植物生理指标

植物生理指标

1、植物酶液提取：

1)PVPP(固体,PVP单体与金属元素结合) 酚类吸附剂，酚的羟基与蛋白质

的羰基形成氢键，醌导致蛋白质聚合。或polyclarAT（Polyclar-AT is insoluble PVP, also called as PVPP (PolyVinyl PolyPyrrolidine).

It binds phenols etc more efficiently than PVP and is easily

removable by filtration or a low speed spin）去除酚的毒害防止醌

颜色干扰。PVP的肽键中的氧与酚羟基上的质子牢固结合，防止酚与酶

中肽键结合，保护了酶。

2)母液制备：0.1mol/L二硫苏糖醇DTT: 100mg至微量离心管，+650ul 水

0.5mo/L EDTA : 93gEDTANa,10g NaOH,定容到500ml

10mg/ml BSA：100mgBSA于9.5ml 水中

2、可溶性总糖测定（蒽酮比色法）

（1）原理：糖+硫酸—糠醛，其与蒽酮形成绿色络合物，620nm下显色。本实验采用浓硫酸，倒入水中产生大量热，促进反应发生。

（2）标准曲线绘制：取略大于0.01g的葡萄糖，105度烘干至恒重，取0.01g 定容至100ml，配成100ug/ml的溶液。取200mg蒽酮，溶于100ml 浓硫酸，冷却，保存于棕色瓶。（注意：不需定容，量取100ml硫酸倒入烧杯即可，定容混匀时产气热溅出。注意硫酸中是否存在杂质。蒽酮非常敏感，不能用勺等挖取，只能直接倒，否则就会污染。溶液配后呈亮黄色，放置

620nm.

实验结果：实际上并不理想，因abs均偏低，可试将标糖浓度适当升高。

葡萄糖含量ug 20 40 60 80 100

abs 0.09 0.169 0.259 0.332 0.427

3、电导率（DDS-11A）

1)接通电源前观

否指零，若有偏

差调节表头下

方凹孔，使其恰

指零。

2)接通电源，仪器预热10分钟。

3)将电极浸入去离子水中，须确保极片浸没，校正零。

4)根据数值选择量程，我选10ms

5)常数设为1

4、培养液PH测定(PHS-3C)

1)PH计在不使用时需使用KCL浸泡液浸泡，用枪从上小孔和帽注满，至

少浸泡24h。将PH4.0缓冲剂包定容至250ml,再加入56g分析纯KCL，

加热溶解。

2)仪器使用前至少预热30min.

3)首先进行定位调节、斜率调节：将测量头用蒸馏水洗后，根据所测溶液

性质不同，放入不同溶液，待示数平衡，再分别调节定位、斜率至

6.86,4.00.

5、细胞活力测定（TTC法）

1)《植物生理学通讯》TTC法测定红豆杉细胞活力刘华[1] 梅兴园[2][1]湖北

省卫生职工医学院生物教研室，湖北荆州434000 [2]华中理工大学生命科学与技术学院，武汉430074）

2)药品配置：0.4%(m/v)TTC红四氮唑溶液：0.2gTTC, 加1.5ml 95%乙醇溶解，

用蒸馏水定容至50ml。随配随用，不宜久藏，遮光，变红不可用。

3)原理：TTC氧化态为无色，被呼吸作用产生的H还原成红色的三苯基甲

4)步骤：10ml试管：2.5ml 0.4% TTC+2.5ml PH7.0 0.1mol/L PBS+0.2g鲜细胞,25

度避光13-16h,倒掉液体，以蒸馏水洗细胞三次，加5ml 95%乙醇使细胞完全脱色，70度水浴20min,以乙醇为对照，测485nm处吸光度，此数值可直接作为细胞活力的衡量标准。一般所得值1-2

6、可溶性蛋白含量测定（考马斯亮蓝G250染色）

1)原理：

2)溶液配置：

a)考马斯亮蓝溶液：100mg G250,溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85%(w/v)的

磷酸，定容至1000ml。于棕色瓶常温保存30天。蓝黑色过滤后形成棕褐色稀释成淡蓝色；

b)50mmol/LPBS PBS直接稀释对PH无太大影响。

c)100ug/ml标准蛋白溶液：精确称取牛血清蛋白10mg,加水定容至100ml

3)步骤：

a)标准曲线绘制：6ml反应体系，盖盖摇匀程度均一，放置反应3分钟，

测595nm处吸光度。比色在1h内完成。

b)样品测定：100ul 样品提取液

900ul 蒸馏水

5ml G250溶液

7、苯丙氨酸解氨酶PAL（陈建勋）

1)原理：PAL催化苯丙氨酸的脱氨反应，使氨释放形成反式肉桂酸，反式肉桂

酸在290nm处有重要吸收。此酶在植物体内次生物质代谢如木质素等起重要作用。

2)药品配置：PH8.8 0.1mol/L 硼酸缓冲液

0.02mol/L L-苯丙氨酸：0.330g L-苯丙氨酸,上述缓冲液定容至100ml

3)步骤：1ml 0.02mol/L L-苯丙氨酸

2ml PH8.8 0.1mol/L 硼酸缓冲液

100ul 酶液（2份ck : 100ul 提取缓冲液）

混匀，290nm处测起始OD，精确计时，30度保温30分钟后，290nm处测吸光度。以每30min 吸光度增加0.01所需酶量为1U.

4)计算：PAL活性（U/gFW）= 30min内OD差值*酶液总体积

0.1ml（酶液）*提取酶液时样品重*0.01

5）注意：

a)PAL为诱导酶，除光诱导外，切割受伤，病害感染等也能诱导此酶活性升高。

b)除直接用新鲜材料提取进行测定外，也可将诱导好的材料制成丙酮粉，然后

再提取测定。

8、过氧化氢酶CAT

德]B．施特尔马赫著．钱嘉渊译．酶的测定方法[M]．第1版．中国轻工业出版社，1992．p186-188

1)原理：CAT催化H2O2 分解，240nm处检测H2O2 减少量。CAT以PH7.0，

37度时活性最高，冷冻，阳光，氧气降低酶活。

2)药品：0.18%H2O2 ：600ul 30% H2O2 用PH7.0 PBS稀释至100ml.现配。

（一般情况下，配置的双氧水冬天两周用完，夏天一周，避光）

25度预热的蒸馏水

3)步骤：