不同产地不同季节的千里光药材中指标成分的含量测定

不同产地不同季节的千里光药材中指标成分的含量测定

目的比较不同产地及不同采收季节的千里光药材中金丝桃苷和绿原酸的含量。方法反相高效液相色谱法。结果8个产地的千里光药材金丝桃苷和绿原酸的含量差异较大，金丝桃苷含量以浙江衢州所产最高；绿原酸含量以广东连州所产最高；不同采收季节的千里光药材金丝桃苷和绿原酸含量均以10月份所产最高。结论市场上全年采收的千里光药材给药品质量控制带来了困难，本实验数据显示千里光药材的最佳采收期为9～10月。

标签：千里光；高效液相；含量测定；金丝桃苷；绿原酸

千里光为菊科植物千里光（Senecio scandens Buch.-Ham.）的干燥地上部分。该品始载于《本草拾遗》。味苦、辛，性寒。清热解毒、明目利湿[1]。用于痈肿疮毒，感冒发热，目赤肿痛，泄泻痢疾，皮肤湿疹。生于路旁及旷野间，分布浙江、江苏、江西、四川、湖南、广东、广西等地，是我国应用历史悠久的常用中药。目前对其质量进行控制的指标成分多为金丝桃苷和绿原酸。在实际应用过程中发现，不同产地的千里光药材其绿原酸含量有一定差异[2]，这样，将其投料制成成方制剂的质量不稳定，易造成成方制剂中绿原酸含量测定结果为不合格，影响厂家投料生产。而且各工具书对其采收季节的描述也各有出入，《中国药典》2015版对千里光采收的描述为“全年均可采收”，《中药大辞典》中对其采收的描述为“夏秋二季采收”，而《中华本草》中对其采收的描述为“9—10月收割全草”，市場上也确实存在着茎、叶共存，茎、叶、花共存及单独以茎入药的现象，正是因采收时间不同所致，而季节对指标成分的影响并无报道，综合考虑产地与采收时间的影响，该实验以金丝桃苷和绿原酸为指标成分，对不同产地和不同季节采收的千里光进行了含量测定，拟为从源头上提高千里光药材及其制剂的质量提供依据。

1 仪器、试剂与样品

岛津LC-20AT高效液相色谱仪；SPD-20A（VWD）检测器；Welch Ultimax XB C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；对照品：均为中国药品生物制品检定所提供，绿原酸（批号：110753-201506，纯度：96.2%）；金丝桃苷（批号：111521-201507，纯度：92.5%）试剂：甲醇（色谱纯，霍尼韦尔）；水（纯净水，怡宝）。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液精密称取绿原酸对照品①12.46 mg与②10.25 mg，加75%甲醇制成浓度各为239.730 4 μg/mL、197.21 μg/mL的对照品溶液。

精密称取金丝桃苷对照品①10.45 mg与②10.82 mg，加75%甲醇制成浓度各

为48.331 25 μg/mL、50.042 5μg/mL的对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液精密称取过2号筛的千里光供试品粉末1.0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入75%的甲醇25 mL，称定重量，水浴回流1 h，放至室温，再称定重量，用75%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2 色谱条件与系统适用性实验

绿原酸：采用Welch Ultimax XB C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相：甲醇-1%冰醋酸（10∶90），流速：0.8 mL/min，检测波长：328 nm；柱温：35℃，进样体积：10 μL。色谱图见图1。

金丝桃苷：采用Welch Ultimax XB C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相：乙腈-0.4%醋酸（16∶84 ），流速：0.8 mL/min，检测波长：360 nm；柱温：35℃，进样体积：10 μL。色谱图见图2。

2.3 线性关系的考察

精密吸取绿原酸对照品10.22 mg，置25 mL量瓶中，加75%甲醇制成对照品溶液①（393.265 6 μg/mL）；精密量取①5 mL，置25 mL量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液②（78.653 12μg/mL）；精密量取②5 mL，置50 mL量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液③（7.865 312 μg/mL）。精密吸取对照品溶液③5 μL、10 μL，②5 μL、10 μL，①5 μL、10 μL，在液相色谱仪中测定，以进样量（ng）为横坐标，以平均峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。其回归方程为：Y=3 449.2X+16 563，R2=0.999 9。结果表明：绿原酸对照品在39.326 56～3 932.656 ng范围内线性关系良好。

精密称取金丝桃苷对照品10.52 mg，置20 mL量瓶中，加75%甲醇制成对照品溶液（493.914 μg/mL）；精密量取①5 mL，置25 mL量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液②（98.782 8 μg/mL）；精密量取②5 mL，置50 mL量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液③（9.878 28 μg/mL）；精密量取③5 mL，置50 mL量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液④（0.987 828 μg/mL）。精密吸取对照品溶液④20 μL，③10 μL、20 μL，②5 μL、10 μL、20 μL，①10 μL，在液相色谱仪中测定，进样量（μg）为横坐标，以平均峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。其回归方程为：Y=1 694.7X+255 15，R2=0.999 8。

结果显示：金丝桃苷对照品在19.756 56～4 939.14 ng范围内线性关系较好。

2.4 精密度实验

精密吸取金丝桃苷对照品溶液，连续进样6次，每次10 μL，记录峰面积值，RSD为0.3%。

2.5 稳定性实验

取13号浙江衢州产千里光供试品溶液，于0、2、4、8、12、24 h分别进样10 μL，记录峰面积值。其RSD为0.6%（绿原酸）、0.4%（金丝桃苷）。表明供试品溶液中的绿原酸及金丝桃苷在24 h内稳定。

2.6 重复性实验

取13号浙江衢州产千里光供试品溶液6份，精密称定，在上述色谱条件下进行测定，计算绿原酸与金丝桃苷的含量。RSD为0.9%（绿原酸）、0.6%（金丝桃苷），结果表明重复性良好。

2.7 加樣回收率实验

取浙江衢州产千里光供试品溶液6份，约0.5 g，精密称定，分别加入已知含量一半的绿原酸对照品溶液和金丝桃苷对照品溶液适量，并用75%的甲醇溶液补至25 mL。自“称定重量”起，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样测定，结果表明回收率良好，绿原酸平均回收率为98.2%（RSD=0.9%）；金丝桃苷平均回收率为97.5%（RSD=1.8%）。

2.8 样品含量测定

精密吸取按“2.1”项下方法配置的对照品溶液与供试品溶液各10 μL，在高效液相色谱仪中测定样品中绿原酸与金丝桃苷的含量，见表1。

3 讨论

千里光药材具有清热解毒、明目退翳、杀虫等功效，目前作为其质量评价的指标成分为金丝桃苷和绿原酸（中成药中检测），表1中的数据显示，在同一时间段收集的不同产地的千里光药材中，金丝桃苷和绿原酸的含量具有差异性，金丝桃苷以浙江衢州产的含量最高，绿原酸以广东连州产的含量最高；而选取的湖南望城、浙江衢州这两个产地不同采收季节采收的千里光药材含量测定数据显示，10月均为金丝桃苷和绿原酸含量的高值，其次为12月份，而3月、6月的金丝桃苷和绿原酸的含量均处于低值，这提示《中华本草》中对其采收“9—10月收割全草”的描述最为准确，而《中国药典》中描述的“全年均可采收”可能欠妥。由于各产地气候条件差异较大，从药材性状观察可显示绿原酸和金丝桃苷含量均以开花期后较高，提示选购千里光药材时以叶、花较多者为佳，茎较多者为次。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.2015版中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：33-34.

[2] 朱立华，李跃辉，胥新元，等.不同产地千里光药材中金丝桃苷和绿原酸