GBT22388奶粉中的三聚氰胺检测液相色谱质谱法课件

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检出限
• HPLC/MS/MS：0.01 mg/kg • HPLC:2mg/kg
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检测流程：
称样2.00 g, 准确加入0.2 mol/L高氯酸溶液9.8 mL、 0.2 μg/mL三聚氰胺内标溶液0.2 mL，均质，加入 10 mL二氯甲烷，振荡，4000r/min 离心5分钟，准 确移取5 mL上清液过混合性阳离子交换固相萃取 柱（用前用3 mL甲醇、3 mL水活化），分别用 3mL水和3mL甲醇淋洗柱子，再用3.0 mL 5%氨水 甲醇溶液洗脱，收集洗脱液于50 ℃氮气吹干，准 确加入乙腈+水（9+1）2.0 mL，涡旋振荡，洗脱 液用0.25 μm微孔滤膜过滤，上机测定。
浓度 （ng/mL）
2 5 10 20 10
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3．色谱条件
• 仪器型号：Agilent 1200-6410 LC/MS (08JL016)
• 色谱柱：ACQUITY UPLC BEH HILIC 1.7 μm
• 流速：0.2 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：5
μL；
• 流动相：A醋酸铵水B乙腈；梯度洗脱；
洗脱液于 50 ℃氮气吹干 2.0 mL 乙腈+水（9+1）洗脱、过滤，上机检测
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标准曲线配制
曲线浓度
2、5 、10 、20ng/mL(各含内 标10.0 ng/mL)
曲线
工作液
移取体积 （mL）
0.2
0.5 0.1μg/mL
1.0
2.0
内标0.2ug/mL 0.5
稀释至 10 mL
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三聚氰胺检测原理（LC/MS/MS）
• 标准中：试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳 离子交换固相萃取柱净化后，用液相色谱-质谱/ 质谱检测和确证，外标法
• 本实验室用0.2 mol/L高氯酸溶液提取，增加了 “样品经0.2 mol/L高氯酸溶液提取后加入10 mL 二氯甲烷萃取”,离心，取上层过柱，内标法定 量，固相萃取净化步骤同标准。
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ห้องสมุดไป่ตู้
GB/T22388 奶粉中的三聚氰胺检测液相色谱质谱法
2016.02.29
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1
1 性质
• 三聚氰胺：别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分 子 式：C3N6H6、 C3N3(NH2)3 ；分 子 量： 126.12
• 物理性能：白色结晶粉末，无毒，无味；
• 相对密度：1570kg/m³ ；
• 熔点：在常压下，354℃分解；
• Nebulizer: 35psi。
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注意事项
每批检测样做样顺序为试剂空白、样品空白、样品加标、样品。 加标回收：移取0.2 mL，0.1 μg/mL标准溶液至样品中，相当于0.01
mg/kg添加水平，加入0.2mL 0.2 μg/mL内标工作液，初测加标要选 同等基质的样品做空白，样品复测做平行样，复测时如没有同等基 质的空白样品则直接在样品中加标，加标量为初测时样品中的含量 3倍，且加入内标量也应与三聚氰胺含量相当，样品提取液在过固 相萃取柱之前稀释到合适的范围，取稀释液过固相萃取柱，且应保 证最终上机工作液中内标的含量为10.0ng/mL . 检测结果无需校正回收率，检测结果应减去试剂空白。 每次检测结果应与标准谱图对照，如相同浓度标液峰面积偏差较大， 应及时查找原因；
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流程图
称样 2g 50 mL 离心管 均质
0.2 mol/L 高氯酸溶液 9.8 mL 0.2 μg/mL 内标溶液 0.2 mL 10 mL 二氯甲烷
振荡萃取，4000 r/min 离心 5 min
取水相（上层）5 mL 过柱（用前预活 化）
3mL 水和 3mL 甲醇洗涤柱子，弃去洗液 3mL5%的氨化甲醇洗脱柱子，收集洗脱液
• 升华温度：300℃；
• 溶 解 性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、 甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯 和四氯化碳，水溶液呈弱碱性
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化学性能
• 三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料，显 弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐；在 强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步 被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一 酰胺和三聚氰酸；三聚氰胺与醛类反应生成加成 化合物；三聚氰胺与甲醛反应制成树脂，三聚氰 胺树脂是一种多种用途的材料，防火耐热且有很 高的稳定性，用于生产塑料、地板砖，厨房用具， 防火纤维，商业滤膜，胶水和阻燃剂
• Iron Source：ESI+；Capillary：4kV； Time(min) 0.0 1.0 2.0 4.5 4.6 8.0
A%
95 95 50 50 95 95
• Fragmentor：105；delta EMV：300；
• Gas Temp：110 ℃； Gas Flow：11L/hr；