核酸探针描述
核酸探针技术
中学生物学
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核酸探针技术
岳朝宽
摘 要
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\XYZ[; 目前应用较多的非放射性标记物是生物素和地
高辛， 二者都是半抗原。 生物素是一种小分子水溶性维生素， 对亲和素有 独特的亲和力， 两者能形成稳定复合物， 通过连接在 亲和素或抗生物素蛋白上的显色物质（ 如酶、 荧光素 等） 进行检测。 地高辛是一种类固醇半抗原分子， 可利用其抗体 进行免疫检测， 运用原理类似于生物素的检测。地高 辛标记核酸探针的检测灵敏度可与放射性同位素标 记的相当， 而特异性优于生物素标记， 其应用日趋广 泛。
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]^_‘Ma5b678 人工合成的寡核苷酸探针是在已知基因序列的
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情况下， 由核酸合成仪来完成， 可廉价获得大量的此 类探针， 长度一般长约 !"#$" %&， 甚至可达 ’" %& 。如 果已知核酸序列可根据已知 ()* 或 +)* 序列合成 精确互补的 ()* 探针，单一已知序列寡核苷酸探针 能与它们的目的序列准确配对， 可以准确地设计杂交 条件， 以保证探针只与目的序列杂交而不与序列相近 的非完全配对序列杂交， 对于一些未知序列的目的片 段则无效； 如果不知道核酸序列， 可依据其蛋白质产 物 的 氨 基 酸 顺 序 推 导 出 核 酸 序 列 从 而 合 成 ()* 探 针。 人工合成的寡核苷酸片段作为核酸杂交探针应 用十分广泛， 对于检测靶基因上单个核苷酸的点突变 和小段碱基的缺失或插入尤为适用。
如何自制核酸探针
如何自制核酸探针？什么是核酸探针？核酸探针是能与特定的靶分子发生特异性结合的一段核苷酸分子。
通过在核酸探针上连接一些小分子化合物，如生物素、荧光素、地高辛等，或者放射性同位素标记核苷酸，可以达到检测靶基因序列和纯化的目的。
这一过程被称为核酸杂交。
其原理是碱基互补的两条核酸分子退火形成双链。
探针应用核酸探针技术作为分子生物学中最常见的技术之一，是印记杂交，原位杂交，实时荧光PCR，microarray（微阵列）等技术不可或缺的组成部分。
探针技术能定性或者检测特异性DNA/RNA序列，还可用于病原微生物和寄生虫的检测，疾病诊断等领域。
探针制备探针标记主要分为放射性和非放射性标记法。
探针制备流程如图1所示。
Southern印迹、Northern印迹等需要较长的DNA探针，常使用缺口平移法和随机引物法进行标记。
而这些方法对于较短的DNA（200 bp以下）来说，效率很低，常使用末端标记法。
除了这三种方法，常见的还有PCR标记法。
图1. 探针制备流程。
随机引物法随机引物法的原理是利用随机引物（random primer，即DNA 水解、分离得到的六聚脱氧核苷酸作）与单链DNA随机互补结合，在Klenow大片段酶的作用下，合成互补链，直至下一个引物。
如果模板是RNA，则使用反转录酶。
随机引物法可以使标记均匀跨越探针全长。
相比于缺口平移法，探针的活性更高，但是产量相对较低。
图2. 随机引物法的原理。
Protocol试剂：[α-32P]dCTP (3000Ci/mmol), dATP,dTTP,dGTP (5 mmol/L),Klenow大片段（2U/uL），模板，随机引物，NA终止/贮存缓冲液（50 mmol/L Tris-Cl (pH 7.5)，50 mmol/L NaCl，5 mmol/L EDTA (pH 8.0)，0.5% (m/V) SDS）5X 随机引物缓冲液（250 mmol/L Tris (pH 8.0)，25 mmol/L MgCl2，100 mmol/L NaCl，10 mmol/L 二琉苏糖醇（DTT)，1 mol/L HEPES ( 用 4 mol/L NaOH 调至 pH 6.6），1 mol/L DTT 贮存于 -20℃，临用前用水稀释，使用后弃去稀释的 DTT。
生物检测技术——核酸探针
3)单链DNA探针和双链DNA探针
➢ 用双链探针杂交验测另一个远缘DNA时，探针序列与 被检测序列之间有很多错配，但是，2条探针互补链之 间的配对却十分稳定，即形成自身的无效杂交，结果 使检测效率下降。科学上采用单链探针则可解决这一 问题。单链DNA探针的合成方法:(1)从Ml3载体衍生序 列合成单链DNA探针。(2)以RNA为模板用反转录酶合 成单链cDNA探针。
核酸探针的前景
➢ 基因芯片在环保方面、食品检测方面的研究报道比较少， 这将成为将来的研究方向。从某种意义上我们可以认为： 基因结构或种类决定物种，基因功能或表达则决定生命即 生物的生、老、病、死。基因芯片技术将为我们提供一条 认识生命本质的捷径，同时它的发展也带动了蛋白质芯片、 细胞芯片、多肽芯片、组织芯片的发展和应用。
➢ 核酸探针具有特定的序列，能够与具有相应核苷酸碱 基互补序列的核酸片段结合，因此可用于样品中特定 基因片段的检测。
核酸探针的标记物
一.放射性标记
➢ 放射性同位素是最早使用、也是目前应用最广泛的 探针标记物。常用的同位素有 32P、3 H、35S。其中， 以32P应用最普遍。
➢ 放射性标记的优点是灵敏度高，可以检测到pg级； 缺点是易造成放射性污染，而且同位素半衰期短、 不稳定、成本高。因此，放射性标记的探针不能实 现商品化。目前，许多实验室都致力于研究非放射 性标记的探针。
➢ 在癌基因的检测和诊断、致病病原体的检测、遗传病的产 前诊断以及亲子关系鉴定等基因诊断方面以及特异性目的 基因及外源DNA的检测方面，核酸探针技术将越来越显出 其巨大的应用解脲脲原体(UU)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
➢ 双链DNA探针的合成方法：切口平移法和随机引物合 成法。双链DNA探针在与靶序列杂交前，DNA分子必 须变为单链，这一般是通过加热使其变性而达到解链 目的。解链DNA分子被迅速冷却到只能缓慢复性的温 度以下，可使探针保持单链状态。
常用核酸探针标记方法
常用核酸探针标记方法1、切口平移法（nick translation）原理：先用适量的DNase I 在Mg2+存在下，在双链DNA 上打开若干个单链缺口。
利用E. coli DNA 聚合酶I 的5'- 3' 核酸外切酶活性在切处将旧链从5’-末端逐步切除。
同时DNA 聚合酶I的5'- 3'聚合酶活性的作用下，顺序将dNTP连接到切口的3’-末端-OH上，以互补的DNA 单链为模板合成新的DNA单链。
图1 切口平移法原理示意图特点：1）各种螺旋状态（超螺旋、闭环及开环）及线性的双链DNA均可作为缺口平移法的标记底物。
但单链DNA和RNA不能采用此方法进标记。
双链DNA小片段（>100-200bp）也不是此法标记的理想底物。
2）DNA多聚酶必须是E·Coli DNA多聚酶的全酶。
3）DNA模板要用纯化过DNA2、随机引物法（random priming）原理：将待标记的DNA探针片段变性后与随机引物一起杂交，然后以此杂交的寡核苷酸为引物，大肠杆菌DNA聚合酶I大片段（E·Coli DNA polymerase I Klenow Fragment）的催化下，合成与探针DNA互补的DNA链。
当反应液中含有标记的dNTP时，即形成标记的探针。
图2 随机引物标记法原理示意图特点：1）除了能进行双链DNA标记外，也可用于单链DNA和RNA探针的标记。
2）所得到的标记产物是新合成的DNA单链，而所加入的DNA片段本身并不能被标记。
3）新形成的标记DNA单链的长度与加入寡核苷酸引物的量成反比，因为加入的寡核苷酸数量越多，合成起点也越多，得到的片段的长度也越短。
按标准方法得到的标记产物长度一般为200-400bp。
3、末端标记与切口平移法和随机引物法不同，DNA末端标记法并不将DNA片段的全长进行标记，而是只将其一端（5’或3’端）进行部分标记。
其特点是可得到全长DNA片段，DNA片段并非均匀标记，标记活性不高。
核酸基因分子探针
核酸基因分子探针从化学和生物学的意义上理解，探针是一种已知特异性的分子，它带有合适的标记物供反应后检测。
探针和靶的相互反应如抗原-抗体、血凝素-碳水化合物、亲合素-生物素、受体和配体，以及核酸与其互补核酸间的杂交等反应均属此类。
用核酸探针与待检标本中核酸杂交，形成杂交体，再用呈色反应显示。
此方法用于疾病的诊断，称为分子杂交基因诊断。
此法开始用于遗传性疾病的诊断如血红蛋白病的诊断、先天性遗传病的产前诊断。
近来，已发展为诊断外源性病原体如病毒、细菌、原虫等的方法；内源性病变基因研究如癌基因检测、基因突变、基因缺失或变异引起的疾病的基因诊断；人类基因识别及其生理功能和衰老有关研究；在法医检测中有关性别鉴别和DNA指纹谱的鉴定。
基因探针的研究引起了人们高度重视，在探针的制备技术上有重大突破。
可将核酸分子探针检测比喻为在柴草堆中去找一根针的神奇技术。
据美国华尔街分析家预言：“在生物技术市场中，下一个突破和具有吸引力的是基因探针”。
它的巨大的开发潜力和经济效益，已引起人们的重视。
目前基因检测方法中以同位素标记（32P、35S等）DNA探针灵敏度最高，但由于放射性污染、半衰期短、需要特别的安全防护条件等，限制了同位素标记探针的广泛应用。
因此，非同位素标记探针的研制引起重视，自Langer等（1981）合成了生物素化dUTP和NTP类似物以来，开创了用非同位素标记的新领域，用生物素标记核酸探针检测和识别特定的核酸序列，已广泛应用于临床检验和科学研究。
Leary等（1983）用缺口平移法标记的生物素DNA探针成功地用于Southern印迹杂交技术。
Forst等（1985）发表了光敏生物素直接标记核酸的简便方法，使核酸和蛋白质的生物素标记探针技术前进一大步。
Renz等（1984）、Thorpe等（1985）和Pollars 、Knight等（1990）用化学法直接把辣根过氧化物酶接到DNA上，运用发光显影法提高了敏感性。
分子生物学试题(附答案)
分子生物学试题（附答案）一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、为了避免反复冻融对核酸样品产生的破坏作用，最好( )A、将核酸小量分装保存B、将核酸冻干保存C、将核酸大量保存D、将核酸溶解保存E、将核酸沉淀保存正确答案：A2、关于梅毒螺旋体的描述错误的是A、可侵犯皮肤黏膜、内脏器官，导致心血管及中枢神经系统损害B、梅毒螺旋体是梅毒的病原体C、梅毒螺旋体属于苍白密螺旋体的苍白亚种D、主要通过性接触、输血、胎盘或产道等途径感染人体E、不会对胎儿产生影响正确答案：E3、用于区分 HBV 主要基因型的序列是A、NS5b 区B、C 区C、NS3 区D、5’UTR 区E、NS5a 区正确答案：D4、下列是 PCR 反应体系中必须存在的成分， ( )除外A、引物B、模板C、dNTPD、Mg2+E、DMSO正确答案：E5、PCR 反应过程中，退火温度通常比引物的Tm 值A、低5℃B、低15℃C、高5℃D、高15℃E、相等正确答案：A6、关于 DNA 芯片描述不正确的是A、探针为已知序列B、有序地高密度地固定于支持物上C、理论基础是核酸杂交D、可研究基因序列E、不能研究基因突变正确答案：E7、硝酸纤维素膜最大的优点是( )A、高结合力B、本底低C、非共价键结合D、共价键结合E、脆性大正确答案：B8、下列物质不适于非放射性探针标记的是A、AKPB、ACPC、生物素D、地高辛E、荧光素正确答案：B9、检测 TB 的实验室技术中，被认为是目前最先进的一种检测TB 及其耐药性的方法是A、PCR 技术B、荧光定量 PCR 技术C、PCR-RFLP 技术D、全自动结核杆菌检测技术E、DNA 测序技术正确答案：D10、目前最常用的TB 分子检测方法是A、PCRB、real-time PCRC、SDAD、LPAE、DNA chip正确答案：B11、DNA 指纹分子的遗传性基础是A、连锁不平衡B、MHC 的多样性C、DNA 的多态性D、反向重复序列E、MHC 的限制性正确答案：C12、基因芯片原位合成的描述错误的是A、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针B、适用于寡核苷酸探针C、适用于制作大规模 DNA 探针芯片D、可实现高密度芯片的标准化和规模化生产E、也称为离片合成正确答案：E13、个体识别所使用的 HLA 分型技术不包括下列哪项 ( )A、PCR-RFLPB、PCR-SSPC、PCR-SSOPD、PCR-指纹图E、FISH正确答案：E14、美国食品药品监督管理局规定用于检测尿液标本中淋病奈瑟菌的方法是A、革兰染色镜检B、抗酸染色镜检C、淋病奈瑟菌 16SrRNA 基因检查D、ELISAE、动物接种正确答案：C15、操纵子结构不存在于：A、大肠杆菌基因组中B、真核生物基因组中C、细菌基因组中D、原核生物基因组中E、病毒基因组中正确答案：B16、脆性 X 综合征的临床表现有A、智力低下伴眼距宽、鼻梁塌陷、通贯手、指间距宽B、智力正常、身材矮小、肘外翻、乳腺发育差、乳间距宽C、智力低下伴头皮缺损、多指、严重唇裂及膊裂D、智力正常张力亢进，特殊握拳姿势、摇椅足E、智力低下伴长脸、大耳朵、大下颌、大睾丸正确答案：A17、稀有碱基主要存在于A、核糖体 RNAB、信使 RNAC、转运 RNAD、核 DNAE、线粒体 DNA正确答案：C18、当标本核酸量非常低难以扩增时，可采用的 PCR 技术是A、逆转录 PCRB、转录介导扩增C、原位 PCRD、巢式 PCRE、荧光 PCR正确答案：D19、单基因遗传病诊断最重要的前提是A、了解患者的家族史B、疾病表型于基因关系已阐明C、了解相关基因的基因克隆和功能分析等知识D、进行个体的基因分型E、了解相关基因的染色体定位正确答案：A20、次氯酸钠去除临床分子生物学实验室污染源的原理是A、诱导同一 DNA 链上相邻的两个嘧啶之间形成嘧啶二聚体B、氧化损伤核酸C、水解核酸D、与扩增产物的嘧啶碱基形成单加成环丁烷衍生物E、与胞嘧啶形成羟氨基胞嘧啶正确答案：B21、PCR 反应体系不包括A、耐热的 TaqDNA 聚合酶B、cDNA 探针C、4 种 dNTPD、合适的缓冲液体系E、模板 DNA正确答案：B22、阴性质控品失控的原因不包括A、扩增产物污染B、标本交叉污染C、放射性污染D、基因组 DNA 或质粒的污染E、试剂污染正确答案：C23、第三代测序技术的最主要特征：A、对单分子 DNA 进行非 PCR 的测序B、对 SNP 进行非 PCR 的测序C、高通量和并行 PCR 测序D、直接分析 SNPE、直接进行个体基因组测序和 SNP 研究正确答案：A24、下列方法中能同时检测几种疟原虫混合感染的是A、竞争 PCRB、巢式 PCRC、多重 PCRD、普通 PCRE、PCR-RFLP正确答案：C25、目前，个体识别和亲子鉴定主要依靠A、STR 基因座技术B、PCR-SSOC、蛋白质凝胶电泳技术D、PCR-SSCPE、细胞混合培养技术正确答案：A26、分离纯化核酸的原则是 ( )A、保证一定浓度B、保持一级结构完整并保证纯度C、保持二级结构完整并保证纯度D、保持空间结构完整E、保证纯度与浓度正确答案：B27、未来基因诊断的主要发展方向是A、胎盘着床前诊断B、母体外周血中胎儿细胞分析技术C、对常见病进行分子诊断D、对多发病进行分子诊断E、以上都是正确答案：E28、关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述不正确的是A、特异性高B、可依赖氨基酸序列推测其序列C、分子量小D、可用于相似基因顺序差异性分析E、可用末端转移酶进行5’端标记正确答案：E29、SDS 是一种阴离子表面活性剂，其可断开蛋白质分子内和分子间的( )A、氢键B、离子键C、二硫键D、酯键E、疏水键正确答案：A30、基因芯片技术的本质是 ( ) ：A、核酸分子杂交B、蛋白质分子杂交技术C、连接酶链反应D、DNA 重组技术E、酶切技术正确答案：A31、关于点样法进行 DNA 芯片制备不正确的是A、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针的 DNA 芯片制备技术B、通过高速点样机直接点样C、多用于大片段 DNA 探针的芯片制备D、成本低E、速度快正确答案：A32、DNA 自动化测序技术一般用不到的技术是A、Sanger 的双脱氧链终止法B、Maxam 和 Gilbert 的化学降解法C、荧光标记技术D、PCR 技术E、电泳技术正确答案：B33、关于肿瘤分子诊断的说法正确的是A、肿瘤分子诊断就是利用分子生物学原理和技术建立的肿瘤诊断方法B、肿瘤的分子诊断中根据目的、对象、类型的不同要采取相似的诊断策略与方法C、肿瘤分子诊断的研究成果仅用于临床肿瘤的诊断D、肿瘤分子诊断的核心是基于细胞水平的分子诊断技术E、肿瘤分子诊断的含义主要表现在虽然检测对象众多，但大多数标志物是特异性的肿瘤标志物正确答案：A34、实时荧光 PCR 中，GC 含量在 20%~80% (45%~55%最佳) ，单链引物的最适长度为A、35~50bpB、15~20bpC、55~70bpD、5~20bpE、70~90bp正确答案：B35、线粒体病分子生物学检验标志物不包括A、点突变位点B、重复序列C、SNP 位点D、缺失或插入片段E、线粒体单体型正确答案：B36、线粒体基因组编码几种rRNAA、22 种B、20 种C、18 种D、3 种E、2 种正确答案：E37、基因诊断间接方法不包括A、基于 SNP 的单倍型分析B、Southern blotC、基于 STR 的微卫星分析D、PCR-RFLPE、RFLP 连锁分析正确答案：B38、下列方法中不属于 RNA 诊断的是A、Northern blotB、RNA 斑点杂交C、基因芯片D、mRNA 差异显示 PCR 技术E、逆转录 PCR正确答案：C39、在对病原体检测中，一次性获得信息量最大的技术是 ( )A、ELISAB、荧光定量 PCR 技术C、PCR-RFLP 技术D、原位杂交技术E、基因芯片技术正确答案：E40、生物芯片根据芯片上固定的探针种类不同可分为几种，不包括：A、DNA 芯片B、蛋白质芯片C、细胞芯片D、组织芯片E、测序芯片正确答案：E41、以下不需要对引物或探针预先标记的实时定量 PCR 方法是A、TaqMan 水解探针技术B、探针杂交技术C、分子信标技术D、SYBR Green Ⅰ荧光染料技术E、数字 PCR 技术正确答案：D42、关于带正电荷尼龙膜的描述下列不正确的是A、可结合 DNAB、可结合 RNAC、对盐浓度要求不高D、核酸可通过 UV 交联共价结合E、本底较低正确答案：E43、可作为分子遗传标记的是A、HLAB、单拷贝序列C、高表达蛋白D、RFLPE、染色体正确答案：D44、下列关于人类遗传病的叙述不正确的是A、人类遗传病包括单基因遗传病、多基因遗传病和染色体异常遗传病B、21-三体综合症患者体细胞中染色体数目为 47 条C、单基因病是指受一个基因控制的疾病D、遗传性疾病既可以直接诊断，也可以间接诊断E、人类遗传病是指由于遗传物质改变而引起的疾病正确答案：C45、乙型肝炎病毒的核酸类型是 ( )A、双股 DNAB、负股 DNAC、正股 DNAD、单股 DNAE、DNA-RNA 二聚体正确答案：A46、目前白血病的发病机制的研究主要集中的领域不包括A、融合基因与白血病B、遗传学疾病及白血病发病的后天因素C、基因多态性与白血病D、白血病复发的后天因素E、白血病发病的先天因素正确答案：D47、镰状细胞贫血患者，代替其血红蛋白β链 N 端第六个氨基酸残基谷氨酸的是A、苯丙氨酸B、缬氨酸C、酪氨酸D、丙氨酸E、丝氨酸正确答案：B48、多重 PCR 的描述中正确的是：A、同一个模板，多种不同的引物B、相同的引物，多种不同的模板C、多个模板，多种引物D、引物的Tm 值、反应时间和温度、反应缓冲液等尽量不一致以区分不同产物E、同一反应内各扩增产物片段的大小应尽可能相同或接近正确答案：A49、GeneXpert 全自动结核杆菌检测技术现可进行哪种药物的耐药检测A、乙胺丁醇B、吡嗪酰胺C、异烟肼D、链霉素E、利福平正确答案：E50、目前确认与人类肿瘤发生有关的RNA 病毒是A、人乳头状瘤病毒B、乙型肝炎病毒C、EB 病毒D、人类疱疹病毒-8E、丙型肝炎病毒正确答案：E51、编码 HIV 衣壳蛋白的是A、tat 基因B、gag 基因C、env 基因D、vif 基因E、pol 基因正确答案：B52、下列不属于 SNP 检测技术特点的是 ( )A、遗传稳定性B、富有代表性C、密度低D、密度高E、易实现分析的自动化正确答案：C53、下列哪些技术不适用于鉴定菌种亲缘性：A、随机扩增DNA 多态性分析B、连接酶链反应C、PCR-RFLPD、多位点测序分型E、DNA 测序技术正确答案：B54、珠蛋白基因的碱基由G 突变为 C 时，造成的突变称为A、密码子缺失或插入B、单个碱基置换C、融合基因D、移码突变E、片段缺失正确答案：B55、HCV 基因分型的“金标准”是( )A、基因分型检测芯片B、测序分析法C、实时荧光 PCRD、基因型特异性引物扩增法E、RFLP正确答案：B56、核酸探针不可用什么标记A、放射性核素标记B、抗体标记C、生物素标记D、荧光标记E、地高辛标记正确答案：B57、第二代测序技术最主要技术特征是A、对单分子 DNA 进行非 PCR 的测序B、针对 SNP 进行非 PCR 的测序C、高通量和并行 PCR 测序D、直接分析 SNPE、直接进行个体基因组测序和 SNP 研究正确答案：C58、关于 Ct 值的描述，不正确的是A、Ct值是荧光定量 PCR 获得的最初数据资料B、Ct代表了反应达到预定设置的阈值时的循环次数C、Ct 与反应模板的初始模板量成正比D、Ct越小代表其模板核酸拷贝数越多E、Ct值处于扩增曲线和荧光本底基线的交叉点正确答案：C59、提取 DNA 的原则除外A、保证核酸一级结构完整性B、保留所有核酸分子C、核酸样本中不应存在有机溶剂和过高浓度的金属离子D、蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度E、排除 RNA 分子的污染与干扰正确答案：B60、硝酸纤维素和PVDF 膜结合蛋白主要靠( )A、疏水作用B、氢键作用C、离子键作用D、盐键作用E、酯键作用正确答案：A61、以 mRNA 为模板合成 cDNA 的酶是A、DNA 酶B、Taq DNA 聚合酶C、限制性内切酶D、RNA 酶E、逆转录酶正确答案：E62、HIV 核酸类型是：A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案：D63、采用了所谓酶联级联测序技术的测序方法是A、边合成边测序B、化学降解法测序C、双脱氧终止法测序D、焦磷酸测序E、寡连测序正确答案：D64、线粒体基因突变不包括A、mtDNA 拷贝数的变异B、碱基突变C、插入D、缺失E、重复序列增多或减少正确答案：E65、HIV 核酸类型是A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案：D66、研究得最早的核酸分子杂交种类是( )A、菌落杂交B、Northern 杂交C、Southern 杂交D、液相杂交E、原位杂交正确答案：D67、PCR 中的脱氧核苷三磷酸不包括A、dATPB、dTTPC、dCTPD、dGTPE、dUTP正确答案：E68、PCR 反应的基本过程不包括A、预变性B、退火C、淬火D、变性E、延伸正确答案：C69、表达谱芯片A、是在 DNA 水平研究基因之间的表达关系B、是在 mRNA 水平研究基因之间的表达关系C、是在蛋白质水平研究基因之间的表达关系D、不能用于疾病机制的研究E、不能指导个体化治疗正确答案：B70、杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加 1%，则 Tm 值下降A、1~1.5℃B、3~3.5℃C、0.5℃D、4~4.5℃E、2~2.5℃正确答案：A71、关于荧光原位杂交技术叙述不正确的是( )A、用荧光素标记探针B、用放射性核素标记探针C、无需经过核酸的提取D、可以用于遗传病的产前诊断E、可以用于基因定位正确答案：B72、以下不是在移植配型中常用的分子生物学检测技术是A、核酸分子杂交技术B、PCR 技术C、基因芯片技术D、免疫组化技术E、基因测序技术正确答案：D73、大多数质粒在自然状态下是( )A、线性双链 DNAB、线性单链 DNAC、线性单链 RNAD、环状双链 DNAE、环状单链 DNA正确答案：D74、珠蛋白生成障碍性贫血的主要原因是A、珠蛋白基因突变导致氨基酸序列改变B、血红蛋白破坏加速C、出现异常血红蛋白 SD、铁代谢异常E、珠蛋白链合成速率降低正确答案：E75、关于分子信标技术的描述，不正确的是A、分子信标设计简单B、操作简便C、背景信号低D、特异性强E、灵敏度高正确答案：A76、下述序列中，在双链状态下属于完全回文结构的序列是A、AGTCCTGAB、AGTCAGTCC、AGTCGACTD、GACTCTGAE、ACTCGACT正确答案：C77、PCR 反应的基本过程不包括以下：A、预变性B、退火C、探针杂交D、变性E、延伸正确答案：C78、最容易降解的核酸探针是A、cDNA 探针B、dsDNA 探针C、ssDNA 探针D、gDNA 探针E、RNA 探针正确答案：E79、Southern 杂交通常是指( )A、DNA 与 RNA 杂交B、DNA 与 DNA 杂交C、RNA 与 RNA 杂交D、蛋白质与蛋白质杂交E、DNA 与蛋白质杂交正确答案：B80、不属于移植配型中常用的分子生物学检测技术是 ( )A、RFLP/PCR-RFLP/PCR-SSPB、PCR-SSCPC、PCR-SequencingD、PCR-SSO/基因芯片技术E、FISH正确答案：E81、不是自动 DNA 测序仪主要系统之一的是A、测序反应系统B、电泳系统C、荧光检测系统D、探针荧光标记系统E、电脑分析系统正确答案：D82、下列关于Taq DNA 聚合酶的描述，错误的是A、以 dNTPs 为原料B、催化形成3’,5’-磷酸二酯键C、使 DNA 链沿5’→3’方向延伸D、不具有3’→5’外切酶活性E、扩增的DNA 片段越长，碱基错配率越低正确答案：E83、关于 RNA 探针的描述下列不正确的是A、可用于随机引物标记B、特异性高C、灵敏度高D、可用非同位素标记法标记E、不易降解正确答案：E84、关于mtDNA 的描述正确的是A、结构基因编码 mtDNA 复制所需的酶、调控蛋白、NADH 氧化还原酶、ATP 酶等B、重链有编码功能，轻链无编码功能C、含 22 个结构基因D、含 tRNA 基因，可转录 22 种 tRNA，以满足线粒体内蛋白质翻译的需要E、含 rRNA 基因，编码 2 种 rRNA，即 12SrRNA 和 18SrRNA正确答案：D85、要制订一个能够简洁准确的 DNA 测序方案，首先应考虑A、DNA 片段大小B、测序方法C、实验条件D、测序目的E、测序时间正确答案：E86、Alu家族属于A、可变数目串联重复序列B、短串联重复序列C、长散在核原件D、短散在核原件E、DNA 转座子正确答案：D87、寡核苷酸探针的最大的优势是A、杂化分子稳定B、易标记C、易合成D、可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列E、易分解正确答案：D88、细菌感染分子生物学检验的检验对象是A、测定血清中抗体抗原B、测定血清中病原体蛋白含量C、测定样本中核酸含量D、镜检病原体形态E、测定血清中蛋白酶活性正确答案：C89、肺癌的分子生物学检验的意义不包括A、可以较早的发现微小转移的癌灶B、有利于肺癌的早期诊断C、可以减轻肺癌患者化疗的不良反应D、帮助降低肺癌患者的病死率E、可以对肺癌患者的预后作出评估正确答案：C90、转录依赖扩增系统与其他 PCR 技术的区别是A、模板是 RNAB、模板是 DNAC、引物是 RNAD、模板和产物都是 RNAE、需要热循环正确答案：D91、下列病毒中，基因组可直接作为mRNA 的 3 种病毒是A、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、流感病毒B、脊髓灰质炎病毒、AIDS 病毒、麻疹病毒C、脊髓灰质炎病毒、甲型肝炎病毒、新型肠道病毒D、脊髓灰质炎病毒、乙型肝炎病毒、轮状病毒E、脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、甲型肝炎病毒正确答案：C92、一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称A、复杂性B、探针C、杂交D、复性E、变性正确答案：C93、荧光原位杂交的描述正确的是A、快速确定是否存在目的基因B、检测靶分子是 RNAC、用于基因定位分析D、用于阳性菌落的筛选E、用于蛋白水平的检测正确答案：C94、对于寡核苷酸探针，杂交温度一般低于其 Tm 值A、10~15℃B、20~30℃C、15~30℃D、30~40℃E、5℃正确答案：E95、最常用的 DNA 探针标记方法是A、随机引物标记B、切口平移标记C、3’-末端标记D、5’-末端标记E、PCR 法正确答案：A96、结核杆菌的分子生物学检验临床意义中不包括A、疗效评价B、早期诊断C、耐药检测D、快速诊断E、鉴别诊断正确答案：B97、决定 PCR 反应特异性的是A、模板B、dNTPC、引物D、缓冲液E、Taq DNA 聚合酶正确答案：C98、关于核酸探针的描述下列不正确的是A、可以是 DNAB、可以是 RNAC、可用放射性标记D、可用非放射性标记E、必须是单链核酸正确答案：E99、关于单基因遗传病的叙述，正确的是A、原发性高血压是单基因遗传病B、发病机制都已阐明C、可进行定性诊断和定量诊断D、在群体中发病率高E、受多对等位基因控制正确答案：C100、引起镰状细胞贫血的珠蛋白基因突变类型是A、错义突变B、终止密码突变C、整码突变D、无义突变E、移码突变正确答案：A。
核酸探针
核酸杂交：不同来源的两条核酸单链由
于具有互补序列，在一起复性时，互补 序列配对，形成杂化分子。
+ +
14
15
16
二、影响杂交的因素 1. 核酸分子的浓度和长度 2. 温度：比Tm低25℃~30℃较适宜
3. 离子强度：离子强度↑→杂交反应率↑
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4. 杂交液中的甲酰胺
甲酰胺能降低核酸杂交的Tm， 含30%—50%甲酰胺的杂交溶液温度能 降低到30—42℃。 使用甲酰胺的优点：
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1. Southern 印迹杂交 主要步骤：
46
纯化的待测DNA样品 限制性内切酶酶切后（EDTA， 65℃灭活限制酶） 琼脂糖凝胶电泳分离酶切DNA片段 变性液（碱变性）
凝胶上DNA变性
Tris缓冲液 中和 高盐下
预杂交 杂交 放射自显影 结果分析
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DNA转印至NC膜
烘干、固定
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southern印迹
3
DNA的变性(denaturation)：
在某些理化因素作用下，DNA 分子内碱基对之间的氢键断裂，使 规则有序的双螺旋结构变为不规则 无序的单链线团样结构的过程。
4
5
解链温度（融解温度，Tm） (melting temperature)：
使50%的DNA发生变性时的环 境温度。 DNA的变性从开始解链到完全 解链是在一个相当窄的温度内完成 的。
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2. 特性： ①检测特异性强； ②灵敏度高； ③对酶促反应无任何影响，也不影响碱 基配对的特异性和稳定性；
④易造成放射性污染；
⑤半衰期短的同位素应用受到限制，随用 随标记，立即使用，不能长时间存放。
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3. 探针标记的方法 ①缺口平移法（nick translation） 实质：用 [α-32P]dNTP取代原来 DNA链 中不带同位素的同种核苷酸，生成的两 条链均被同位素标记。
核酸探针技术
核酸探针技术化学及生物学意义上的探针(probe)，是指与特定的靶分子发生特异性相互作用，并可被特殊的方法探知的分子。
抗体-抗原、生物素-抗生物素蛋白、生长因子-受体的相互作用都可以看作是探针与靶分子的相互作用。
核酸探针技术原理是碱基配对。
互补的两条核酸单链通过退火形成双链，这一过程称为核酸杂交。
核酸探针是指带有标记物的已知序列的核酸片段，它能和与其互补的核酸序列杂交，形成双链，所以可用于待测核酸样品中特定基因序列的检测。
每一种病原体都具有独特的核酸片段，通过分离和标记这些片段就可制备出探针，用于疾病的诊断等研究。
(一) 核酸探针的种类1.按来源及性质划分可将核酸探针分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA 探针和人工合成的寡核苷酸探针等几类。
作为诊断试剂，较常使用的是基因组DNA探针和cDNA探针。
其中，前者应用最为广泛，它的制备可通过酶切或聚合酶链反应(PCR)从基因组中获得特异的DNA后将其克隆到质粒或噬菌体载体中，随着质粒的复制或噬菌体的增殖而获得大量高纯度的DNA探针。
将RNA进行反转录，所获得的产物即为cDNA。
cDNA探针适用于RNA病毒的检测。
cDNA探针序列也可克隆到质粒或噬菌体中，以便大量制备。
将信息RNA(mRNA)标记也可作为核酸分子杂交的探针。
但由于来源极不方便，且RNA极易被环境中大量存在的核酸酶所降解，操作不便，因此应用较少。
用人工合成的寡聚核苷酸片段做为核酸杂交探针应用十分广泛，可根据需要随心所欲合成相应的序列，可合成仅有几十个bp的探针序列，对于检测点突变和小段碱基的缺失或插入尤为适用2.按标记物划分有放射性标记探针和非放射性标记探针两大类。
放射性标记探针用放射性同位素做为标记物。
放射性同位素是最早使用，也是目前应用最广泛的探针标记物。
常用的同位素有32P、3H、35S。
其中，以32P应用最普遍。
放射性标记的优点是灵敏度高，可以检测到Pg级；缺点是易造成放射性污染，同位素半衰期短、不稳定、成本高等。
核酸探针描述课件
斑点印迹法是一种简单快速的核酸检测方法，其基本原理是将核酸样品直接点到 膜上，然后通过与标记的探针进行杂交，检测目核酸序列。该方法具有操作简 便、快速、高通量等优点，广泛应用于基因诊断、基因表达分析等领域。
微孔板印迹法
总结词
一种将核酸结合到微孔板上的方法，用 于高通量检测多个样本中的特定核酸序 列。
等领域的研究提供了有力支持。
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核酸探针的应用领域
基因检测与诊断
用于检测基因突变、遗传病、癌症等 疾病相关的基因序列变化，为疾病的
预防、诊断和治疗提供依据。
生物多样性研究
用于检测和鉴定物种的基因组序列， 研究物种的进化、分类和系统发育等
。
食品安全与环境监测
用于检测食品和环境中存在的有害微 生物、病毒和其他病原微生物的核酸 序列，保障食品安全和环境卫生。
探针的纯化与保存
探针的纯化
通过凝胶电泳、亲和层析等方法对标记后的核酸 探针进行纯化，去除杂质和未标记的核酸分子。
探针的保存
将纯化的核酸探针进行分装，并保存在-20℃或80℃冰箱中，以延长探针的保存时间并保持其稳 定性。
03
核酸探针的检测方法
Southern印迹法
总结词
一种将DNA从凝胶转移到膜上的方法，用于检测基因组DNA中的特定序列。
农业科研与育种
用于检测和鉴定农作物及其病原微生 物的基因组序列，研究农作物的遗传 改良和抗病育种等。
02
核酸探针的制备
目的基因的获取
01 基因组DNA提取
从生物样本中提取基因组DNA，作为制备核描述课件
目录
• 核酸探针概述 • 核酸探针的制备 • 核酸探针的检测方法 • 核酸探针的实际应用 • 核酸探针的未来发展
临床分子生物学检验技术习题(附答案)
临床分子生物学检验技术习题（附答案）一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、下列关于人类遗传病的叙述不正确的是A、21-三体综合征患者体细胞中染色体数目为47条B、人类遗传病包括单基因遗传病、多基因遗传病和染色体异常遗传病C、人类遗传病是指由于遗传物质改变而引起的疾病D、遗传性疾病既可以直接诊断，也可以间接诊断E、单基因病是指受一个基因控制的疾病正确答案：E2、基因诊断对下列哪些疾病最具有确切的临床诊断意义A、染色体疾病B、肿瘤C、单基因遗传病D、畸形E、多基因遗传病正确答案：C3、最能直接反映生命现象的是A、蛋白质组B、基因组C、mRNA水平D、糖类E、脂类正确答案：A4、目前的DNA 自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约A、50bpB、100bpC、500bpD、1000bpE、2000bp正确答案：D5、无血缘关系的同种器官移植，发生移植排斥反应的主要原因是A、移植供血不足B、MHC的高度反应性C、移植物被细菌污染D、受者免疫功能紊乱E、受者体内有自身反应性T淋巴细胞正确答案：B6、珠蛋白基因的碱基由G突变为C时，造成的突变称为A、密码子缺失或插入B、单个碱基置换C、融合基因D、移码突变E、片段缺失正确答案：B7、Southern杂交通常是指A、DNA和RNA杂交B、DNA和DNA杂交C、RNA和RNA杂交D、蛋白质和蛋白质杂交E、DNA和蛋白质杂交正确答案：B8、目前临床上最常用的显带技术是A、Q带B、G带C、C带D、T带E、N带正确答案：B9、某基因位点正常时表达为精氨酸，突变后为组氨酸，这种突变方式为A、移码突变B、同义突变C、动态突变D、错义突变E、无义突变正确答案：D10、目前对肺癌遗传易感性的主要研究不包括A、RNA修复能力B、对诱变剂的敏感性C、DNA修复能力D、某些基因的突变或缺失E、代谢酶的基因多态性正确答案：A11、衣原体中能够引起沙眼的血清型为A、A;B; Ba;CB、A;B;D;EC、A;B;F;HD、A;B;C;KE、A;B;F;L正确答案：A12、ICAT出现成对的峰，分子质量通常相差几个质量单位A、1个B、2个C、4个D、6个E、8个正确答案：E13、细胞周期运行的动力主要来自A、CDKB、CDKIC、CDK2D、CDK4E、CDK3正确答案：A14、下列哪种蛋白质染色方法会出现“雪崩效应”A、胶体考马斯亮蓝染色B、银染色C、SYPRO RubyD、考马斯亮蓝染色E、SYPRO Orange正确答案：B15、关于肿瘤分子诊断的说法正确的是A、肿瘤分子诊断就是利用分子生物学原理和技术建立的肿瘤诊断方法B、肿瘤分子诊断的含义主要表现在虽然检测对象众多，但大多数标志物是特异性的肿瘤标志物C、肿瘤的分子诊断中根据目的、对象、类型的不同要采取相似的诊断策略与方法D、肿瘤分子诊断的核心是基于细胞水平的分子诊断技术E、肿瘤分子诊断的研究成果仅用于临床肿瘤的诊断正确答案：A16、用于蛋白质三级结构分析最大的数据库是A、NCBIB、EMBLC、SWISS-PROTD、PDBE、NIG正确答案：D17、用于区分 HCV 主要亚型的序列是A、C区B、NS5a区C、5'UTR区D、NS3区E、NS5b区正确答案：E18、PCR反应必需的成分是A、BSAB、DTTC、Tween 20D、明胶E、Mg²⁺正确答案：E19、质粒的主要成分是A、多糖B、蛋白质C、氨基酸衍生物D、DNA分子E、脂类正确答案：D20、脆性X综合征的临床表现有A、智力正常张力亢进，特殊握拳姿势、摇椅足B、智力低下伴眼距宽、鼻梁塌陷、通贯手、趾间距宽C、智力低下伴头皮缺损、多指、严重唇裂及膊裂D、智力低下伴长脸、大耳朵、大下颌、大睾丸E、智力正常、身材矮小、肘外翻、乳腺发育差、乳间距宽、颈蹼正确答案：B21、原核生物基因组中没有A、外显子B、插入序列C、操纵子D、转录因子E、内含子正确答案：E22、在人体内超过半数药物的代谢清除是通过下列哪个系统来完成的A、CYP450B、N-乙酰基转移酶C、硫嘌呤S-甲基转移酶D、G-6-PDE、水解酶系统正确答案：A23、关于HPV各亚型遗传物质的描述正确的是A、都是核糖核酸B、同时存在脱氧核糖核酸和核糖核酸C、有的是脱氧核糖核酸，有的是核糖核酸D、都是脱氧核糖核酸E、脱氧核糖核酸与核糖核酸可交替互换正确答案：D24、排斥反应的发生及其严重程度和供受者间高度相关的指标是A、年龄差距B、ABO血型配合程度C、血缘关系D、组织相容性抗原配合程度E、组织特异性抗原配合程度正确答案：D25、迪谢内肌营养不良(DMD)说法错误的是A、基因缺失是 DMD发生的主要原因B、DMD属于X连锁性隐性遗传C、最常用的诊断技术为多重PCRD、抗肌萎缩蛋白结构改变导致DMDE、发病者都为女性正确答案：E26、组织DNA 提取中,EDTA的作用是A、抑制 DNaseB、沉淀 DNAC、减少液体表面张力D、抑制RNaseE、去除蛋白质正确答案：A27、下列在双向电泳中不能增加蛋白质溶解度的是A、尿素B、4%[3-(3-胆胺丙基)二甲氨基-1-丙磺酸]C、二硫苏糖醇D、TrisE、EDTA正确答案：E28、变性剂可使核酸的Tm值降低，常用的变性剂是A、浓盐酸B、甲醇C、稀盐酸D、甲酰胺E、氢氧化钠正确答案：D29、PCR反应的基本过程不包括A、预变性B、退火C、淬火D、变性E、延伸正确答案：C30、为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加入A、ssDNAB、1×SSCC、10×SSCD、5×TBECE、50×TAE正确答案：A31、下列哪种病毒在复制过程中可产生RNA-DNA杂交体A、HIVB、HPVC、HBVD、HCVE、流感病毒正确答案：A32、常用的肺癌远处转移检测标志物是A、EGFR基因B、K-rasC、TTF-1D、TPAE、CEA正确答案：D33、阳性质控品失控的原因不包括A、扩增仪孔间温度不一致B、扩增产物污染C、Taq酶失活D、核酸提取试剂失效E、提取的核酸残留有抑制物正确答案：B34、关于微卫星的说法正确的是A、通常由9~10个核苷酸组成B、是一类低度多态性的遗传标记C、是一种简单串联排列的RNA序列D、微卫星序列定位于基因的启动子、编码区、内含子及其外显子交界区E、通过改变 RNA 结构或与特异性蛋白结合而发挥作用正确答案：D35、HLA-DR是A、同种抗原B、同种异型抗原C、异嗜性抗原D、自身抗原E、肿瘤相关抗原正确答案：B36、结核杆菌耐利福平的相关基因是A、rpsLB、ropBC、rrsD、pncAE、embB正确答案：B37、关于TTF-1的说法正确的是A、TTF-1在成人组织中主要分布在中胚层分化的组织中B、不是常用的肺癌检测标志物C、大多数腺癌显示TTF-1阴性，而大多数鳞癌显示阳性D、是一种分子量为20~25kb的核蛋白E、TTF-1在胎儿肺组织和成人Ⅱ型肺泡上皮中存在而在Ⅰ型肺泡上皮中不表达正确答案：E38、关于遗传病下列说法不正确的是A、在上下代之间垂直传递B、由遗传物质发生改变所引起的疾病C、在世代间进行传递的不是表型，而是异常改变的遗传物质D、终身携带E、遗传病的发生与环境因素无关正确答案：E39、下列不是目前用于 O157：H7型大肠埃希菌分子生物学检验方法的是A、常规PCRB、多重PCRC、实时定量 PCRD、基因芯片技术E、DNA测序正确答案：E40、众多肿瘤中遗传因素最突出的一种肿瘤是A、肝癌B、结直肠癌C、乳腺癌D、肺癌E、前列腺癌正确答案：B41、导致世界范围内性传播疾病的最为普遍的因素是A、沙眼衣原体B、豚鼠衣原体C、鹦鹉热衣原体D、鼠衣原体E、肺炎衣原体正确答案：A42、淋病奈瑟菌基因组结构特征正确的是A、大小为4.4MbB、含4411个开放阅读框(ORF)C、G+C含量高达65.6%D、同本属其他细菌(如脑膜炎球菌)的同源性较低E、没有操纵子这种具有共同启动子的基因簇正确答案：E43、当mtDNA8993T>C的突变率(异质性)达到约90%时可导致Leigh病的发生,那么该突变致 Leigh病的阈值为A、10%B、20%C、90%D、80%E、70%正确答案：C44、下列属于单基因遗传病的是A、冠心病B、原发性高血压C、精神与神经疾病D、糖尿病E、珠蛋白生成障碍性贫血正确答案：E45、下列关于 real-time PCR 引物设计的原则中,不正确的是A、两条引物的Tm值相差尽量大B、G+C的含量应在45%~55%之间C、尽量避免引物二聚体的出现D、反应体系中引物的浓度一般在0.1~0.2μmol/L 之间E、引物过长可能提高退火温度正确答案：A46、根据国际命名系统，人类染色体分为A、7组B、5组C、4组D、8组E、6组正确答案：A47、关于逆转录 PCR的描述，不正确的是A、首先应将RNA 转化为cDNA才能进行 PCRB、除了使用DNA聚合酶外，还应使用逆转录酶C、模板为 RNAD、oligo-d(T)理论上可以将所有的mRNA进行逆转录反应E、逆转录酶不需要引物进行逆转录反应正确答案：E48、属于等温扩增技术的是A、荧光定量 PCR技术B、PCR-RFLP技术C、SDA技术D、PCR-SSCP技术E、基因芯片技术正确答案：C49、第一代DNA 测序技术的核心技术是A、Sanger的双脱氧链终止法B、Maxam 和Gilbert的化学降解法C、荧光标记技术D、PCR技术E、DNA 自动分析技术正确答案：A50、关于随机引物法标记探针下述不正确的是A、可标记单链DNAB、可标记双链RNAC、可标记单链RNAD、比活性高达108cpm/μgDNA以上E、常经过 SephadexG-50 纯化才可使用正确答案：E51、目前基于 MALDI-TOF-MS进行细菌鉴定的主要标志物是A、16S rRNAB、IS6110C、katGD、特异性保守蛋白-核糖体蛋白E、丰度较高的管家基因正确答案：D52、结构基因突变不包括A、基因表达异常B、基因重排C、基因扩增D、基因点突变E、基因缺失正确答案：A53、关于NC膜下列描述不正确的是A、能吸附单链DNAB、能吸附单链RNAC、依赖于高盐浓度结合靶分子D、对小分子 DNA片段(<200bp)结合力强E、易脆正确答案：D54、具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称A、复杂性B、变性C、杂交D、探针E、复性正确答案：E55、由线粒体基因编码的呼吸链复合体Ⅰ蛋白质数目有A、3个B、1个C、13个D、2个E、7个正确答案：E56、Klinefelter综合征患者的典型核型是A、45,XB、47,XXYC、47,XY(XX),+14D、47,XY(XX),+21E、47,XYY正确答案：B57、HBV耐药性的检测在临床上主要是针对A、HBV DNA 聚合酶S基因的检测B、HBV DNA 聚合酶P基因的检测C、HBV DNA 聚合酶C基因的检测D、HBV DNA 聚合酶前C基因的检测E、HBV DNA 聚合酶X基因的检测正确答案：B58、寡核苷酸探针的最大优势是A、可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列B、易分解C、杂化分子稳定D、易标记E、易合成正确答案：A59、DNA芯片的样品制备过程错误的是A、核酸分子的纯化B、样品的扩增C、样品的标记D、常用的标志物为荧光E、标记后的样品不必再纯化正确答案：E60、关于核酸探针的描述下列不正确的是A、可以是DNAB、可以是RNAC、可用放射性标记D、可用非放射性标记E、必须是单链核酸正确答案：E61、下列不是片段性突变引起原因的是A、转录异常B、碱基扩增C、基因重排D、碱基缺失E、碱基插入正确答案：A62、线粒体糖尿病属于A、妊娠期糖尿病B、新发现的第5种糖尿病C、1型糖尿病D、特殊类型糖尿病E、2型糖尿病正确答案：D63、在MSI-H的诊断标准中，5个位点中的多少个出现不稳定定义为MSI-HA、3个B、1个C、5个D、4个E、2个正确答案：E64、下列不是MALDI-MS特点的是A、质量检测范围宽(已超过300kD)B、样品量只需1pmol甚至更少C、对样品要求很高D、分析速度快，分子离子峰强，信息直观E、质量的准确度高正确答案：C65、APC基因的点突变主要集中的位点是A、CpG和CpTB、CpA 和CpCC、CpA和CpTD、CpG 和CpCE、CpG和CpA正确答案：E66、封闭剂可封闭膜上蛋白质的位置，一般封闭剂的有效浓度不应超过A、1.5%B、0.5%C、10%D、5%E、2.5%正确答案：D67、Down综合征为几号染色体三体或部分三体所致A、13B、16C、18D、21E、22正确答案：D68、痕量检材分型最优选的技术是A、RFLP分型技术B、PCR-SSCP技术C、WGA技术D、PCR-SSO技术E、PCR-SSP技术正确答案：C69、DNA 自动化测序技术一般用不到的技术是A、Sanger的双脱氧链终止法B、Maxam 和Gilbert的化学降解法C、荧光标记技术D、PCR技术E、电泳技术正确答案：B70、Tm值主要取决于核酸分子的A、A-T含量B、G-C含量C、A-C含量D、T-G含量E、C-T含量正确答案：B71、某个体体细胞中染色体数目为49，称为A、亚二倍体B、超二倍体C、三倍体D、超三倍体E、四倍体正确答案：A72、变性梯度凝胶电泳的描述中错误的是A、使DNA双链分子局部变性B、采用梯度变性凝胶C、变性难易由核苷酸组成决定D、突变检测率高E、可确定突变位置正确答案：E73、Leber遗传性视神经病变继发性突变位点是A、G3460AB、G11778AC、T14484CD、A4435GE、A1555G正确答案：D74、在临床开展最多、效果最好的器官移植是A、肝脏移植B、肺移植C、肾脏移植D、心脏移植E、脾脏移植正确答案：C75、下列可通过染色体检查而确诊的疾病是A、Huntington舞蹈病B、Klinefelter综合征C、血友病D、白化病E、苯丙酮尿症正确答案：B76、硝酸纤维素膜最大的优点是A、高结合力B、本底低C、脆性大D、共价键结合E、非共价键结合正确答案：B77、奥美拉唑在体内代谢受哪种药物代谢酶影响较大A、CYP1A1B、CYP1A2C、CYP2D6D、CYP2C9E、CYP2C19正确答案：E78、丙型肝炎病毒的核酸类型是A、双链RNAB、单链正链RNAC、双链环状DNAD、单链DNAE、单链负链RNA正确答案：B79、淋病奈瑟菌耐大环内酯的分子机制与以下哪个基因有关A、ropBB、ermC、katGD、gyrAE、embB正确答案：B80、最容易降解的核酸探针是A、cDNA 探针B、dsDNA 探针C、ssDNA探针D、gDNA 探针E、RNA正确答案：E81、以下不属于MLPA技术优点的是A、特异性和重现性高B、灵敏度高C、方法简便D、可用于检测未知的点突变类型E、检测分辨率宽正确答案：D82、目前通过何种技术扩增致病基因仍是PGD诊断单基因疾病的主要手段A、单细胞PCR技术B、微卫星DNA序列C、基因芯片D、变性高效液相色谱分析法E、原位杂交技术正确答案：A83、不适宜于直接作为第一代测序技术测序的DNA模板是A、双链DNA片段和PCR产物B、单链DNA片段C、克隆于质粒载体的DNA片段D、克隆于真核载体的DNA片段E、提取的染色质 DNA正确答案：E84、PCR-RFLP检测点突变和SNP 时酶的质量控制要求是A、酶体积不要超过总体积5%B、酶体积不要超过总体积10%C、酶体积不要超过总体积15%D、酶体积不要超过总体积2.5%E、酶体积不要超过总体积7.5%正确答案：B85、关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述不正确的是A、特异性高B、可依赖氨基酸序列推测其序列C、分子量小D、可用于相似基因顺序差异性分析E、可用末端转移酶进行5'端标记正确答案：E86、某临床分子生物学检验项目每2周检测1次，最适用的统计学质控方法是A、Westgard 多规则质控方法B、6 Sigma质控方法C、即刻法质控方法D、累积和质控方法E、Levey-Jennings质控图方法正确答案：C87、利用DNA芯片检测基因的表达情况，杂交条件应选A、高盐浓度、低温和长时间B、低盐浓度、低温和长时间C、高盐浓度、高温和长时间D、高盐浓度、低温和短时间E、高盐浓度、高温和短时间正确答案：A88、在同种骨髓移植 HLA配型中，最重要的抗原是A、HLA-DR分子B、HLA-A分子C、HLA-B分子D、HLA-DP分子E、HLA-C分子正确答案：A89、关于p53基因说法不正确的是A、属于抑癌基因B、在进化过程中高度保守C、编码蛋白为转录因子 p53蛋白，与调控细胞生长周期、调节细胞转化、DNA复制及诱导细胞凋亡有关D、可单独作为乳腺癌预后的分子标志E、定位于人染色体17q13上正确答案：E90、DNA 提取中不能有效去除蛋白质的是A、酚/氯仿抽提B、SDSC、高盐洗涤D、蛋白酶KE、RNase正确答案：E91、下列物质不适于非放射性探针标记的是A、AKPB、ACPC、生物素D、地高辛E、荧光素正确答案：B92、限制性长度多态性是由于以下哪项所致A、碱基变化发生在酶切位点上B、碱基变化发生在增强子上C、碱基变化发生在微卫星序列上D、碱基变化发生在外显子E、碱基变化发生在内含子正确答案：A93、关于解脲脲原体，以下错误的是A、解脲脲原体是引起非淋菌性尿道炎的主要病原体之一B、目前 UU有14个血清型，可被划分为两大生物群C、脲酶抗原是UU种特异性抗原，可与其他支原体相区别D、UU的分群有助于探讨生物群或血清型与疾病或耐药之间的联系E、UU有脂多糖抗原和蛋白质抗原可与其他支原体相区别正确答案：E94、下列方法中不能分辨野生型和突变型基因的是A、PCR-SSCPB、变性梯度凝胶电泳C、熔解曲线分析D、逆转录 PCRE、RFLP正确答案：D95、关于随机克隆法或称鸟枪法测序策略的叙述不准确的是A、可用于各种大型的测序计划B、是一种完全定向的测序策略C、需将目的DNA大片段随机切割成小片段，并分别进行亚克隆D、可利用通用引物测定亚克隆的序列E、一些区段往往被重复测定正确答案：B96、人类染色体不包括A、端着丝粒染色体B、亚中着丝粒染色体C、性染色体D、中央着丝粒染色体E、近端着丝粒染色体正确答案：A97、不符合 Down综合征的临床表型是A、严重智力低下B、小头畸形C、耳低位D、摇椅样足E、肌张力低下正确答案：D98、下列哪种蛋白质染色方法灵敏度最高A、SYPRO OrangeB、胶体考马斯亮蓝染色C、考马斯亮蓝染色D、银染色E、质谱兼容的银染色正确答案：D99、与氨基糖苷类抗生素耳毒性有关的突变位于A、tRNALeuB、16S rRNAC、12S rRNAD、ND1E、ND6正确答案：C100、MALDI分析生物大分子的过程中，下列不是一个合适基质应具备的是A、吸收能量B、使生物大分子彼此分离C、使被分析的生物大分子离子化D、基质分子与被分析物质间的摩尔比为 100:1~50000:1E、烷基化蛋白质所带的自由巯基正确答案：E。
分子生物学考试模拟题及参考答案
分子生物学考试模拟题及参考答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、HIV 核酸类型是:A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案：D2、核酸分子杂交的基础是A、配体受体结合B、甲基化C、磷酸化D、抗原抗体结合E、碱基互补配对正确答案：E3、HBV 耐药性的检测在临床上主要是针对A、HBV DNA 聚合酶 S 基因的检测B、HBV DNA 聚合酶 P 基因的检测C、HBV DNA 聚合酶 C 基因的检测D、HBV DNA 聚合酶前 C 基因的检测E、HBV DNA 聚合酶 X 基因的检测正确答案：B4、理想的质控品应具备的条件不包括A、阳性质控品所含待测物浓度接近试验的决定性水平B、靶值或预期结果已知C、基质与待测样本一致D、含有未灭活的传染性病原体E、稳定、价廉、同一批次可大量获得正确答案：D5、第二代测序技术最主要技术特征是A、对单分子 DNA 进行非 PCR 的测序B、针对 SNP 进行非 PCR 的测序C、高通量和并行 PCR 测序D、直接分析 SNPE、直接进行个体基因组测序和 SNP 研究正确答案：C6、关于 DNA 芯片描述不正确的是A、探针为已知序列B、有序地高密度地固定于支持物上C、理论基础是核酸杂交D、可研究基因序列E、不能研究基因突变正确答案：E7、可抑制 RNA 酶活性防止其对 RNA 样品降解的是( )A、Tris-HClB、EDTAC、酚试剂D、氯仿E、DEPC正确答案：E8、以 SDA 技术检测结核杆菌时扩增靶点是A、SDAB、IS6110 和 18SrRNAC、IS6110 和 5SrRNAD、IS6110 和 16SrRNAE、IS6110 和 15SrRNA正确答案：D9、最常用的 DNA 探针标记方法是A、随机引物标记B、切口平移标记C、3’-末端标记D、5’-末端标记E、PCR 法正确答案：A10、关于 G-C 之间氢键的描述下列正确的是A、G-C 之间有 3 个氢键B、G-C 之间有 2 个氢键C、G-C 之间有 1 个氢键D、G-C 之间有 4 个氢键E、G-C 之间有 5 个氢键正确答案：A11、PCR 反应的基本过程不包括A、预变性B、退火C、淬火D、变性E、延伸正确答案：C12、关于 mtDNA 复制特点的描述正确的是A、线粒体密码子与核基因密码子相同B、mtDNA 以 D-环复制为主要模式,与核 DNA 复制同步C、mtDNA 两条链的复制是同步的D、mtDNA 为自主性复制,不受核内基因控制E、参与 mtDNA 复制所需的酶、调控因子等由核 DNA 编码正确答案：E13、Alu家族属于A、可变数目串联重复序列B、短串联重复序列C、长散在核原件D、短散在核原件E、DNA 转座子正确答案：D14、纯 DNA 的 A260/A280 比值为 1.8,可使比值降低的是( ):A、蛋白质B、牛血清白蛋白C、RNAD、氯仿E、Mg2+正确答案：A15、关于肿瘤分子诊断的说法正确的是A、肿瘤分子诊断的核心是基于细胞水平的分子诊断技术B、肿瘤分子诊断就是利用分子生物学原理和技术建立的肿瘤诊断方法C、肿瘤的分子诊断中根据目的、对象、类型的不同要采取相似的诊断策略与方法D、肿瘤分子诊断的研究成果仅用于临床肿瘤的诊断E、肿瘤分子诊断的含义主要表现在虽然检测对象众多,但大多数标志物是特异性的肿瘤标志物正确答案：B16、利用 DNA 芯片检测基因的表达情况,杂交条件应选( )A、高盐浓度、低温和长时间B、低盐浓度、低温和长时间C、高盐浓度、高温和长时间D、高盐浓度、低温和短时间E、高盐浓度、高温和短时间正确答案：A17、关于 RNA 探针的描述下列不正确的是A、可用于随机引物标记B、特异性高C、灵敏度高D、可用非同位素标记法标记E、不易降解正确答案：E18、SDS 是一种阴离子表面活性剂,其可断开蛋白质分子内和分子间的( )A、氢键B、离子键C、二硫键D、酯键E、疏水键正确答案：A19、单细胞基因扩增一般采用下列何种技术增加检测的敏感性和特异性A、巢式 PCRB、多重 PCRC、PCR-RFLPD、等位基因特异性 PCRE、PCR-SSCP正确答案：A20、在对病原体检测中,一次性获得信息量最大的技术是( )A、ELISAB、荧光定量 PCR 技术C、PCR-RFLP 技术D、原位杂交技术E、基因芯片技术正确答案：E21、采用了所谓酶联级联测序技术的测序方法是A、焦磷酸测序B、双脱氧终止法测序C、寡连测序D、化学降解法测序E、边合成边测序正确答案：A22、引起镰状细胞贫血的珠蛋白基因突变类型是A、错义突变B、终止密码突变C、整码突变D、移码突变E、无义突变正确答案：A23、产前诊断临床应用尚不广泛,原因不包括A、诊断的准确性受到多种制约B、需要生殖医学与遗传学技术的结合C、诊断技术不成熟D、已明确母亲为携带者的婴儿E、单个细胞的遗传诊断困难正确答案：C24、下列属于单基因遗传病的是A、糖尿病B、冠心病C、原发性高血压D、珠蛋白生成障碍性贫血E、精神与神经疾病正确答案：D25、FMR-1 基因上 CGG 重复序列异常扩增导致A、镰状细胞贫血B、脆性 X 综合征C、地中海贫血D、血友病 AE、血友病 B正确答案：B26、被称为细菌“分子化石”的是A、16SrRNAB、IS6110 插入序列C、rfbEO157D、fliCH7E、rpoB正确答案：A27、质粒的主要成分是A、多糖B、蛋白质C、氨基酸衍生物D、DNA 分子E、脂类正确答案：D28、HIV 最易发生变异的部位是A、内膜蛋白B、核衣壳蛋白C、包膜蛋白D、刺突蛋白E、逆转录酶正确答案：D29、DNA 自动化测序技术中,不正确的荧光标记方法A、用荧光染料标记引物5’端B、用荧光染料标记引物3’-OHC、用荧光染料标记终止物D、使用一种或四种不同荧光染料标记E、使荧光染料标记的核苷酸渗入到新合成的 DNA 链中正确答案：B30、以下不是 APC 基因失活方式的是A、移位B、缺失C、插入D、无义突变E、错位拼接正确答案：A31、关于 PCR 反应引物的描述,不正确的是A、引物的长度在 20~30bpB、引物自身或引物之间不应存在互补序列,防止产生二聚体和发夹结构C、引物中 G+C 的含量占 45%~55%D、引物的3’端可以带有生物素、荧光或酶切位点等作为标记E、两条引物的 Tm 值应该尽量相近正确答案：D32、目前的 DNA 自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约A、50bpB、100bpC、500bpD、1000bpE、2000bp正确答案：D33、目前测序读长最大的测序反应:A、连接测序B、双脱氧终止法C、焦磷酸测序D、边合成边测序E、化学裂解法正确答案：B34、K-ras 基因最常见的激活方式是A、染色体重排B、插入突变C、缺失突变D、点突变E、基因扩增正确答案：D35、利用 DNA 芯片检测基因突变,杂交条件应:A、短时间内、低盐、高温条件下的高严紧性杂交B、长时间内、低盐、高温条件下的低严紧性杂交C、短时间内、高盐、高温条件下的低严紧性杂交D、短时间内、低盐、低温条件下的高严紧性杂交E、短时间内、低盐、高温条件下的低严紧性杂交正确答案：A36、母亲血浆中的胎儿 DNAA、占母亲血浆总 DNA 的 50%以上B、可用于检测胎儿从母亲遗传而来的线粒体 DNA 突变C、确定 RhD 阳性孕妇所怀胎儿的 RhD 情况D、确定胎儿是否从母亲遗传了 X 连锁的基因突变E、血友病 A 的产前诊断正确答案：C37、最能直接反映生命现象的是:A、蛋白质组B、基因组C、mRNA 水平D、糖类E、脂类正确答案：A38、重复序列通常只有 1~6bp,重复 10~60 次并呈高度多态性的 DNA 序列称为A、微卫星 DNAB、小卫星 DNAC、cDNAD、高度重复顺序 DNAE、单拷贝顺序 DNA正确答案：B39、为封闭非特异性杂交位点,可在预杂交液中加入A、ssDNAB、1×SSCC、10×SSCD、5×TBECE、50×TAE正确答案：A40、探针基因芯片技术的本质就是A、基因重组技术B、聚合酶链反应技术C、蛋白质分子杂交技术D、核酸分子杂交技术E、酶切技术正确答案：D41、引起亨廷顿舞蹈病的突变形式是:A、错义突变B、无义突变C、RNA 剪接突变D、插入缺失突变E、动态突变正确答案：E42、珠蛋白基因的碱基由 G 突变为 C 时,造成的突变称为A、密码子缺失或插入B、单个碱基置换C、融合基因D、移码突变E、片段缺失正确答案：B43、双链 DNA 的 Tm 值主要与下列哪项有关( )A、A-T 含量B、G-T 含量C、A-G 含量D、T-G 含量E、C-G 含量正确答案：E44、下列不是片段性突变引起原因的是A、基因重排B、碱基插入C、碱基缺失D、碱基扩增E、转录异常正确答案：E45、5’-末端的 DNA 探针标记主要依靠的酶是A、T4 多聚核苷酸激酶B、末端转移酶C、AKPD、DNA polⅠE、DNA pol正确答案：A46、下列不属于 SNP 检测技术特点的是( )A、密度低B、易实现分析的自动化C、密度高D、遗传稳定性E、富有代表性正确答案：A47、关于核酸探针的描述下列不正确的是A、可以是 DNAB、可以是 RNAC、可用放射性标记D、可用非放射性标记E、必须是单链核酸正确答案：E48、基因多态性连锁分析中,第一、二、三代遗传标记分别是A、RFLP、SSCP、STRB、RFLP、SNP、STRC、RFLP、STR、SNPD、VNTR、SSCP、SNPE、VNTR、STR、RFLP正确答案：C49、结核分支杆菌的基因组特征是A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案：B50、要制订一个能够简洁准确的 DNA 测序方案,首先应考虑A、DNA 片段大小B、测序方法C、实验条件D、测序目的E、测序时间正确答案：E51、由于突变使编码密码子形成终止密码,此突变为:A、终止密码突变B、错义突变C、移码突变D、同义突变E、无义突变正确答案：E52、关于荧光原位杂交技术叙述不正确的是( )A、可以用于基因定位B、可以用于遗传病的产前诊断C、用放射性核素标记探针D、用荧光素标记探针E、无需经过核酸的提取正确答案：C53、以下不属于 DNA 分析检测技术的是A、基因芯片B、ASO 杂交C、Northern blotD、RFLP 分析E、PCR正确答案：C54、荧光定量 PCR 检测核酸量的时间段在A、非指数期B、PCR 反应的最初阶段C、PCR 反应最后的时间阶段D、指数期的起始阶段E、指数期的终末阶段正确答案：D55、线粒体糖尿病属于A、2 型糖尿病B、妊娠期糖尿病C、型糖尿病D、特殊类型糖尿病E、新发现的第 5 种糖尿病正确答案：D56、单基因遗传病诊断最重要的前提是A、了解相关基因的染色体定位B、了解患者的家族史C、了解相关基因的基因克隆和功能分析等知识D、进行个体的基因分型E、疾病表型于基因关系已阐明正确答案：B57、DNA 双螺旋之间氢键断裂,双螺旋解开,DNA 分子成为单链,这一过程称A、变性B、复性C、复杂性D、杂交E、探针正确答案：A58、关于带正电荷尼龙膜的描述下列不正确的是A、可结合 DNAB、可结合 RNAC、对盐浓度要求不高D、核酸可通过 UV 交联共价结合E、本底较低正确答案：E59、下述序列中,在双链状态下属于完全回文结构的序列是A、AGTCCTGAB、AGTCAGTCC、AGTCGACTD、GACTCTGAE、ACTCGACT正确答案：C60、规范化的临床基因扩增检验实验室工作区域不包括A、产物分析区B、标本制备区C、试剂储存和准备区D、隔离区E、扩增区正确答案：D61、PCR 反应过程中,退火温度通常比引物的 Tm 值A、低5℃B、低15℃C、高5℃D、高15℃E、相等正确答案：A62、不是自动 DNA 测序仪主要系统之一的是A、测序反应系统B、电泳系统C、荧光检测系统D、探针荧光标记系统E、电脑分析系统正确答案：D63、转录依赖扩增系统与其他 PCR 技术的区别是A、模板是 RNAB、模板是 DNAC、引物是 RNAD、模板和产物都是 RNAE、需要热循环正确答案：D64、PCR 反应体系的描述错误的是A、模板B、一条引物C、dNTPD、DNA 聚合酶E、缓冲液正确答案：B65、核酸探针不可用什么标记A、生物素标记B、抗体标记C、地高辛标记D、荧光标记E、放射性核素标记正确答案：B66、一位男性血友病患者,他亲属中不可能是血友病的是A、外甥或外孙B、姨表兄弟C、叔、伯、姑D、外祖父或舅父E、同胞兄弟正确答案：C67、线粒体基因组编码几种 rRNAA、22 种B、20 种C、18 种D、3 种E、2 种正确答案：E68、以下关于原癌基因说法不正确的是A、普遍存在于人类或其他动物细胞基因组中的一类基因B、在生物进化过程中不稳定C、在控制细胞生长和分化中起重要作用D、容易在多种因素作用下激活成活性形式的癌基因E、活性形式的癌基因才引起细胞癌变正确答案：B69、关于点样法进行 DNA 芯片制备不正确的是A、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针的 DNA 芯片制备技术B、通过高速点样机直接点样C、多用于大片段 DNA 探针的芯片制备D、成本低E、速度快正确答案：A70、关于 mtDNA 的描述正确的是A、结构基因编码 mtDNA 复制所需的酶、调控蛋白、NADH 氧化还原酶、ATP 酶等B、重链有编码功能,轻链无编码功能C、含 22 个结构基因D、含 tRNA 基因,可转录 22 种 tRNA,以满足线粒体内蛋白质翻译的需要E、含 rRNA 基因,编码 2 种 rRNA,即 12SrRNA 和 18SrRNA正确答案：D71、原核生物基因组特点不应包括:A、重复序列B、断裂基因C、插入序列D、转录产物为多顺反子E、操纵子结构正确答案：B72、开展耳聋基因诊断有重要临床意义,但不包括A、可作为听力筛查的一个有效辅助手段B、可以预测耳聋疾病的病情和预后C、可以了解患者发生耳聋的分子病因D、可以预测下一代出现耳聋的概率E、可作为有效治疗耳聋的手段之一正确答案：E73、关于非放射性探针标记,下列描述不正确的是A、可长时间使用B、目前应用的非放射性标志物都是抗原C、对人体危害小D、酶促显色检测最常使用的酶是碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶E、灵敏度不如放射性探针正确答案：B74、唯一一个在结肠上皮增殖过程中起看门作用的基因是A、MCC 基因B、DCC 基因C、APC 基因D、p53 基因E、HNPCC 基因正确答案：C75、用于基因定位的技术是:A、荧光定量 PCR 技术B、PCR-RFLP 技术C、PCR 微卫星检测技术D、原位杂交技术E、cDNA 表达芯片技术正确答案：D76、影响 DNA 分离纯化效果的是A、材料新鲜,低温保存B、加核酸酶抑制剂C、剧烈震荡D、除净蛋白质E、除净多糖正确答案：C77、PCR-SSCP 描述中错误的是A、检测核酸点突变的技术B、需制备成单链 DNAC、根据空间构象由 DNA 的碱基组成决定的原理D、不需电泳E、敏感性与待分离 DNA 的长度有关正确答案：D78、最早发现与 mtDNA 突变有关的疾病是A、肿瘤B、Leber 遗传性视神经病C、糖尿病D、耳聋E、MELAS 综合征正确答案：B79、DCC 基因突变的主要方式不包括A、等位基因杂合性缺失B、5’端纯合性缺失C、3’端纯合性缺失D、DCC 基因过甲基化E、外显子的点突变正确答案：C80、HBV DNA 中最小的一个开放阅读框是A、P 基因区B、S 基因区C、X 基因区D、前 S 基因区E、C 基因区正确答案：C81、基因诊断间接方法不包括A、基于 SNP 的单倍型分析B、Southern blotC、基于 STR 的微卫星分析D、PCR-RFLPE、RFLP 连锁分析正确答案：B82、双脱氧终止法测定核酸序列时,使用 ddNTP 的作用是:A、作为 DNA 合成的正常底物B、形成特异性终止链C、标记合成的 DNA 链D、使电泳时 DNA 易于检测E、使新合成的 DNA 链不易形成二级结构正确答案：B83、下列叙述不正确的是A、F 质粒的主要特征是带有耐药性基因B、R 质粒又称抗药性质粒C、Col 质粒可产生大肠杆菌素D、F 质粒是一种游离基因E、F 和 ColE1 质粒可以在同一菌株内稳定共存正确答案：A84、关于梅毒螺旋体的实验室检测,下列描述正确的是A、诊断梅毒的传统方法是体外培养B、分子生物学方法是耐药基因分析和流行学研究的首选方法C、镜检法简便,特异性高,但不能用于皮肤黏膜损害的早期诊断D、分子生物学方法不能早期诊断梅毒感染E、血清学检查普遍用于梅毒的筛查、疗效观察和流行病学检查,对早期梅毒诊断敏感正确答案：B85、转录依赖扩增系统的描述错误的是A、以 RNA 为模板B、首先由靶 RNA 合成 DNA 拷贝C、再由 DNA 转录生成大量 RNA 拷贝D、产物为 DNAE、为等温扩增正确答案：D86、次氯酸钠去除临床分子生物学实验室污染源的原理是A、诱导同一 DNA 链上相邻的两个嘧啶之间形成嘧啶二聚体B、氧化损伤核酸C、水解核酸D、与扩增产物的嘧啶碱基形成单加成环丁烷衍生物E、与胞嘧啶形成羟氨基胞嘧啶正确答案：B87、首个被证实和克隆的乳腺癌易感基因是A、BRCA1B、BRCA2C、c-erbB-2/HER2D、ATME、p53正确答案：A88、一般来说核酸杂交的温度低于其 Tm 值多少度A、10~15℃B、30~40℃C、40~50℃D、5~10℃E、15~25℃正确答案：E89、有下列哪项指征者应进行产前诊断A、夫妇之一有致畸因素接触史的B、习惯性流产的孕妇C、夫妇之一有染色体畸变的D、35 岁以上高龄的E、以上都是正确答案：E90、关于真菌,以下描述正确的是A、真菌种类繁多,其中大多数对人类有害B、浅部真菌感染对治疗有顽固性,对机体的影响相对较小C、近年真菌病的发病率有明显下降趋势D、病原性真菌根据其入侵组织部位深浅的不同分为浅部真菌和内部真菌E、真菌感染对人体的危害不大正确答案：B91、基因芯片技术的主要步骤不包括( )A、酶切分析B、芯片的设计与制备C、杂交反应D、信号检测E、样品制备正确答案：A92、在如下情况时,可考虑通过基因连锁分析进行分子生物学检验A、基因结构变化未知B、基因点突变C、基因插入D、基因缺失E、基因表达异常正确答案：A93、线粒体基因突变不包括A、mtDNA 拷贝数的变异B、碱基突变C、插入D、缺失E、重复序列增多或减少正确答案：E94、引起急性移植排斥反应最重要的抗原是A、ABO 血型抗原B、HLA 抗原C、超抗原D、异嗜性抗原E、Rh 血型抗原正确答案：B95、人类可遗传的变异中最简单、最常见的一种是( )A、RFLPB、VNTRC、STRD、SNPE、CNV正确答案：D96、大多数质粒在自然状态下是( )A、线性双链 DNAB、线性单链 DNAC、线性单链 RNAD、环状双链 DNAE、环状单链 DNA正确答案：D97、单核苷酸多态性检测芯片探针的设计不正确的是( )A、一般采用等长移位设计法B、包括与靶序列完全匹配的野生型探针C、三种不同的单碱基变化的核苷酸探针D、靶序列与探针完全匹配的杂交点显示较弱的荧光信号E、可以对某一段核酸序列所有可能的 SNPs 位点进行扫描正确答案：D98、杂交时的温度与错配率有关,错配率每增加 1%,则 Tm 值下降A、3~3.5℃B、0.5℃C、4~4.5℃D、2~2.5℃E、1~1.5℃正确答案：E99、电脑显示和打印出的 DNA 碱基序列图谱中不出现的颜色:A、紫B、蓝C、绿D、黄E、红正确答案：A100、常见基因芯片合成的两大类方法是( )A、原位合成和在片合成B、分子印章多次压印合成和在片合成C、原位合成和直接点样D、光引导原位合成和喷墨合成E、离片合成和直接点样正确答案：C。
核酸探针技术及应用
核酸探针技术及应用基因检测技术的发展，使对某些疾病的诊断达到了特异性强、敏感性高及简便快速的目的。
近年来各种血清学方法发展很快，但血清学方法主要是测抗体，是间接的证据随着分子生物学的发展，应用DNA—DNA杂交建立了核酸探针(Probe)技术，该技术是目前基因检测最常用的方法，目前已成为诊断各种感染性疾病，恶性肿瘤，遗传病，检测抗生紊的耐药性，法医学鉴定及从分子水平上研究发病机制与流行病学规律等方面的一种重要手段。
本文主要介绍了核酸探针技术的原理，核酸分子杂交方法及核酸探针的应用等方面。
一、核酸探针技术的原理DNA 或RNA 片段能识别特定序列基因的DNA 片段，能与互补的核苷酸序列特异结合，这种用同位素非同位素标记的单链DNA片段即为核酸探针。
核酸探针技术是将双链DNA 经加热或硷处理，使硷基对间的氢链被破坏而变性，解开成两条互补的单链。
它们在一定温度和中性盐溶液条件下，又可按A—T，G—C碱基配对的原则重新组合成双链为复性。
这种重组合只是在两股DNA是互补(同源)或部分互补(部分同源)的条件下才能实现。
正是由于双链DNA的这种可解离与重组合的性质，才可用一条已知的单链DNA，用放射性同位素或其他方法标记后制备成核酸探针，与另一条固定在硝酸纤维素滤膜上的变性单链DNA进行杂交，(另一条DNA链与核酸探针是配对碱基，称为靶)再用放射自显影或其他显色技术检测，以确定有无与探针DNA (或RNA)同源或部分同源的DNA(或RNA)存在。
因为探针只与靶病原体的DNA或RNA杂交，而不与标本中存在的其他DNA 或RNA 杂交。
二、核酸探针技术的基本方法被检标本用去污剂和酶分解以去除非DNA成分或直接提取DNA，用各种方法处理DNA使其变性，把DNA双螺旋的两条链分开，单链DNA结合于固态基质上，(如滤膜)使其固定。
再加上已制备好的探针进行杂交，探针便可找出已固定的DNA中的互补序列，与之配对结合，然后洗掉未结合部分，由于探针已将放射性同位素掺入，再用x射线敏感的胶片自显影，见黑色影印者即为阳性。
核酸探针的名词解释
核酸探针的名词解释核酸探针是一种生物技术工具，用于检测和定量分析某个特定的核酸序列。
核酸探针广泛应用于生命科学研究、临床诊断、药物研发等领域，发挥着重要的作用。
本文将对核酸探针进行全面的解释和概述。
首先，核酸探针是由特定的DNA或RNA序列构成的分子探针，可以与目标核酸序列发生亲和作用。
这种亲和作用是通过碱基之间的氢键和静电相互作用来实现的。
当核酸探针与目标序列结合时，可以通过不同的手段进行检测，如荧光、放射性同位素、酶等。
因此，核酸探针可以用于检测及定量分析目标核酸的存在和数量。
核酸探针通常分为两类：探针和探针靶标。
探针是指通过标记物标记的核酸序列，用于寻找、结合和识别特定的目标序列。
标记物可以是荧光染料、放射性同位素、酶等，通过这些标记物的特性，可以将目标序列的存在转化为可见的荧光信号或颜色变化等。
探针的设计需要根据目标序列的特点和要求进行选择，以确保能够高效地与目标序列结合。
而探针靶标是指与探针结合的目标核酸序列。
探针靶标可以是基因、RNA、病毒等，通过与探针的结合，可以准确地检测和定量目标核酸的存在和数量。
探针靶标的选择是基于研究的目的和所需的结果，不同的探针靶标可以提供不同的信息和数据。
核酸探针的优点是具有高度的特异性和灵敏性。
由于核酸探针是专门设计的，可以针对目标序列的独特特点进行选择和设计，使其具有非常高的特异性。
此外，核酸探针的灵敏性也很高，可以检测到非常低浓度的目标分子。
因此，核酸探针常被用于疾病的早期诊断、药物研发、基因工程和环境监测等领域。
然而，核酸探针也存在一些限制和挑战。
首先，核酸探针对目标序列的特异性要求非常高，如果目标序列发生了变异或突变，可能会导致探针无法与其结合，从而导致检测结果的错误。
此外，核酸探针的设计和合成成本相对较高，需要专业的实验室和设备支持。
因此，在使用核酸探针进行研究和应用时，需要充分考虑这些限制和挑战。
目前，核酸探针已经广泛应用于各个领域。
在生命科学研究中，核酸探针常用于基因表达分析、突变检测、病毒感染研究等。
核酸的荧光探针
• 实验表明，GMP的测量线性范围达到3x10-8 -3x10-5mol/L，比Tb-GMP体系宽一个数量级
• 此外，它的检测限达到3.9x I0-9 mol/l ，比后 者低一个数量级。
例如Gd3+加入Tb-GMP体系明显地增强了该体系的荧光强度。
此外，它的检测限达到3.
GMP在生物体内具有重要的生理功能。
主要是基于配合物立体结构的发光性质，多是过渡金属元素配合物。
吴思辉
03081020
金属离子
• 主要是基于某些稀土离子本身的发光特性 稀土离子的共振带正好与核酸受紫外光激 发时的三线态相重叠，能有效地发生从有 机配体到中心离子之间的能量转移。
纳米粒子 吴思辉
03081020
与传统的有机染料荧光探针相比，半导体纳米晶体探针的光强度高20倍，荧光寿命长，光稳定性高100倍，谱线宽度只是有机染料谱线
宽度的1/3，因此大大提高了分析的灵敏度和选择性。
实验表明，GMP的测量线性范围达到3x10-8 -3x10-5mol/L，比Tb-GMP体系宽一个数量级
该法具有光谱线宽窄、发光寿命长和能发射特征荧光且与生物分子有很大亲和力等特点。
米晶体探针的光强度高20倍，荧光寿命长， 9x I0-9 mol/l ，比后者低一个数量级。
另外有时蛋白质的存在会严重干扰测量，须预先去除再进行测定。 应用色谱法分辨率较高，但所需时间长，一般需数小时，而且需制备特殊的柱子。
• 该法具有光谱线宽窄、发光寿命长和能发 射特征荧光且与生物分子有很大亲和力等 特点。
e.g.
FOR EXAMPLE
一、核酸分子探针的标记
一、核酸分子探针的标记
(labeling of probe)
（一）概述
在化学及生物学意义上的探针(probe)，是 指能与特定的靶分子发生特异性相互作用的分 子，并可以被特殊的方法所探测。
例如抗体—抗原、生物素—抗生物素蛋白、 激素—受体等的相互作用都可以看作是探针与 靶分子的相互作用。
所谓核酸分子探针则是指特定的已知 核酸片段，能与互补核酸序列退火杂交， 然后用特定的方法进行杂交信号的检测。从 而可以用于待测核酸样品中特定基因序列 的探测。
以下介绍最常用的几种固相支持物。
(1)硝酸纤维素滤膜(nitrocellulose filter membrane)： 优点： ➢杂交信号本底较低; ➢非特异性地吸附蛋白质的作用较弱，因此特别适合
于那些涉及蛋白质作用(如抗体和酶等)的非放射性 标记探针的杂交体系。
缺点：
因为硝酸纤维素膜是依靠疏水性相互作用结合DNA的， 这种结合并不十分牢固，随着杂交及洗膜的进程， DNA会慢慢脱离硝酸纤维素膜，特别是高温情况下， 从而使杂交效率下降。因此不太适宜于在同一膜上重 复进行杂交。再者，硝酸纤维素膜质地较脆，特别是 经烘烤后，操作不方便，须特别小心。
（五）探针的非放射性标记法
按照标记方法的不同，现有的非放射性标记物主要有 两种类型： 1.标记物预先已连接在NTP或dNTP上，因此可像放射 性核素标记的核苷酸一样用酶促聚合方法掺入到核酸 探针上，如生物素、地高辛等； 2.标记物直接与核酸进行化学反应而连接在核酸上。 此后一类标记物标记过程更为简单，可能是今后研究 发展的主流。
Hale Waihona Puke 杂交的双方是待测核酸序列及探针。 待测核酸序列可以是克隆的基因片段，也 可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。 将核酸从细胞中分离纯化后可以在体外与 探针杂交(膜上印迹杂交)，也可直接在细 胞内进行(细胞原位杂交)。
核酸引物探针质量技术要求
核酸引物探针质量技术要求全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：核酸引物探针是分子生物学实验中常用的一种工具，用于特异性检测和测定目标DNA或RNA序列。
其质量的好坏直接影响实验结果的准确性和可靠性。
制定和遵守一定的技术要求对于保证核酸引物探针的质量至关重要。
一、引物序列设计核酸引物探针的设计是其质量的重要基础。
在设计引物时，需要考虑以下几个方面：1. 引物的长度：引物长度通常在18-30个碱基对之间，需要保证引物足够长以确保特异性结合目标序列，同时又不能过长影响反应效率。
2. 引物的GC含量：引物中GC含量的合理范围通常在40%-60%之间，过高或过低的GC含量可能导致引物的特异性降低。
3. 引物的特异性：引物的特异性是指引物与目标序列的互补性，需要确保引物与非目标序列的互补性尽可能小以避免干扰。
4. 引物的末端结构：引物的末端结构需要考虑到PCR扩增、杂交和捕获等不同实验操作的需求，合理设计引物的末端结构有助于提高实验效率。
二、引物检测和验证在使用核酸引物探针前，需要对引物进行检测和验证，以确保其质量符合要求。
主要检测方法包括：1. 电泳检测：通过琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳等方法，检测引物的纯度和长度。
2. 透射电子显微镜观察：可以通过透射电子显微镜观察引物的形态和结构，判断引物的合成质量。
3. 质谱分析：利用质谱分析技术，可以检测引物的精确质量和序列。
三、引物处理和保存引物的处理和保存也对其质量起到重要影响，以下是一些常用的处理和保存方法：1. 复溶：引物在使用前需要以适当的溶剂复溶，避免在处理过程中引物受损。
2. 冻干：可以利用冻干技术将引物保存在干燥状态，减少引物的降解和污染。
3. -20℃或更低温度保存：引物应该保存在-20℃或更低的温度下，避免被高温或光照导致降解。
四、实验操作规范在进行核酸引物探针实验时，需要严格遵守实验操作规范，包括以下几个方面：1. 避免污染：实验前准备工作台、试剂和仪器时要避免污染，以确保实验结果的准确性。
核酸探针的种类
核酸探针的种类基因探针根据标记方法不同可粗分为放射性探针和非放射性探针两大类，根据探针的核酸性质不同又可分为DNA探针，RNA探针，cDNA探针，cRNA探针及寡核苷酸探针等几类，DNA探针还有单链和双链之分。
下面分别介绍这几种探针。
（一）DNA探针DNA探针是最常用的核酸探针，指长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。
现已获得DNA探针数量很多，有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和人类细胞DNA探针。
这类探针多为某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列。
这些DNA片段须是特异的，如细菌的毒力因子基因探针和人类Alu探针。
这些DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。
以细菌为例，目前分子杂交技术用于细菌的分类和菌种鉴定比之G+C百分比值要准确的多，是细菌分类学的一个发展方向。
加之分子杂交技术的高敏感性，分子杂交在临床微生物诊断上具有广阔的前景。
细菌的基因组大小约5×106bp，约含3000个基因。
各种细菌之间绝大部分DNA是相同的，要获得某细菌特异的核酸探针，通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法，即将细菌DNA切成小片段后分别克隆得到包含基因组的全信息的克隆库。
然后用多种其它菌种的DNA作探针来筛选，产生杂交信号的克隆被剔除，最后剩下的不与任何其它细菌杂交的克隆则可能含有该细菌特异性DNA片段。
将此重组质粒标记后作探针进一步鉴定，亦可经DNA序列分析鉴定其基因来源和功能。
因此要得到一种特异性DNA探针，常常是比较繁琐的。
探针DNA克隆的筛选也可采用血清学方法，所不同的是所建DNA文库为可表达性，克隆菌落或噬斑经裂解后释放出表达抗原，然后用来源细菌的多克隆抗血清筛选阳性克隆，所得到多个阳性克隆再经其它细菌的抗血清筛选，最后只与本细菌抗血清反应的表达克隆即含有此细菌的特异性基因片段，它所编码的蛋白是该菌种所特有的。
用这种表达文库筛选得到的显然只是特定基因探针。
对于基因探针的克隆尚有更快捷的途径。
生物检测技术——核酸探针
核酸探针的分类及制备方法
根据核酸的来源和性质，核酸探针可分为RNA探针、人工 合成的寡核苷酸探针、单链DNA探针、双链DNA探针等几 类。
1） RNA探针
RNA探针一般都是单链，它具有单链DNA探针的优点，又 具有许多DNA单链探针所没有的优点，主要是：RNA： DNA杂交体比DNA：DNA杂交体有更高的稳定性，所以 在杂交反应中RNA探针比相同活性的DNA探针所产生信号 要强。RNA：RNA杂交体用RNA酶A(胰RNA酶)切比用Sl 酶切DNA：RNA杂交体容易控制，所以用RNA探针进行 RNA结构分析比用DNA探针效果好。
核酸探针的前景
基因芯片在环保方面、食品检测方面的研究报道比较少， 这将成为将来的研究方向。从某种意义上我们可以认为： 基因结构或种类决定物种，基因功能或表达则决定生命即 生物的生、老、病、死。基因芯片技术将为我们提供一条 认识生命本质的捷径，同时它的发展也带动了蛋白质芯片、 细胞芯片、多肽芯片、组织芯片的发展和应用。 在癌基因的检测和诊断、致病病原体的检测、遗传病的产 前诊断以及亲子关系鉴定等基因诊断方面以及特异性目的 基因及外源DNA的检测方面，核酸探针技术将越来越显出 其巨大的应用前景。
3)单链DNA探针和双链DNA探针
用双链探针杂交验测另一个远缘DNA时，探针序列与 被检测序列之间有很多错配，但是，2条探针互补链之 间的配对却十分稳定，即形成自身的无效杂交，结果 使检测效率下降。科学上采用单链探针则可解决这一 问题。单链DNA探针的合成方法:(1)从Ml3载体衍生序 列合成单链DNA探针。(2)以RNA为模板用反转录酶合 成单链cDNA探针。 双链DNA探针的合成方法：切口平移法和随机引物合 成法。双链DNA探针在与靶序列杂交前，DNA分子必 须变为单链，这一般是通过加热使其变性而达到解链 目的。解链DNA分子被迅速冷却到只能缓慢复性的温 度以下，可使探针保持单链状态。
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四、探针标记物的选择 理想的标记物： ①具有高度的灵敏性 ②与探针结合后，不影响杂交及探针的主 要理化特性 ③检测方法高灵敏性、高特异性，假阳性率 低，环境污染少，价格低廉；
④若用酶促方法标记，应对Km影响不大
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（一）常用的放射性标记物
1. 常用探记探针的同位素：
32P、3H、35S、14C、125I、131I
30
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②随机引物法（random priming）
人工合成的6~8个核苷酸长的各种不同排列 顺序的混合物，它们可以随机地互补到 DNA探针的某一处，作为引物，在Klenow 片段作用下，合成与探针DNA互补的DNA 链，当在反应液中加入[α-32P]dATP时，即 可形成放射性同位素标记的DNA探针，但 探针DNA序列是长短不等的。
11
1. 常用的变性方法： ① 热变性
② 酸碱变性
③ 化学试剂变性
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2. 影响复性的因素 ① 序列简单的分子复性快，如poly(dT)和poly(dA) 识别快 ② DNA片段愈大，扩散速度愈低，复性慢 ③ 离子强度↑→有利于复性 ④ DNA浓度↑→复性↑ Tm值的估算 ① <20bp Tm=4（G+C）+2（A+T） ② >20bp Tm=69.3+0.41(G+C)% ③ Tm=81.5℃+16.6lgM+0.41（G+C）% -500/n-0.61×（甲酰胺%）
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4. 寡核苷酸探针 优点：①可根据需要合成相应序列； ②探针短,序列复杂性低,分子量小， 因此杂交时间短; ③长 度只有10—50bp，该识别序 列内1个碱基的变化可明显降低杂 交Tm值。 ④可大量合成，价格低，能够用酶 学或 化学方法进行非放射性标记。
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三、探针设计原则：
①长度：10~50bp ②碱基成分:G+C含量为40%~60% ③探针分子内无互补序列。 ④避免同一碱基重复出现。 ⑤ 一旦选定某一序列后，尚需与已知的各种基因 序列进行同源性比较，与非靶区域的同源性不应 超过70%或有连续8个或更多的碱基同源。
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核酸杂交：不同来源的两条核酸单链由
于具有互补序列，在一起复性时，互补 序列配对，形成杂化分子。
+ +
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16
二、影响杂交的因素 1. 核酸分子的浓度和长度 2. 温度：比Tm低25℃~30℃较适宜
3. 离子强度：离子强度↑→杂交反应率↑
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4. 杂交液中的甲酰胺
甲酰胺能降低核酸杂交的Tm， 含30%—50%甲酰胺的杂交溶液温度能 降低到30—42℃。 使用甲酰胺的优点：
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2. 特性： ①检测特异性强； ②灵敏度高； ③对酶促反应无任何影响，也不影响碱 基配对的特异性和稳定性；
④易造成放射性污染；
⑤半衰期短的同位素应用受到限制，随用 随标记，立即使用，不能长时间存放。
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3. 探针标记的方法 ①缺口平移法（nick translation） 实质：用 [α-32P]dNTP取代原来 DNA链 中不带同位素的同种核苷酸，生成的两 条链均被同位素标记。
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增色效应：
DNA变性后对 260nm紫外光收 增加的现象。
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DNA的复性（renaturation)：
在适当条件下，变性DNA的两条 互补链可再恢复成天然的双螺旋结 构的过程。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复 性，此过程称为退火(annealing)。
9
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减色效应：
变性DNA复性后 对260nm紫外光 吸收减少的现象。
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第二节 核酸探针
一、探针的选择原则 1. 高度的特异性 2. 制备探针的难易性和检测手段的灵敏法 二、探针的种类
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1.体连接（质粒、噬菌体）
↓
克隆(PCR扩增)
↓
酶切 优点：①无性繁殖、制备方法简单；②不易降解 （与RNA比较）；③标记方法成熟。
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DNA的变性(denaturation)：
在某些理化因素作用下，DNA 分子内碱基对之间的氢键断裂，使 规则有序的双螺旋结构变为不规则 无序的单链线团链温度（融解温度，Tm） (melting temperature)：
使50%的DNA发生变性时的环 境温度。 DNA的变性从开始解链到完全 解链是在一个相当窄的温度内完成 的。
优点：比活度高，结果稳定
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③用T4多核苷酸激酶标记DNA5ˊ末端
5ˊ-pCpGpApCpG-3ˊ 碱性磷酸酶(AKP） 5ˊ-HOCpGpApCpG-3ˊ [γ-32P]ATP T4噬菌体多核苷酸激酶（PNK）
5ˊ-32PCpGpApCpG-3ˊ
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④Klenow片段快速标记DNA探针末端 用枯草杆菌蛋白酶切割可得两条多肽链 N— 5ˊ→3ˊ外切酶 小片段(36000)
①低温下探针更稳定； ②能更好地保留非共价结合的核酸。
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注意： ①待测核酸顺序与探针顺序同源性高 的杂交，用水溶液时取68℃，用50% 甲酰胺溶液时取40℃。 ②待测核酸顺序与探针同源性不高时， 以50% 甲酰胺溶液在35—40℃杂交。
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5. 核酸分子的复杂性直接影响复性几率。 6. 非特异性杂交反应：在杂交前将非特异 性位点进行封闭，以减少对探针的非特异 性吸附作用。 常用封闭物： ①变性非特异DNA：鲑鱼精子DNA， 小牛胸腺DNA ②高分子化合物：Denhardt溶液 脱脂奶粉
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2. cDNA探针（complementary DNA）
通过逆转录 ↓ 双链cDNA 优点： 不含内含子及高度 重复序列但不易获得 ↓S1核酸酶切平两端 加接头 ↓限制酶 粘性末端 ↓ 载体连接 ↓ 克隆
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3. RNA探针：检测DNA和mRNA 优点：杂交效率高，稳定性高，非特异性 杂交较少,未杂交探针可用RNase 降解，减少本底的干扰。 缺点：易降解，标记方法复杂
第五章 核酸探针技术检测 食品微生物
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核酸分子杂交（nucleic acid hybridization）
指具有互补序列的两条核酸单链在一定条 件下按碱基配对原则形成双链的过程。
不同来源的DNA或RNA单链在一定条件下 重新组成的新的双链分子——杂交分子。
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第一节 核酸探针杂交的基本理论 一、变性与复性