柴胡的研究进展及提取试验方案设计

李金槟缪旭

柴胡皂苷类成分的提制和鉴识

柴胡是伞形科柴胡属植物柴胡干燥的根，是我国传统中药中重要和常用的药材。我国药典规定北柴胡(Bupleurum chinenseDC．)和狭叶柴胡(Bupleurum scorzonerifolium Willd．)为正品供药用。我国柴胡资源极其丰富，主要分布于我国的陕西、内蒙古、甘肃、青海、宁夏、河北等地。柴胡是柴胡滴丸，小柴胡汤等中药产品的主要成分。研究发现柴胡皂苷具有解表和里、疏肝解郁、升举阳气之功效。

南柴胡北柴胡

一、柴胡化学成分

柴胡的化学成分比较复杂，除含皂苷、挥发油，尚含有黄酮、多元醇、植物甾醇、香豆素、脂肪酸成分1等有效成分，尤其以柴胡皂苷为主。迄今为止，从柴胡根、种子的不同部位中已分离到50多种单体皂苷成分。这些皂苷成分有a、c、d、b1、b2、b3、b4等，其中以皂苷a、d的生物活性最为显著。（柴胡中主要含有柴胡皂苷a、c、d）

1.皂苷a（C42H68O13）

物理性质：本品为结晶粉末，易溶于水，稀醇，特别是热水和热醇，在丁醇和戊醇中溶解性大，难溶或不溶于苯，乙醚，氯仿等溶剂。

化学反应：Molish反应阳性，Lieberman-Burchard反应产生紫色。

2.皂苷c（C48H78O17）

物理性质：易溶于水，稀醇，特别是热水和热醇，在丁醇和戊醇中溶解性大，难溶或不溶于苯，乙醚，氯仿等溶剂。

化学性质：Molish反应阳性，Lieberman-Burchard反应产生紫色。

3.皂苷d（C42H68O13）

物理性质：白色粉末，易溶于热水、稀醇、热甲醇和热乙醇。

化学性质：Molish反应阳性，Lieberman-Burchard反应产生紫色。

二.实验目的

1.学习通过AB_8大孔吸附树脂预处理得到柴胡粗皂苷，并将得到的粗皂苷进行纯化。

2.通过硅胶柱层析法把提取物中的柴胡皂苷都分离成单体。

3.了解柴胡皂苷类成分的一般性质和鉴别反应。

三.实验原理

三萜皂苷类，由于糖分子的引入，使极性增大，可溶于水，易溶于热水、稀醇、热甲醇和热乙醇中，几乎不溶于或难溶于丙酮、乙醚以及石油醚等极性小的有机溶剂。

柴胡皂苷在水饱和的正丁醇中溶解度较大，且可以与水分成二相，可利用此性质从水溶液中用正丁醇提取皂苷，借以与亲水性的糖、蛋白质等分离。此外为避免原生苷环氧醚键的断裂，防止皂苷次生化，可在提取溶剂中加入5%吡啶。

四、实验步骤

1.柴胡皂苷的粗制

（1）.乙醇总提取物的制备

取柴胡粗粉150g，加2g无水碳酸钠，用含5%吡啶的65%乙醇溶液提取二次（650ml回流1.5h，550ml回流1.5h。合并乙醇液。减压回收乙醇得浓缩液。（2）.AB-8大孔吸附树脂分离精制柴胡总皂苷

A．树脂的预处理

称取适量AB- 8型新大孔树脂于烧杯中，用95%的乙醇浸24h，湿法装柱，用乙醇洗脱，至流出液加纯水不变浑浊为止改用水洗，直至无乙醇味，用水浸泡备用。

分离条件：

吸附剂：AB-8大孔树脂

样品：碱性溶液上样浓缩液30~50ml

装柱：湿法装柱

洗脱剂：30%乙醇，60%乙醇，95%乙醇

B．洗脱分离

分别用5倍量的30%、60%、90%乙醇依次洗脱，弃去30%乙醇提取物，分别收集60%，90%乙醇提取物，减压回收得到抽松物粗皂苷1，粗皂苷2

2.柴胡皂苷的精制

（1）石油醚的萃取

（2）正丁醇萃取

（3）真空减压浓缩回收正丁醇

（4）乙酸乙酯处理

4.鉴识

（1）.薄层层析法

吸附剂：硅胶GF254

展开剂：氯仿：甲醇：水（30:10:1）

对照品：皂苷a,皂苷b，皂苷c

显色剂：2％对二甲氨基苯甲醛40％硫酸溶液

（2）.柴胡皂苷的定性反应

A、Liebermann-Burchard反应：取样品少量，溶于乙酸酐中，加浓硫酸-乙酸酐（1:20）数滴，观察颜色变化。（黄-紫-蓝，最后褪色）

B、Molish反应：取样品溶于MeOH，并取试液1ml，加5%-α萘酚乙醇液1~3滴，摇匀后沿试管壁缓缓加入浓硫酸，观察两液面间是否有紫色环出现。

C、溶血试验：取样品少量，用0.9%的生理盐水溶解，加入几滴2%的红细胞悬浮液，如有皂苷类成分存在，则发生溶血现象，溶液由浑浊变为澄清。

五．参考文献

1.刘和平，谢培山，田润涛柴胡属皂苷高效薄层色谱指纹图谱的研究（1.珠海科曼中药研究有限公司，广东珠海 519085；

2.澳门科技大学基金会澳门药物与健康研究所，澳门）

2.王春兰，郑伯松柴胡皂苷硅胶柱层析分离方法的研究（吉林农业科技学院中药学院，吉林 132101）

3.迟雪洁，任海勇，黄伟，栾永福，孙蓉大孔吸附树脂分离纯化柴胡总皂苷工艺研究（山东省中医药研究院，山东济南 250014；天津中医药大学，天津 300193；济南杏林生物技术有限公司，山东济南 250101）

4.宋海妹，苏小凤，李楠，鱼红闪，金凤燮柴胡皂苷的提取与鉴定（大连轻工业学院生物与食品工程学院，辽宁大连 116034）

5.马长雨柴胡皂苷分离纯化研究（天津大学生物化工 20050101）