2013实验四细菌鞭毛观察法及细菌运动性观察 (2)
实验四微生物菌落的观察和细菌的运动性观察21页PPT
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26、我们像鹰一样，生来就是自由的 ，但是 为了生 存，我 们不得 不为自 己编织 一个笼 子，然 后把自 己关在 里面。 ——博 莱索
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27、法律如果不讲道理，即使延续时 间再长 ，也还 是没有 制约力 的。— —爱·科 克
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28、好法律是由坏风俗创造出来的。 ——马 克罗维 乌斯
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29、在一切能够接受法律支配的人类 的状态 中，哪 里没有 法律， 那里就 没有自 由。— —洛克
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30、风俗可以造就法律，也可以废除 法律。 ——塞·约翰逊
动性观察
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
实验四 鞭毛染色法及活细菌活动性的观察
鞭毛染色法及活细菌活动性的观察
一、实验目的及要求
1、了解细菌鞭毛染色的原理，掌握鞭毛染色 的方法； 2、学习用压滴法和悬滴法观察细菌的运动性。
二、实验原理
细菌的鞭毛很纤细，直径一般为0.1-0.2μm， 只有用电子显微镜才能观察到。但是，如采用 特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看 到它。 鞭毛染色的基本原理是：即在染色前先用媒染 剂处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗， 然后再进行染色。 常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等 配制而成。
四、实验方法
（一）鞭毛染色（硝酸银染色法）
1.清洗玻片：选择光滑无裂痕的玻片，置洗衣粉过滤液中（洗 衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒），煮沸20min。取 出用清水冲洗，沥干水后，置95%乙醇中浸泡，用时取出在 火焰上烧去酒精。
2.菌液的制备：菌龄较老的细菌容易失落鞭毛，所以在染色前 应将待染细菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培养基斜面上连续移 接3-5代，以增强细菌的运动力。最后一代菌种放恒温箱中 培养12-16h。然后，用接种环挑取斜面与冷凝水交接处的菌 液数环，移至盛有1-2mL无菌水的试管中，使菌液呈轻度混 浊。将该试管放在37℃恒温箱中静置10min（放置时间不宜 太长，否则鞭毛会脱落），让幼龄菌的鞭毛松展开。
3.制片：吸取少量菌液滴在洁净玻片的一端，立即将玻片倾 斜，使菌液缓慢地流向另一端，用吸水纸吸去多余的菌液。 涂片放空气中自然干燥。 4.染色： ①滴加A液，染3-5min； ②用蒸馏水充分洗净 A 液； ③用B液冲去残水，再加 B 液于玻片上覆盖染色 数秒至1min，必要时在酒精灯微火加热直至显 褐色，立即用蒸馏水洗，自然干燥。 5.镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜 检查。结果：菌体呈深褐色， 鞭毛呈浅褐色。
细菌鞭毛染色及运动性观察
细菌鞭毛染色及运动性观察摘要：实验包括用压滴法制片对细菌的运动性观察；用硝酸银染色法对细菌鞭毛进行染色及观察。
学习用压滴法观察细菌的运动性，掌握鞭毛染色法，观察细菌鞭毛的形态特征关键词：压滴法运动性硝酸银染色法鞭毛前言：鞭毛是细菌的纤细丝状运动“器官”。
鞭毛的有无，数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
它是原核生物实现其趋性的最有效方式，具鞭毛的细菌在液体中借助鞭毛的旋转，使菌体能定向的泳动。
鞭毛的直径一般20—30nm，只有用电镜才能直接观察到。
若用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂（如单宁酸或明矾钾）处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用适合的方法进行染色。
1材料和方法1.1材料1.1.1菌种枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌1.1.2 溶液和试剂无菌水稀释美兰95%乙醇硝酸银鞭毛染液香柏油二甲苯1.1.3 仪器和其他用品普通光学显微镜擦镜纸载玻片酒精灯双层瓶接种环滴管试管夹1.2方法1.2.1压滴法（1）制片：取一个干净的载玻片，中央滴加一滴无菌水，无菌条件下取适量菌种进行涂片。
加一滴稀释美兰与之混合均匀，将盖玻片一边与菌液接触，慢慢放下盖玻片。
（2）镜检：迅速用油镜镜检。
1.2.2鞭毛染色（1）载玻片的准备：将干净的载玻片置于95 ％乙醇中，用时取出在火焰上烧去酒精及可能残留的油迹。
（2）制片：在载玻片的一端滴一滴蒸馏水,用接种环挑取少许备用的菌种（注意不要挑上培养基）,在载玻片的水滴中轻沾几下。
将载玻片稍倾斜,使菌液随水滴缓慢流到另一端,然后平放在空气中自然干燥。
（3）染色：涂片干燥后滴加A液染5分钟,用蒸馏水冲洗,用B液冲去残水。
洗净A液滴加B液覆盖1min （其间可将玻片在酒精灯上稍加热）然后用蒸馏水冲洗,自然干燥。
（4）镜检：油镜镜检。
2结果与分析2.1 实验结果压滴法观察细菌运动性时可以看到菌体不规则快速运动，有些为转动。
鞭毛染色的两个片子油镜镜检时，找到一处菌体聚集的地方。
实验四_细菌的鞭毛染色
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
鞭毛的结构及其运动机制
基体
L环
P环
S环 M环ຫໍສະໝຸດ 鞭毛钩 鞭毛丝观察和判断细菌鞭毛的方法 电子显微镜直接观察
鞭毛长度：15～20μm；直径：0.01～0.02μm
光学显微镜下观察：鞭毛染色和暗视野显微镜
根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态
实验要求和步骤
细菌的鞭毛染色实验要求了解细菌鞭毛染色的应用鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义单端鞭毛周生鞭毛鞭毛的结构及其运动机制基体鞭毛钩鞭毛丝观察和判断细菌鞭毛的方法电子显微镜直接观察鞭毛长度
细菌的鞭毛染色
实验要求
• 掌握细菌鞭毛染色的一般过程 • 了解细菌鞭毛染色的应用
单端鞭毛
端生丛毛
两 端 生 鞭 毛 周生鞭毛
细菌运动性的观察2
三、实验器材 1、菌种 培养24~36h的枯草芽孢杆菌菌悬液。 2、仪器或其他用具 载玻片、盖玻片、滴管、显微镜、 擦镜纸。
四、实验步骤 1、制片 用滴管取菌悬液一小滴，置于干净的载玻片中央， 以倾斜法加上盖玻片（勿使产生气泡） 2、镜检 将载玻片置显微镜下，用低倍镜、高倍镜观察细菌 运动的情况。
实验三 细菌运动性的观察
一、目的要求 1、学习水浸片的制作方法。 2、观察细菌的运动性。
二、基本原理 具鞭毛的细菌在液体中借助鞭毛的旋转，使菌体能定向 的泳动。幼龄菌运动活泼，老龄菌运动性差或失去鞭毛不能 运动。观察细菌的运动性可采用水浸片法。在显微镜下观察 时，应减弱光照强度，并注意区分是细菌的真运动，还是因 液体流动引起细菌随水流而动，或呈现无规则、原位颤动的 布朗运动
五、实验察细菌运动时，为何应减弱光线 （2） 细菌的运动与布朗运动有何区别
实验三__鞭毛染色法及活细菌运动性的观察
三、实验器材
1. 活材料：培养 活材料：培养12-16h小时的普通变形杆菌）。 小时的普通变形杆菌）。 小时的普通变形杆菌 2. 标本片：单鞭毛（绿脓杆菌），周鞭毛（伤寒 标本片：单鞭毛（绿脓杆菌），周鞭毛（ ），周鞭毛 杆菌）） 杆菌）） 3. 试剂：生理盐水、香柏油、二甲苯。 试剂：生理盐水、香柏油、二甲苯。 4. 器材：凹载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、吸 器材：凹载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、 水纸、接种环，显微镜等。 水纸、接种环，显微镜等
五、实验作业： 实验作业：
1. 绘出鞭毛菌（绿脓和伤寒杆菌）的形态图 绘出鞭毛菌（绿脓和伤寒杆菌）的形态图. 2. 用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌菌是否具 有鞭毛，要注意哪些环节？ 有鞭毛，要注意哪些环节？ 3. 悬滴法中，为什么加的菌液不能大多？如 悬滴法中，为什么加的菌液不能大多？ 果发现显微镜视野内大量细菌向一个方向 流动，你认为是什么原因造成的？ 流动，你认为是什么原因造成的？
A染液（媒染剂）染色4-6分钟→蒸馏水洗→ 再 染液（媒染剂）染色 分钟→ 染液 分钟 蒸馏水洗→ 染液（ 用B染液（硝酸银）冲洗残水→ 然后使 液充满 染液 硝酸银）冲洗残水→ 然后使B液充满 载片→ 酒精灯加热至冒气（微热） 载片→ 酒精灯加热至冒气（微热），30-60秒 秒 加热时应随时补充蒸发掉的染料， （ 加热时应随时补充蒸发掉的染料 ， 不可使玻 片出现干涸区） 蒸馏水洗、自然干燥→ 镜检. 片出现干涸区）→蒸馏水洗、自然干燥→ 镜检
下周实验
四大类微生物菌落及个体形态观察
本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净！ 请确保油镜头擦拭干净！ 请第三组同学留下值日
注意事项
①取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。 取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。 取菌后的接种环在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可， ②取菌后的接种环在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可， 不要用力太猛，更不能用接种环大幅度涂开； 不要用力太猛，更不能用接种环大幅度涂开；否则鞭毛 易脱落，造成染色失败。 易脱落，造成染色失败。 鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用热风吹干， ③鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用热风吹干，不 能热固定，这是由于加热后菌体易变形，鞭毛易脱落， 能热固定，这是由于加热后菌体易变形，鞭毛易脱落， 影响观察。 影响观察。 染液染完后用蒸馏水（ ④A、 B染液染完后用蒸馏水（自来水效果差）冲洗时 、 染液染完后用蒸馏水 自来水效果差） 一定要充分，背景很脏，鞭毛不易被观察到， 一定要充分，背景很脏，鞭毛不易被观察到，影响实验 效果。 效果。 染液后， ⑤加B染液后，将玻片稍加热（但不能太热，更不能沸 染液后 将玻片稍加热（但不能太热， 腾或蒸干）使其微冒蒸汽，染色效果较不加热为好。 腾或蒸干）使其微冒蒸汽，染色效果较不加热为好。 染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。 染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。
2013实验四细菌鞭毛观察法及细菌运动性观察(2)
一、目的要求：
1、学习并初步掌握鞭毛染色法，观察 细菌鞭毛的形态特征。 2、学习用压滴法和悬滴法观察细菌的 运动性。
二、基本原理
鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭 毛 着生的位置和数目是细菌的一项重要的形态特征。细菌的鞭毛 直径通常为0.01-0.02微米，为超显微结构，不能用光学显微 镜直接观察，必须对鞭毛染色。
2、思考题：用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是 否具有鞭毛， 要注意那些环节？
3、其他：载玻片、盖玻片、无菌水、 显微镜、双层瓶、镜头纸、接种环等。
四、操作步骤
1、鞭毛染色：
1）制片：在新制载玻片上抹一薄薄的水层，在菌 苔边缘取菌，轻轻在水层中轻轻点几下；待其自然 干燥；
2）A液染色：3--5分钟； 3）缓流水洗：让水流平缓流下，浸洗多次，将残 留的A液洗尽； 4）B液染色：30--60秒、微热 5）缓流水洗，自然干燥； 6）镜检（油镜）：菌体深褐色，鞭毛淡褐色。
染色原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上， 使鞭毛直径加粗，然后再用硝酸银染色，因而可以在显微镜下 观察。
在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否 有鞭毛。常用压滴法和悬滴法。
三、实验材料及用品
1、菌种：苏云金芽孢杆菌（半固体培养基平 板）、白色葡萄球菌（斜面）
2、染色剂：A液（媒染剂）、 B液（硝酸银鞭毛染色液）。
2、运动性的观察 （1）、压滴法
a 、制片：滴无菌水，取菌，盖上盖玻片； b 、镜检（高倍）
（2）、悬滴法 a 、加菌液于盖玻片，盖于凹玻片上； b 、镜检（高倍）
五、实验报告
1、结果：你所观察的2种细菌是否都具有鞭毛？ 是否都能 运动？鞭毛----运动有无相关性？绘图 表示有鞭毛细菌的形态特征
细菌运动性的观察
实验四细菌运动性的观察姓名：贾晓霖学号：201000140032班级：生科10.1同组成员：李江湲程子修洪钧烨一、实验目的1、学习压滴法观察细菌运动性。
2、学习鞭毛染色法，观察鞭毛的形态特征。
二、实验原理鞭毛是细菌的纤细丝状“运动”器官。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才能直接观察到。
但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。
鞭毛染色方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。
鞭毛的着生方式多样，有一端单生，如铜绿假单胞菌；两端单生；一端丛生，如荧光假单胞菌；两端丛生，如蔓延螺菌以及周生，如大肠杆菌等。
三、实验器材1、所需菌种枯草芽孢杆菌（周生）铜绿假单胞菌（端生）2、溶液和试剂0.01%美蓝染液，95%乙醇溶液，鞭毛染色液A，鞭毛染色液B。
3、仪器和其他用品酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，烧杯，试管架，镊子等。
四、实验内容a)压滴法（说明一下我做的是铜绿假单胞菌）1、洗片将载玻片用水加去污粉洗净，自然晾干。
2、涂片在载玻片中央滴一小滴蒸馏水，点燃酒精灯，在火焰旁边从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀。
3、染色、镜检加0.01%美蓝染液染色，之后加盖玻片放于油镜下观察。
附：实验照片b)鞭毛染色（说明一下我做的是铜绿假单胞菌）1、洗片将载玻片用水加去污粉洗净，自然晾干。
2、浸泡将适量95%乙醇倒入烧杯，将洗净晾干的载玻片放入有乙醇的烧杯中，浸泡5min。
3、干燥将载玻片用镊子夹出，点燃酒精灯，将载玻片在酒精灯上小心过火干燥。
4、涂片将一小滴蒸馏水滴在载玻片一端，点燃酒精灯，在火焰旁边从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，将载玻片有水滴的一端微微竖起，使有菌种的水滴自然从载玻片一端流到另一端，在载玻片上形成一条菌带。
5、干燥自然干燥。
实验四 鞭毛染色法及活细菌运动性的观察
实验四鞭毛染色法及活细菌运动性的观察摘要本实验采用硝酸银染色法对枯草芽孢杆菌与铜绿假单胞菌进行鞭毛染色，在油镜下观察其菌体形态和鞭毛的形态、数量、着生位置。
并采用压滴法观察细菌的运动性。
关键词鞭毛、硝酸银染色法、压滴法、运动性一、实验目的1．学习并掌握细菌鞭毛染色的基本方法及观察细菌鞭毛的着生情况。
2．学习用压滴法观察细菌的运动性。
二、基本原理鞭毛是细菌的运动“器官”，一般细菌的鞭毛都非常纤细。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
根据鞭毛的特征，可将有动力细菌分为单端极鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才能直接观察到。
在普通光学显微镜的分辨力限度以外，故需要用特殊的鞭毛染色法，才能看到。
首先用媒染剂（如单宁酸或明矾钾）处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性复品红（Leifson氏染色法）、硝酸银（West氏染色法）或结晶紫（Difco氏染色法）进行染色。
在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否有鞭毛。
通常使用压滴法或悬滴法观察细菌的运动性。
观察时，要适当减弱光线，增加反差，如果光线很强，细菌和周围的液体就难以辨别。
三、实验器材1、菌种枯草芽孢杆菌活菌、铜绿假单胞菌活菌2、溶液和试剂硝酸银鞭毛染液A液和B液、0.01﹪美蓝水溶液3、仪器和其他用品酒精灯、载玻片、盖玻片、显微镜、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）、擦镜纸、接种环、烧杯、载玻片夹子、蒸馏水、吸水纸四、实验操作1、活菌运动型性观察（压滴法）（1）菌液制备无菌操作，用接种环分别在枯草芽孢杆菌斜面培养基和铜绿假单胞菌斜面培养基上挑取菌落边缘菌体，接种环接触提前滴在载玻片上的水滴上，制成轻度混浊的菌液，注意不要剧烈震荡。
（2）制片用镊子夹一洁净的盖玻片，先使其一边接触菌液，然后慢慢地放下盖玻片，防止产生气泡。
（3）镜检将光线适当调暗，先用低倍镜找到观察部位，再用高倍镜观察。
细菌鞭毛变异实验报告
一、实验目的1. 掌握细菌鞭毛的观察方法。
2. 了解细菌鞭毛变异的现象及原因。
3. 探讨不同因素对细菌鞭毛变异的影响。
二、实验原理细菌鞭毛是细菌的运动器官，由鞭毛蛋白、基体和构型鞘三部分组成。
鞭毛蛋白是鞭毛的主要成分，具有推动细菌运动的功能。
细菌鞭毛变异是指细菌鞭毛数量、形态、结构等方面的变化。
三、实验材料1. 实验菌株：变形杆菌、霍乱弧菌、大肠杆菌等。
2. 培养基：营养肉汤、营养琼脂、石炭酸琼脂等。
3. 实验工具：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、酒精灯、火焰、消毒液等。
四、实验方法1. 细菌培养：将实验菌株接种于营养肉汤，37℃恒温培养18小时。
2. 鞭毛染色：取培养好的实验菌株，涂布于载玻片上，干燥后用鞭毛染色剂染色，置于显微镜下观察。
3. 鞭毛变异观察：观察不同菌株的鞭毛数量、形态、结构等方面的变化。
4. 石炭酸处理：将实验菌株接种于石炭酸琼脂平板，37℃恒温培养24小时，观察鞭毛变异现象。
5. 无石炭酸培养基恢复实验：将石炭酸处理的实验菌株接种于不含石炭酸的琼脂平板，37℃恒温培养24小时，观察鞭毛恢复情况。
五、实验结果与分析1. 细菌鞭毛观察结果（1）变形杆菌：变形杆菌具有明显的鞭毛，呈单鞭毛状，运动速度较快。
（2）霍乱弧菌：霍乱弧菌具有明显的鞭毛，呈单鞭毛状，运动速度较快。
（3）大肠杆菌：大肠杆菌具有明显的鞭毛，呈单鞭毛状，运动速度较快。
2. 鞭毛变异观察结果（1）变形杆菌在石炭酸琼脂平板上培养24小时后，鞭毛数量明显减少，部分菌株鞭毛完全消失。
（2）霍乱弧菌在石炭酸琼脂平板上培养24小时后，鞭毛数量明显减少，部分菌株鞭毛完全消失。
（3）大肠杆菌在石炭酸琼脂平板上培养24小时后，鞭毛数量明显减少，部分菌株鞭毛完全消失。
3. 无石炭酸培养基恢复实验结果将石炭酸处理的实验菌株接种于不含石炭酸的琼脂平板，37℃恒温培养24小时后，部分菌株的鞭毛数量逐渐恢复，但仍低于正常水平。
六、实验结论1. 细菌鞭毛变异现象确实存在，石炭酸可以引起细菌鞭毛的变异。
实验三、细菌鞭毛染色及其运动的观察
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2细菌运动性的观察201611051压滴法载玻片取菌液加盖玻片观察2悬滴法盖玻片取菌液加凹载玻片并翻转观察1压滴法载玻片取菌液加盖玻片观察2悬滴法盖玻片取菌液加凹载玻片并翻转观察2016110620161107特殊聚光器实现斜射照明给样品照明的光线不直接穿过物镜而经样品反射或折射后进入物镜使样品与背景差别大可以清楚看到透明微小颗粒
实 验
三
细菌鞭毛染色及其运动的观察
生科院微生物教研室
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一、目的
1、学习并初步掌握鞭毛染色法，观察细菌 鞭毛的形态特征； 2、学习用压滴法和悬滴法观察活细菌的运
动性。
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二、基本原理
鞭毛具运动功能，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的
位置和数目是细菌的一项重要形态特征。细菌的鞭毛很纤
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图 2 运动型细菌
特殊聚光器实现斜射照明，给样品照明的光线不直接穿过物镜， 而经样品反射或折射后进入物镜，使样品与背景差别大，可以清 楚看到透明微小颗粒。 用于：生活细菌运动性观察。 2016/1/7 7
细菌鞭毛的着生位置
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三、实验材料
1、菌种 大肠杆菌、变形杆菌6～8h斜面 培养物；
2、染色剂 鞭毛染色液
3、仪器或其他用具 光学显微镜、酒精 灯 载玻片、盖玻片、凹载玻片、无菌水等。
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四、操作步骤
1、鞭毛染色 制片 染色液A 3～5min 充分水洗 染色液B 2min 水洗、自然干燥、镜检。 2、细菌运动性的观察 （1）压滴法 载玻片 取菌液 加盖玻片 观察 （2）悬滴法 盖玻片 取菌液 加凹载玻片并翻转 观察
细菌鞭毛染色及运动性观察
细菌鞭毛染色及运动性观察郭森 200900140029 09级生命基地周二下午摘要：本实验以苏云金芽孢杆菌和假单胞菌为实验菌种，分别将其制备成菌液并制片。
而后，使用鞭毛染色法（用硝酸银染液A液和B液进行染色）对其染色，之后用光学显微镜的油镜观察细菌鞭毛的形态；使用压滴法并用美兰染色后，之后用光学显微镜的高倍镜观察细菌的活体运动。
实验结果我们并没有观察到鞭毛结构，但在实验中已大致掌握相关实验操作。
关键词：苏云金芽孢杆菌；假单胞菌；鞭毛染色法；压滴法前言：鞭毛是细胞的纤细丝状运动“器官”。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才能观察到。
若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
因此在本实验中，要观察细菌鞭毛形态，就要使用鞭毛染色法。
本实验使用染液的是硝酸银染液A液和B 液；而观察细菌的运动性时要使用压滴法就要用美兰染色。
本实验选用的的菌种是具周生鞭毛的苏云金芽孢杆菌和具端生鞭毛的的假单胞菌，均可使用两种方法进行观察。
本实验报告先介绍了本次实验的实验材料与方法，然后是对实验的结果与分析进行描述，最后是总结性的小结部分。
1材料与方法1、1 材料1、1、1 菌种苏云金芽孢杆菌，假单胞菌。
1、1、2 溶液和试剂硝酸银鞭毛染液（A、B液），0.01%美兰水溶液。
1、1、3 仪器和其他用品普通光学显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），接种环，试管架，镊子，吸水纸，滴管等。
1、2 步骤和方法1、2、1 菌液制备无菌操作用接种环由普通变形菌14~18h牛肉膏蛋白胨半固体新鲜培养物平板上挑取数环菌落边缘菌体，悬浮于1~2ml无菌水中制成轻度浑浊的菌悬液，不能剧烈震荡。
1、2、2 鞭毛染色1、2、2、1 制片取一滴菌悬液滴到洁净载玻片一端，倾斜玻片，使菌悬液缓慢流向另一端，用吸水纸吸去多余菌悬液，自然干燥。
1、2、2、2 染色滴加硝酸银染液A液覆盖菌面3~5min后用蒸馏水充分洗去A液。
实验四细菌的鞭毛染色及运动性观察
实验四细菌的鞭⽑染⾊及运动性观察实验四细菌的鞭⽑染⾊及运动性观察⽣命科学学院林剑锋（200900140065）摘要为了在光学显微镜下观察到细菌的鞭⽑，我们⾸先采⽤媒染剂染细菌，使沉积在鞭⽑上，导致细菌鞭⽑直径加粗，再⽤染⾊剂染⾊。
媒染剂与染⾊剂反应，我们就能够在光学显微镜下看见细菌的“放⼤”的鞭⽑了。
然后，可以⽤压滴法观察细菌运动，简易地判断细菌是否被有鞭⽑。
关键词鞭⽑染⾊法（Flagella stain）周⽣鞭⽑端⽣鞭⽑压滴法细菌的鞭⽑极细，直径⼀般为10—20nm，只有⽤电⼦显微镜才能观察。
但是由于设备限制，我们希望能够在普通的光学显微镜下就能够看见细菌鞭⽑。
于是，便产⽣了鞭⽑染⾊法。
1958年Rhodes根据Fontana的螺旋体改良镀银染⾊法，建⽴了⼀种细菌鞭⽑镀银染⾊法。
试剂分为媒染剂和银染剂。
但是试剂的稳定性低，容易变质。
2002年⾕海瀛发明了⼀种新的细菌鞭⽑镀银染⾊法。
该法将媒染剂分为A、B两种。
A液为酸化FeCl3溶液，B液为15%单宁酸，含甲醛1 ml，⽤时A、B液等量混合，轻微加热，染⽚40s，再⽤银染液涂⽚加热⾄微冒蒸汽，染⾊10 s。
这种⽅法不仅染⾊效果好，⽽且解决了试剂稳定性差的问题，此种试剂常温下⾄少可保存1年。
通过鞭⽑染⾊，可以观察到鞭⽑形态、数量和鞭⽑在菌体分布的位置，鞭⽑数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之⼀，根据鞭⽑的这些特征，可将有动⼒细菌分为单端极鞭⽑菌、单端丛鞭⽑菌、周鞭⽑菌、侧鞭⽑菌。
有了这种简易的鞭⽑染⾊⽅法，对于我们的细菌研究来说就更加⽅便容易了。
1实验原理1．1染⾊原理鞭⽑染⾊⽅法很多，但其基本原理相同，即采⽤不稳定的胶体溶液做媒染剂，并使其沉淀于鞭⽑上⽽使“鞭⽑肿胀（tar and feather）”，鞭⽑直径加粗，进⼀步染⾊后即可在油镜下观察。
常⽤的媒染剂由丹宁酸和氯化⾼铁或钾明矾等配制⽽成。
1．2运动机理鞭⽑的功能相当于船的螺浆，在⽔中可以⾼速旋转从⽽推动菌体前⾏，因此⽔体环境才是鞭⽑细菌⾃由驰骋的天地。
细菌运动观察(二)
细菌运动观察（二）关键词：硝酸银菌种乙醇凡士林试剂标准物质北京标准物质网一、操作步骤1．鞭毛染色1)硝酸银染色法(1)菌种的准备：要求用活跃生长期菌种进行鞭毛染色和运动性的观察。
对于冰箱保存的菌种，通常要连续移种1～2次后使用。
为节约时间，从可行性角度出发，可选用下列方法(之一)接种培养作染色用菌种：①取新配制的营养琼脂斜面(表面较湿润、基部有冷凝水)接种，28～32℃培养10～14h，取斜面和冷凝水交接处培养物作为染色观察材料；②取新制备的营养琼脂(含0．8％～1．0％的琼脂)平板，用接种环将新鲜菌种点种于平板中央。
28～32℃培养18～30h，让菌种扩散牛长，取菌落边缘的菌苔(不要取菌落中央的菌苔)作为染色观察的菌种材料。
注意：良好的培养物，是鞭毛染色成功的基本条件。
不宜用已形成孢芽或衰亡期培养物作为鞭毛染色的菌种材料，因为老龄细菌鞭毛容易脱落。
(2)载玻片的准备：将载玻片在含适量洗衣粉的水中煮沸约20min，取出用清水充分洗净，沥干水后置95％乙醇中，用时取出在火焰上烧去酒精及可能残留的油迹。
注意：玻片要求光滑、洁净，尤其忌用带油迹的玻片(将水滴在玻片上，无油迹玻片上的水能均匀散开)。
(3)菌液的制备：取斜而或平板菌种培养物数环于盛有1～2mL无菌水的试管中，制成轻度混浊的菌悬液用于制片。
也可用培养物直接制片，但效果往往不如先制备菌液。
挑菌时，尽可能不带出培养基。
(4)制片：取一滴菌液于载玻片的一端，然后将玻片倾斜，使菌液缓缓流向另一端，用吸水纸吸去玻片下端多余菌液，室温(或37℃温室)自然干燥。
载菌玻片千后，最好在0．5h内尽快染色，不宜长时间放置，以菌种免失活变性。
(5)染色：涂片干燥后，滴加硝酸银染色液甲液覆盖3～5min，用蒸馏水轻轻地充分洗去甲液。
用乙液冲去残水后，再加乙液覆盖涂片染色约数秒至1min，当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。
若加乙液后显色较慢．可用微火加热(加热时不能出现干燥面)．直至显褐色时立即水洗，自然干燥。
[医学保健]细菌运动性的观察
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细菌运动性的观察
一、目的要求
1、学习水浸片的制作方法。 2、观察细菌的运动性。
二、基本原理
具鞭毛的细菌在液体中借助鞭毛的旋转，使菌体能定向 的泳动。幼龄菌运动活泼，老龄菌运动性差或失去鞭毛不能 运动。观察细菌的运动性可采用水浸片法。在显微镜下观察 时，应减弱光照强度，并注意区分是细菌的真运动，还是因 液体流动引起细菌随水流而动，或呈现无规则、原位颤动的 布朗运动
（1） 显微镜下观察细菌运动时，为何应减弱光线 （2） 细菌的运动与布朗运动有何区别
急性肾小球肾炎的的病理改变是肾脏 体积可 较正常 增大， 病变主 要累及 肾小球 。病理 类型为 毛细血 管内增 生性肾 小球肾 炎。光 镜下通 常为弥 漫性肾 小球病 变，以 内皮细 胞及系 膜细胞 增生为 主要表 现，急 性期可 伴有中 性粒细 胞和单 核细胞 浸润。 病变严 重时， 增生和 浸润的 细胞可 压迫毛 细血管 袢使毛 细血管 腔变窄 、甚至 闭塞， 并损害 肾小球 滤过膜 ，可出 现血尿 、蛋白 尿及管 型尿等 ；并使 肾小球 滤过率 下降， 因而对 水和各 种溶质 （包括 含氮代 谢产物 、无机 盐）的 排泄减 少，发 生水钠 潴留， 继而引 起细胞 外液容 量增加 ，因此 临床上 有水肿 、尿少 、全身 循环充 血状态 如呼吸 困难、 肝大、 静脉压 增高等 。肾小 管病变 多不明 显，但 肾间质 可有水 肿及灶 状炎性 细胞浸 润。 急 性 肾 小 球肾 炎治疗 ：本病治疗以休息及对症为主，少数急性肾功能衰竭病例应 予透析 ，待其 自然恢 复。不 宜用激 素及细 胞毒素 药物。 一、一般治疗 肉眼血尿消失、水肿消退及血压恢复正 常前应 卧床休 息。予 低盐（ <3g/d）饮食 ，尤其 有水肿 及高血 压时。 肾功能 正常者 蛋白质 入量应 保持正 常（每 日每公 斤体重1g）， 但氮质 血症时 应限制 蛋白质 摄入， 并予高 质量蛋 白（富 含必需 氨基酸 的动物 蛋白） 。仅明 显少尿 的急性 肾功能 衰竭病 例才限 制液体 入量。 二、治疗感染灶 首选青霉素（过敏者更换为对革兰氏 阳性菌 高度敏 感的大 环内酯 类、头 孢第一 代抗生 素）800万单 位静脉 滴注，10～14天，但 其必需 性现有 争议。 反复发 作的慢 性扁桃 体炎， 待肾炎 病情稳 定后（ 尿蛋白 小于（+ ），尿 沉渣红 细胞少 于10个 /高倍 视野） 可作扁 桃体摘 除，术 前、后 两周需 注射青 霉素。 三、对症治疗 利尿、消肿、降血压。常用噻嗪类利尿 剂（如 双氢氯 噻嗪25mg,每日2～3次）， 必要时 才予利 尿剂如 呋塞米20～60mg/d,注射或分 次口服 。利尿 后高血 压值仍 不满意 时，可 加用钙 通道阻 滞剂如 硝苯啶 20～40mg/d,分次口 服或血 管扩张 药如肼 酞嗪25mg,每日 3次。 但保钾 利尿药 （如氨 苯蝶啶 及安体 舒通） 及血管 紧张素 转化酶 抑制剂 ，少尿 时应慎 用，以 防诱发 高血钾 。
实验细菌鞭毛染色及其运动的观察
在显微镜下观察活细菌的运动性，也可以初步判断细菌 是否有鞭毛。细菌运动性的观察可用压滴法和悬滴法。
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三、器材
1、菌种 大肠杆菌、四联球菌12～18h液 体培养物，变形杆菌6～8h斜面培养物；
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图 2 运动型细菌
特殊聚光器实现斜射照明，给样品照明的光线不直接穿过物镜，
而经样品反射或折射后进入物镜，使样品与背景差别大，可以清
楚看到透明微小颗粒。
用于：生活细菌运动性观察。
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细菌鞭毛的着生位置
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七、预习
细菌的芽孢染色 细菌的荚膜染色
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五、实验报告
1、绘图示细菌的鞭毛染色形态图。 2、说明所观察各菌是否都有鞭毛？有鞭毛的
细菌作何运动，无鞭毛的细菌又如何 运动？
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六、思考题
1、试设计一实验，如何鉴别某种细菌是 否能运动，是否有鞭毛，观察其鞭毛的 着生的位置。
（要求使用详细介绍流程步骤）
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2、染色剂 鞭毛染色液 3、仪器或其他用具 光学显微镜、酒精 灯
载玻片、盖玻片、凹载玻片、无菌水等。
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四、操作步骤
1、鞭毛染色
制片 染色液A3～5min 充分水洗 Nhomakorabea染色液B 2min
水洗、自然干燥、镜检。
2、细菌运动性的观察
实验四鞭毛染色和藻类的观察ppt课件
实验报告及思考题
1. 绘图表示芽孢、荚膜和鞭毛的染 色结果。
2. 鞭毛的染色与其他染色有何不同， 为什么？
藻细胞的观察
微囊藻、硅藻和绿藻等藻类是引起太湖水华的主 要藻种。
铜绿微囊藻 栅藻 柯式并联藻 直链藻
铜绿微囊藻
蓝藻门——蓝藻纲——色球藻目——微囊藻科——微囊藻属—— 铜绿微囊藻
直链藻
硅藻门——中心纲——圆筛藻目——圆筛藻 科——直链藻属——变异直链藻
细胞连成链状在同一胶质管中，壳体和细胞 呈圆柱状，色素体呈小圆盘状，多个。细胞 间有沟状的缢入部，为“假环沟”
观察要求： 画图 色素体 假环沟 壳体
细菌的鞭毛很纤细，所以，除了很少数 能形成鞭毛束的细菌可以用相差显微镜直接 观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均 不能用光学显微镜直观察到，而只能用电 子显微镜观察。
要用普通光学显微镜观察细菌的 鞭毛，必须用鞭毛染色法。鞭毛染色 方法很多，但其基本原理类似，即在 染色前先用媒染剂处理，让它沉积在 鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进 行染色，显微镜观察。
细胞球形，直径在3-7μm，细胞有伪空胞，细胞分为有光合色 素的色质区和中央的无色的中心质区，中心质区有DNA微丝。
细胞中常具有大小不等的强反光颗粒，如多磷酸体，多面体 （羧化酶体），蓝藻体（天门冬氨酸和精氨酸聚合体的结晶， 又称结构颗粒），多聚糖体（又称蓝藻淀粉或糖原）等。
观察要求： 画图 分清色素区和 中心区伪空胞
细胞长纺锤形，直或弯曲两端渐细，色素体周生（围 绕细胞壁）、片状，以叶绿素a和b最多，还有叶黄素 和胡萝卜素，故呈绿色，具有两个蛋白核；贮藏的营 养物质主要为淀粉和油类，形成淀粉粒。细胞内有1 个或多个细胞核。群体聚集在透明的胶被内，细胞长 轴与群体长轴平行
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四、操作步骤
1、鞭毛染色：
1）制片：在新制载玻片上抹一薄薄的水层，在菌 苔边缘取菌，轻轻在水层中轻轻点几下；待其自然 干燥； 2）A液染色：3--5分钟； 3）缓流水洗：让水流平缓流下，浸洗多次，将残 留的A液洗尽； 4）B液染色：30--60秒、微热 5）缓流水洗，自然干燥； 6）镜检（油镜）：菌体深褐色，鞭毛淡褐色。
染色原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上， 使鞭毛直径加粗，然后再用硝酸银染色，因而可以在显微镜下 观察。 在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否 有鞭毛。常用压滴法和悬滴法。
三、实验材料及用品
1、菌种：苏云金芽孢杆菌（半固体培养基平 板）、白色葡萄球菌（斜面） 2、染色剂：A液（媒染剂）、 B液（硝酸银鞭毛染色液）。 3、其他：载玻片、盖玻片、无菌水、 显微镜、双层瓶、镜头纸、接种环等。
2、运动性的观察 （1）、压滴法 a 、制片：滴无菌水，取菌，盖上盖玻片； b 、镜检（高倍） （2）、悬滴法 a 、加菌液于盖玻片，盖于凹玻片上； b 、镜检（高倍）
五、实验报告
1、结果：你所观察的2种细菌是否都具有鞭毛？ 是否都能 运动？鞭毛----运动有无相关性？绘图 表示有鞭毛细菌的形态特征 2、思考题：用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是 否具有鞭毛， 要注意那些环节？
实验四、细菌鞭毛染色法 及运动性观察
一、目的要求：
1、学习并初步掌握鞭毛染色法，观察 细菌鞭毛的形态特征。 2、学习用压滴法和悬滴法观察细菌的 运动性。
二、基本原理
鞭毛毛 着生的位置和数目是细菌的一项重要的形态特征。细菌的鞭毛 直径通常为0.01-0.02微米，为超显微结构，不能用光学显微 镜直接观察，必须对鞭毛染色。