4第四章 基因克隆的载体-4噬菌粒载体

用于体外转录
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T7 T3
8. 带有一个M13噬菌体的复制起点，在有 辅助噬菌体感染的寄主细胞中，可以合 成出单链DNA拷贝，并包装成噬菌体颗 分泌到培养基中； 9. 在pUC118和pUC119这两个载体中，多 克隆位点区的核苷酸序列取向是彼此相 反的，于是它们当中的一个可转录克隆 基因的正链DNA，另一个则可转录出负 链DNA； 10. 可以直接对克隆的DNA片断进行核苷 酸的序列测定，免去了从质粒载体到噬 菌体的这一烦琐的亚克隆步骤。
pBluescript噬菌粒载体
基本结构： 1. 在多克隆位点的两侧，有一对T3和T7噬菌体 的启动子，可以定向指导外源基因的转录活动； 2. 同时具有一个单链噬菌体M13或f1的复制起 点和一个来自ColE1质粒的复制起点，在不同 的情况下，可以采取不同的复制形式，分别合 成单链或双链的DNA； 3. 编码有一个胺苄青霉素抗性基因，供作转化 子记号； 4.含有lacZ基因，可用Xgal-IPTG组织显色反应 法筛选噬菌粒载体。
第四节 噬菌粒载体
噬菌粒载体
由质粒载体和单链噬菌体载体结合而成的 新型的载体系列。 DNA长约3 kb，可携带约10 kb的外源 基因。 它具有质粒的复制起点、选择性标记、 多克隆位点等，方便DNA的操作，可在细胞 内稳定存在；又具有单链噬菌体的复制起点， 在辅助噬菌体的存在下，可进行噬菌体的繁 殖，产生单链的子代噬菌体。
常用的噬菌粒载体pUC118和pUC119
是一对分别由pUC18和pUC19质粒与野生型M13噬菌体的 基因间隔区（IG）重组而成的噬菌粒载体。 1. 具有较小分子量的共价、闭合、环形的基因组DNA， 可克隆10kb的外源DNA片段，并易于进行分离与操作； 2. 编码一个ampr基因作为选择记号，因此只有携带 pUC118或pUC119噬菌粒载体的大肠杆菌转化子细胞， 才能够在含有氨苄青霉素的培养基中生长，便于转化子 的选择； 3. 拷贝数含量高，每个寄主可高达500个，所以只要用 少量的大肠杆菌细胞培养物，便可制备出大量的载体 DNA；
4. 存在着一个多克隆位点区，因此许多种不同类型的外 源DNA片段，不经修饰便可直接插入到载体分子上；
5. 由于多克隆位点区阻断了大肠杆菌lacZ基因的 5’-端编码区，可按照IPTG组织化学显色反应试 验，筛选重组子； 6. lacZ基因是置于lac启动子的控制之下，这样插 入的外源基因便会以融合蛋白质的形式表达； 7. 含有质粒的复制起点，在没有辅助噬菌体的情 况下，克隆的外源基因可以像质粒一样按常规 的方式，复制形成大量的双链DNA分子