抗人球蛋白试验

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Baidu Nhomakorabea
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红细胞应充分洗涤，除去吸附的血浆球蛋白，以 免中和抗人球蛋白而出现假阴性结果。 尽量用温的0.85%生理盐水进行试验，以利用消 除高难浓度冷抗体的影响，而不致出现假阳性。 血液标本要当天检查，因弱抗体置室温放置24h 后反应减弱。 用枸橼酸钠、EDTANa2或肝素抗凝对强抗体无 明显影响，对弱抗体则有抑制作用，故用去纤维 蛋白抗凝方法好。
②
实验操作
③
阳性对照红细胞悬液的制备：取经洗涤的混合O 型红细胞（离心后）1滴，加抗D血清2滴混匀， 置37℃水浴1h。离心后弃去上清液，再用生理 盐水洗涤3次，配成10%红细胞悬液。
④ ⑤
取试管4支，编号按下表进行操作。 混匀后置室温5min后观察。或低速离心 （1000rpm/min,1min）轻轻混和。
结果判断（健康人都呈阴性）
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直接试验 如阴性对照不出现凝集，而阳性对 照及被检红细胞出现凝集，即阳性结果，表 示被检红细胞膜上有不完全抗体。 间接试验 若对照全相符，再看待检管结果， 若出现凝集为阳性，提示待检血清中有不完 全抗体；无凝集为阴性，则表示待检血清无 不完全抗体。
评价
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抗人球蛋白试验
讲课老师 吴红梅
实验原理
免疫性溶血性贫血患者的血清中或红细胞 膜上常有不完全抗体，这种不完全抗体能吸附 在红细膜上，使红细胞致敏，但不能使红细胞 凝集，能与相应的抗体（抗人球蛋白抗体）发 生特异的抗原抗体结合反应，使致敏红细胞发 生凝集。抗人球蛋白试验用于检测不完全抗体， 有直接法和间接法两种，直接法是检测患者红 细膜表面的不完全抗体，间接法用于检测患者 血清中不完全抗体。
反应物（滴）
1管（测定 2管（阳性 3管（阴性 管） 对照管） 对照管）
被检血清 5%O型D阳性 红细胞
抗D血清 AB型血清
2 1
— —
— 1
1 —
— 1
— 1
注意事项
1.
本试验必须设阳性对照、阴性对照、盐水对 照。如阳性对照管不凝集，说明抗D血清失 效或抗人球蛋白血清失效，应更换血清，重 作试验；若阴性对照出现凝集，可能由于抗 人球蛋白血清中含有残余（制备时未被完全 破坏或吸附）种属抗体，或被细菌污染；盐 水对照出现凝集，可能由于存在完全抗体或 其它原因引起的自凝现象，本实验均失去意 义，不能判断结果。
抗人球蛋白试验以直接抗人球蛋白试验最常 用。 只有阳性对照、阴性对照、盐水对照出现预 期结果，本实验才有判断价值。 特异性和抗体量对试验影响较大，因此抗人 球蛋白血清最好用不同批号混合血清作试验。
1管 2管 3管 反应物（滴） （测定管） （阴性管） （阳性管） 受检者红细 胞悬液 正常人红细 胞悬液 阳性对照红 细胞悬液 1 — — — 1 — — — 1
4管（盐水 对照） 1 — — —
抗人球蛋白 血清（工作 液）
生理盐水
1 —
1 —
1 —
1
实验操作
2. ① ②
③
④
间接试验 将混合O型Rh阳性红细胞用生理盐水洗涤1次， 配成5%红细胞生理盐水悬液。 取试管3支按下表操作。 混匀各管，置37℃水浴箱中1h后取出，用生 理盐水洗涤3次，最后一次弃支上清液，仅留 1滴红细胞悬液。 每管加抗人球蛋白血清1滴，混匀，5min后 观察结果。
实验材料
1. 2. 3. 4.
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受检红细胞。 对照同型混合红细胞悬液 阳性对照红细胞悬液。 抗人球蛋白血清。 抗D血清。 受检者血清。 AB型血清。 0.85%生理盐水。 离心机、水浴箱（37℃）、吸管、试管。
实验操作
1.
①
直接试验
受检者红细胞悬液：取患者抗凝血去纤维蛋白血， 离心除上清液，用生理盐水洗涤3次，配成10% 红细胞悬液。 正常“O”型抗凝血，离心除去上清液，每次用 5ml生理盐水洗涤红细胞3次，然后配成10%红 细胞悬液。