抗体包被
ELISA
酶联免疫吸附试验（ELISA）作者：发布日期：(2009-05-31) 浏览次数：7次酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是一种固相酶免疫测定技术。
它的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。
再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。
此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
ELISA的主要类型有双抗体夹心法、间接法、竞争法、捕获法等。
试剂准备1．包被液（碳酸盐缓冲液pH9.6）：Na2CO3 1.59g；NaHCO3 2.93g；加800ml水溶解，定容至1000ml加0.02%NaN3，0.22μm膜过滤，4℃保存。
2．洗涤缓冲液（PBST）：NaCl 9g；KCl 0.25g；Na2HPO4 3.63g；KH2PO4 0.25g；加水溶解，定容至1000ml加0.2% Tween20混匀。
3．封闭液：10%小牛血清（1ml小牛血清加到9ml 1×PBS中混匀）。
4．底物缓冲液（磷酸盐-柠檬酸缓冲液pH6.0）：Na2HPO4 56.77g；柠檬酸5.6g；加水800ml溶解，定容至1000ml，过滤0.22μm膜，4℃保存。
5．终止液：1mol/L H2SO4。
一、双抗体夹心法检测抗原双抗体夹心法用于检测抗原。
它是利用待测抗原上的两个抗原决定簇A和B分别与固相载体上的抗体A和酶标记抗体B结合，形成抗体A-待测抗原-酶标抗体B复合物，复合物的形成量与待测抗原含量成正比。
ELISA包被指南
ELISA包被指南如果做ELISA完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；（5）结合物及标本的稀释液；（6）洗涤液；（7）酶反应终止液。
1、免疫吸附剂已包被抗原或抗体的固相载体在低温（2~8℃）干燥的条件下一般可保存6个月。
有些不完整的试盒，仅供应包被用抗原或抗体，检测人员需自行包被。
以下简述固相载体和包被过程。
1.1固相载体固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器，不参与化学反应。
可作ELISA中载体的材料很多，最常用的是聚苯乙烯。
聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。
聚苯乙烯为塑料，可制成各种形式。
ELISA载体的形状主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管。
以微量滴定板最为常用，专用于EILSA 的产品称为ELISA板，国际上标准的微量滴定板为8×12的96孔式。
为便于作少量标本的检测，有制成8联孔条或12联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA板相同。
ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。
现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操作的标准化极为有利。
聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空白值较大。
良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近。
聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的ELISA板在使用前须事先检查其性能。
常用的检查方法为：以一定浓度的人IgG（一般为10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸光度。
1体外诊断试剂研发包被标记检测等详细步骤注意点影响因素
1体外诊断试剂研发包被标记检测等详细步骤注意点影响因素一、抗体包被详细步骤：用包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/mL。
在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1mL，4℃过夜。
次日，平衡至室温弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次1分钟。
加入封阻液200uL，37℃温浴2-3h，用洗涤缓冲液洗3次，每次1分钟。
加入200uL含5%蔗糖的PBS缓冲液，37℃温浴1h，甩干后37℃烘干1h后自封袋封存（含干燥剂）。
包被缓冲液：10mM PBS;pH7.420mM Tris-HCL；pH7.2-8.050mM碳酸盐缓冲液；pH9.6洗涤缓冲液：10mM PBST(含有0.05%吐温)pH7.4封阻液：10mM PBS缓冲液ph7.4，含1%BSA二、过碘酸钠氧化法标记步骤：称0.5mg HRP，溶于0.25ml纯化水，入20uL新配的0.1M NaIO4，温避光反应20min（15-30min）。
1mM醋酸钠缓冲液透析，4度过夜，加入50ul0.16M乙二醇，混匀静置30min，加入5ul0.2M CBS。
立即加入0.5mg抗体，室温避光轻混2-4h，加入10ul新配的4mg/ml NaBH4，4度避光2h。
对PBS透析过夜调浓度，甘油对半稀释，-20冻存。
三、具体操作步骤1.配制稀释液（PBS，pH7.2～7.4，含2%BSA）；2.取1块预包被板，平衡至室温（大概时间20min）；3.取CA125抗原一支（冻干品，500U/支0.5mL纯水复溶）复溶混匀；4.加入稀释液，配制浓度为12U/mL，50U/mL的抗原液作为校准品；5.将-20℃酶标抗体（冻存浓度为500ug/mL）室温快速溶解（可以用手温或37℃水浴溶解），加入稀释液中，酶使用浓度为1ug/mL；6.酶反应底物配置，完成后用锡箔纸避光，使用之前必须平衡至室温（至少20min）7.所有试剂使用前平衡至室温（大概20min，液体较多则平衡至30min）8.每个孔加样100ul（垂直悬空加入，切勿碰到孔壁）盖上封板膜37℃孵育1h，和90min，注意边缘效应，边缘数值一般较高；9.沿弧线甩干液体，移液枪小心加入300uL PBST（0.05%吐温）洗涤液，不要流出孔外，放置到微量振荡器振荡1min，重复洗涤四次。
第一节直接法测抗体[精华]
![第一节直接法测抗体[精华]](https://img.taocdn.com/s3/m/ca2177d188eb172ded630b1c59eef8c75fbf9573.png)
第一节间接法测抗体1. 基本原理将特异性抗原包被在固相载体上，形成固相抗原，加入待检标本（含相应抗体），其中抗体与固相抗原形成抗原-抗体复合物，再加入酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体，亦称二抗），与上述抗原-抗体复合物结合。
此时加入底物，复合物上的酶则催化底物而显色。
2. 试剂与设备z 纯化抗原。
z 酶标抗体（辣根过氧化物酶标记抗人免疫球蛋白）z 底物(邻苯二胺OPD或四甲联苯胺TMB)z 底物缓冲液（Na2HPO4 0.184g +构椽酸0.047g + H2O10ml + H2O2 5ul）z PBS（见附录）z pH9.6碳酸盐缓冲液CBS（见附录）z 洗液（PBS +0.05%体积的Tween20）z 稀释液（100ml PBS + 1g牛血清血蛋白）z 终止液（２mol/L H2SO4）z 酶标板（聚苯乙烯板）z 微量加样器z 吸水纸z 封口胶带z 酶标仪z 洗板机等。
3. 实验步骤一予试验（一）抗原包被的酶标板的制备１. 以碳酸盐缓冲液将抗原稀释成适当浓度（参考：5ug/ml），加入酶标板（50ul/孔），以胶带封口，于4℃过夜。
２. 弃抗原液，以双蒸水冲洗3次，自然干燥后以胶带封口。
此为已知抗原包被的酶标板，备用。
（二）底物浓度的摸索在底物缓冲液中加入不同量的底物（参考：5mg/10ml），加入酶标板中（50ul/孔），以胶带封口，37℃避光保存2h，在没有明显变色的条件下选择尽可能大的底物浓度。
（三）酶标抗体浓度的摸索1用稀释液稀释酶标抗体至适当倍数（参考：40~4000倍），加入已包被抗原的酶标板中（50ul/ 孔），封口后于37℃作用30min。
以洗液连续冲洗5次，然后于吸水纸上拍干，加入已摸索好的底物封口后于37℃作用2h，在没有变色的条件下选择尽可能大的酶标抗体浓度。
（四）待测标本浓度的摸索选择明确为阴性的标本，以稀释液做适当稀释（至少5倍以上，参考：100倍），封口后于37℃作用1h，按上述条件洗板（连续冲洗5次），加入已确定浓度的酶标抗体，再洗板，再加入已确定的底物，选择无明显发色的最大浓度的标本。
包被抗体
筛选Cmv抗体时部分IgG也可以与IgM竞争抗原，现在尝试先除掉IgG，昨天板上包的是抗IgG的抗体，抓完IgG就剩IgM了，再包抗原加抗体再加抗抗体
实验名称：包板、封闭
实验目的：
实验步骤:
2012/8/12
1．包板：稀释抗IgG抗体8 K 板抗体包被缓冲液PB7.4 抗原包被缓冲液CB 1X
第一组所需浓度1000纳克/孔(100微升)=10 纳克/微升
所需体积X 每孔体积100微升共需1200微升配置1.5毫升
所需质量 1.5毫升X 10 纳克/微升=15000纳克=15 微克
原浓度为2 微克/微升所需抗抗体体积15 微克÷2 微克/微升=7.5 微升第二组所需浓度100 纳克/孔（100微升）=1 纳克/微升
2．第一组，去7.5 微升抗抗体稀释到1.5 毫升，加完第一组后，剩余300微升稀释10 倍后浓度即为1 纳克/微升，加完第二组。
标明GAH-IgG(Tab) 浓度日期名字然后4 ℃过夜( 或37℃2小时但是本底略高，P/N比低)
2012/8/13
3．封闭：将封闭液提前取出半小时放于室温下，然后将板洗一次，脱水，加入200微升（封闭周围空隙），4℃保存两个半小时。
4．加入血清，３７度一小时，取出吸取上清加入到包被有病毒ｃｍｖ的板上，三阳两阴一空白对照，３７度一小时，准备酶，待用
5．。
elisa包被原理
elisa包被原理ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常见的免疫检测方法，广泛用于疾病诊断、生物化学分析、药物筛选等领域。
该技术通过利用酶的高灵敏度和特异性，在试管中检测目标分子的存在，并通过比色或发光等方法来定量分析。
ELISA检测方法一般有直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和夹心ELISA等多种形式。
本文将着重介绍夹心ELISA的原理和实验步骤。
一、原理：夹心ELISA （Sandwich ELISA）是一种双抗夹心法，其基本原理是利用两种不同特异性的抗体对目标分子进行夹心检测，其中一种抗体固定在所选的检测板上，另一种抗体标记着特定的酶。
在检测过程中，目标分子会与板上的固定抗体结合，接着与标记抗体结合，并将其特定的酶活性带到检测体系中，最终通过加入底物来产生测定信号。
夹心ELISA的信号强度与检测物的浓度成正比，经过计算后可以获得目标分子的定量信息。
具体来说，夹心ELISA步骤包括以下几个方面：1. 准备试剂和试验板：- 准备特异性的固定抗体，并将其分别涂覆在微孔板表面；- 将剩余的微孔板孔涂覆阻断剂，以避免非特异性的蛋白质粘附在板表面。
2. 样品加入：- 加入待检测的样品或标准样品，并在适当条件下使其与固定抗体结合。
3. 标记抗体加入：- 加入与待检测物品特异性的标记抗体，其酶标记通常为马过氧化物酶（HRP）。
4. 洗涤：- 通过洗涤步骤去除未结合的物质和蛋白质等杂质，以保证检测结果准确可靠。
5. 底物反应：- 加入适当的底物和缓冲溶液，并使用酶标仪检测获得的信号强度。
6. 计算分析：- 根据已知样品的浓度建立标准曲线，并利用标准曲线获得待检测样品的浓度。
二、实验步骤：1. 准备试剂和微孔板：- 预热酶标板至室温，并在孔板中分别涂覆所选特异性抗体，处理空孔作为阴性对照；- 已经涂覆抗体的孔板需要在4℃下保存，以保持活性。
- 制备所需的缓冲溶液、洗涤缓冲液和底物溶液。
免疫检验的自动化
免疫检验的自动化随着免疫学的不断发展,新的免疫学技术不断出现,如化学发光技术、时间分辨荧光免疫测定技术、荧光偏振免疫分析测定技术等。
促进了免疫检测的自动化,一大批先进的自动化免疫分析仪应运而生,它们的出现不仅减轻了工作人员的劳动强度,而且缩短了分析流程,提高了实验结果的精确度和准确性,灵敏度甚至更是达到pg水平,在内分泌激素、血浆特种蛋白、肿瘤标志物、维生素、体内药物浓度的快速测定中起着重要作用。
各种现代化免疫分析仪都使用一种或两种新的免疫分析技术,如:酶联免疫分析技术、生物素一亲和素技术、化学发光分析技术、荧光偏振技术、时间分辨荧光免疫测定技术、电化学发光技术等,使免疫检验手段更先进、方法更可靠、结果更准确。
下面就国内外常见的几种自动化免疫分析仪及其分析原理作一介绍。
一、美国雅培公司的AXSYM全自动快速免疫分析系统:该系统综合使用了微粒子捕捉酶免疫分析技术(MEIA)、荧光偏振免疫分析技术(FPIA),可测定激素、肿瘤标志物、肝炎、病毒标志物、维生素和各种治疗药物浓度等。
(一)微粒子捕捉酶免疫分析技术(MEIA)原理。
以双抗体夹心法为例,介绍如下:已包被了抗体的塑料微珠试剂中,加入待测标本后,经温育,再加入碱性磷酸酶标记的抗体、形成抗体一抗原一酶标记抗体复合物。
然后将其转移到玻璃纤维柱上,用缓冲液洗涤,没有结合的抗原、酶标抗体被洗掉,结合抗原抗体的塑料微珠则被保留在纤维柱滤膜的上方。
这时再加入底物,4-甲基伞型酣磷酸盐(4-Mup)。
酶标抗体上的碱性磷酸酶将4Mup分解,脱磷酸后形成甲基伞型酣(4Mu),它在365nm激发光的照射下,发出448nm的荧光,经过荧光读数仪的记录、放大,计算出所测物质的含量。
（二）荧光偏振免疫分析技术(FPIA),这是一种均相荧光免疫分析法,主要用于测定小分子量物质,如药物浓度测定。
原理是:标记在小分子抗原上的荧光素经485m的激发偏振光照射后,吸收光能,越入激发状态,激发状态的荧光素不稳定,很快以发出光子的形式释放能量而还原。
elisa蛋白包被原理
elisa蛋白包被原理
嘿，你们知道不，这elisa蛋白包被原理啊，其实就跟咱们平时穿衣服差不多，讲究个合身，讲究个精致。
咱先得把那层“衣服”选好，对吧？这层“衣服”就是抗原抗体复合物，得精挑细选，得跟咱们要检测的那个抗原牢牢结合。
然后，咱们得把这个抗原抗体复合物固定在平板上，就像咱们把衣服穿在身上一样，得让它稳稳当当的。
固定完了，再给平板洗个澡，把没粘牢的分子洗掉，就像咱们穿衣服前得洗个澡，干净利索。
接下来，把那个elisa蛋白包被，也就是那个复合物，铺到平板上。
这就像咱们穿上衣服，得让衣服贴合身体，不能有空隙，要让抗原抗体复合物均匀分布在平板上。
然后，再来一层抗体，这就像咱们再穿上一件外套，外面再套一件，增加保护。
这层抗体可就厉害了，它能够跟平板上的抗原结合，形成一个牢固的复合物。
最后，再给这层复合物洗个澡，洗掉没结合上的抗体。
这就像咱们穿衣服后，回家得脱掉外套，只留下需要的衣服。
这elisa蛋白包被原理，其实就是这么一环扣一环，讲究的就是个精细操作。
就像咱们穿衣服一样，得讲究搭配，讲究颜色，讲究款式。
所以啊，这elisa实验，得咱们一步一步来，用心去做，才能出好结果。
你们说呢？这elisa实验，是不是就像咱们穿衣服一样，讲究个细致入微呢？。
免疫抗体包被筛选法
免疫抗体包被筛选法
免疫抗体包被筛选法是一种利用抗体与抗原之间的特异性结合来筛选特定抗体的方法。
这种方法的步骤通常如下：
1.选择要用于包被的抗原：这种抗原应是目标抗体的特异性抗原，或者与目
标抗体有交叉反应的抗原。
2.将抗原包被在固相载体上：通常使用的是酶标板或免疫试管等固相介质，
可以通过物理吸附或共价结合的方式将抗原固定在固相载体上。
3.洗涤以去除未结合的抗原：通过洗涤步骤，可以去除未结合的抗原和其他
杂质，以提高特异性结合的效率。
4.加样和孵育：将含有目标抗体的样品加入已经包被了抗原的固相载体中，
并进行孵育。
孵育时间根据具体的实验条件而定，目的是让抗体与抗原充分结合。
5.洗涤和检测：洗涤以去除未结合的抗体，然后通过酶标显色或荧光检测等
方法检测特异性结合的抗体。
包涵体蛋白包被ELISA板检测抗体的规程
包涵体蛋白包被E L I S A 板检测抗体的规程集团标准化小组：[VVOPPT-JOPP28-JPPTL98-LOPPNN]包涵体蛋白包被E L I S A板检测抗体的流程一、包涵体包被抗原制备：在包涵体蛋白尿素溶解后不能浓缩或者置换溶剂的情况下，可以采取直接使用包涵体尿素溶解液直接作为检测原包被ELISA 板。
（1）完成包涵体的制备和洗涤流程。
（2）按照常规流程溶解使用8M尿素或者1%SKL（十二烷基肌氨酸钠）溶解包涵体。
剧烈震动后，室温静置30分钟至2小时或者4℃过夜，使其缓慢溶解。
注：每100mL细菌提取的包涵体使用2mL含8M尿素的BufferA溶解；或者每100mL细菌提取的包涵体使用2mL含1%SKL的BufferA溶解（使用前混合，1.97mlBufferA加入0.03ml20％的SKL贮存液）。
（3）抗原稀释：使用0.05MpH9.6碳酸盐包被缓冲液（CBS）4倍稀释包涵体溶解液，分装冻存-20℃冰箱，减少冻融次数。
注意必须由少到多逐渐加入CBS，边加边震荡，以免试剂浓度变化造成的蛋白沉淀。
DMSO溶解的用CBS稀释4倍。
加入1:2-5倍PBS/TE/SW液体后切胶磨碎，4度放置3-7天，最高转速4度离心取上清冻存。
二、包涵体包被抗原浓度的确定：1、稀释抗原：取出包涵体抗原，4℃融化。
在ELISA板每孔加入100μLCBS。
将100μL抗原加入ELISA板第一竖排孔中；吹打4-5次后，吸出100μL加到第二竖排孔中；吹打4-5次后，吸出100μL加到第三竖排孔中，一次类推，最后一排吸出的100μL液体弃去。
注：每种抗原至少稀释3行，一行阳性血清检测，一行阴性血清对照，一行使用含8M尿素的BufferA做对照。
2、包被：4℃过夜或37℃温育2小时。
弃去孔内溶液，用PBST洗3次（洗涤方法：在ELISA孔中加满PBST，室温静置5分钟后弃去，反复三次）。
拍干！3、封闭：5%脱脂乳300μL，37℃温育2小时或4℃过夜。
(仅供参考)ELISA原理及操作注意事项
血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌 体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反 应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合， 在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来， 在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过 一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋 白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓， 避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上 强烈振荡。
2.如样品中含有抗原，则优先
竞争结合抗体，结合
为抗原抗体复合物。
酶
3.同时加入酶标记抗原，抗原
酶标记抗原 没有结合的位点酶标记抗原
抗原
去占据，则结合为酶标记抗
抗原
原-抗体复合物。
4.酶催化底物并显色。
抗体
固相载体
酶标抗原竞争法示意图（图d）
五、基本操作注意事项
标本抗原：
天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。
合成多肽抗原是抗原决定簇的氨基酸序列人工 合成的多肽片段。一般只含有一个抗原决定簇， 纯度高，特异性也高，但由于分子量太小，往 往难于直接吸附于固相上。借助于偶联物与固 相载体的吸附，间接地结合到固相载体表面。
包被用抗体
IgG对聚苯乙烯有强吸附力，其联结发生在Fc段上， 抗体结合点暴露于外。
血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、 粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗 原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、 尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分 泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本 。
血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其 他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助 于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、 血 块收缩后即可取得。除特殊情况外，在医 学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中 血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规 方 法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时 会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP 为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增 加 非特异性显色。
酶联免疫吸附试验(ELISA)
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间接法测定抗体
检测抗体最常用的方法，常用于传染病的检测。
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ELISA基本过程： 抗原吸附在固相载体上，这个过程称为包被，加
待测抗体, 再加相应酶标记抗体，生成抗原--待测 抗体--酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反 应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算 抗体的量。待测抗体的量与有色产物成正比。同 理也可包被抗体，测定抗原含量。
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TMB经HRP作用后共产物显蓝色。TMB性质较稳定，可配成溶液 试剂，只需与H2O2溶液混和即成应用液。酶反应终止后，TMB 产物由蓝色呈黄色，可在比色计中定量，最适吸收波长为 450nm。 ABTS虽不如OPD和TMB敏感，但空白值极低，也为一些试剂盒 所采用。
HRP对氢受体的专一性很高，仅作用于H2O2、小分醇的过氧化 物和尿素过氧化物(urea peroxide)。
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结合物的保存
酶和抗体均为生物活性物质，易失活。高浓度较为稳 定，冻干后可在普通冰箱中保存一年左右。结合物溶液中 加入等体积的甘油，加入蛋白保护剂。另外再加入抗生素 （例如庆大霉素）和防腐剂（HRP结合物加硫柳泵，AP结 合物可加叠氮钠）。
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结合物的稀释液
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AP的底物为磷酸酯酶，一般采用对硝基苯磷酸酯作为 底物。产物为黄色的对硝基酚，在405nm波长处有吸 收峰。用NaOH终止酶反应后，黄色可稳定一时间。AP 也有发荧光底物（磷酸4-甲基伞酮），可用于ELISA 作荧光测定，敏感度较高于用显色底物的比色法。
所有的ELISA固相均需封闭？
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采用抗体包被纳米金多层自组装膜的HCG安培免疫传感器
ＨＣ 通 过 层 层 自组 装 技 术 在 Ａｕ 电极 表 面 交 替 修 饰 多层 ｛ ／ ＮＰ ｝ ， 通 过 膜 内的 Ｇ． ＨＬ Ａｕ ｓ 膜 再
Ａｕ ｓ 附 ａ ｔ ＨＣ 构 筑 了 ＨＣ 安培 免疫 传 感 器． Ｋ。 ｅ Ｃ ６为探 针 ， ｐ ７ ０的 Ｐ Ｓ ＮＰ 吸 ｎｉ Ｇ， — Ｇ 以 Ｆ （ Ｎ） 在 Ｈ ． Ｂ
Ｎｉｇ ｏ ｈ ｊ ｎ １ ２ １ ｈｎ ； ．Ｃ ｉｉａ Ｌ ｂ ｒｔ ｒ ｆＮ ｎ ｂ ｐ ｒ Ｈｏ ｐｔｌ ｎ ｂ ，Ｚ ｅ ａ ｇ ３ ５ １ ，Ｃ ｉａ ２ ｌ ｃ ｌ ａ ｏ ａｏ ｙｏ ｉｇ ｏＥｘ ｏ ｔ ｓ ｉ ，Ｎｉｇ ｏ ｈ ｊ ｎ ｉ ｎ ａ ｎ ｂ ，Ｚ ｅｉ ｇ ａ
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Ａｍ ｐ ｒ ｍ ｅｒｃＩ ｍ ｕ ｏ ｅ ｓ ｒ ｆ ｒ Ｈｕ ａ ｏ ｉ ｎ ｃ Ｇ０ ｄ ｔ ０ ｈｉ ｅ ｏ ｔｉ ｍ ｎ ｓ ｎ ｏ ｏ ｍ ｎ Ｃｈ ｒｏ ｉ ｎａ ０ ｒ ｐ ｎ
Ｂａ ｅ ｎ Ａｎｔｂ ｄ ａ Ｎａ ｏ Ｇｏ ｄ Ｍ ｕ ｔｌ ｙ ｒ Ｍ ｏ ｆｅ ｅ ｔ ｏ ｅ ｓｄ ｏ ｉ ｏ ｙ Ｃｏ ｔ ｎ ｌ ｉｉａ ｅ ｄｉｉ ｄ Ｅｌｃ ｒ ｄ
包涵体蛋白包被ELISA板检测抗体的流程
包涵体蛋白包被E L I S A 板检测抗体的流程集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-包涵体蛋白包被E L I S A板检测抗体的流程一、包涵体包被抗原制备：在包涵体蛋白尿素溶解后不能浓缩或者置换溶剂的情况下，可以采取直接使用包涵体尿素溶解液直接作为检测原包被ELISA板。
（1）完成包涵体的制备和洗涤流程。
（2）按照常规流程溶解使用8M尿素或者1%SKL（十二烷基肌氨酸钠）溶解包涵体。
剧烈震动后，室温静置30分钟至2小时或者4℃过夜，使其缓慢溶解。
注：每100mL细菌提取的包涵体使用2mL含8M尿素的BufferA溶解；或者每100mL细菌提取的包涵体使用2mL含1%SKL的BufferA溶解（使用前混合，1.97mlBufferA加入0.03ml20％的SKL贮存液）。
（3）抗原稀释：使用0.05MpH9.6碳酸盐包被缓冲液（CBS）4倍稀释包涵体溶解液，分装冻存-20℃冰箱，减少冻融次数。
注意必须由少到多逐渐加入CBS，边加边震荡，以免试剂浓度变化造成的蛋白沉淀。
DMSO溶解的用CBS稀释4倍。
加入1:2-5倍PBS/TE/SW液体后切胶磨碎，4度放置3-7天，最高转速4度离心取上清冻存。
二、包涵体包被抗原浓度的确定：1、稀释抗原：取出包涵体抗原，4℃融化。
在ELISA板每孔加入100μLCBS。
将100μL抗原加入ELISA板第一竖排孔中；吹打4-5次后，吸出100μL加到第二竖排孔中；吹打4-5次后，吸出100μL 加到第三竖排孔中，一次类推，最后一排吸出的100μL液体弃去。
注：每种抗原至少稀释3行，一行阳性血清检测，一行阴性血清对照，一行使用含8M尿素的BufferA做对照。
2、包被：4℃过夜或37℃温育2小时。
弃去孔内溶液，用PBST洗3次（洗涤方法：在ELISA孔中加满PBST，室温静置5分钟后弃去，反复三次）。
拍干！3、封闭：5%脱脂乳300μL，37℃温育2小时或4℃过夜。
磁珠包被抗体原理
磁珠包被抗体原理
磁珠包被抗体原理是生命科学领域中常见的技术手段，其主要作用是
用于分离和纯化不同种类的蛋白质。
该技术通过利用抗体与其特异性
墙外靶标的互相作用，使得磁珠球能够牢牢地吸附在靶标表面，从而
实现磁珠包被靶标的目的。
磁珠包被抗体原理的原理基于抗体与其靶标具有特异性相互作用。
在
实际应用中，首先需要将抗体固定在磁珠表面，形成被抗体修饰的磁
珠包，并将其与待处理的样品混合。
在样品中，如果存在与磁珠包被
抗体具有特异性的蛋白质，那么这些蛋白质就能够结合在磁珠包表面，并随后通过洗涤等步骤被纯化。
而对于不具有特异性的蛋白质，则不
会与磁珠包产生结合作用，从而最终被去除。
磁珠包被抗体原理的优势在于其实验步骤相对简单、操作灵活，同时
该技术在分离和分析蛋白质中表现出了优秀的灵敏度和准确性。
不仅
如此，磁珠包可以通过调整不同的抗体修饰实现对不同蛋白质的快速
分离和纯化，为后续的下游分析提供了重要的基础支撑。
因此，磁珠
包被抗体原理已经成为了生命科学和临床研究中不可替代的技术手段
之一。
总的来说，磁珠包被抗体的原理是通过特定的抗体与其特异性的靶标
间互相作用，在样品中实现对待处理蛋白质的分离纯化。
其应用范围广泛且操作简单，是目前生命科学研究中不可或缺的技术手段之一。
抗体包被的原理
抗体包被的原理
抗体包被是指将目标抗原与特异性抗体先进行化学或物理交联，形成抗原-抗体复合物，然后将该复合物包被固定于固相载体（如ELISA板）上的方法。
其原理是利用特异性抗体对抗原的选择性识别，将目标抗原与特异性抗体结合成复合物，然后将该复合物通过物理或化学方法固定于固相载体上，以便后续检测抗原浓度或其它相关性质。
抗体包被主要应用于免疫学和生物化学领域中，可用于ELISA、免疫印迹、流式细胞术等检测方法中。
由于抗体包被方法能够有效地固定目标抗原-抗体复合物于固相载体上，具有选择性高、稳定性强等优点，因此被广泛应用于抗原检测、生物物质分离和纯化、药物筛选等方面。
磁珠包被抗体原理
磁珠包被抗体原理1. 介绍在生物医学领域中，磁珠包被抗体原理是一种用于分离、富集和纯化特定分子的常见方法。
这种技术基于磁性珠子表面包裹有特定抗体的原理，可用于从复杂的生物样本中选择性地捕获目标分子。
2. 磁珠包被抗体的制备磁珠包被抗体的制备通常可以分为两个步骤：珠子的磁性修饰和抗体的偶联。
以下是制备磁珠包被抗体的一般步骤：2.1 珠子的磁性修饰1.选择合适的磁性珠子，通常是由四氧化三铁或其他类似材料制成的微米级珠子。
2.制备表面具有氨基、羧基或其他反应活性基团的珠子。
3.引入磁性修饰剂，如Fe3O4，使珠子具有磁性。
2.2 抗体的偶联1.选择与目标分子对应的抗体。
2.活化珠子表面的反应基团。
3.将抗体与珠子表面的反应基团进行偶联，通常通过共价键或亲和力进行。
3. 磁珠包被抗体的工作原理磁珠包被抗体的工作原理基于抗体的高度特异性和亲和力。
以下是磁珠包被抗体的工作原理的一般步骤：3.1 样本的处理1.将待分离的复杂生物样本加入到含有磁珠包被抗体的混悬液中。
2.混合反应物使得磁珠包被抗体与目标分子发生特异性结合。
3.2 磁力分离1.使用磁力将磁珠包被抗体从混悬液中分离出来，通常通过磁场的作用使得珠子快速沉降。
2.将不结合的分子洗脱，以去除非特异性结合的物质。
3.3 目标分子的纯化和富集1.在分离过程中，磁性珠子上的抗体通过特异性结合捕获目标分子。
2.分离后，磁珠包被抗体可被再次分散，从而将纯化和富集的目标分子从珠子表面洗脱。
4. 磁珠包被抗体的优势和应用磁珠包被抗体的技术具有许多优势，使其在生物医学领域广泛应用：4.1 高选择性和亲和力磁珠包被抗体通过特异性结合目标分子，具有很高的选择性和亲和力。
4.2 快速和高效磁珠包被抗体在处理样本中可达到高通量的快速和高效纯化目标分子。
4.3 可重复使用磁珠包被抗体可以通过去除结合分子和洗脱目标分子的步骤，使其可被有效地再次使用。
4.4 多样化的应用磁珠包被抗体广泛应用于蛋白质纯化、病毒和细菌富集、分子诊断、药物研发等领域。
包涵体蛋白包被ELISA板检测抗体的流程
包涵体蛋白包被E L I S A板检测抗体的流程一、包涵体包被抗原制备：在包涵体蛋白尿素溶解后不能浓缩或者置换溶剂的情况下，可以采取直接使用包涵体尿素溶解液直接作为检测原包被ELISA板。
（1）完成包涵体的制备和洗涤流程。
（2）按照常规流程溶解使用8M尿素或者1%SKL（十二烷基肌氨酸钠）溶解包涵体。
剧烈震动后，室温静置30分钟至2小时或者4℃过夜，使其缓慢溶解。
注：每100mL细菌提取的包涵体使用2mL含8M尿素的Buffer A溶解；或者每100mL细菌提取的包涵体使用2mL含1%SKL的Buffer A溶解（使用前混合，ml Buffer A加入ml 20％的SKL贮存液）。
（3）抗原稀释：使用碳酸盐包被缓冲液（CBS）4倍稀释包涵体溶解液，分装冻存-20℃冰箱，减少冻融次数。
注意必须由少到多逐渐加入CBS，边加边震荡，以免试剂浓度变化造成的蛋白沉淀。
DMSO溶解的用CBS稀释4倍。
加入1:2-5倍PBS/TE/SW液体后切胶磨碎，4度放置3-7天，最高转速4度离心取上清冻存。
二、包涵体包被抗原浓度的确定：1、稀释抗原：取出包涵体抗原，4℃融化。
在ELISA板每孔加入100μL CBS。
将100μL抗原加入ELISA板第一竖排孔中；吹打4-5次后，吸出100μL加到第二竖排孔中；吹打4-5次后，吸出100μL加到第三竖排孔中，一次类推，最后一排吸出的100μL液体弃去。
注：每种抗原至少稀释3行，一行阳性血清检测，一行阴性血清对照，一行使用含8M尿素的Buffer A做对照。
2、包被：4℃过夜或37℃温育2小时。
弃去孔内溶液，用PBST洗3次（洗涤方法：在ELISA孔中加满PBST，室温静置5分钟后弃去，反复三次）。
拍干！3、封闭：5%脱脂乳300μL，37℃温育2小时或4℃过夜。
弃去孔内溶液，用PBST洗3次，拍干！。
封闭不彻底会导致假阳性！4、稀释阳性血清：在本实验中，傅强的阳性血清和李仕超的阴性血清均做1000倍稀释。
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抗体包被
原理
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
在测定时，受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。
此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
测定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重复性好。
方法
1.双抗体夹心法测抗原
是检测抗原最常用的方法。
只要获得针对受检抗原的特异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物。
常用的组合：单克隆抗体＋多克隆抗体
单克隆抗体＋单克隆抗体
后一组合是两种单克隆抗体针对抗原上不同的相距较远的两个抗原决定簇，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。
用途：测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。
例如各种细胞因子的检测。
双抗体夹心法测抗原的方法：
捕获抗体包被→封闭（3％BSA）→待测抗原→洗涤（含0.1％Tween的PBS)→酶标单抗或多抗→洗涤→显色→检测
2.竞争法测抗原
1）抗体固相测抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。
其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。
标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，最后的显色也愈浅。
方法：抗体包被→封闭→同时加入待测抗原和酶标抗原→洗涤→酶底物→显色→ELISA reader检测
配置20uL 1mg/mL包被抗体
抗体抗原配对
胶体金的制备
时间：2015年4 月8 日地点：国声研究室温度：17℃湿度：43 实验名称：胶体金的制备
实验目的：制备胶体金溶液
实验材料：1%氯金酸、超纯水、柠檬酸三钠、电热套、磁力搅拌器、搅拌子、三角瓶
实验步骤：
1.配制1%浓度的氯金酸溶液。
（已配制好，待使用）
2.取1L烧杯加500 mL超纯水，在磁力搅拌器上加热搅拌（500℃）。
水沸腾后清洗烧杯及量筒。
时间：16：45
3.取柠檬酸三钠0.16g（每500 mL叫0.16g）溶解于4 mL纯水中。
时间：16：48
4.量取500mL超纯水，500℃加热至沸腾后，开始时间：17：00 加入1%氯金酸10mL（每500mL加10mL氯金酸），至沸腾10s后加柠檬酸三钠。
时间17：16 变色后温度、转速减半，沸腾10min后，停止加热，搅拌至冷却。
时间17：26
5.检金次日08：4。