第十章血脂及浆脂蛋白检验
脂类及其代谢—血脂及血浆脂蛋白(生物化学课件)
血脂
生物化学 B i o c h e m i s t r y
一、血脂
定义
血浆所含脂类统称血脂，包括：甘油三酯、 磷脂、胆固醇及其酯以及游离脂酸。
（一）组成与含量： 血脂含量受膳食、年龄、性别及代谢等影响，波动范围很大
正常成人空腹血脂的组成及含量
二、来源与去路：
来源：
外源性——从食物中摄取 内源性——肝、速离心法：
按脂蛋白密度高低进行分类，也分为四类： CM → VLDL → LDL → HDL
超速离心法 CM
VLDL
（一）分类
LDL
HDL
乳糜微粒 电泳分类法
-脂蛋白
前-脂蛋白
-脂蛋白
（二）组成
•血浆 •脂蛋白
•蛋白质
•（载脂蛋 白apo）
•甘油 三酯
(TG)
•磷脂 (PL)
•胆固醇 •(Ch)
•酯 •(ChE)
不同的脂蛋白仅有含量上的差异而无本质上的不同。
（三）血浆脂蛋白的结构
血浆脂蛋白颗粒通常呈球形。
其中所含的载脂蛋白多数具有双极性 -螺旋。
各种脂蛋白的结构十分类似，其颗粒外 层为亲水的载脂蛋白和磷脂的极性部分 组成，载脂蛋白和磷脂的疏水部分则伸 入到内部，而疏水的甘油三酯和胆固醇 酯则被包裹在内部。
血浆脂蛋白的分类与组成修改
生物化学 B i o c h e m i s t r y
血脂与血浆中的蛋白质结合，以脂蛋白形式而运输
（一）分类
1.电泳法：根据电泳迁移率的不同进行分类，可分为四类：
乳糜微粒 → -脂蛋白 → 前-脂蛋白 → -脂蛋白
CM 前
♁
血脂与血浆中的蛋白质结合，以脂蛋白形式而运输
第十章 血脂及血浆脂蛋白检验
pathway） （LDL receptor pathway）
LDL受体途径：LDL或其他含ApoB100、 LDL受体途径：LDL或其他含ApoB100、 受体途径 或其他含ApoB100 的脂蛋白如VLDL VLDL、 VLDL均可与 均可与LDL E的脂蛋白如VLDL、β-VLDL均可与LDL 受体结合，内吞入细胞使其获得脂类， 受体结合，内吞入细胞使其获得脂类， 主要是胆固醇，这种代谢过程称为LDL 主要是胆固醇，这种代谢过程称为LDL 受体途径。该途径依赖于LDL LDL受体介导 受体途径。该途径依赖于LDL受体介导 的细胞膜吞饮作用完成。 的细胞膜吞饮作用完成。 若胞内游离胆固醇浓度升高，则： 若胞内游离胆固醇浓度升高， 抑制HMGCoA还原酶， HMGCoA还原酶 ①抑制HMGCoA还原酶，以减少自身的 胆固醇合成； 胆固醇合成； 抑制LDL受体基因的表达，减少LDL LDL受体基因的表达 ②抑制LDL受体基因的表达，减少LDL 受体的合成，从而减少LDL的摄取； LDL的摄取 受体的合成，从而减少LDL的摄取； 激活内质网ACAT ACAT， ③激活内质网ACAT，使游离胆固醇在 胞质内酯化成胆固醇酯贮存， 胞质内酯化成胆固醇酯贮存，以供细 胞的需要； 胞的需要；
二、极低密度脂蛋白受体
结构与LDL受体类似。 LDL受体类似 ▲结构与LDL受体类似。 仅对含ApoE 的脂蛋白VLDL ApoE的脂蛋白 VLDL、 ▲ 仅对含 ApoE 的脂蛋白 VLDL 、 VLDL残粒有高亲和性结合， VLDL 残粒有高亲和性结合，对 残粒有高亲和性结合 LDL为显著的低亲和性。 LDL为显著的低亲和性。 为显著的低亲和性 在肝内几乎未发现， ▲ 在肝内几乎未发现 ， 广泛分 布在代谢活跃的心肌，骨骼肌、 布在代谢活跃的心肌 ， 骨骼肌 、 脂肪组织等细胞. 脂肪组织等细胞. ▲VLDL受体不受细胞内胆固醇 VLDL 受体不受细胞内胆固醇 负反馈抑制
生化检验 第十章 心血管疾病相关
急性心肌梗死：总CK＞200U／L， ％CK–MB在4％～25%
CK–BB或巨CK存在：总CK＞200U／L， ％CK–MB＞25％
CK作为AMI标志物优点：
①快速、经济、有效，能准确诊断急性心肌梗死，是当 今应 用最广的心肌损伤标志物。
②其浓度和急性心肌梗死面积有一定的相关，可大致判 断梗死范围。
• 在胸痛发作24h后测定LD同工酶，作为CK–MB补充 • LD出现较迟，如果CK–MB或cTn已有阳性结果，AMI诊断明确，
就没有必要再检测LD和LD同工酶。
有人认为急性心肌梗死时不仅LD1升高，往往还有LD2相 对降低，故LD1/LD2比值（>0.76）更敏感和特异。LD1 ／LD2的敏感性为75%-86%，特异性为85%-0%。
0.5μg/L
1.5～3.1μg/L
3～8 3～8 8～18 8～18 3～6 3～6
10～36 9～30 24～72 24～72 10～24 14～20
72～96 5～25 48～72 5～20 6～10d 3～5 6～10d 5～10 5～10d 30～200 7～14d 20～50
三、心力衰竭生物化学检测指标
(1)优点 1）敏感度高于CK，不仅能检测出急性心肌梗死患者， 而且能检测微小损伤，如不稳定性心绞痛、心肌炎。 2）检测特异性高于CK。 3）有较长的窗口期，有利于诊断迟到的急性心肌梗死和 不稳定性心绞痛、心肌炎的一过性损伤。 4）双峰的出现，易于判断再灌注成功与否。 5）肌钙蛋白血中浓度和心肌损伤范围的较好的相关性， 可用于判断病情轻重，指导正确治疗。
预测因素
年龄 CHF病史 急性心肌梗死病史 湿性罗音 肺尖部血管增粗
水肿 颈静脉怒张 BNP＞100pg/ ml
血脂及血浆脂蛋白检验ppt
4.标本处理
标本应尽快送往实验室，室温下放置30 - 45 min 后离心，分离血清。
-
35
血清或血浆外观 （血清/浆静置试验）
-
36
血清（浆）静置试验
将患者空腹12h后采集静脉血分离出血清置4℃冰箱中过夜，然后观 察其分层现象及清澈度。
-
6
（一）血浆脂蛋白的分类
超速离心法：
• 电泳法:
乳糜微粒 CM
－－－－－－－－－－ 乳糜微粒（CM）到 电
密 度
极低密度脂蛋白 VLDL
β脂蛋白
快泳 速
从 中间密度脂蛋白 IDL
度
低 低密度脂蛋白 LDL 到 脂蛋白(a) Lp(a) 高 高密度脂蛋白 HDL
前β脂蛋白
由
慢
α-脂蛋白
-
7
血
浆
CM↑↑
TC N/↑,TG↑↑ （I型）
TG↑↑
VLDL↑↑
TC N/ ↑,TG ↑↑ （IV型）
TC↑↑,TG↑↑ （ IIb型/III型） CM及VLDL↑↑
TC↑↑,TG↑↑ （III型/V型）
TC、TG均正 （正常人） 常TC↑↑,TG正常 （IIa型）
TC↑↑,TG↑ （IIb型）
-
37
-
ApoB100缺陷 不清楚
ApoE异常
不清楚
临床特征
表型分类
以胆固醇升高为主，可伴轻度甘油三酯升 高，LDL明显增加，可有肌腱黄色瘤，多有 冠心病和高脂血症家族史。
同上
胆固醇和甘油三酯均升高，VLDL和LDL都增 加，无黄色瘤，家族成员中有不同型高脂 蛋白血症，有冠心病家族史。
实验诊断学课件：血脂及脂蛋白检测
【参考值】
0.56～1.70 以下 合适
1.70 以上
升高
【临床意义】
降低：(1)营养不良、吸收不良综合征。 (2)甲亢。 (3)先天性α-β脂蛋白血症。
升高：(1)动脉粥样硬化、肾病综合征、甲状 腺功能减退、糖尿病。
(2)原发性甘油三酯增多症、糖原累积症。
(3)妊娠后期。
高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定
二、血浆脂蛋白（lipoprotein，LP）
1、定义：血浆脂质与蛋白质结合所组成 的一类大分子复合物，能溶于 水，运输于血。
2、组成： 蛋白质（载脂蛋白） 甘油三酯 磷脂 脂质 胆固醇 胆固醇酯
血浆脂蛋白结构图
3、功能 （1）运输脂类 （2）参与脂类代谢 （3）参与某些疾病的过程
血浆脂蛋白的分类
激活LPL
ApoC III VLDL 肝
抑制肝脏
摄取VLDL
ApoE VLDL,CM,HDL 肝
被CM受体识别
第三节 血浆脂蛋白的代谢与功能 1、CM （1）代谢 （2）生理功能：
转运外源食物中甘油三酯到全身各组织， 氧化分解供能或储存。
2、VLDL （1）代谢 （2）生理功能：
运输内源性的甘油三酯，即将体内多 余糖转变生成的甘油三酯运到肝外脂肪 组织中储存或被肝外组织利用。
3.临床因素，如①疾病继发（内分泌或代谢性 疾病、肾脏疾病、肝胆疾病及其他）；②药物 诱导（抗高血压药，免疫抑制剂及雌激素等）。 4.标本收集与处理，如禁食状态、血液浓缩、 抗凝剂与防腐剂、毛细血管与静脉血、标本贮 存等。
致动脉粥样硬化性脂蛋白谱(ALP)：致动脉粥样 硬 化 性 脂 蛋 白 谱 ( atherogenic lipoprotein profile，ALP)是指有一定遗传基础的几种代谢 异常的综合。主要表现为致AS作用很强的颗粒 小而密的低密度脂蛋白(sLDL)增多、高甘油三 酯(TG)血症及HDL水平低。常伴有以胰岛素抵 抗为基础的代谢综合征。德国PROCAM研究的 初步结果表明，高甘油三酯结合低HDL—C代表 了最不良的脂蛋白类型，它会大大增加发生冠心 病的危险。
血清浆脂类及脂蛋白测定ppt课件
31
注意事项：
标本： 标本要求是餐后12-14h的空腹血液
——（血清TG易受饮食影响）。 标本存放不宜超过3天
——（避免TG水解而释放出甘油）。 试剂：
酶试剂应4℃避光保存，出现红色不 可再用 。
32
实验53：
免疫透射比浊法测定血清载 脂蛋白A1和载脂蛋白B
33
原理：
ApoA1 ApoA1抗体 ApoB ApoB抗体
20
21
实验49：
磷酸甘油氧化法测定血清甘 油三酯（TG）
22
甘油三酯(TG)的结构：
23
甘油三酯测定的方法：
化学法 酶法
24
化学法
（KOH） （过碘酸）
抽提 甘油 甲醛
皂化
氧化
显色
25
甘油 三酯
甘油
甲醛 变色酸
紫红色
26
☆酶法（磷酸甘油氧; 脂肪酸
GK + ATP
抗原 + 抗体
抗原抗体复合物
比色
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临床意义：
ApoA1 与高脂血症、冠心病呈负相关； ApoB 与高脂血症、冠心病呈正相关。
35
血清（浆）脂类及脂 蛋白测定
——
1
血脂的组成：
甘油三酯(少量甘油二酯和甘油一酯) 磷脂 胆固醇和胆固醇酯 非酯化脂肪酸（游离脂肪酸）等
2
血脂的运输形式—脂蛋白
1、定义： 指血浆脂质与载脂蛋白组成
的可溶性的生物大分子。
3
2、结构：
脂蛋白 微粒
表面 核心
磷脂 胆固醇 载脂蛋白
甘油三酯 胆固醇酯
4
5
9
实验原理： 提取HDL
测定胆固醇
血脂、脂蛋白和载脂蛋白的检测ppt课件
〔3〕临床要素，如①疾病诱导(内分泌或代谢 性疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、储存性疾病、 急性或暂时性疾病等)，②药物诱导〔抗高血 压药、免疫抑制剂和性激素等〕；
〔4〕标本搜集与处置，如禁食形状、血液浓缩、 抗凝剂与防腐剂、毛细血管与静脉血标本储 存等。
减少血脂和脂蛋白测定分析前要素对结果 影响的方法
CM主要功能是转运外源性TG及Chol。 VLDL主要功能是转运内源性TG。 LDL主要功能是将肝合成的内源性Chol
转运至肝外组织。 HDL主要功能是参与Chol由肝外组织转
运至肝的逆向转运。
血浆载脂蛋白的分类
apo A ： apo AI、 apo AⅡ、 apo A Ⅲ apoB： apoB100、 apoB48 apo C： apo CI、 CⅡ、CⅢ apoD： apoE： apo EI、 EⅡ、EⅢ
调理脂蛋白代谢关键酶
如脂蛋白脂肪酶(LPL) 卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT) 肝脂肪酶(HL)
高脂血症
高脂血症是指血浆中Chol和/或TG程度升 高。由于血脂在血中以脂蛋白方式运输，实 践上高脂血症也可以为是高脂蛋白血症。血 浆中HDL-C降低也是一种血脂代谢紊乱。故 有人建议采用脂质异常血症(dyslipidemia)一词 全面准确反映血脂代谢紊乱形状。
血脂及血浆脂蛋白检验
※※※※※※※※※※※※※
第三节 血清三脂酰甘油的测定
（ 脂二肪）组、 织血 （Ⅱ浆 皮b脂 下型蛋 ，白 腹的 腔组大VLL成 网DD膜LL，脂肠类系和膜载，脂TT内蛋CG脏↑白↑↑周组围成组织）、B血C↑浆CⅢⅡ↑ ↑
少有混浊
深β带 深前β带
（3）参考方法的研究 老年所提出了HLPC法为TC的参考方法其各项技术指标达到了 ALBK法的要求
脂蛋白的结构
血浆脂蛋白的结构
§9.1 脂类的概述
血浆脂蛋白的组成特点
密度
脂 组类
蛋 成白
质
功能
CM
＜0.96
含TG最多， 80~95% 最少, 2%
从小肠转运外 源性甘油三酯 至肝脏及肝外 组织
VLDL
0.96~1.006
含TG 50~70% 10%
LDL
HDL
1.006~1.063
1.063~1.210
α脂蛋白相当于HDL、前β脂蛋白相当于VLDL、 β脂 蛋相当于LDL
（二）、血浆脂蛋白的组成 脂类和载脂蛋 白组成
（1）脂类：甘油三酯、磷脂、胆固醇和胆固醇 酯，其含量和比例在各类脂蛋白中差别极大。
（2）载脂蛋白（apo）：是指血浆脂蛋白中蛋白 质成分，分为apoA、apoB、apoC、apoD、apoE， 其主要功能是结合和转运脂类，此外不同载脂蛋 白还有其特殊功能。
脂蛋白血症的分型及特征
型别*
增加的脂 蛋白
血浆脂质
血浆载脂蛋白 血浆外观 电 泳
原因
从（奶肝1油）脏 上脂转层蛋运, 白下胆Ⅰ的层固型氧混醇化浊至各组Co织xMLDL的形成T是CT正炎G症常↑↑分或↑ 子↑强有力的B诱4C导8↓物↑↑A↑
奶油上层 下层透明
2021临床医学 10血脂血浆脂蛋白检验
电泳法:
CM preβ-LP
β-LP
α-LP
CM β-LP 前β-LP α-LP
＋
CM LDL VLDL 第四页，共一百零二页。 HDL
第五页，共一百零二页。
第六页，共一百零二页。
CM
• 后无CM， • 颗粒最大，甘油三酯最多，密度最低。 • 含CM的血浆浑浊，过夜后漂到上层〔奶油状〕。 • 主要含ApoAI和ApoC、 ApoB48
VLDL,CM,HDL
肝
被CM受体识别
CM,VLDL,LDL
？
激活LPL
HDL
肝
溶解和转运脂质
Lp（a）
肝
第十八页，共一百零二页。
抑制纤维蛋白溶解酶活性
⑴ apoA： 由肝和小肠合成 目前发现有四种亚型 即apoAⅠ，apoAⅡ，apoAⅣ，apoAⅤ。 apoAⅠ和apoAⅡ主要存在于HDL中 ApoAⅠ可以激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶〔LCAT〕 的活性
第九页，共一百零二页。
LDL
• 胆固醇含量最多的脂蛋白，血浆中70%的胆固醇位于 LDL中 • LDL颗粒小，血浆不形成浑浊。 • 几乎全为ApoB100，仅有微量ApoC和ApoE
第十页，共一百零二页。
LDL
• 胆固醇含量最多的脂蛋白，血浆中70%的胆固醇位于 LDL中 • LDL颗粒小，血浆不形成浑浊。 • 几乎全为ApoB100，仅有微量ApoC和ApoE
• 是冠心病的危险因素
• 增高还可见于肾病、妊娠、糖尿病等
CM β-LP
前β-LP
α-LP
＋
CM LDL 第十三页，共一百零二页。 VLDL HDL
二 血浆脂蛋白组成与结构
〔一〕血浆脂蛋白的结构 1 化学组成 相同点：蛋白质脂类〔TG、
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第十章血脂及血浆脂蛋白检验第一节概述一、血脂和血浆脂蛋白与生化内容重复自学二、脂蛋白代谢紊乱（一）高脂蛋白血症血脂含量超过正常称为高脂血症，由于血脂均以血浆脂蛋白的形式存在，故也称为高脂蛋白血症。
按发病原因分为两大类。
1.按表型分类以Fredrickson（1967）分类法为基础，经WHO（1970）修订的分类系统，根据血清TC、TG、外观和脂蛋白电泳图谱，将其分为6型。
（1）Ⅰ型高脂蛋白血症又称高乳糜微粒血症。
是一种常染色体隐性遗传病。
由于LPL缺损或LPL活化因子（ApoCⅡ）缺损所致。
婴儿期即可发生，但罕见。
其生化检查特征：①4℃冷置试验，血清上层为奶油状，下层清亮。
②血清TG↑↑，达11mmol/L以上，血清TC正常或轻度↑。
③血清LPL活性↓。
④血清脂蛋白电泳，CM↑↑。
（2）Ⅱa高脂蛋白血症又称高β-脂蛋白血症或高胆固醇血症。
属常染色体显性遗传，有明显的家族史。
病因LPL受体缺损，杂合子型发生频率为1/500，纯合子型发生频率为1/100 000。
其生化检查特征：①4℃冷置试验，血清外观清亮透明。
②血清TC↑↑，＞15.6mmol/L尤其是LDL-C↑↑，TG正常。
③血清脂蛋白电泳，β-LP↑↑。
临床表现，中青年常伴有冠状动脉硬化，结局为心肌梗塞。
（3）Ⅱb型高脂蛋白血症在Ⅱa型基础上伴有VLDL（高LDL+VLDL血症），病因不明。
其生化检查特征：①4℃冷置试验，血清外观清亮或微混。
②血清TC↑，TG↑。
③血清脂蛋白电泳，β-LP↑，preβ-LP↑。
（4）Ⅲ型高脂蛋白血症又称宽β-脂蛋白血症。
属常染色体显性遗传病，发病率1/10 000，病因，ApoE异常，与相应受体结合率↓。
其生化检查特征：①4℃冷置试验，血清外观混浊，后形成蜡样黄色薄膜。
②血清TC↑，TG↑。
③血清脂蛋白电泳，β-LP↑，preβ-LP↑，IDL↑。
融合形成宽β区带。
临床表现，早期易发生动脉粥样硬化和冠心病。
（5）Ⅳ型高脂蛋白血症又称高前β-脂蛋白血症或家族性高甘油三脂血症。
属常染色体显性遗传病，较常见，我国原发性高脂蛋白血症中一半属于此型。
病因，ApoA2异常。
其生化检查特征：①4℃冷置试验，血清外观混浊。
②血清TG↑↑，TC正常或稍↑。
③血清脂蛋白电泳，preβ-LP↑。
临床表现，多见于中年人易发生冠心病。
（6）Ⅴ型高脂蛋白血症属常染色体显性遗传病，病因不详，可能由几种遗传缺陷所致，较罕见。
生化检查特征：①4℃冷置试验，血清上层为奶油状，下层混浊。
②血清TG↑↑，TC↑。
③血清脂蛋白电泳，CM↑↑，preβ-LP↑。
2.按是否继发于全身性疾病分类分为原发性和继发性高脂血症。
常继发于糖尿病、肝病、肾病、肥胖以及过量饮酒，成人发病率为3%～5%。
3.高脂血症的基因分型法一部分高脂血症患者存在单一或多个遗传基因的缺陷，具有明显的家族聚集性，有明显的遗传倾向。
（二）低脂蛋白血症主要有四种类型1. 低LDL血症是一种常染色体显性遗传病，病因ApoB100低下，血浆LDL 减少，TC↓。
2. 无LDL血症罕见的常染色体隐性遗传病，病因ApoB100、B48缺损，血浆中无LDL，TC↓↓。
3. 低HDL血症病因不详，血清TG↑，动脉粥样硬化、冠心病的发病率高。
4. 无HDL血症（Tangier病）罕见的常染色体隐性遗传病，ApoAⅠ、AⅡ缺损，血浆TC↓，HDL-C↓。
第二节血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定血脂测定方法很多，目前临床实验室基本检验项目有：血清外观分析，TC，TG，HDL-C，LDL-C测定。
进一步可做HDL亚组分，IDL，Apo（如ApoAⅠ、ApoB100），Lp（a）及脂蛋白电泳，LPL，LCAT测定，为保证分析结果的可靠性，标本的采集应在餐后12h以上。
一、血清外观分析（血清冷置试验）二、血清总胆固醇测定胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重要的生理功能，如合成类固醇激素，维生素D3胆汁酸，并构成细胞膜成分，TC包括FC（1/3）和CE（2/3），胆固醇与动脉粥样硬化有密切关系，故胆固醇测定是最常用的实验室检测项目之一。
TC测定方法很多，约200多种，分为化学测定法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法（决定性方法）。
（一）.化学测定法主要有两类1. Liberman-Burchard反应简称L-B反应，胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成3.5-胆烷二烯阳离子，然后被醋酐，浓硫酸氧化生成绿色的胆烷六烯磺酸。
呈色稳定性差。
2. Zak反应胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成3.5-胆烷二烯阳离子，然后在Fe3+存在下氧化生成紫红色胆烷四烯阳离子，灵敏度较L-B反应高7倍，且呈色稳定性好，但试剂腐蚀性极大，不能用于自动化分析。
（二）.酶法胆固醇酯CEH胆固醇＋脂肪酸胆固醇＋O2ChOD胆烷-4-烯-3酮＋H2O2H2O2＋4AAP ＋酚POD红色亚胺醌＋H2O Trinder反应试剂中除上述三种酶外，还有胆酸钠和表面活性剂及稳定剂，胆酸钠用于激活CEH，表面活性剂促进胆固醇从脂蛋白中释放。
酶法操作简便，快速，试剂无腐蚀性，适合于自动化分析，但也存在有一些不足，CEH对胆固醇水解不完全，表面活性剂影响CEH活性，黄疸血清中过高的胆红素可还原H2O2使结果偏低。
【正常参考值】3.10～5.70mmol/L【临床意义】血清TC含量受年龄、性别、饮食和运动等因素的影响。
（1）20岁以上随年龄↑而↑，70岁以后则有下降趋势。
（2）20～40岁阶段男性高于女性，但女性绝经后则高于男性。
（3）城市人群高于农村人群，与饮食和运动有关。
（4）脑力劳动者高于体力劳动者。
病理性高胆固醇血症原发性高胆固醇血症，糖尿病、胆道阻塞、肾病综合症、甲状腺功能减退。
病理性低胆固醇血症严重贫血、甲亢、营养不良。
三、血清甘油三脂测定TG是有一分子甘油与三分子脂肪酸组成的化合物，主要存在于VLDL和CM中临床化学中往往以测定甘油代表TG的含量。
TG的测定方法很多，如气相色谱法、高效液相色谱法、红外分光光度法。
但上述方法需特殊的仪器设备和技术，故一般只用于研究工作中。
临床实验室主要用化学法和酶法。
（一）化学法各方法的基本步骤可归纳为四步1.提取：甘油三脂的提取采用合适的溶剂，使脂蛋白变性将TG提取，同时去除干扰物质（磷脂、游离甘油、葡萄糖等）常用方法有：（1）异丙醇抽提，沸石合剂（沸石、高岭土）吸附。
（2）异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂。
（3）正壬烷、异丙醇、稀硫酸分溶抽提，免去吸附磷脂的操作，后用价廉的正庚烷代替正壬烷。
应用较广。
2.皂化：甘油三脂的水解一般都采用KOH乙醇或异丙醇溶液，60℃，5～15min可使TG完全水解。
3.氧化：甘油的氧化最常用的氧化剂是HIO4，甘油在酸性条件下被氧化成甲醛、甲酸。
反应受α-磷酸甘油、葡萄糖、丝氨酸的干扰，故抽提时应尽量除去此类物质的干扰。
4.显色：显色测定甲醛。
常用方法有：（1）甲醛与变色酸（4.5-二羟-2.7-萘二磺酸）在硫酸溶液中加热生成紫红色化合物。
（570nm）（2）甲醛与乙酰丙酮在氨的存在下缩合成黄色的 3.5-二乙酰-1.4-二氢-2.6-二甲基吡啶。
（420nm）（二）酶法常用的有：1.磷酸甘油氧化酶法（GK-GPOD-POD法）使用最普遍TG ＋H2O LPL甘油＋FA甘油＋ATP GK3-磷酸甘油＋ADP3-磷酸甘油＋O2GPOD磷酸二羟丙酮＋H2O2H2O2＋4-AAP ＋酚POD红色亚胺醌＋H2O试剂较稳定，灵敏度高，线性范围宽，胆红素、维生素C可消耗H2O2使结果偏低。
2.乳酸脱氢酶法（GK-PK-LDH 法）TG ＋H2O LPL甘油＋FA甘油＋ATP GPOD3-磷酸甘油＋ADPADP ＋磷酸烯醇式丙酮酸PKATP ＋丙酮酸丙酮酸＋NADH＋H+LDH乳酸＋NAD+3.甘油氧化酶法第一步消除血清中原有的甘油：游离甘油＋O2GlyOD甘油醛＋H2O2H2O2＋EMAE POD无色物质EMAE称N-乙基-N-（3-甲基）-N-乙酰乙二胺。
是一种还原剂，灵敏度比酚高。
第二步测定甘油三脂水解释放的甘油：TG ＋H2O LPL甘油＋FA甘油＋O2GlyOD甘油醛＋H2O2H2O2＋4-AAP ＋EMAE POD有色化合物【正常参考值】0.56～1.70mmol/L【临床意义】血清TG一般随年龄增长而升高，体重超标者往往偏高。
1. 病理性增高原发性高脂蛋白血症、肥胖症、糖尿病、肾病综合症、脂肪肝、妊娠后期。
2. 病理性降低甲亢、肾上腺皮质功能减退、严重肝功能损伤。
四、血清高密度脂蛋白胆固醇测定测定步骤包括①HDL的分离；②测定HDL中胆固醇。
HDL的分离方法有：超速离心法、凝胶过滤法、免疫化学法、电泳法、沉淀法。
临床实验室常用沉淀法。
沉淀剂一般为二价阴离子和多价阴离子。
如：肝素-Mg2+、硫酸葡聚糖- Mg2+、磷钨酸- Mg2+、聚乙二醇（PEG）等。
如：磷钨酸- Mg2+选择性地沉淀血清中的LDL和VLDL，经离心上清液中保留HDL，然后用酶法测定上清液中的胆固醇含量，即代表HDL中的胆固醇。
【正常参考值】男 1.28±0.33mmol/L女1.37±0.33mmol/L【临床意义】HDL-C与冠心病发病呈负相关，HDL-C低于0.9mmol/L是冠心病危险因素。
五、血清高密度脂蛋白亚组分胆固醇测定HDL有三个亚类（HDL1、HDL2、HDL3）最近的研究工作表明，HDL2亚类与冠心病危险度的相关程度比总HDL-C更密切。
HDL2 d = 1.063～1.125g/ml HDL3 d = 1.125～1.210g/ml脂类60% 蛋白质40% 脂类45% 蛋白质55%高密度脂蛋白亚组分的分析方法有超速离心法、柱层析法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、多价阴离子分级沉淀法。
其中多价阴离子分级沉淀法具有快速、经济、简便更为实用，是目前临床实验室最常用的方法。
常用的沉淀剂有硫酸葡聚糖- Mg2+、聚乙二醇（PEG）。
原理：用PEG做沉淀剂，以不同浓度的PEG在不同pH条件下分别将VLDL 和LDL（沉淀剂Ⅰ95g/L PEG，Ph6.5）HDL2（沉淀剂Ⅱ170g/L PEG，Ph7.5）沉淀，上清液中只含有HDL（沉淀剂Ⅰ）和HDL3（沉淀剂Ⅱ），然后用酶法测定HDL-C和HDL3-C，并以HDL-C减去HDL3-C的差即为HDL2-C的含量。
【正常参考值】HDL2-C 男0.53±0.17mmol/L女0.62±0.22mmol/LHDL3-C 男0.75±0.17mmol/L女0.75±0.16mmol/L及B测定六、血清载脂蛋白AⅠ脂蛋白中的蛋白质部分称为载脂蛋白（apolipoprotein，Apo），可分为A、B、C、D、E、F、G、H八类，其中ApoA，B，C还有亚类。