09甘露聚糖酶的检测方法

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颁发部门：品管部 技 术 标 准

甘露聚糖酶 酶活力的检测方法

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1. 目的

建立甘露聚糖酶酶活力的测定方法，为各部门人员测定甘露聚糖酶活力提供依据。 2. 适用范围

适用于饲料添加剂的饲料酶产品，也适用于添加甘露聚糖酶的浓缩饲料和添加剂预混合饲料。 3. 方法原理

β-甘露聚糖酶可以将槐豆胶中的β-甘露聚糖水解成甘露糖及其它还原性碳水化合物，这些物质可以同DNS试剂发生显色反应，可用分光光度计测定其色度，计算其酶活力。 4. 定义

在55℃、PH4.8～PH5.0条件下，1min分解槐豆胶中的β-甘露聚糖产生具有还原能力相当于1μmol 甘露糖所需的酶量，规定为1个酶活单位（实为国际单位IU），以μmol /min表示。 5. 试剂和溶液

5.1 乙酸-乙酸钠缓冲溶液（PH4.8-5.0）

称取醋酸钠16.06g，醋酸4.92g，用蒸馏水溶解定容至1000mL，配好后用PH计校正。 5.2 DNS试剂

取酒石酸钾钠182g，溶于500mL蒸馏水中加热，于热溶液中依次加入3.5—二硝基水杨酸6.3g，NaOH 2lg，苯酚5g，亚硫酸钠5g，搅拌至溶，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色试剂瓶中，室温下放置15天以后使用，使用有效期一个半月。 5.3 0.5%槐豆胶溶液

用PH4.8～ PH5.0的乙酸-乙酸钠缓冲溶液配制, 槐豆胶为SIGMA试剂。 5.4 7 %甘露糖标准溶液

精确称取经105℃烘至恒重的甘露糖1.0000 g,用蒸馏水定容至100mL容量瓶中制成1%甘露糖标准溶液。 6. 仪器与设备

6.1 恒温水浴锅60±2℃ 6.2 紫外分光光度计UV1601 6.3 电子天平(0.001g) 6.4 漩涡混合器

7. 测定步骤

7.1 甘露糖标准曲线的绘制

分别吸取1%甘露糖标准溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0 mL于50mL容量瓶中，用蒸馏水制成每mL 分别含甘露糖200，400，600，800，1000，1200μg的标准液。各取不同浓度标准液0.5mL于试管中，加2mL Ph4.8-5.0的乙酸-乙酸钠缓冲溶液,加2.5 mL DNS试剂煮沸5分钟。冷后加水5 ml，摇匀，520nm 处测定光密度，以0.5 mL水代替标准液来作空白。以所得的光密度值为横坐标，以对应的标准甘露糖

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