抗菌实验—抑菌圈法
实验七杀菌剂生物活性测定方法――抑菌圈法
实验七杀菌剂生物活性测定方法――抑菌圈法一、实验目的掌握抑菌圈法测定杀菌剂的生物活性的方法及步骤。
二、实验原理本实验主要采用抑菌圈法来测定杀菌剂的生物活性。
抑菌圈法是利用杀菌剂在琼脂平板上产生的抑菌效果来对其生物活性进行测定的一种方法。
通常，将杀菌剂溶液滴加到琼脂平板上，使其均匀地分布在琼脂上。
然后，将含有细菌培养物的琼脂平板放入恒温箱中进行培养。
在培养一段时间后，观察平板上是否出现了抑菌圈，并测量抑菌圈的直径来评估杀菌剂的生物活性。
三、实验仪器和材料1.显微镜2.恒温箱3.滴定管或移液管4.琼脂平板5.细菌培养物6.杀菌剂溶液四、实验步骤1.准备琼脂平板。
将琼脂平板置于恒温箱中，加热至溶化状态后取出，待其稍微冷却后均匀地倒入培养皿中。
2.滴加杀菌剂溶液。
将杀菌剂溶液滴加到琼脂平板上，并用移液管在平板上转动，使杀菌剂均匀地分布在琼脂上。
3.检验杀菌剂效果。
取一定量的细菌培养物，将其在琼脂平板上均匀涂布。
4.培养细菌。
将含有细菌培养物的琼脂平板放入预先恒温箱中，设置合适的温度和培养时间。
5.观察抑菌圈。
在培养一段时间后，取出琼脂平板，用显微镜观察平板上是否出现了抑菌圈。
6.测量抑菌圈直径。
使用直尺或量角器等工具测量抑菌圈的直径，并记录结果。
五、实验注意事项1.操作时要注意无菌技术，以避免细菌污染。
2.滴加杀菌剂溶液时要均匀并轻柔，以保证杀菌剂能充分分散在琼脂平板上。
3.培养细菌时要控制好温度和培养时间，以确保细菌能够充分生长。
4.观察抑菌圈时要注意使用合适的放大倍数，以免错过细小的抑菌圈。
5.测量抑菌圈直径时要使用准确的测量工具，以获得准确的结果。
六、实验结果处理根据实验所得的抑菌圈直径数据，可以通过计算其平均值、标准差等统计指标来评估杀菌剂的生物活性。
较大的抑菌圈直径通常表示杀菌剂具有较强的抑菌效果，反之则表示其抑菌效果较弱。
可以将实验结果与已有的标准值进行比较，以判断杀菌剂的生物活性。
七、实验结果分析根据测得的抑菌圈直径结果，可以对杀菌剂的生物活性进行分析。
抑菌圈法实验流程
抑菌圈法实验流程
（1）实验准备：准备相关菌种（二氧化硫克隆体、硝酸盐克隆体等）和试剂；准备法兰管材质的抑菌圈，在它的内部划分两个回路；抑菌圈内
装有空气泵，来实现对空气进行不同强度的抽压，以达到抑菌目的；
（2）实验方法：将抑菌圈里装有的菌种悬液加入到两个回路中，使
用空气泵来实现抽压；在调节空气流量的情况下，可以观察抑菌圈法对菌
种的抑制情况；
（3）数据分析：当抑菌圈的空气流量调节到一定程度时，可以观察
到抑菌圈内的菌种数量有明显的下降；
（4）讨论：抑菌圈法是一种新型的抑菌方法，它可以有效地抑制菌
种的繁殖，有效地减少菌种的数量，保护人类环境。
但是，抑菌圈法也有
一定的缺点，抽压太大会导致菌种基因组的变异，并且会产生抗性菌株，
同时也会使抑菌方法失效。
无机抗菌材料抗菌性能试验方法-检验检疫标准管理信息系统
《无机抗菌材料抗菌性能试验方法》编制说明一、任务来源本标准方法的制定工作，是根据国家出入境检验检疫局下达的制标任务，计划编号2008B034，由辽宁出入境检验检疫局提出起草研究。
二、编制依据本标准方法是根据 GB/T1.1-2000 《标准化工作导则》第一部分：标准的结构和编写规则的要求进行编写的。
无机抗菌材料抗菌性能试验方法是参考国内外有关文献，经研究、改进和大量的验证后而制定的。
经检索查新，国际标准尚无无机抗菌材料抗菌性能试验方法的标准，国内尚无相应的国家标准和行业标准。
三、方法概述国内外研制了各类无机抗菌材料，这些材料具有优异的抗菌性能。
但该类材料的抗菌性能检测在国内尚无统一标准，目前大多参照国外的行业标准，因而检测结果不具有权威性。
日本抗菌制品技术协会SIAA(Society of Industrial-technology for Antimicrobial Articles )1995年推出并于1998年修订了《抗菌制品的抗菌力评价试验法－薄膜密着法》。
该标准于2000年12月编入国家工业标准JIS Z 2801-2000《抗菌加工制品－抗菌性试验方法和抗菌效果》。
在国内，2001年由中国建筑材料科学院负责制定了抗菌建材产品第一个行业标准《抗菌陶瓷制品抗菌性能》(JC/T 897-2002),2002年轻工业部制定了《抗菌塑料－抗菌性能试验方法和抗菌效果》 ( QB/T2591 -2003)行业标准,2003年中国建筑材料科学院负责制定了抗菌建材产品第二个行业标准《建筑用抗细菌塑料管抗细菌性能》，2008年中国石油和化学工业协会负责制定了GB/T 21866-2008 抗菌涂料抗菌性测定法和抗菌效果。
但是，目前我国尚没有针对无机抗菌材料抗菌性能检测的系统、完整的国家标准和行业标准。
鉴于目前国内外尚未见系统、完整的国家标准或行业标准方法，迫切需要建立无机抗菌材料抗菌性能检测的标准检验方法。
日化产品长效抑菌效果的评价方法
日化产品长效抑菌效果的评价方法一、微生物培养法微生物培养法是通过将一定量的日化产品加入培养基中，然后接种微生物，在一定温度下培养一段时间后，观察和测量生长的菌落数来评价抑菌效果。
该方法可以直观地反映微生物的生长情况，从而判断抑菌效果。
二、抑菌圈法抑菌圈法是在琼脂平板上划线接种已知菌种，然后将待测的日化产品涂布于平板上，观察抑菌圈的大小来判断抑菌效果。
该方法简单易行，适用于表面抑菌剂效果的测定。
三、重量法重量法是通过测量抑菌前后样品的质量变化来评价抑菌效果。
该方法适用于能够去除微生物的日化产品效果的测定，如某些洗手液、清洁剂等。
四、表面观察法表面观察法是通过观察实验前后样品表面的变化来判断抑菌效果。
该方法适用于表面杀菌剂效果的测定，如某些消毒液、抗菌湿巾等。
五、残留量法残留量法是通过测量抑菌后样品中有效成分的残留量来判断抑菌效果。
该方法适用于能够定量检测有效成分的日化产品效果的测定。
六、计时法计时法是在一定的时间内，观察抑菌剂对微生物生长的抑制作用，通过比较抑菌剂处理组和对照组微生物的生长情况来判断抑菌效果。
该方法适用于能够观察到微生物生长变化的抑菌剂效果的测定。
七、反复实验法反复实验法是在相同条件下进行多次重复实验，取平均值作为实验结果，以提高实验的准确性和可靠性。
该方法适用于任何需要重复实验的抑菌剂效果的测定。
八、质量控制法质量控制法是通过建立质量控制标准，对实验全过程进行质量监控，以保证实验结果的准确性和可靠性。
该方法适用于任何需要保证实验质量的抑菌剂效果的测定。
九、微生物计数法微生物计数法是通过在琼脂平板上接种一定量的待测微生物样品，在一定温度下培养一段时间后，对菌落进行计数来判断抑菌效果。
该方法适用于能够进行微生物计数的抑菌剂效果的测定。
抑菌试验方法总结用于测定抗菌药物体外抑制细菌生长效力的试验称
抑菌试验方法总结用于测定抗菌药物体外抑制细菌生长效力的试验称为抑菌试验。
通过抑菌实验，可以测定一个药物的最低抑菌浓度，用以评价该药物的抑菌性能，这是抗菌药物的最基本的药效学数据。
主要方法有进行定性测定的扩散法（如抑菌斑试验）和进行定量测定的稀释法（如最低抑菌浓度实验）。
1、定性测定（1）纸片扩散法(disk diffusion test)，K-B法：WHO推荐的全球统一的标准方法。
原理：含有定量抗菌货物的纸睡帖在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。
在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。
质控：标准菌株的抑菌圈直径应落在预期范围内，如果超出该范围，应视为失控而予以纠正。
影响因素：培养基的质量、药敏纸片的质量、接种菌量、试验操作质量、孵育条件、抑菌圈测量工具的精度和质控菌株本身的药敏特性等均能影响试验结果的准确性。
操作方法：按每1000 ml蒸馏水称取Muller-hinton Agar 38 g配备M—H琼脂，按每个平皿(直径9 mm)25 ml进行分装。
将孵育16—24 h的菌种分别接种生理盐水试管中，校正浓度至0.5麦氏标准(相当于1.0×108 CFU／m1)。
用无菌棉签拭蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液后在M—H琼脂表面，均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周。
平板在室温下干燥3—5 min后用无菌镊子将药物纸片紧贴于琼脂表面．置35℃孵育16 18 h。
记录抑菌圈的直径，实验。
重复10次。
主要用于比较不同抗菌物质，或者通过不同方法提取的同一种物质的效果。
（2）打孔法药敏实验：待M—H平板干后，用无菌棉签蘸取菌液(相当于1.0×108CFU／m1)，在培养基平板上密集划线接种。
kb法抑菌圈解读
KB法抑菌圈的解读主要涉及以下几个方面：
1.抑菌圈大小：KB法通过测量抑菌圈的大小来评估抗菌药物的抑菌
效果。
抑菌圈越大，说明抗菌药物的抑菌效果越强。
2.抑菌圈与抗菌药物浓度：抑菌圈的大小与抗菌药物的浓度通常呈
正相关。
随着抗菌药物浓度的增加，抑菌圈也会相应增大。
3.抑菌圈与抗菌药物种类：不同种类的抗菌药物在KB法中产生的抑
菌圈大小可能存在差异。
这反映了不同抗菌药物对测试菌的敏感性不同。
4.抑菌圈与测试菌种类：同一抗菌药物在不同种类的测试菌中产生
的抑菌圈大小也可能存在差异。
这反映了不同种类的细菌对抗菌药物的敏感性不同。
在解读KB法抑菌圈时，需要综合考虑以上几个方面，以全面评估抗菌药物的抑菌效果。
同时，还需要注意实验条件、操作规范等因素对实验结果的影响。
抗菌测试检测标准
抗菌测试检测标准摘要：1.抗菌测试的背景和意义2.抗菌测试的主要方法3.我国对抗菌测试的标准要求4.抗菌测试在实际应用中的重要性5.未来抗菌测试的发展趋势正文：抗菌测试是在医学、卫生、日用品、建筑材料等领域中广泛应用的一种检测技术。
它可以用于检测物品或材料是否具有抗菌性能，为产品研发、生产、质量控制等提供科学依据。
目前，抗菌测试的主要方法有抑菌圈法、滤膜法、琼脂平板法等。
抑菌圈法是通过测定测试物质在平板培养基上形成的抑菌圈的大小来判断其抗菌活性。
滤膜法则是将测试物质涂布在滤膜上，通过测定滤膜对细菌的阻拦效果来评价其抗菌性能。
琼脂平板法则是将测试物质加入培养基中，观察细菌在含有测试物质的培养基上的生长情况，从而判断其抗菌效果。
我国对抗菌测试的标准要求非常严格，我国相关标准规定了各种测试方法的实验步骤、评价指标、实验条件等，确保了测试结果的科学性和准确性。
同时，我国还积极参与国际标准的制定，为国际抗菌测试领域的发展做出贡献。
抗菌测试在实际应用中具有重要意义。
例如，在医疗卫生领域，抗菌药物的合理使用对于治疗感染性疾病至关重要。
在日用品领域，抗菌性能是许多产品的重要卖点，如抗菌毛巾、抗菌餐具等。
在建筑材料领域，抗菌性能可以有效防止建筑物内部的细菌滋生，提高居住者的生活质量。
未来，随着科技的发展，抗菌测试将更加精确、快速、便捷。
例如，基于生物传感技术的抗菌测试方法已经取得了突破性进展，有望在不久的将来投入实际应用。
此外，随着大数据和人工智能技术的发展，抗菌测试的数据处理和分析也将更加智能化。
总之，抗菌测试作为一项重要的检测技术，在各个领域具有广泛的应用前景。
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法work Information Technology Company.2020YEAR实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法一、实验目的学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。
二、实验原理抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。
在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。
其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。
但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。
根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。
三、实验材料供试药剂：速克灵或扑海因。
供试病原菌：番茄灰霉病菌。
实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。
四、实验方法采用管碟法。
将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。
1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。
灭菌蒸馏水为对照。
2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。
在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5 min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。
用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。
抑菌实验
一、菌种(一)、细菌：大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）；(二)、真菌：啤酒酵母（Saccgaromyces cerevisiae）、米曲霉（Aspergillusoryzae）3402、黑曲霉（Aspergillus niger）、叶点霉（Phyllosticta maydis ）和刺盘孢霉（Colletotrichum musae）二、培养基（一）细菌培养液：LB液体：胰蛋白胨10.0g酵母提取物 5.0gNaCl 10.0g10mol/LNaOH 100μL蒸馏水定溶至1.0LpH 7.0~7.4如要配置固体LB培养基，加15.0g琼脂糖/L(二)、真菌培养液：马铃薯培养基(PDA)马铃薯(去皮切块) 200.0g葡萄糖 20.0g琼脂 18.0g，蒸馏水 1000mLpH 自然三、器材培养皿（90mm）、滤纸、三角耙、接种环、试管四、实验步骤(一)、抑菌圈的测定(滤纸片法)1、菌种接种将保存菌种反复转种2次，使菌种新鲜，细菌置30℃，温箱培养1d，霉菌置27℃，温箱培养3d，备抗菌实验用。
2、菌悬液制备在超净台里将转接后生长良好的菌种试管斜面注入适量无菌水(约5mL)，接种环轻刮菌落，摇晃，置旋涡混合器混匀。
3、倒平板在超净台里将培养基倒入平板，每板约15mL左右，水平放置，凝固后倒置放入30℃温箱中，2d后观察是否有菌落生长，若没有则可供下一步实验使用，否则需重新倒平板。
4、涂布在超净台里用枪取0.1ml菌悬液注入平板，放置5min左右后用三角耙涂布均匀，每种菌设置两个重复平板。
5、贴片在超净台里将平板平均分为6个区，对角设置平行组，同时用无菌水做对照组,硫酸链霉素(10U)作阳性对照。
每两张滤纸片(直径1.1cm或0.6cm)为一贴，用镊子夹着滤纸片在样品中轻轻蘸一下后，取出贴在平板的指定位置，轻摁一下使滤纸片牢固，置(正放)4℃冰箱中放24h。
抑菌圈法实验流程
抑菌圈法实验流程
实验目的：通过抑菌圈法检测不同抗生素对细菌的敏感性，为临床治疗提供参考依据。
实验原理：利用纸片或圆筒在琼脂平板上制造抑菌圈，测定不同药物对细菌的抑制能力。
当细菌被抗生素抑制生长时，抑菌圈周围的菌落会出现明显的清晰区域，即抑菌圈。
抑菌圈大小与细菌对该药物的敏感性成正比。
实验步骤：
1. 培养细菌：选取待测菌种，在无菌条件下接种于琼脂平板上，进行预培养。
2. 制备药物纸片：将不同抗生素药物浸泡在无菌纸片中，使纸片充分吸收药物。
3. 在琼脂平板上制造抑菌圈：用无菌铁环或无菌棉签将药物纸片放置于琼脂平板表面，轻轻压实，使药物充分扩散。
然后在纸片周围接种待测菌种，使其均匀生长。
4. 培养细菌：将琼脂平板倒置，放入培养箱中，在适宜的温度下培养细菌。
5. 观察抑菌圈：经过一定时间的培养，观察琼脂平板上细菌的生长状态，记录不同药物纸片周围的抑菌圈大小和形态。
6. 结果分析：根据抑菌圈的大小和形态，判断该菌株对不同药物的敏感性，为临床治疗提供参考。
实验注意事项：
1. 所有操作均在无菌条件下进行，避免外界微生物的污染。
2. 选择合适的药物浓度，避免药物过浓或过稀而影响实验结果。
3. 操作时要注意卫生，避免药物接触到皮肤或口腔。
4. 实验后应及时处理琼脂平板和药物纸片，避免造成环境污染。
实验教案设计：观察抑菌圈实验及其意义
实验教案设计：观察抑菌圈实验及其意义1.实验目的及意义：通过观察抑菌圈实验，使学生了解细菌的生长与分裂以及抑菌圈的形成原理；同时，通过抑菌圈的直接表示，以简明易懂的形式表达药物的抗菌性能，提高学生的实验动手能力和实验数据的分析能力。
2.实验要求及适用范围：本实验适用于中学生物课程的实验教学，要求学生依据教师提供的实验步骤和实验资料，自行设计实验方案，并进行实验操作。
同时，鼓励学生进行实验数据的分析和实验结果的讨论。
3.实验步骤：(1) 准备无菌培养基和细菌样品。
(2) 在无菌平板上，将细菌悬液接种于其上。
(3) 将教师提供的不同浓度的抗生素药片分别放在不同区域的平板上。
(4) 然后在恒温培养箱中进行培养，观测药片周围的细菌生长情况，以判断患者的感染情况。
(5) 结束实验后，观察每个药片周围的抑菌圈，计算药物的最小抑菌浓度，分析药物的抗菌性能。
4.实验结果分析及讨论：(1) 抗菌药物的抑菌效果会随着药物的浓度或种类不同而产生变化，教师可将不同浓度的抗生素药片和不同种类的药物提供给学生进行实验，以便学生比较不同药物的抗菌效果。
(2) 抑菌圈的大小与药物的抗菌效果成正比，药效越强，则抑菌圈的直径越大。
(3) 抑菌圈的形成是由于药物的杀菌成分能够有效抑制菌落的扩散，因此，抑菌圈的直径越大，则表明药物的抑菌能力更强。
(4) 通过实验观察，学生可以了解细菌在平板上生长的情况，以及药物的抗菌性能；同时，通过实验数据的统计和分析，学生可以进一步掌握实验结果的科学分析方法。
5.实验教学的改进方案：(1) 采用多样化的实验教学方法，例如，采用视频、图像等多媒体方式，使学生更加直观地了解实验流程和结果。
(2) 加强对实验设备、实验流程和实验注意事项的讲解，特别是细菌样品的准备和实验操作的无菌要求。
(3) 激励学生积极参与实验讨论和结果分析，鼓励学生发挥自己的创造力和创新精神，提高学生的实验观察能力和实验数据分析能力。
抑菌试验中抑菌圈法的比较研究
抑菌试验中抑菌圈法的比较研究抑菌圈法是一种常用的抑菌试验方法，可以用来测定样品对微生物的抑制活性。
相比传统的微生物抑菌方法，抑菌圈法具有更高的敏感性和准确性。
本文将对抑菌圈法和传统法进行比较研究，以期为相关领域的研究提供参考。
抑菌圈法具有较高的抑菌效果，能够更准确地反映样品对微生物的抑制活性。
相比传统法，抑菌圈法更能敏感地检测出样品的微弱抑菌作用。
这是因为抑菌圈法是通过测量抑菌圈的直径来计算抑菌效果，可以更直观地反映微生物的生长情况。
传统法操作相对简单，对实验设备要求不高，因此适用于一些条件较差的实验室。
而抑菌圈法需要用到精密的培养皿和移液器等设备，操作相对复杂，但可以通过自动化设备减轻工作量。
抑菌圈法具有更高的灵敏度，能够更准确地检测出样品的抑菌效果。
传统法往往需要大量的样品才能达到较好的抑菌效果，而抑菌圈法则只需要少量的样品即可。
抑菌圈法还可以通过观察抑菌圈的颜色和透明度等指标来评估样品的抑菌效果。
通过对抑菌圈法和传统法的比较研究，可以得出以下抑菌圈法在抑菌效果、操作简便性和灵敏度等方面均优于传统法。
尤其是在对样品进行微弱抑菌活性检测时，抑菌圈法具有更高的准确性和可靠性。
因此，在需要进行高精度和敏感度的抑菌试验时，建议采用抑菌圈法。
然而，对于一些条件较差的实验室，传统法仍然是一种可行且实用的选择。
在未来的研究中，可以进一步探讨抑菌圈法的应用范围和局限性，以及如何通过改进实验条件和优化实验方案来提高其准确性和可操作性。
对于传统法，也可以研究如何通过改进实验设备和优化实验流程来提高其准确性和灵敏度，从而为相关领域的研究提供更多有益的信息。
抑菌圈法和传统法各有其优点和适用范围。
在进行抑菌试验时，应根据具体的研究目的、样品性质和实验室条件来选择合适的实验方法，以提高研究结果的准确性和可靠性。
随着人们对健康的度不断提高，家用抑菌型洗涤产品在市场上越来越受到欢迎。
这些产品宣称可以有效地杀灭细菌和病毒，保护家人免受疾病困扰。
抗菌中药实验报告
一、实验目的1. 学习抗菌中药的提取方法，掌握常用提取溶剂及提取工艺。
2. 了解抗菌中药活性成分的检测方法，评估其抗菌活性。
3. 分析不同提取工艺对抗菌中药活性的影响。
二、实验原理抗菌中药的提取主要是通过溶剂法将植物中的有效成分提取出来。
根据植物成分的溶解性质，常用的提取溶剂有水、醇、酸、碱等。
本实验采用水提醇沉法提取抗菌中药，该方法能较好地保留有效成分，同时降低杂质含量。
抗菌中药的活性成分检测方法有多种，本实验采用抑菌圈法测定抗菌中药的抗菌活性。
该方法简单易行，结果准确可靠。
三、实验材料1. 药材：金银花、黄连、黄芩、连翘等。
2. 试剂：氯化钠、硫酸铜、氢氧化钠、乙醇等。
3. 仪器：电热恒温水浴锅、显微镜、抑菌圈测定仪等。
四、实验方法1. 提取工艺（1）取金银花、黄连、黄芩、连翘等药材，粉碎成粗粉。
（2）将粗粉置于提取罐中，加入适量水，加热提取1小时。
（3）过滤，取滤液，加入乙醇，使醇沉。
（4）过滤，收集沉淀，晾干，得到抗菌中药提取物。
2. 抗菌活性测定（1）将抗菌中药提取物溶解于无菌生理盐水中，配制成一定浓度的溶液。
（2）取无菌琼脂平板，加入金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株，均匀涂布。
（3）将抗菌中药溶液滴加于平板表面，直径约为6mm。
（4）37℃恒温培养24小时，观察抑菌圈大小。
五、实验结果与分析1. 不同提取工艺对抗菌中药活性的影响（1）水提醇沉法：提取得到的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株的抑菌圈直径分别为10mm、8mm。
（2）醇提水沉法：提取得到的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株的抑菌圈直径分别为7mm、5mm。
（3）酸提碱沉法：提取得到的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株的抑菌圈直径分别为6mm、4mm。
结果表明，水提醇沉法提取的抗菌中药活性成分含量较高，抗菌活性较强。
2. 抗菌中药提取物对不同菌株的抗菌活性（1）金黄色葡萄球菌：水提醇沉法提取的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为10mm，具有较好的抗菌活性。
抗菌实验—抑菌圈法
抑菌圈实验说明抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式，主要用于测定杀菌防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。
通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌防霉剂品种。
用具和材料精品文档，你值得期待霉菌培养皿，无菌吸管（或针筒），圆片滤纸（直径2cm），带玻璃珠的无菌水，带过滤漏斗的三角牌，镊子，接种针（环），熔化状态的琼脂培养基（最好保温于45℃左右水浴中），一定浓度的药剂，供试验用的菌种。
试验过程1.用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中，用手振荡数分钟使孢子分散，过滤后制成混合孢子悬液。
2.用无菌吸管（或针筒）向各培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液0.5mL。
3.向各培养皿内注入15Ml~20ml的熔化状琼脂培养基（约45℃），将菌液与培养基混合均匀，待其冷却。
4.用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍片刻，取出置于带菌培养基平板的中央，盖上盖子5.置适宜温度下，培养2~3d，观察滤纸片圆片周围抑菌圈的有无及大小。
注意事项1.所有的操作用具和材料都要事先做灭菌处理，操作必须在无菌室（或无菌箱）内于火焰旁进行。
2.霉菌、细菌、酵母菌等各种微生物都必须分别配置混合菌液，即这里指的混合菌液是霉菌或酵母菌等诸种菌的分别混合液，并非霉菌、细菌和酵母菌的混合液。
3.混合菌液的浓度一般为106~108cfu/mL.4.倒入培养皿的琼脂培养基温度不能太高（一般为45℃左右），否则会引起微生物死亡。
也不能太低，因为琼脂会很快凝结，以致搅拌不均匀，影响试验结果。
5.各种微生物的最适生长温度不同（例如霉菌一般为25~30℃，细菌一般为32~37℃等），恒温培养时宜分开放置。
结果评判由于滤纸圆片所吸附的药液慢慢向四周扩散，因此在滤纸片的周围就出现清晰的抑菌圈（加入该防霉剂对供试菌有抑制效果）。
抑菌圈的大小代表药剂抗菌力的高低。
在一定的药剂浓度范围内，药剂的浓度越高则抑菌圈的直径越大。
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法摘要：本实验主要研究了七杀菌剂的生物活性测定方法，抑菌圈法。
该方法通过在琼脂平板上播种细菌，再在平板上施加一定浓度的七杀菌剂，观察并测量周围的抑菌圈直径，从而评估七杀菌剂对细菌的抑制作用。
实验结果表明，抑菌圈直径与七杀菌剂浓度呈正相关关系，且抑菌圈直径越大，表示七杀菌剂的抑菌效果越好。
通过该方法可以快速、简便地评估七杀菌剂的生物活性，为进一步研究其抗菌机制和优化配方提供了参考。
关键词：七杀菌剂；抑菌圈法；生物活性；抑菌圈直径一、引言七杀菌剂是一类特殊作用机制的植物杀菌剂，具有广谱杀菌、低滴效、低残留、不发生抗性等优点，被广泛应用于农业防病生产中。
评估七杀菌剂的生物活性是研究抗病机理、筛选优良品种和优化配方的重要手段。
目前，常用的七杀菌剂生物活性测定方法包括最小抑菌浓度法、抑菌圈法和微量滴定法等。
本实验采用抑菌圈法对七杀菌剂的生物活性进行测定，该方法简单易行、时间短，能够客观直观地评估抗菌剂的抑菌效果，被广泛应用于杀菌剂的筛选和评估中。
二、材料与方法2.1实验材料-七杀菌剂：根据实验需要选择合适的七杀菌剂；-革兰氏染色培养基：包括琼脂和所需培养成分；-细菌：根据实验需要选择合适的细菌菌种；- 培养皿：直径90 mm的培养皿；-无菌棉花：消毒后用于吸水；-直尺：用于测量抑菌圈的直径。
2.2实验步骤步骤一：制备琼脂平板1)按照革兰氏染色培养基的配方将琼脂和所需培养成分溶解在适量的蒸馏水中；2)加热溶液，使其均匀溶解；3)微量加热，使溶液达到沸腾状态；4)关火，冷却至50-60°C左右；5)待溶液冷却至室温，但还能滴落时，加入适量的细菌菌液；6)快速均匀摇晃培养皿，使菌液均匀分布；7)等待琼脂凝固，形成琼脂平板。
步骤二：制备七杀菌剂根据使用七杀菌剂的需要，按照使用说明书中的配方调配适量的七杀菌剂浓度。
步骤三：进行抑菌实验1)在琼脂平板表面平均涂布一层细菌菌液；2)在涂布完成后，使用消毒的锥形杯钻按规定距离在琼脂平板上扎孔；3)将七杀菌剂溶液滴入孔内，注意控制滴入的量和浓度；4)将培养皿倾斜，使溶液均匀涂布在琼脂平板上；5)撤去孔内的溶液，用无菌棉花吸干孔内的溶液；6)将培养皿倒置放置于恰当的环境中进行培养；7)培养一定时间后，观察并测量抑菌圈的直径。
抗菌实验—抑菌圈法
抑菌圈实验说明抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式，主要用于测定杀菌防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。
通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌防霉剂品种。
用具和材料霉菌培养皿，无菌吸管（或针筒），圆片滤纸（直径2cm），带玻璃珠的无菌水，带过滤漏斗的三角牌，镊子，接种针（环），熔化状态的琼脂培养基（最好保温于45℃左右水浴中），一定浓度的药剂，供试验用的菌种。
试验过程1. 用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中，用手振荡数分钟使孢子分散，过滤后制成混合孢子悬液。
2. 用无菌吸管（或针筒）向各培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液0.5mL 。
3. 向各培养皿内注入15Ml~20ml 的熔化状琼脂培养基（约45℃），将菌液与培养基混合均匀，待其冷却。
4. 用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍片刻，取出置于带菌培养基平板的中央，盖上盖子5. 置适宜温度下，培养2~3d，观察滤纸片圆片周围抑菌圈的有无及大小。
注意事项1. 所有的操作用具和材料都要事先做灭菌处理，操作必须在无菌室（或无菌箱）内于火焰旁进行。
2. 霉菌、细菌、酵母菌等各种微生物都必须分别配置混合菌液，即这里指的混合菌液是霉菌或酵母菌等诸种菌的分别混合液，并非霉菌、细菌和酵母菌的混合液。
3. 混合菌液的浓度一般为106~108cfu/mL.4. 倒入培养皿的琼脂培养基温度不能太高（一般为45℃左右），否则会引起微生物死亡。
也不能太低，因为琼脂会很快凝结，以致搅拌不均匀，影响试验结果。
5. 各种微生物的最适生长温度不同（例如霉菌一般为25~30℃，细菌一般为32~37℃等），恒温培养时宜分开放置。
结果评判由于滤纸圆片所吸附的药液慢慢向四周扩散，因此在滤纸片的周围就出现清晰的抑菌圈（加入该防霉剂对供试菌有抑制效果）。
抑菌圈的大小代表药剂抗菌力的高低。
在一定的药剂浓度范围内，药剂的浓度越高则抑菌圈的直径越大。
抑菌实验
四、抑菌试验1．Optochin敏感试验(1)原理：Optochin(奥普托欣)是盐酸乙基氢化羟基奎宁的商品名。
对肺炎链球菌有特异抑制作用，其作用机制可能是干扰叶酸生物合成作用，而对其它链球菌则无此作用。
(2)方法：用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，贴上一张含5μg奥普托欣纸片，置烛缸或二氧化碳孵箱，35℃孵育18~24h，观察结果。
(3)结果：抑菌圈直径大于14mm为敏感，小于或等于14mm为阴性。
(4)应用：主要用于肺炎链球菌（敏感）与其它链球菌（耐药）的鉴别。
2．杆菌肽敏感试验(1)原理：A群链球菌对杆菌肽几乎是100%敏感，而其它群链球菌对杆菌肽通常耐药。
故此试验可对链球菌进行鉴别。
(2)方法：用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴一张含0.04U 的杆菌肽纸片，置35℃孵育18~24h，观察结果。
(3) 结果：抑菌圈直径大于10mm为敏感，小于10mm为耐药。
(4)应用：主要用于A群与非A群链球菌的鉴别。
从临床分离的菌株中有5%~15%非A群链球菌也对杆菌肽敏感，如6%的B群链球菌、7.5%的C群链球菌和G群链球菌等。
3．O/129试验(1)原理：O/129（2，4二氨基-6，7-二异丙基喋啶）能抑制弧菌属、发光杆菌属和邻单胞菌属细菌生长，而气单胞菌属和假单胞菌属细菌则耐药。
(2)方法：用棉拭子将待检菌菌悬液均匀涂布于碱性琼脂平板上，将10μg/片及150μg/片的O/129诊断纸片贴于平板上，置35℃孵育18~24h，观察结果。
(3)结果：出现抑菌圈者表示敏感，无抑菌圈者为耐药。
(4)应用：主要用于弧菌属、邻单胞菌属与气单胞菌属的鉴别，弧菌属和邻单胞菌属菌为敏感，气单胞菌属菌为耐药。
其它菌属有发光杆菌属为敏感，假单胞菌属为耐药。
细菌药敏试验2010-12-09 15:40:52| 分类：专业文章 | 标签：高校公共卫生 |字号订阅各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床，对控制细菌性传染病的流行至关重要。
抑菌圈法实验流程
抑菌圈法实验流程抑菌圈法（Kirby-Bauer法）是一种常用的抗菌药物敏感性试验方法，用于评估抗菌药物对细菌的抑菌效果和选择性。
实验流程如下：1.材料准备- 霍乱弧菌（Vibrio cholerae）培养基：将霍乱弧菌分离菌落接种到琼脂平板上，培养过夜。
-纯培养的霍乱弧菌菌液：选择一颗单菌落，将其转移到无菌培养基中，培养到对数生长期。
-抗菌药物纸材：将抗生素敏感纸片切成适当大小的圆片。
-灭菌钎子：用于将纸材固定在平板上。
-显微镊子：用于取出抗生素纸片。
2.制备琼脂培养基平板-在无菌条件下，将琼脂培养基加热至溶解。
-将琼脂培养基均匀倒入培养皿中。
-放置琼脂培养基凝固。
3.制备菌液悬液-用无菌生理盐水洗涤培养的霍乱弧菌菌落，使其悬浮在生理盐水中。
-用光度计测量悬浮液的浓度，调整到0.5的麦克斯韦尔稀释系数。
4.菌液接种-用梅林巴赫管（或吸管）吸取菌液悬液，通过刮平盖玻片法将其涂抹在琼脂平板上。
-用无菌棉签将菌液均匀涂抹在琼脂平板上。
5.抗生素纸片覆盖-用灭菌钎子将抗生素纸材固定在琼脂平板表面。
-用无菌镊子将预先标定好的抗生素纸片覆盖在菌液层上。
6.孵育-将平板倒置，放入37℃恒温培养箱中孵育24小时。
7.测量抑菌圈直径-孵育后，观察平板上的抗生素纸片周围是否出现抑菌圈。
抑菌圈呈透明带状。
-用尺度卡测量抑菌圈的直径。
8.数据分析-根据抑菌圈的直径，查阅相关参考表确定该抗生素对该菌株的敏感性。
注意事项：-所有步骤都要在无菌条件下进行，以避免外部细菌的干扰。
-保持实验环境的洁净和安全，并进行相应的实验室安全措施。
-实验中要保持手部和工具的清洁，避免交叉污染。
-实验后应妥善处置实验废弃物，如纸材和实验用具。
抑菌圈法是一种简单、可靠的药敏试验方法，可用于评估抗生素的抑菌效果和终止治疗浓度建议。
通过该试验可以指导临床医生合理使用抗菌药物，防止药物滥用和耐药菌株的产生。
同时，该方法也可以用于研究新发现的抗生素的抗菌特性和敏感度。
细菌抑菌圈法抑制率算法
细菌抑菌圈法抑制率算法
如果平板是含菌平板，则抑菌率=(Bd-Bck)/Bd*100
如果平板式抑制物质，则抑菌率=(Bck-Bd)Bck*100
Bck是对照直径，Db是处理直径。
(对照组菌落直径－处理组菌落直径)/(对照组菌落直径－菌饼
直径)×100%查文献看到的OD值换算抑菌率的计算公式，有个疑问，如果试验设不同浓度或者不同组合的药物，那么本身这个药物就会有这个OD值，而且之间的差别还挺大的，那么这种情况下，各组合换算出来的抑菌率还能直接拿来比较分析么？
抑菌率%=[(空白菌液吸光度值一样品菌液吸光度值)X100/空白
菌液吸光度值]%用牛津杯法测抑菌作用时怎么计算抑菌率？抑菌率=菌落直径（CK）-菌落直径（处理）/菌落直径（CK）杀菌率和抑菌率有什么不同国标规定：能杀死＞50%细菌的产品才能标称有抑菌效果；能杀死＞90%细菌的产品才能标称有杀菌效果。
杀菌率和抑菌率都是杀菌能力的指标。
50%-90%称为抑菌率，＞90%称为杀菌率。
杀菌跟抑菌的作用方式是不一样的，抑菌的意思就是抑制细菌的生长，抑菌是抑制细菌不让其继续繁殖，而杀菌是破坏细菌细胞的结构，让细菌死亡。
抑菌跟杀菌只是一字之差，可以通过字面意思来理解，一个是杀掉细菌，一个是抑制细菌的生长。
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抑菌圈实验说明
抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式，主要用于测定杀菌防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。
通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌防霉剂品种。
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霉菌培养皿，无菌吸管（或针筒），圆片滤纸（直径2cm），带玻璃珠的无菌水，带过滤漏斗的三角牌，镊子，接种针（环），熔化状态的琼脂培养基（最好保温于45℃左右水浴中），一定浓度的药剂，供试验用的菌种。
试验过程
1.用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中，用手振荡数分钟使孢子分散，
过滤后制成混合孢子悬液。
2.用无菌吸管（或针筒）向各培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液0.5mL。
3.向各培养皿内注入15Ml~20ml的熔化状琼脂培养基（约45℃），将菌液与培养基混合均
匀，待其冷却。
4.用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍片刻，取出置于带菌培养基平板的中央，
盖上盖子
5.置适宜温度下，培养2~3d，观察滤纸片圆片周围抑菌圈的有无及大小。
注意事项
1.所有的操作用具和材料都要事先做灭菌处理，操作必须在无菌室（或无菌箱）内于火焰
旁进行。
2.霉菌、细菌、酵母菌等各种微生物都必须分别配置混合菌液，即这里指的混合菌液是霉
菌或酵母菌等诸种菌的分别混合液，并非霉菌、细菌和酵母菌的混合液。
3.混合菌液的浓度一般为106~108cfu/mL.
4.倒入培养皿的琼脂培养基温度不能太高（一般为45℃左右），否则会引起微生物死亡。
也不能太低，因为琼脂会很快凝结，以致搅拌不均匀，影响试验结果。
5.各种微生物的最适生长温度不同（例如霉菌一般为25~30℃，细菌一般为32~37℃等），
恒温培养时宜分开放置。
结果评判
由于滤纸圆片所吸附的药液慢慢向四周扩散，因此在滤纸片的周围就出现清晰的抑菌圈（加入该防霉剂对供试菌有抑制效果）。
抑菌圈的大小代表药剂抗菌力的高低。
在一定的药剂浓度范围内，药剂的浓度越高则抑菌圈的直径越大。
此法同样适合于测定单个菌的抗菌效果。
光阴无涯的荒原，于一段温柔往事里，缄默不语。
一幕风雪中捧花的馈赠，默记下一种花的笺语，深情，香软。
韶华匆促，握不住指缝穿行的流风，那一程隔山隔水的约定，又岂是惧怕了沿途相迎的风雨？！又岂是今生能够翻越的遥迢？！旷寂无声的世界，将自己放逐流年深处，循着隐约悠扬的琴声，那一片花叶缤纷的伏途迷津，终有个人来牵手引路，引入一处雪月圆满的幸福。
盈盈冬情开一朵风花，落雪凝香的清冷，蛰伏在月光中，如鳞带殇的剥落，是谁，在用心收藏。
思绪冉冉，挽起云影风歌的手，冬雪藏不住的风情，露出一角红藕的娇俏。
那年，那月的情话，是经年凉不透的月色，任时光沦陷，沧桑了容颜，依然，无约挂起。
你用泪水打碎的一杯月光，初一、十五都在水中，一个让人看到圆满，一个让人目睹残缺。
铺一宣花的颜色，写一首泪水研墨的诗，托风，寄给远走的背影，不需要任何人读懂。
我写的新词，你却说，是旧人的言语。
换一张面孔相见，为何？依然恍若故人。
人世半生，紫梦一卷。
太多难舍的眷恋，沦为荒凉的记忆，又仿似格外的平宁与安妥；太多未尽的情意，缀成一个个封尘的故事，染了风月的沉香与古意。
一纸淡描浅画的书写，将饮露陈年收藏，雨水洗过的明亮，花吹雪落的清隽。
看惯岁月中的风云变幻，才明白，有些人，不必太用心，有些事，不可太执意。
嗔痴，虚妄，穿过迢迢千里的冷冽，相遇了内心的寂静山河。
尘光潋滟的心畔，遗忘了彼岸花繁的邀约，徐徐千帆落影，无言，亦厚重。
岁月无声流转，年年温馨刻画的印记，风物明净一般，润一份清浅心境。
花凝朝露，不染风尘，光阴永恒的底色，一如初遇的白。
一座灵魂安逸的神秘园中，执爱柔软的触碰，不曾有丝缕的伤害，默然陪伴的温柔，恰如一抹轻暖坐拥春懿。
一朵心花，为一人绽放，一种情怀，为一人开启。
风浅唱，水清吟，一起挽手走过的山山水水，织锦一袭素艳的罗衣时光。
生命的恒长里，凭自己的能力去背负。
那些情深意重，那些被自己宽宥的爱，深沉于打捞不起的海洋。
那个桃红李白的春天，结出一季丰硕的秋情，一片贫瘠的旧年往事，开一朵雪花的芬芳与感动。
感谢岁月恩慈，曾以为的奢侈，无需卑微地祈求，都已意外地拥有。
感谢光阴成全，曾用心许下的承诺，都能够不失信地准时兑现。
光阴无涯的荒原，于一段温柔往事里，缄默不语。
一幕风雪中捧花的馈赠，默记下一种花的笺语，深情，香软。
韶华匆促，握不住指缝穿行的流风，那一程隔山隔水的约定，又岂是惧怕了沿途相迎的风雨？！又岂是今生能够翻越的遥迢？！旷寂无声的世界，将自己放逐流年深处，循着隐约悠扬的琴声，那一片花叶缤纷的伏途迷津，终有个人来牵手引路，引入一处雪月圆满的幸福。
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那年，那月的情话，是经年凉不透的月色，任时光沦陷，沧桑了容颜，依然，无约挂起。
你用泪水打碎的一杯月光，初一、十五都在水中，一个让人看到圆满，一个让人目睹残缺。
铺一宣花的颜色，写一首泪水研墨的诗，托风，寄给远走的背影，不需要任何人读懂。
我写的新词，你却说，是旧人的言语。
换一张面孔相见，为何？依然恍若故人。
人世半生，紫梦一卷。
太多难舍的眷恋，沦为荒凉的记忆，又仿似格外的平宁与安妥；太多未尽的情意，缀成一个个封尘的故事，染了风月的沉香与古意。
一纸淡描浅画的书写，将饮露陈年收藏，雨水洗过的明亮，花吹雪落的清隽。
看惯岁月中的风云变幻，才明白，有些人，不必太用心，有些事，不可太执意。
嗔痴，虚妄，穿过迢迢千里的冷冽，相遇了内心的寂静山河。
尘光潋滟的心畔，遗忘了彼岸花繁的邀约，徐徐千帆落影，无言，亦厚重。
岁月无声流转，年年温馨刻画的印记，风物明净一般，润一份清浅心境。
花凝朝露，不染风尘，光阴永恒的底色，一如初遇的白。
一座灵魂安逸的神秘园中，执爱柔软的触碰，不曾有丝缕的伤害，默然陪伴的温柔，恰如一抹轻暖坐拥春懿。
一朵心花，为一人绽放，一种情怀，为一人开启。
风浅唱，水清吟，一起挽手走过的山山水水，织锦一袭素艳的罗衣时光。
生命的恒长里，凭自己的能力去背负。
那些情深意重，那些被自己宽宥的爱，深沉于打捞不起的海洋。
那个桃红李白的春天，结出一季丰硕的秋情，一片贫瘠的旧年往事，开一朵雪花的芬芳与感动。
感谢岁月恩慈，曾以为的奢侈，无需卑微地祈求，都已意外地拥有。
感谢光阴成全，曾用心许下的承诺，都能够不失信地准时兑现。