奶粉中三聚氰胺的高效液相色谱快速测定法
高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺
高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺三聚氰胺（Melamine）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革等行业，为白色晶体。
三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》（GB/T22400-2008）的国家标准。
本文参考了以上标准并进行配制条件优化，建立了液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、重现性以及回收率均符合国家标准。
1 实验部分1.1 仪器与试剂LC1600高效液相色谱仪（含UV1600紫外-可见检测器1台，P1600高压恒流泵1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；AT-330色谱柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；FA2004分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；TGL-16G-A离心机（上海安亭科学仪器厂）；三聚氰胺标准品(>99%，上海安谱)；辛烷磺酸钠(色谱纯，北京百灵威)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯，美国Tedia)、纯净水(杭州娃哈哈)。
1.2 标准品溶液配制精密称取三聚氰胺标准品，溶于50％的甲醇水溶液，配制称1.422mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。
根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。
1.3 样品前处理称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混匀后超声提取15min。
取提取液250ul，加入0.1mol/l盐酸750ul，混匀，以12000r/min离心5min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC 测定溶液。
1.4 色谱条件：色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)流动相：乙腈/缓冲盐=15/85（缓冲盐：10mM辛烷磺酸钠水溶液，含0.1％磷酸）流速：1.0ml/min波长：240nm温度：40℃进样量：20μl2 实验结果2.1 精密度实验取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样5次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.23％，峰面积RSD为0.57％。
高效液相色谱内标法测定奶粉中三聚氰胺
高效液相色谱内标法测定奶粉中三聚氰胺邸万山【摘要】以双氰胺为内标物,采用高效液相色谱内标法测定奶粉中三聚氰胺的含量,通过对色谱条件的优化,最后确立了有效的检测方法.样品经20 mL 50℃热水,0.5g 无水硫酸镁,10 mL乙腈提取后,采用Nova-PakC18色谱柱(3.9 mm×15 mm×5 μm)分离,以0.01 mol/L乙酸铵∶乙腈=90∶10 (V∶V)作为流动相,218nm为检测波长.结果表明,双氰胺在该条件下能够与三聚氰胺完全分离,可以作为测定三聚氰胺的内标物.在0.500～1.500 mg/kg的添加范围内,三聚氰胺的回收率为98.2％～100.5％.精密度实验结果相对标准偏差为0.44％.所测定奶粉样品中三聚氰胺为0.223 mg/kg.此法处理样品处理简便易行,回收率、准确度高,分析速度快,具有良好的重复性和再现性,适于测定奶粉中的三聚氰胺.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)003【总页数】3页(P145-147)【关键词】三聚氰胺;高效液相色谱法;奶粉【作者】邸万山【作者单位】辽宁石化职业技术学院应用化学系,辽宁锦州121001【正文语种】中文【中图分类】TS207.3三聚氰胺作为一种价格低廉的有机化工原料，其最大的特点就是含氮量高（质量分数为66.6%），掺假增氮效果明显，成本低。
因此，在技术上和经济上存在奶粉中掺加三聚氰胺的可能。
研究表明，三聚氰胺长期累计摄入会导致肾、输尿管和膀胱结石，并有生殖系统损伤的可能性［1］。
因此有必要对奶粉中的三聚氰胺进行监测，明确其实际含量，防患于未然。
奶粉中总氮质量分数测定国家标准中使用凯氏定氮法，该方法对设备要求低，操作相对简单，但精度差。
国家规定奶粉中残留三聚氰胺限量＜1 mg/kg。
液态奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5 mg/kg，高于2.5 mg/kg的产品一律不得销售。
三聚氰胺奶粉检测方法
三聚氰胺奶粉检测方法三聚氰胺奶粉的检测方法是保障食品安全的重要手段之一。
随着科技的不断发展，各种先进的检测方法被不断研发和应用。
本篇文章将介绍几种常见的三聚氰胺奶粉检测方法，以及它们的原理和应用情况。
1. 高效液相色谱法高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的三聚氰胺奶粉检测方法。
该方法基于样品中三聚氰胺的特征物理化学性质，通过色谱柱分离，再通过紫外灯或荧光检测器进行检测和定量分析。
这种方法具有检测灵敏度高、准确度高、可定量分析和操作简便等优点，被广泛应用于三聚氰胺奶粉的检测中。
2. 气相色谱质谱法气相色谱质谱法（Gas Chromatography-Mass Spectrometry，GC-MS）是一种高灵敏度的三聚氰胺奶粉检测方法。
该方法通过将样品中的三聚氰胺与气相色谱柱分离，再通过质谱仪检测和定量分析三聚氰胺的含量。
气相色谱质谱法具有灵敏度高、准确度高、避免了色谱柱选择的限制等优点，被广泛应用于三聚氰胺奶粉的检测领域。
3. 红外光谱法红外光谱法（Infrared Spectroscopy）是一种非破坏性的三聚氰胺奶粉检测方法。
该方法通过样品中三聚氰胺分子和红外光的相互作用，产生吸收峰或透射峰，再通过光谱仪进行检测和定量分析。
红外光谱法具有快速、直观、无需样品处理等优点，但其灵敏度相对较低，适用于大批量样品的初筛。
4. 质谱法质谱法（Mass Spectrometry，MS）是一种高灵敏度、高选择性的三聚氰胺奶粉检测方法。
该方法通过样品中三聚氰胺分子与质谱仪中的电子束或激光束相互作用，形成离子碎片，再通过质谱仪对离子碎片进行检测和定量分析。
质谱法由于其高灵敏度和高选择性的特点，在三聚氰胺奶粉的检测中具有较高的应用价值。
5. 快速检测试纸法快速检测试纸法是一种便携、迅速的三聚氰胺奶粉检测方法。
该方法通过在试纸上固定一定的试剂，当样品与试纸发生反应后，试纸上的颜色或形态发生变化，从而判断样品中是否存在三聚氰胺。
高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺的含量精选全文
测定奶粉中三聚氰胺的含量 ——高效液相色谱法
生物工程1001班
目录
1
三鹿毒奶粉事件
2
液相色谱法简介
3
样品检测方案
4
结论与反思
毒奶粉事件回顾
❖ 2008年7月，举国上下正在为刚刚过去的 汶川大地震默哀纪念的时候，正在为即将到 来的北京奥运会而欢庆的时候，一则新闻报 道了大量婴儿因喝了某品牌奶粉而患上了肾 结石。随后三鹿集团被推上了风口浪尖，一 时间包括蒙牛、伊利在内的全国各大品牌奶 粉均被查出“毒奶粉”，引起了全国恐慌， 三鹿集团因此也破产倒闭。而这一毒奶粉事 件的罪魁祸首——三聚氰胺也随之为大众知 晓。
样品的来 源和预处 理方法
确定仪器 配置
确定初始 操作条件
定性鉴定 与
定量分析
实验结果 及判定
样品的来源和预处理方法
❖ 高效液相色谱法要求试样能制成溶液。这样， 我们在接到一个未知样品时，就必须了解的来 源，从而估计样品可能含有的组分，以及样品 的溶解度范围。如果样品体系简单，试样组分 可溶解则可直接分析。如果样品中有不能用 HPLC直接分析的组分，或样品浓度太低，就 必须进行必要的预处理，如采用吸附、解析、 萃取、浓缩、稀释、提纯、衍生化等方法处理 样品。
④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液 相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差 化合物的分离分析，显示出优势。
⑤分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得 多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分 钟内即可完成，一般小于1小时。
样品检测方案
高效液 相色谱 法检测
0.5μg/mL，1μg/mL，2μg/mL的标准工作液和中样品处理后的浸泡液 注入色谱仪中，以保留时间定性，以色谱峰面积或峰高定量。
高效液相色谱HPLC法测定三聚氰胺成分含量
高效液相色谱法测定奶制品中三聚氰胺1引用标准按照国家标准GB/T 22388-2008，三聚氰胺简称三胺，是一种重要的氮杂环有机化工原料。
因三聚氰胺分子中含有大量氮元素，一些不法厂商通过添加这种化工原料，提高产品中蛋白质含量。
2方法原理：采用HPLC法测定三聚氰胺，成本低，不需要衍生，简便易行。
采用外标法进行定量分析。
本方法采用南京科捷LC-600二元高压梯度，按照国家标准GB/T 22388-2008对牛奶中三聚氰胺进行检测。
该方法稳定可靠，检测范围广泛。
3. 仪器和试剂LC-600二元高压梯度系统：输液泵，配梯度单元和在线脱气装置；LC-600紫外检测器；手动进样器7725i，色谱工作站N2000P,离心机1台（转头6*50ml）；固相萃取小柱和萃取装置；氮吹仪；三聚氰胺对照品购自sigma公司，样品液态奶购买于超市，实验中用到的其他试剂如三氯乙酸、氢氧化钠、柠檬酸和辛烷磺酸钠均为分析级。
4. 色谱条件色谱柱：V enusil ASB-C18 4.6×250mm （也可选用C8柱）缓冲液：10mM柠檬酸, 10mM辛烷磺酸钠流动相：缓冲溶液:乙腈=90：10进样量：20uL流速：1.0mL/min柱温：40℃5. 样品制备按照GB/T 22388-2008中3.4节进行：称取2g（精确到0.01g）试样（液态纯牛奶）于50mL 具塞塑料离心管中，加入15ml 1%三氯乙酸提取液和5mL乙腈，充分混匀，超声提取20min，再振荡提取10min后，以4000r/min离心10min。
上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL滤液，过混合型阳离子固相萃取小柱(PCX)。
洗脱液于50℃下氮气吹干，残留物用20%甲醇的水溶液定容至1mL。
6. 定性分析称取三聚氰胺标准品适量，流动相溶解，按照上述色谱条件，进入色谱仪分析。
保留时间分别为4.75min。
7. 样品测试按照上述样品处理方法和色谱条件，对样品进行测定，得到色谱图如图1所示。
高效液相色谱法测定奶粉和液态奶中的三聚氰胺
。
图 1
聚氰胺 的结构 式
以 往 常 见 报道 的是 关 于 饲 料 中三 聚 氰胺 的检测
实验部分
．
方法 主要 有 高效液 相 色谱 质 谱 法
．
卜
川
、
，
高效 液 相
。
1
1
仪 器 材 料 与试 剂
、
色谱法 ( H P L C )
㈦
引
、
气相色谱 质谱法
．
…
关于奶
Wa te
r s
公司
2695
型 高效液相 色谱仪 ( 带二 极
to gra p hy
(HPLC )
；
m e
la
n i
e ； m
il k p
de
r ； m
il k
三 聚氰 胺俗称 蜜胺
，
分子 式 为
c
，
N 。H
。
，
结构式
液 态 奶 的基 质 与饲 料 不 同 干 扰 因 素 的差 异 较 大 饲
，
，
见图
，
1
。
三 聚氰胺是
一
种重 要 的氮杂环 有 机 化工 原
一
料 中三 聚 氰 胺 的 测 定 方 法 不 适 用 于 奶 制 品 的 测 定
因此 有 必 要 建 立 的检 测 方法
。
一
，
料 主要 用 于 生 产三 聚氰胺 甲醛树脂 广 泛 应 用 于
，
套 针 对 奶 粉 和 液 态 奶 中三 聚 氰 胺
、
木材加 工 塑 料 涂 料 造 纸 纺 织 皮革 电气 医 药
、 、
、
、
、
、
三聚氰胺 检测方法
三聚氰胺检测方法
三聚氰胺是一种有机化合物，常用于制造塑料、胶粘剂和涂料等工业产品。
然而，由于其毒性较高，三聚氰胺被广泛用作食品和饲料中的掺假物质，这对人和动物的健康构成了威胁。
因此，需要采用有效的方法进行三聚氰胺的检测。
以下是几种常用的三聚氰胺检测方法：
1. 高效液相色谱法（HPLC）：这是一种常用的分析方法，可以在饲料和食品中测定三聚氰胺含量。
样品经过净化、提取和洗脱等步骤后，通过高效液相色谱进行分离和定量分析。
2. 饲料掺假检测：主要通过检测饲料中的蛋白质含量来排除三聚氰胺的掺假情况。
由于三聚氰胺会增加饲料样品中的蛋白含量，因此检测饲料中的蛋白质含量可以间接检测三聚氰胺。
3. 红外光谱法（IR）：通过测量样品在红外光谱范围内的吸收和散射特性来确定三聚氰胺的存在。
这种方法需要先将样品制备成片状，然后使用红外光谱仪进行测量和分析。
4. 酶联免疫吸附测定法（ELISA）：这是一种基于抗体-抗原特异性反应的分析方法，可以快速准确地测定三聚氰胺的含量。
ELISA方法可以用于快速筛查食品和饲料样品中的三聚氰胺。
这些方法都具有各自的优缺点和适应范围，选择合适的方法应根据实际需求和样品性质进行综合考虑。
三聚氰胺的测定—液相色谱法
C18柱，离子对试剂缓冲液-乙腈（90+10，体积比），混合。
流速：1.0 mL/min
柱温：40℃
波长：240 nm
进样量:20 μL
五、高效液相色谱测定
高
效 液
标准曲线的绘制
相
用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.8、2、20、
色 谱
40、80 μg/ml的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度
效 液
甲醇：色谱纯
相
乙腈：色谱纯
色 谱 法
氨水：含量为25％～28％ 三氯乙酸
柠檬酸
辛烷磺酸钠：色谱纯
甲醇水溶液：准确量取50 mL甲醇和50 mL水，混匀后备用。
三氯乙酸溶液（1％）：准确称取10 g三氯乙酸于1 L容量瓶中，用水溶解并定容 至刻度，混匀后备用。
二、试剂和材料
高
效
氨气：纯度大于等于99.999％
三、仪器和设备
高
效
高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外线检测器或二极管阵列检测器
液 相
分析天平：感量为0.000 1 g和0.01 g
色 谱
离心机：转速不低于4 000 r/min
法
超声波水域
固相萃取装置
氨气吹干仪
涡旋混合器
具塞塑料离心管：50 mL
研体
四、分析步骤
氨化甲醇溶液（5％）：准确量取5 mL氨水和95 mL甲醇，混匀后备用。
液
离子对试剂缓冲液：准确称取2.10 g柠檬酸和2.16 g辛烷磺酸钠，加入约980 mL
相
水溶解，调节PH至3.0后，定容至1 L备用。
色
三聚氰胺标品：CAS08-78-01，纯度大于99.0％
三聚氰胺 检测方法
中华人民共和国质量监督检验检疫ICS 67.100.10 X 82中华人民共和国国家标准中华人民共和国质量监督检验检疫总局 乳与乳制品中三聚氰胺残留的测定—高效液相色谱法Milk and Milk Product Detection ofMelamine Residues —HPLCA.1乳与乳制品中三聚氰胺残留的测定—高效液相色谱法1 范围本方法规定了用HPLC与GC-MS测定三聚氰胺的方法。
本方法适用于乳与乳制品中三聚氰胺含量的测定。
本方法三聚氰胺的最低检出限为1.0mg/kg。
1 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
NY/T 1372-2007 饲料中三聚氰胺的测定GB5009.1 食品卫生检验方法理化部分总则GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法2 原理试样中的三聚氰胺用乙腈、水的混合溶液萃取，乙酸锌溶液沉淀蛋白质后，提取液经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，净化液用高效液相色谱进行测定，外标法定量。
3 试剂与材料：除另有规定外，试剂为分析纯，水符合GB/T6682规定的三级水，色谱用水符合一级水的规定。
3.1 乙腈：色谱纯3.2 甲醇：色谱纯3.3 氨水：浓度25%～28%3.4混合型阳离子交换固相萃取小柱：60mg/3mL3.5 三氯乙酸溶液10g/L ：称取10g三氯乙酸加水至1000mL。
3.6 乙腈水溶液：乙腈:水为50：503.7 盐酸溶液：0.1mol/L3.8 氨水-甲醇溶液：量取5mL 氨水，溶解于100mL 甲醇中。
3.9 乙酸锌溶液219 g/L：取219g乙酸锌用300mL 水溶解后，定溶至1L。
3.10 20%甲醇溶液：200mL 甲醇，溶解于800mL 水中。
高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的含量-分析设计实验方案
高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的含量实验部分高效液相色谱法（HPLC）1、试剂与材料（除非另有说明，所有试剂均为分析纯。
）1.1 甲醇：色谱纯，200ml1.2 乙腈：色谱纯,10ml1.3 乙酸铅:0.5g1.4 柠檬酸:1.0640g1.5 辛烷磺酸钠：色谱纯,0.9508g1.6 三氯乙酸：2.5g1.7 三聚氰胺：0.2500g试剂配制⏹三氯乙酸溶液（1％）：准确称取2.5g三氯乙酸用水溶解后转移至250mL容量瓶中，定容至刻度，混匀后备用。
⏹离子对试剂缓冲液：准确称取0.9508 g 辛烷磺酸钠（5mmol/L）+ 1.0640g柠檬酸（pH=3-4）用蒸馏水配制1L溶液，备用。
⏹三聚氰胺标准储备液：准确称取0.2500g（精确到0.1 mg）三聚氰胺标准品于100mL 容量瓶中，用甲醇水溶液（20%）溶解并定容至刻度，配制成浓度为2.5 mg/mL的标准储备液，低温避光保存。
2、仪器和设备2.1 高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。
2.2 分析天平：感量为0.0001 g。
2.3 离心机：转速不低于4000 r/min。
2.4 超声波水浴。
2.5 具塞塑料离心管：50mL。
3、样品处理分别称取3份5 g（精确至0.0001g）奶粉于50mL具塞塑料离心管中，各加入5mL配制好的2.5g/L的三聚氰胺溶液，编号1、2、3，往1号试管中加入20mL 三氯乙酸溶液，往2号试管中加入15mL三氯乙酸和5mL乙腈溶液，往3号试管中加入20ml乙酸铅的三氯乙酸溶液，超声提取10 min，后以4000 r/min离心10 min。
各取三支试管中上清液10mL于3个25mL容量瓶中用水定容，待测。
4、高效液相色谱测定4.1 HPLC条件a) 色谱柱：CNWSIL C18液相色谱柱（4.6×250mm，5 µm）b) 流动相：A液：0.9508 g 辛烷磺酸钠（5mmol/L）+ 1.0640 g柠檬酸（pH=3-4）用高纯水品配制1L溶液；B液：甲醇；色谱条件：30%B+70%A。
高效液相色谱法测定液态奶三聚氰胺方法的建立
－ ｉ ｉｏ 张培君 ， １ 陈小玲 ， 苗得 园， 鸡传染性 鼻炎 流行病学调查（ 等． Ⅱ）
－ ． ｌ］ 中 国 兽 药 杂 志 ，０ １ ３ （） ２ －３ Ｊ ２ ０ ，５ １ ｌ１２ ．
， １ １ 陈天寿． ７ 微生物培养基的制造与应用［ ． Ｍ］ 北京 ｔ 中国农业 出版
社 ，９５ ２ ８２ ９ １ ９ ｌ３ －３ ．
Ｈａ ｍｏ ｉｕ ａ ａ ａ ｌｎ ｒ ｍ ｓ ｌ ｔ ｅ ｐｈ ｌ ｓｐ ｒ ｇ ｌｉ ａ ｕ Ｉ ｏ ａ ｅ
Ｌ ｉ ｆｎ Ｘ Ｅ Ｃｈ ｎｆ。 Ｌ Ｕ Ｈｏ ｇ ， ＩＱ ｎ －ｕ Ｌ ＡＮＧ ｈ ｎｊｎ ， ＡＯ Ｗ ｅ ｆｎ 。 Ｉ ｅ ｅ ｇ ， Ｉ ｕ —ｕ ， Ｉ ｎ Ｌ ｉｇｓ ｏ ， Ｉ Ｊ－ Ｚ ａ－ 。Ｇ ａ ｉａ ｇ —
福。 苏敬 良， 北京 ： 译．
ｎ ｌ ｉｐｏ ｅ ｉ ｆ ｅ ａ ｇ ｔ ｉ Ｊ ． ｍ Ｖ ｔ ｅ， ９ ２ ｏ ｇ ｐ ｒ ｅ ｏ ｍ ｇ ｌ ｉ ｎ １ Ａ ｅ ｅ Ｒ ｓ １８ ， ｏ ｃ ｒ ｔｓ ｈ ｕｎ １ － Ｊ
４ １ １ － ３ ４ ３ｌ ３ １ １ １ ．
， １ １ １ 张培君 ， １ 苗得 园 ， 玉 梅， Ｂ型 副鸡 嗜血杆 菌的分 离鉴定 龚 等． － ． ｌ］ 中国预防兽医学报 ，０ ３ ２ （ ） ５－８ Ｊ ２ ０ ．５ １ ６５． ［ ２ 孙慧玲 。 １３ 苗得 园， 王艳平 ， Ｂ型剐鸡 嗜血杆菌北京株 的分 离 等． 与鉴定 ［ ． Ｊ 中国兽医杂志 。０ ５ ４ （） ２ －９ ］ ２ ０ ，１ ２ ｔ８２．
检 测限 为 ０ ５ｍｇ ｋ ， ． ／ ｇ 定量 限 为 １ｍｇ ｋ 。 高效液相 色谱 法 测定 液 态奶 中三 聚氰 胺 的方 法灵敏 度 高 ， 用 于 ／ｇ 适
固相萃取-高效液相色谱检测法测定蛋制品中三聚氰胺残留量
谱纯 ）进 行溶解 ，所得 到的溶剂置入 固相萃 取柱 中，需要注 意的是 固相 萃取柱在使用 之 前应该用 乙腈 （ 色谱纯 ）进 行润洗 。在 固相 萃取柱填充完毕 以后 ，用 ５ ． ０ ｍｌ 的２ ０ ％ 氨水 乙腈溶液 进行洗脱 。对洗脱 液进行处理 ，在 水浴 的情况下用 Ｎｚ（ 氮气 ）吹干洗脱液 ，温 度控制在 ４ Ｏ度至 ４ ５度之 间。对于其 中的残 渣 一定要用流动相将其溶解 ，同时进行定容 ， 体积为 ｌ ｍｌ 。 ２ ． ２ ． ２标 准 曲线 的 设定 对贮 备液进行稀 释处理 ，配制相应 的标 准 液 ，其 浓 度 为 ０ 、０ ． ０ １ 、０ ． ０ ２ 、０ ． ０ ５ 、０ ． １ ０ 、 ０ ． ２ ０ 、０ ． ５ ０ 、１ ． Ｏ Ｏ ｇ ／ ｍｌ 。对 其中 的每个 浓度 重复测定 ５次 ，根据测定结果的平均值描绘 出相应 的标准 曲线， 以此来作为样 品定量 的 标准 。 ２ ． ２ － ３测定样 品的回收率 取 ２ ． ０ ｇ蛋制 品样 品放入离心管 中，并将 已配制好 的标准 液加入 到离心管 中，在 混合 以后静置 １ ５分钟左右按照上述实验方法进行 测定并计算相应 的回收率 。添加浓度为 ０ ． ０ ２ 、 Ｏ ． ０ ５ 、０ ． １ Ｏ ｍｇ ／ ｋ ｇ ，每个浓度 的样 品重复测定 ５ 次。
１ 、三聚氰胺 的基本性质
三 聚氰胺 外观 呈现为 白色、单斜 晶体 ， 其熔 点为 ３ ０ ０度 ，相对密度为 １ ． ５ ７ ３ ，相对蒸 汽 密度 为 ４ ． ３ ４ ，饱和蒸汽压为 ６ ． ６ ６ ｋ Ｐ ａ ，在 ２ ０ 度 时水 中的溶解度 为 ０ ． ３ ３ ｇ ，其水溶性 较差， 易溶 于有 机溶 剂 如（ ＨＯＣ Ｈ２ ） ２乙二 醇 、 Ｃ Ｈ３ ＣＨ２ ＯＨ （ ￣醇） ，不溶于 Ｃ Ｃ１ ４ （ 四氯化碳） 、
高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺的含量
高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺的含量姓名：班级：学号：摘要：三聚氰胺是一种低毒的化工原料，动物实验结果表明，其在动物体内代谢很快且不会存留，主要影响泌尿系统。
乳制品中添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量偏高，从而使劣质食品通过食品检验机构的测试，就送检的奶粉样品，采用高效液相色谱法（HPLC）测定其中的三聚氰胺的含量。
关键词：三聚氰胺食品质量与安全奶粉标准依据高效液相色谱检测方法1材料与方法1.1盐酸（HCl）。
1.2盐酸苯肼（C6H8N2•HCl）。
1.3铁氰化钾（K3[Fe（CN）6]）。
1.4硫酸（H2SO4）。
1.5氢氧化钠（NaOH）。
1.6盐酸（HCl）（10+2）：量取100mL盐酸，加入20mL水中，混匀。
1.7盐酸（HCl）（1+1）：量取50mL盐酸，加入50mL水中，混匀。
1.7盐酸苯肼溶液（C6H8N2•HCl）（10g/L）：称取1.0g盐酸苯肼，加80mL水溶解，再加2mL盐酸（10+2），加水稀释至100mL，过滤，贮存于棕色瓶中。
1.8铁氰化钾溶液（K3[Fe（CN）6]）（20g/L）：称取2.0g铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。
1.9硫酸（H2SO4）（1+35）：量取1mL硫酸缓慢注入35mL水中，混匀。
1.10碘标准溶液（I2）（0.1mol/L）：配制和标定按照GB/T601或购商品化标准物质。
1.11硫代硫酸钠标准滴定溶液（Na2S2O3）（0.1moL／L）：配制和标定按照GB/T601或购商品化标准物质。
1.12氢氧化钠溶液（NaOH）（40g/L）：称取4g氢氧化钠，加水溶解并定容至100mL。
1.13甲醛标准储备液（CH2O）原理：以三聚氰胺为原料制作的成型品经4%乙酸浸泡，浸泡液中三聚氰胺用高效液相色谱分离、测定，以保留时间定性、峰高或峰面积定量。
1.14 奶粉1.1 主要材料与试剂1.1.1盐酸（HCl）。
1.1.2盐酸苯肼（C6H8N2•HCl）。
原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法
表１标准 工作溶液配制 （ 高浓度 ）
和实验方法
３原理
用 乙腈 作 为原料 乳 中的 蛋 白质沉 淀剂和三聚氰胺提取剂 ，强阳离子交换 色谱柱分离 ，高效液相 色谱 一 紫外检测
表２标准工作溶液配制 （ 低浓度 ）
１ ６
６测 定步骤 ０ 。
６ １ 试 样 的 制 备 ．
ｌ ｜ｌ ｉ
０ ． ｜ １ 。 ◆ ０ ０誊
＿ ｊ
警凄疑 ｜｜ 。
经透 露渺 ｌ 包
。ｊ ｜ ｜
ｌ 客 ≥ ３ ｊ２ ８ ～ 客 趣 。
｛ ｊ ５ｉ ｛ ； ，㈧ 媛 嘛汀 骏托嫂媳 ｝ 润後越 渊 电透
化辨 窭 ｂ会氆 弧毁 ｉ 料ａ Ｉ 凝 ｉ 《 ｝ 法透 川 啄纠孚 Ｌ 聚 姚 ｉ
０． ５ ／ｋ ０ ｍｇ ｇ。
器／ 二极管阵列检测 器检 测 ，外标法定
量。
（ ． ． ） ，置于 １０ 容量瓶 中 ，用 ４６ １ ０ ｍＬ
水稀释 至刻度 ，混匀。 ４． ３ 按 表 １ 别 移 取 不 同 体 ６． 分
Ａ试专 瓤
ｌ ｌ
积 的标 准 溶 液 Ａ （ ６． ）于 容 量 ４． １
４． 三 聚 氰 胺 标 准 贮 备 溶 液 ： ５
１０ ． ０× １ ０ｍｇ／ Ｌ。
溶 解 后 ，用 磷 酸 （ ２ ４． ）调 节 ＰＨ至
３０ ． ，用水稀 释至 １ Ｌ，用 滤膜 （ ． ） ４ ９
过滤后备 用。
２规范性引用文件
下 列文 件 中的 条款通 过 本标 准的 引用而成为本标准的条款。凡是注 日期
４ ３磷酸二氢钾 （ ． ＫＨ２ Ｏ ）。 Ｐ ４
注 ：当原 料乳 中三聚 氰胺 的含 量
高效液相色谱法测定乳粉中三聚氰胺的方法优化
高效腋相色谱法测定乳粉中三聚氟服的方法优化■文丨卢竹阳沈蕾陈丹莹柏宁江苏省南通市产品质量监督检验所二聚気胺含氮量高，俗称“伪蛋白”，几乎无味，微二^溶于水，可溶于甲醇、乙酸、甲醛等，经常被用作化工原料，对健康有害，我国明确规定三聚氟胺不是食品原料，也不是食品添加剂，禁止人为添加。
“三鹿奶粉”事件影响恶劣，也给食品检验机构敲响警钟，三聚氧胺参数在乳品检测中成了必检指标，研究其检测方法尤为重要。
GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氧胺检测方法》明确规定，测定三聚気胺有三种方法，即液相色谱-质谱/质谱法、气相色谱-质谱联用法和高效液相色谱法前两种方法涉及的仪器高端精密，费用昂贵，后续维护保养较为繁琐，不具备普遍性，本文对高效液相色谱法检测乳粉中三聚氧胺的前处理和色谱条件进行了优化。
一、材料和方法1.仪器。
Agilent-1200高效液相色谱仪（VWD）,多功能氮吹仪，高速冷冻离心机，数控超声波清洗器，电子天平（I级），固相萃取联用仪，SPE小柱：Poly-Sery MCX,60mg/3mL o2.试剂。
三聚氟胺标样（1.0mg/mL）,甲醇、乙睛、正己烷均为色谱纯，柠檬酸、辛烷磺酸钠、氨水、三氯乙酸均为分析纯。
3.样品前处理。
（1）提取"准确称取lg乳粉置于50ml具塞离心管中，加入8ml三氯乙酸溶液（1%）和2ml乙睛,超声提取约lOmin,涡旋提取约lOmin,9500r/min离心8min,取上清液于50ml离心管中；残渣重复提取一次，合并两次提取液，加入10ml三氯乙酸溶液和饱和的正己烷溶液，涡旋振荡lmin,9500r/min离心6min,取下层清液，待净化.（2）净化"依次用3ml甲醇和5m冰对SPE小柱进行活化和平衡，抽至近干；将待净化的清液转至SPE小柱中，用3ml水和3ml甲醇进行淋洗，抽至近干；用6mL氨化甲醇溶液（5%）洗脱，洗脱液于5（TC氮气吹干，残留物用lml 流动相定容，涡旋混合lmin,过0.22|xm微孔水相滤膜后，供测定。
乳制品中三聚氰胺的含量的测定(高效液相色谱法)实验报告
2009级化学教育仪器化学综合性与设计性实验指导老师：曹** 2011年 5月 30号一、实验目的1．通过分析化学综合性实验、设计性实验，培养学生初步的解决分析化学实际问题的能力，培养学生的创新意识与创新能力。
2．学习查阅参考文献、综合参考资料、设计小型分析化学实验。
3．复习和巩固有关理论基础知识并用于指导实践。
4．进一步熟练掌握实验操作技术。
①实验题目：乳制品中三聚氰胺的含量的测定（高效液相色谱法）②摘要、关键词：[摘要]为建立乳制品中三聚氰胺含量的高效液相色谱测定方法, 通过超声提取, 离子交换萃取小柱净化, 结合高效液相色谱进行样品测定。
色谱条件: A液：0.9508 g 辛烷磺酸钠（5 mmol/L）+ 1.0640 g柠檬酸（pH=3-4）用高纯水品配制1L溶液；B液：甲醇；色谱条件：30%B+70%A。
色谱柱：CNWSIL C18液相色谱柱（4.6×250mm，5 µm），检测波长：239 nm结果表明: 三聚氰胺标准曲线为y = 4495951x +18978.83, 相关系数R = 0.9999693, 在0.17～110.0 mg/L范围内线性关系良好, 方法检出限为0.12 mg/L, 两个样品三个水平的加标回收率分别为96.34 % (RSD = 4.76)、84.86 % (RSD = 7.21) 、104.29 % (RSD = 7.63) 和95.31 %(RSD = 4.39) 、89.25 % (RSD = 3.88) 、92.59 % (RSD = 5.27)。
[关键词]高效液相色谱; 三聚氰胺; 乳制品③引言一、目前有关三聚氰胺在乳制品中的概述：三聚氰胺(melamine) ）（化学式：C3H6N6），俗称密胺、蛋白精，IUPAC命名为“1,3,5-三嗪-2,4,6-三氨基”，是一种重要的氮杂环有机化工原料, 通常用于塑料制品中合成树脂的生产[ 1 ] 。
分子印迹固相萃取-高效液相色谱法用于奶粉样品中痕量三聚氰胺的残留检测
２１ ０ ２年 ４月
华 中科 技 大 学 学 报 （ 学 版 ） 医
Ａｃ ａ Ｍ ｅ ｉ ｃ ｅ ｎ ｌＨ ｕ ｚ ｏ ｇ ｔ ｄ Ｕｎ ｖ Ｓ ｉ Ｔｅ ｈ ｏ ａｈ ｎ
Ｖ０ ＮＯ ２ Ｐ． １ ５ Ｌ ４１ ． ８
Ａｐ ． ｒ ２ ２ ０１
合法依次优化致 孔剂种类 、 功能 单 体 与 模 板 分 子 之 间 的摩 尔 比 、 联 剂 的用 量 ， 到 对 三 聚氰 胺 具 有 特 异 性 识 别 能 力 和 交 得 高 吸 附 容 量 的分 子 印 迹 聚 合 物 ， ６ 粉 样 品 提 取 液 中 痕 量 三 聚 氰 胺 进 行 净 化 和 富 集 。结 果 萃 取 回 收 率 为 对 ０ｍＩ奶
分 子 印迹 固相 萃 取一 效 液 相 色谱 法留检 测 ＊
牛计伟 ， 荆 涛△， 戴 晴 ， 夏 环 ， 周 雨 笋 ， 郝巧玲 ， 周 宜开 ， 梅 素容
华 中 科 技 大 学 同济 医学 院 公 共 卫 生 学 院 环 境 医学 研 究 所 ， 育 部 环 境 与健 康 重点 实验 室 ， 汉 教 武 ４ ０ ３ ３００
摘 要 ： 的 以 三 聚 氰 胺 为 模 板 分 子 ， 备 一 系 列 三 聚 氰 胺 分 子 印 迹 聚 合 物 （ ｌｃｌｒ ｍｐｉｔｄｐ ｌｍｅｓ 目 制 ｍｏｅｕａｌ ｉ ｒ ｅ ｏｙ ｒ， ｙ ｎ ＭＩ ｓ ， ＭＩ ｓ 为 固相 萃 取 吸 附剂 ， 高 效 液 相 色谱 联 用 检 测 奶 粉 样 品 中残 留 的痕 量 三 聚 氰 胺 。方 法 Ｐ ）将 Ｐ 作 与 采 用 沉 淀 聚
８ ． ～９ ． ， ５１ ９ ７ 固相 萃 取 过 程 不但 可 以 避 免 繁 琐 的样 品浓 缩 过 程 ， 短 了 样 品前 处 理 时 间 ， 且 降 低 了 二 次 污 染 。方 缩 而
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
奶粉中三聚氰胺的高效液相色谱快速测定法
对高效液相色谱法快速测定奶粉中的三聚氰胺进行方法学考察，选用高效液相色谱法，进行线性范围试验、溶液稳定性试验、重复性试验、中间精密度试验。
高效液相色谱法快速测定奶粉中的三聚氰胺，方法线性良好，供试品溶液稳定性好。
不受检验条件、试验环境、人员变化的影响，方法操作简单，准确性好。
标签：高效液相色谱法；快速测定；三聚氰胺
自2008年三聚氰胺事件以来，食品安全问题得到了广泛的关注。
“民以食为天”，食物是人类赖以生存的物质基础，食品安全与人类的生命和健康息息相关，在加强和完善食品安全的法律法规以及监督检查力度的同时，作为食品的生产加工销售企业来说，加强对所生产或销售产品的质量控制，保证上市产品的质量尤为重要。
本文对高效液相色谱法快速准确地测定奶粉中残留的三聚氰胺进行方法学考察，意在寻找准确可靠的质量控制方法。
1 试验准备
1.1 仪器与试剂
Agilent 1260高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，
甲醇、乙腈、辛烷磺酸钠为色谱纯，
乙醇、三氯乙酸、柠檬酸为分析纯，
试验用水为二次蒸馏水。
1.2 对照品储备液的制备
取三聚氰胺对照品约50mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇-水（9∶1）使溶解．并稀释至刻度．摇匀得1ml约含三聚氰胺1mg的溶液作为对照品储备液。
1.3 样品溶液的制备
取被测奶粉约2g，精密称定，置25ml容量瓶中，加入20％乙醇溶液17.5ml，用10%的三氯乙酸溶液定容至刻度．超声处理10min，摇匀，冷却至室温后，以10000转／分的转速离心处理10分钟，经0.22μm的微孔滤膜过滤，即得。
1.4 色谱条件
选用岛津COLUMN VP-ODS（150×4.6，5μm）色谱柱，以缓冲液（柠檬酸
2.10g，辛烷磺酸钠2.16g，加入约980ml水时溶解，调节pH值至
3.0，定容至1000ml）-乙腈（90∶10）为流动相，流速1.0ml／min，柱温40℃，检测波长240nm，进样量20μl。
2 项目及结果
2.1 线性范围试验
分别取对照品储备液0ml、0.02ml、0.05ml、0.10ml、0.15ml、0.20ml置100ml 量瓶中，加20%的甲醇溶液稀释至刻度摇匀，得含三聚氰胺0μg/ml、0.2μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、1.5μg/ml、2.0μg/ml的溶液，取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，建立直角坐标系，计算回归方程及r值。
结果在0～2.0μg/ml的浓度范围内，线性关系良好（如图1）。
2.2 溶液稳定性试验
取我公司生产的奶粉（批号：201112001），按样品制备方法制成供试品溶液。
取该溶液分别于0小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时进样，记录峰面积。
该溶液在各时间点的峰面积值见表1。
相对标准偏差（RSD）为0.66%，结果表明：供试品溶液中的三聚氰胺在8个小时内稳定。
表1 溶液稳定性试验
时间（小时）012468RSD%
峰面積（A）865.2866.3859.8867.1855.2854.70.66
2.3 重复性试验
分别精密称取奶粉（批号：201112001）共6份，按样品制备方法制成供试品溶液。
取上述溶液各20μl分别注入高效液相色谱仪，记录峰面积见表2。
相对标准偏差（RSD）为1.09%，结果表明：方法重复性较好。
表2 重复性试验
样品123456RSD%
峰面积（A）847.2861.9855.5858.9864.3875.21.09
2.4 中间精密度试验
取奶粉样品（批号：201112001），由3名分析人员，分别使用2台高效液相色谱仪在不同时间测定奶粉中三聚氰胺的含量。
结果见表3。
相对标准偏差（RSD）
为0.99%，结果表明：方法受检验条件、试验环境、人员变化的影响较小。
3 讨论
三聚氰胺是一种化工原料，具有毒性，不可用于食品添加。
但不法商贩为使奶粉蛋白质含量提高，从中获得巨大的利润，将有毒的三聚氰胺擅自加入到牛奶中。
婴幼儿是奶粉最大的消费人群，相关文献表明：宝宝长期食用三聚氰胺超标的奶粉，会出现小便量少，排尿困难等肾结石症状，进一步发展还会出现更为严重的水肿、血尿、贫血、抽搐、昏迷等症状。
为了确保进入到市场的奶粉的质量，我公司做了大量细致的工作。
高效液相色谱法具有分离效果好、灵敏度高、可以准确定量的优点，经大量的方法学考察，可以将高效液相色谱法应用于奶粉中三聚氰胺的检测。
参考文献
［1］谢卓文.浅谈食品质量安全问题［J］.科学与财富，2011，（7）：107-108.
［2］郭晓霖.高效液相色谱法检测乳制品中三聚氰胺的探讨［J］.农产品加工创新版，2011，7（6）：70-71.
［3］田兰，刁娟娟，陈春丽等.HPLC法测定乳制品中三聚氰胺的前处理方法［J］.中国乳品工业，2010，38（6）：51-53.。