寡核苷酸探针杂交温度如何确定
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
我觉得因改是4×（A+T)+2×（G＋C），再减去5度就行。寡核苷酸探针的杂交温度不应该遵循PCR产物探针的原则。T可以这样估计，但是应该也考虑杂交液中是否有甲酰胺
甲酰胺能降低核酸杂交的Tm值，有利于同源性不高的待测核酸与探针在低温下杂交，维持其稳定性.
预杂交液用甲酰胺,杂交时，一般温度37-42度就可以，不用甲酰胺时需提高温度至68度。
DNA杂交温度T＝Tm－25℃，此时杂交分子最易形成。一般杂交温度低，形成的杂交分子较稳定