原生质体培养的过程

原生质体的分离
机械分离法：先将细胞放在高渗糖溶液中预处理，待细胞发生轻微质壁分离，原生质体收缩成球形后，再用机械法磨碎组织，从伤口处可释放出完整的原生质体，该方法的缺点：获得完整的原生质体的数量比较少，能够用此法产生原生质体的植物种类受到限制。优点：该方法可避免酶制剂对原生质体的破坏作用。
酶解分离法： 指将材料放入能降解细胞壁的混合等渗酶液中保温一定时间，在酶液的作用下，细胞壁被降解，从而获得大量有活力的原生质体的方法。优点：获得量大，适用广泛。缺点：商品酶制剂均含有核酸酶、蛋白酶、过氧化物酶以及酚类物质，会影响所获原生质体的活力

原生质体的纯化
1过滤法，用滤网过滤酶解混合物，滤去未被酶解的细胞和组织块
2离心法，低速离心，使完整的原生质体沉积于离心管底部
3漂浮法，采用比重大的高渗溶液，是原生质体漂浮
原生质体的培养方法
1固体培养法 原生质体纯化、离心、稀释后，再与1.4%琼脂或琼脂糖（37?C左右）等体积混合成0.7% ，培养于培养皿中
2浅层液体培养法 培养皿中注入3-4ml培养液，成一薄层——接种一定密度（ 2x105/ml）原生质体——每日轻摇2-3次，加强通气——原生质体细胞壁产生——分裂形成细胞团——转至固体培养基，分化成苗
3双层培养法 培养皿底部铺一层0.7%琼脂糖的固体培养基，在其上进行原生质体浅层培养。