紫外可见分光光度法测定水杨酸的含量复习课程

实验名称：紫外可见分光光度法测定水杨酸的含量

一、实验目的

1、了解紫外可见分光光度计的性能、结构及其使用方法。

2、掌握紫外－可见分光光度法定性、定量分析的基本原理和实验技术。

二、实验原理

紫外-可见光谱是用紫外-

可见光测得的物质电子光谱，它研究产生于价电子在电子能级间的跃迁，研究物质在紫外-

可见光区的分子吸收光谱。当不同波长的单色光通过被分析的物质时能测得不同波长下的吸光度或透光率，以ABS为纵坐标对横坐标波长λ作图，可获得物质的吸收光谱曲线。一般紫外光区为190-400nm，可见光区为400-

800nm。

紫外吸收光谱的定性分析为化合物的定性分析提供了信息依据。由于分子结构不同但只要具有相同的生色团，它们的最大吸收波长值就相同。因此，通过对末知化合物的扫描光谱、最大吸收波长值与已知化合物的标准光谱图在相同溶剂和测量条件下进行比较，就可获得基础鉴定。

利用紫外吸收光谱进行定量分析时，必须选择合适的测定波长。苯甲酸和水杨酸的紫外吸收光谱如图1所示。

图1 苯甲酸与水杨酸紫外吸收光谱图

1-苯甲酸；2-水杨酸

水杨酸在波长300 nm处有吸收峰，而苯甲酸此处无吸收，在波长230 nm 两组吸收峰重叠，为了避开其干扰，选用300 nm波长作为测定水杨酸的工作波长。由于乙醇在250～350nm无吸收干扰，因此可用60%乙醇为参比溶液。

三、仪器与试剂

1．仪器

紫外－可见分光光度计（UVWIN 5，北京普析通用仪器有限公司）；

容量瓶100mL 1个、50mL 5个；刻度吸量管1mL、2mL、5mL各1支。

2．试剂

水杨酸对照品（分析纯）；60%乙醇溶液（自制）。

四、实验步骤

1、标准溶液的制备：准确称取0.0500 g水杨酸置于100 mL烧杯中，用6

0%乙醇溶解后，转移到100 mL容量瓶中，以60%乙醇稀释至刻度，摇匀。

此溶液浓度为0.5mg·mL-1。

2、将五个50mL容量瓶按1-

5依次编号。分别移取水杨酸标准溶液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL于相应编号容量瓶中，各加入60%乙醇溶液，稀释至刻度，摇匀。

3、用1 cm石英吸收池、，以60%乙醇作为参比溶液，在200～350 nm波

长范围内测定一份水杨酸标准溶液的紫外吸收光谱，确定最大吸收波长。

4、在选定波长下，以60%乙醇为参比溶液，由低浓度到高浓度测定水

杨酸标准溶液系列及未知液的吸光度。以水杨酸标准溶液的吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，根据水杨酸试液的吸光度，通过标准曲线计算水杨酸试样中水杨酸的含量。

五、数据记录

不同波长下的吸光度

标准曲线制定及未知试样浓度检测

六、数据处理

1、根据某一浓度下的全波长扫描图，确定最佳吸收波长。

2、绘制标准曲线，计算工作曲线方程及R2值。

3、计算未知样中水杨酸的浓度。

最大波长：λ=298nm

得到方程Y=0.012+0.02617X

未知溶液吸光度Y=0.687,则浓度X=25.79ug/mg

七、注意事项

1、配制样品前要将所使用的玻璃仪器清洗干净。

2、移取标准溶液之前要润洗移液管。

3、测量前用待测液润洗比色皿，测量由低浓度到高浓度依次进行。