配合,用作固定效果很好。酒精能溶解脂肪及凝脂,故不宜用来固定脂类材料。
醋酸洋红溶液的配制:将1克洋红与100毫升冰醋酸混合后煮沸,煮时可加锈铁钉一枚,略具铁质的1%醋酸洋红染液能增强染色效果。
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