维生素C的定量测定—2,6-二氯酚靛酚滴定法word版本

维生素 C 的定

量测定

— 2 , 6- 二氯酚

靛酚滴

定法

维生素 C 的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法实验目的

1.学习定量维生素 C 的原理和方法

2.掌握微量滴定技术

实验原理

维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。它对物质代谢的调节具有重要的作用，近年来发现它还能增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。

维生素 C 是具有L-系糖构型的不饱和多羟基化合物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（桔类、草莓、山楂、辣椒等）的含量都很丰富。

维生素 C 具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，维生素 C 易被氧化而破坏。在中性和微酸性环境中，维生素C 能将染料2，6—二氯酚靛酚还原成无色的还原型的2，6—二氯酚靛酚，同时将维生素 C 氧化成脱氢维生素C。氧化型的2，6—二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈兰色。当用2，6—二氯酚靛酚滴定含有维生素 C 的酸性溶液时，在维生素 C 尚未全被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即被还原成无色。但当溶液中的维生素 C 刚好全部被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即时溶液呈红色。所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的

维生素 C 刚好全部被氧化，此时即为滴定终点，从滴定时2，6—二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型维生素 C 的含量。

其化学反应式如下：

抗坏血酸 仪器、试剂

（一）仪器：研钵、天平、容量瓶（ 100ml ）、量筒、移液管、锥形瓶 （50ml ）、微量滴定管、漏斗

（二）材料、试剂

1、新鲜蔬菜或新鲜水果

2、1%草酸溶液

1g 草酸溶于 100ml 蒸馏水中

3、2%草酸溶液

2g 草酸溶于 100ml 蒸馏水中

4、标准维生素 C 溶液

准确称取 20mg 纯维生素 C 粉状结晶于 1%草酸溶液中，稀释至 100ml ， 再取其中 10ml 稀释至 100ml ，即得 0.02mg/ml 的维生素 C 溶液。在使用前临时 配制。

5、0.02%2，6—二氯酚靛酚溶液 溶解 50mg2，6—二氯酚靛酚于约 200ml 含有 52mg 的 NaHCO 3的CCC O O H

H

H 2OH o

o

脱氢抗坏血酸

热水中，冷后稀释至250ml，过滤，装于棕色瓶中，放入冰箱中保存。使用时用维生素 C 标准液标定其浓度。

实验步骤

（一）2，6—二氯酚靛酚溶液的标定：

取5ml 维生素 C 标准液及5ml1%草酸溶液于50ml 的锥形瓶中，用配制好的2，6—二氯酚靛酚溶液于微量滴定管中滴定至粉红色出现，并保持15s 不褪色，即滴定终点，此时所用染料的体积相当于0.1mg 维生素C，由此可求出每ml2，6—二氯酚靛酚溶液相当于维生素C的mg数。

（二）称取新鲜蔬菜或水果（要有大、中、小各部分的代表，洗净，除去不可食部分，切碎，混匀）约10 克，于研钵中，加入等体积的2%草酸溶液研磨成浆状，得匀浆液。将匀浆液移入100ml 容量瓶中，可用1%草酸溶液帮助转移，加入30%Zn（AC）2和15%K4Fe （CN）6 溶液各5ml，脱色，然后用1%的草酸稀释至刻度，充分摇匀，静止几分钟后过滤。（弃去最初流出的几毫升溶液）（三）用移液管吸取滤液5或10ml于50ml 的锥形瓶中，立即用标定过的2，6—二氯酚靛酚溶液滴定，直至溶液呈浅粉红色

15s 不褪色为止。记录所用染料的ml 数。为了避免其它物质的干扰，滴定过程不得超过2min。（此步骤平行作2—3 次）

（一）计算

维生素 C 含量（mg/100g样品）=（VT/W ）×100

式中：V 为滴定样品所耗用的染料的平均ml数

T为1ml染料相当于维生素C的mg数

W 为滴定时所用样品稀释液中含样品的g 数

注意事项

1.整个滴定过程要迅速，防止还原型的维生素 C 被氧化。滴定过程一般不超过2min 。滴定所用的染料不应少于1ml 或多于4ml ，若滴定结果不在此范围，则必须增减样品量或将提取液稀释；

2.本实验必须在酸性条件下进行，在此条件下，干扰物反应进行很慢；

3.提取液中尚含有其它还原性的物质，均可与2，6—二氯酚靛酚

反应，但反应速度均较维生素 C 慢，因而，滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一滴一滴地加入，并要不断地摇动锥形瓶直至呈粉红色15s 不褪色为终点；

4.若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，需脱色，可用白陶土、30%Zn（AC）2和15%K4Fe（CN）6 溶液等，本实验用30%Zn （AC）2 和15%K4Fe（CN）6溶液脱色，若色素不多，可不脱色，直接滴定。

5.在生物组织和组织提取液中，维生素 C 还能以脱氢维生素 C 及结合维生素C的形式存在，它们同样具有维生素 C 的生理作用，但不能将2，6—二氯酚靛酚还原脱色.

6.2%草酸有抑制抗坏血酸酶的作用，而1%的草酸无此作用

思考题

1.指出3—4 种维生素C含量丰富的物质。

2.为了准确测定维生素C的含量，实验过程中应注意哪些操作步骤？为什么？