微生物学实验9-cmx10

2020/12/19
16
涂布均匀良好
2020/12/19
涂布不均匀
17
五、菌落计数及报告方法p208
（一）平板菌落数的选择
1、进行平皿菌落计数时，记下同一浓度的2个平板（或 数即为1 mL水样中的细菌总数。
3个）的菌落总数，计算平均值，再乘以稀释倍
2、 计数时应选择菌落数在30~300/皿之间的稀释倍数进行计数，若同—个稀释度中一个平皿有较大片状菌
2020/12/19
11
二、基本原理
本实验应用平板计数技术（稀释混合平板法、稀释涂布平板法）测定水中细菌总数。由于 水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在 一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌 落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值（可培养细菌）。目前一般是采用普通牛肉膏 蛋白胨琼脂培养基。
显微镜直接计数：计菌器（0.02 mm3） 1 mL水体 106个菌体 0.1 mm3水体102个菌体
0.02 mm3水体20个菌体（海40洋0小细格菌）荧光显微镜观察图
2020/12/19
荧光显微镜直接计数： 黑色滤膜、荧光染料、荧光显微镜
12
三、实验材料
1.水样的采取： （1）自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌，再开放水龙头使水流5分钟后，以灭菌三角烧瓶接取水
2、若有两个稀释度的平均菌落数都在30～300之间，则应按两者的比值来决定。若其比值小于2，应 报告两者的平均数；若大于2则报告其中较小的菌落数。
点评 • 1.结果应条理清晰，图表名称应规范，格式统一
1. 酵母菌形态观察
活细胞 死细胞
2. 酵母菌的显微镜计数 表1 酵母菌数量测定结果
芽体细胞
图1 酵母菌光学显微镜图（美兰水浸片）
放大倍数：1000倍
解析：视野中酵母菌数量较多，细胞呈椭圆状，较大， 细胞内部有液泡，有些细胞有出芽现象，活细胞呈无色， 死细胞呈蓝色，死活细胞数量相当，随着时间的增加， 活细胞的比例增大。
0.1 mL，无菌操作用涂布棒均匀涂布至水样吸收入琼脂 平板中。 4. 琼脂平板倒置于37℃温箱中，培养24小时，进行菌落计数。
2020/12/19
15
可培养细菌数量：
1 mL水体 105个菌体 原水样：0.1 mL水体104个菌体 10-1 ： 0.01 mL水体103个菌体 10-2 ： 0.001 mL水体102个菌体 10-3 ： 0.0001 mL水体101个菌体
2020/12/19
由表1表明，酵母菌菌悬液 浓度适中，误差较小，酵母 菌数量为。。。。。
1
• 美蓝染色 不同时间不同浓度的影响----揭示了什么？ • 台尺、血球计数板计数室----光线调暗
2020/12/19
2
视野调解
2020/12/19
3
样品 2020/12/19
目标
40X
10X 4X
4
落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿计数该稀释度的平均菌落数。若片状菌落少于平 皿的一半时，而另—半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数的2倍作为全皿的数目。在记下各平皿菌落 数后，应算出同一稀释度的平均菌数，供下—步计算时用。
2020/12/19
18
(二) 稀释度的选择
l、首先选择平均菌落数在30～300者进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可 用它作为平均值乘其稀释倍数。
• 由于重金属及某些其它的有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，在总细菌数少的水样中并不能 排除这些物质的污染。
2020/12/19
10
• 良好饮用水 细菌总数应小于100 CFU/mL (colony forming units )，而大于500 CFU/mL则不适宜饮用。
• 我国饮用水卫生标准（GB5749-85）规定每毫升水样细菌总数37℃培养24小时不得大于 100 CFU。
2020/12/19
13
四 实验步骤（稀释涂布平板法）
• 1）自来水
•
（a）用移液枪吸取0.1 mL水样，注入肉膏蛋白胨琼脂平板中。共做2平皿。
•
（b）无菌操作用涂布棒（自己制备）均匀涂布至水样全部吸入琼脂 平板中。
•
（c）琼脂平板倒置于37℃温箱中，培养24小时，进行菌落计数。
• 可设置一个空白对照。
样品
2020/12/19
40X
10X 4X
5
2020/12/19
6
五、思考题
1、用血球计数板计数时，哪些步骤易造成误差？ 2、血球计数板测定原理是什么？它有哪些优点及缺点？p52 3、用两种不同规格的计数板测同一样品时，其结果一样？
4、 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的形态特征区别于一般细菌。 5、吕氏碱性美蓝染液浓度及作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量计数有什么影响，试分析其
•
两个平板的平均菌落数乘于10即为1 mL水样的细菌总数。
2020/12/19
14
（2）池水、河水或湖水等
1.吸取0.1mL水样(河水、污水或游泳池水等)，注入盛有0.9mL无菌水的EP离心管中，混匀成10-1 稀释液，注意在吸水样前，水样及稀释水应彻底搅动均匀。
2. 吸稀释液0.1 mL按10倍稀释法稀释成10-2、10-3、10-4等连续的稀释度。 3.吸取由高倍至低倍的稀释液，每个稀释液分别注入2-3个（我们只做1个）琼脂平板中，每皿
原因。
2020/12/19
7
实验 9 水的细菌学检查 1.水中细菌总数的测定
2020/12/19
8
一、目的要求
• ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ1） • （2）
学习并掌握水体中细菌总数的检验方法、检验的原理、数据处理和报告方法。 强化水体细菌总数检验的卫生意义知识。
2020/12/19
9
背景知识
• 水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。因此，它是评价水质污染程度的— 个重要指标之一。细菌总数越大，说明水体被污染得越严重。
样，以待分析。 （2）池水、河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样，先将灭菌的带塞三角瓶，瓶口向下浸入水中，
然后翻转过来，除去瓶塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则 需放入冰箱中保存。 2. 其他实验材料 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，灭菌水； 灭菌的带塞三角烧瓶，1000 ul移液枪及灭菌枪头，灭菌Eppendorf离心管及泡沫架子，玻璃棒、培养箱等