甲基化试剂盒中文说明书
人体hTERT基因甲基化检测试剂盒产品说明书(中文版)
人体hTERT基因甲基化检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途人体hTERT基因甲基化检测试剂是一种旨在通过化学方法使基因组中的所有胞嘧啶（CYTOSINE）转变成尿嘧啶（URACIL），而保留了所有甲基化的胞嘧啶，经过甲基化特异性PCR扩增，探测到人体人体端粒酶逆转录酶基因hTERT启动子CpG岛甲基化信息的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
可以被用于人体人体端粒酶逆转录酶基因hTERT相关的表观遗传学研究。
产品即到即用，性能稳定，操作简便，转化保证。
技术背景在基因的启动子区域（promotor region）通常存在一些富含重复双核苷酸“CG”的区域，称为“CpG岛”（CpG island）。
在人类基因组内，存在有近3万个CpG岛。
这些CpG岛不仅是基因的一种标志，而且还参与基因表达的调控和影响染色质的结构，更是DNA甲基化的唯一位置。
CpG岛甲基化形态的扫描分析是基因表达和表观基因组学的主要课题。
人体端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase；hTERT），又称hTRT、hTCS1 和hEST2，是端粒酶的核心结构，即催化亚体（catalytic subunit）。
hTERT的功能性表达是端粒酶获得活性的前提。
hTERT可以激活端粒酶，使细胞获得永生化。
hTERT是端粒酶活性的限速决定成分，其mRNA表达水平与端粒酶活性之间具有密切的相关性。
hTERT是一单拷贝基因，定位于5q15.33，属于逆转录酶家族，具有进化上的保守性，序列总长约35kb，由16个外显子和15个内含子组成。
端粒酶特异性T-motif和7个同源保守序列的RT-motif分别位于不同的外显子上。
hTERTmRNA 还有7种不同的剪切转录本，分为缺失型与插入型两类。
一旦突变或甲基化，会造成细胞繁殖调控机制缺失，而致肿瘤或细胞衰老等。
产品内容缓冲液（Reagent A） 2 X 1.5 毫升变性液（Reagent B）250微升处理液（Reagent C）1毫升转化液（Reagent D）12毫升封隔液（Reagent E）3毫升净化液（Reagent F）20毫升萃取液（Reagent G）40毫升浓缩液（Reagent H）2毫升助沉液（Reagent I）20微升沉淀液（Reagent J）10毫升清理液（Reagent K）20毫升保存液（Reagent L）1毫升扩增液（Reagent M）900微升补充液（Reagent N）1毫升U引物F（Reagent O）20微升U引物R（Reagent P）20微升M引物F （Reagent Q）20微升M引物R（Reagent R）20微升针筒离心柱20套产品说明书1份保存方式保存MB处理液（Reagent C）、MB转化液（Reagent D）、MB助沉液（Reagent I）、MB扩增液（Reagent M）、MB补充液（Reagent N）、MB U引物F（Reagent O）、MB U引物R（Reagent P）、MB M引物F （Reagent Q）和MB M引物R（Reagent R）在－20℃冰箱里；MB净化液（Reagent F）和MB针筒离心柱保存在室温下；其余的保存在4℃冰箱里；MB处理液（Reagent C）和MB转化液（Reagent D）避免光照；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品操作的容器2.0毫升离心管：用于样品操作的容器恒温水槽：用于孵育反应物微型台式离心机：用于沉淀样品或去除杂质涡旋震荡仪：用于混匀反应物真空泵：用于去除样品中的液体成分针筒挤压塞：用于去除样品中的液体成分PCR仪：用于样品扩增PCR管或平板：用于PCR反应的容器测序试剂盒：用于测序前的产物处理实验步骤实验开始前，将MB处理液（Reagent C）和MB转化液（Reagent D）从－20℃冰箱中取出，置入室温下。
QIAGEN-DNA甲基化试剂盒说明中文版
Q I A G E N-D N A甲基化试剂盒说明中文版-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1QIAGEN EpiTect® Bisulfite•重亚硫酸盐处理DNA时，需要经高盐浓度、高温和低PH条件，会导致DNA断裂和片段化，并在随后的纯化过程中丢失，所以需要大量的input DNA•重亚硫酸盐转化未甲基化的胞嘧啶，转化率超过99%•Bisulfite Mix 足够做8个反应，用时要将Bisulfite Mix溶于800μl RNase-freewater中，溶解的Bisulfite Mix 在-20℃可以保存4周•DNA Protect Buffer 能保护重亚硫酸盐处理的DNA在高温、低ph条件下被片段化•Carrier RNA 能提高小量DNA（小于500pg，体积大于40μl）绑定在回收柱滤膜上的效率，帮助核酸沉淀；总量大于100ng的基因组DNA没有必要加Carrier RNA•EpiTect Bisulfite Kit在-20℃可以保存3年；可以适用于大范围的DNA量，input DNA范围为1ng~2μg；模板DNA片段范围可以在500bp~30kb 之间ProtocolDNA量在1ng~2μg之间，体积20μl以上开始前的准备重点：•Bisulfite Mix 足够做8个反应，如果样本少于8个，可以把溶解的Bisulfite Mix 保存于-20℃，4周内并不会影响其性能•DNA Protect Buffer在加入DNA–Bisulfite Mix后会由绿变蓝（step 2），表明溶液混合很充分且PH值正确•所有的离心分离步骤均在室温（15–25°C）下完成开始前准备的东西：•加入30ml乙醇（96%~100%）到Buffer BW中，室温（15–25°C）保存，使用之前摇匀•加入27ml乙醇（96%~100%）到Buffer BD中，2~8℃保存，使用之前摇匀，使用之后要立即盖上盖子。
艾德科技m6A RNA甲基化文库构建试剂盒说明书
*仅用于科学研究，不用于诊断与治疗。
请随时跟我们索取并使用最新版本的说明书。
m 6A RNA 甲基化文库构建试剂盒（测序版）此品非常适合从广泛的物种比如从哺乳类动物，植物，真菌和细菌，不仅如此，还包括培养细胞与新鲜和冷冻的组织等感兴趣的样本中提取总RNA 来富集片段化的含有m6A 的RNA 。
整个实验时间不到6小时。
手动操作不到1小时。
目录号：A-P-9016（24次、12次）操作手册在您收到定购的产品时，请确认操作手册是配套的！同时，有翻译不妥的地方还请各位老师批评指正！反馈信箱：2021年11月，第1版，对应英文第20210915版艾德科技(北京)有限公司A&D TechnologyCorporation扫我收藏分享，还有机会拿红包哦！目录表目录表 (2)试剂盒组成 (3)运输和保存 (4)配套器材(自备) (4)重点提示 (4)说明 (5)一般特性 (5)产品简介 (6)原理/步骤 (7)用法 (8)操作手册为了得到最好的实验结果，在实验开始前，请通读这个操作手册。
(8)附录 (13)凝难解答 (13)定购信息 (14)推荐产品 (15)相关产品 (15)如何下单 (15)试剂盒组成内容A-P-9016-12(12次)A-P-9016-24（24次）保存条件WB(Wash Buffer)15ml30ml4°C CB(Capture Buffer)2ml4ml常温NDE(Nuclear Digestion Enhancer)150ul300ul常温CEM(Cleavage Enzyme Mix)*30ul60ul–20°C m6A Antibody(1mg/ml)*25ul50ul–20°C Non-Immune IgG(1mg/ml)*10ul20ul4°C PDB(Protein Digestion Buffer) 2.5ml5ml常温Proteinase K(10mg/ml)*50ul100ul4°C Affinity Beads*50ul100ul4°C RPS(RNA Puritication Solution)300ul600ul常温NA Binding Beads*30ul60ul4°C Elution Buffer1ml2ml常温内容A-P-9016-12(12次)A-P-9016-24（24次）保存条件5X Reaction Bufffer*100ul200ul–20°C RT Enzyme*13ul26ul–20°C Adaptor-A（10uM）*28ul56ul–20°C Reaction Enzyme Mix*25ul50ul–20°C Adaptor-B（10uM）*28ul56ul–20°C MQ Binding Beads* 1.8ml 3.6ml4°C 2X HiFi PCR Master Mix*160ul320ul–20°C Primer U（10uM）*15ul30ul–20°C Primer I（10uM）*15ul30ul–20°C 使用手册11常温运输和保存该试剂盒分二部分运输，第一部分是在室温环境下；第二部分需在4°C加冰袋运输。
EZ DNA甲基化试剂盒-Gold
EZ DNA Methylation-Gold KitEZ DNA甲基化试剂盒-GoldCatalog No. D5005Highlights在 3 小时内完全转化富含GC的DNA.两次加热变性的反应步骤简化了由未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶的过程.没有DNA 沉淀.并且通过柱层析一步完成DNA的纯化和脱硫.洗脱的超纯DNA 对于一系列的分子生物分析是非常理想的。
描述EZ DNA Methylation-Gold KitTM 是我们EZ DNA Methylation Kit产品的改进版. EZ DNA Methylation-Gold Kit 将DNA 变性过程和亚硫酸氢盐转变过程转化为一步.此步骤采用温度变性来取代以前方案中使用氢氧化钠的化学变性过程. 经过DNA亚硫酸氢盐转变,试剂盒可大量回收到DNA .两种试剂盒都是基于在胞嘧啶与亚硫酸氢钠之间发生的使胞嘧啶转变为尿嘧啶的三步反应. EZ DNA Methylation-Gold 与EZ DNA Methylation Kits 都采用创新的柱内脱磺酸技术来减少不必要的DNA沉淀步骤以便每次都可以提供给研究人员较好的结果.试剂盒的设计可以减少模版降解和纯化过程中的DNA损失, 并且完全转化未甲基化的胞嘧啶.回收的DNA对于PCR扩增、限制性内切酶消化、测序、微阵列等下游分析是很理想的. 下图是EZ DNA Methylation-Gold Kit所呈现出的结果.在经过亚硫酸氢盐处理后的DNA 测序结果。
使用EZ DNA Methylation-Gold Kit处理的甲基化的CmpG (在#5核苷酸位点)DNA。
回收的DNA通过PCR来扩增并且直接测序。
在#5位置上甲基化的胞嘧啶仍然保持完整，当未被甲基化的胞嘧啶(i.e., positions #7, 9, 11, 14 and 15)通过亚硫酸氢盐处理完后全部转化为尿嘧啶。
试剂制备CT Conversion Reagent的制备试剂盒中所提供的CT Conversion Reagent是固体混合物并且一定要在首次使用前制备好. 通过添加900 μl 水, 50 μl 的M-Dissolving Buffer, 和300 μl 的M-Dilution Buffer 到一管的CT Conversion Reagent中. 在室温下溶解并且震荡10分钟或在摇床上摇动10分钟. 如果看到没有溶解的试剂是很正常的, 因为在溶液中的CT Conversion Reagent 已经达到饱和状态.在使用之前将CT Conversion Reagent 溶液在室温(20°C -30°C)下避光保存.每管的CT Conversion Reagent 是针对10次DNA 处理设计的.为了得到较好的结果, CT Conversion Reagent 应当在制备后立即使用.如果不立刻使用的话, CT Conversion Reagent 溶液可以在-20°C存储1星期.而且在使用之前存储的CT Conversion Reagent 溶液一定要在室温下解冻并且通过震动或颠倒2分钟来混合. CT Conversion Reagent 对光很敏感,所以要尽量减少在光下的暴露.M-WASH BUFFER的制备添加24ml (对于200次的D5006应为96ml) 100%的乙醇到M-WASH BUFFER中来制备最终可以使用的M-WASH BUFFERProtocol每次制备的DNA 范围在500 pg 到 2 μg之间. 最佳量为200-500 ng.在PCR管中添加130 μl 的CT Conversion Reagent 到每20 μl DNA 样品中. 如果DNA 样品的体积小于20 μl, 则用水来弥补差量. 通过轻弹试管或移液器操作来混合样品.For Example: 4 μl DNA 样品, 加入16 μl 水, 130 μl CT Conversion ReagentNote: 对于DNA 体积>20 μl, 就要调整CT Conversion Reagent的制备过程. 对于每增加10 μl DNA样品体积来说，水的量就要随之减少100 μl.例如, 40 μl DNA 样品, 就要添加700 μl来制备CT Conversion Reagent. DNA 样品的最大体积为每次转化反应50 μl.不要调整M-Dissolving Buffer 或M-Dilution Buffer的体积.将样品管放到循环变温器并按以下步骤操作:1. 98°C 放置10 分钟2. 64°C放置2.5 小时3. 立刻进行下述操作或者在4°C 下存储(最多20小时).添加600 μl 的M-Binding Buffer 到Zymo-Spin IC Column 中，并将柱放如试剂盒所提供的Collection Tube中.装填样品(从步骤2)到Zymo-Spin IC? Column 含有M-Binding Buffer. 盖上盖将柱颠倒数次来混合样品.全速(>10,000 x g)离心30 秒. 去除流出液.添加200 μl 的M-Wash Buffer 到柱中. 全速离心30 秒.添加200 μl 的M-Desulphonation Buffer 到柱中并且在室温(20 °C- 30 °C) 下放置15-20 分钟. 在培养后, 全速离心30 秒.添加200 μl 的M-Wash Buffer 到柱中. 全速离心30 秒. 再添加200 μl 的M-Wash Buffer 并且离心30 秒.直接添加10 μl 的M-Elution Buffer 到柱基质中. 将柱放置在 1.5 ml 的管中. 全速离心来洗脱DNA.DNA 可立刻进行分析或储存在低于-20°C 下以备以后使用. 我们建议您对于每次PCR使用2 - 4 μl 洗脱的DNA.订购信息产品描述编号试剂规格EZ DNA D5005 50 rxns.Methylation-Gold Kit D5006 200 rxns.。
EpiMethy DNA 甲基化检测试剂 说明书
EpiMethy TM DNA甲基化检测试剂盒用户手册EpiMethy TM B isulfite Conversion KitUser Manual产品简介：DNA甲基化是一种表观遗传修饰，DNA甲基转移酶（Dnmt）催化S-腺苷甲硫氨酸作为供体，将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶。
CG二核苷酸是最主要的甲基化位点，它在基因组中呈不均匀分布，存在高甲基化、低甲基化和非甲基化三种状态。
DNA甲基化能关闭某些基因的活性，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。
DNA甲基化对人类表观遗传、胚胎发育、基因印记、等位基因失活及肿瘤发生发展都起到重要作用。
EpiMethy TM Bisulfite Conversion Kit是一款用于DNA快速重亚硫酸盐转化处理的专用试剂。
基因组DNA双链变性结链后，在重亚硫酸盐的作用下序列中为甲基化的胞嘧啶（C）转变成尿嘧啶（U），而甲基化的C保持不变。
通过后续的各种检测手段，如MSP、BSP、HRM、Pyroseqencing及甲基化芯片等，将甲基化状态的差异转变成DNA序列的差异被检测出来，从而确定基因的CpG甲基化状态。
本试剂盒提供了重亚硫酸盐转化实验所需试剂和DNA纯化回收过程中所需的优化缓冲液，可获得臻于完美的DNA转化效果和回收效率。
与其他同类试剂盒相比，具有如下优势：�适用于各种样本类型。
�在3小时内完成富含GC的DNA的完全转化，转化效率高达99.9%。
�独特的保护剂最大限度地避免DNA降解，保障了后续的检测实验的需求。
�优化的缓冲液体系能最大限度的提高处理后的DNA回收效率。
�优化的操作步骤适合多种起始样本和起始量。
本产品仅供研究使用产品包装：EpiMethy TM B isulfite Conversion Kit（Kit Size）MD2301-1（10次）MD2301-5（50次）M-Conversion Reagent1Tube5TubesM-Dilution Buffer300ul 1.5mlM-Dissolving Buffer100ul500ulM-Binding Buffer6ml30mlM-Wash Buffer6ml30mlM-Desulphonation Buffer2ml10mlM-Elution Buffer400ul2mlF-Spin Columns10ct.50ct.Collection Tubes10ct.50ct.Instruction Manual11贮藏条件：室温保存。
59104甲基化提取试剂盒说明书
59104甲基化提取试剂盒说明书深度解析
引言：
在生物医学研究中，DNA甲基化是一个重要的表观遗传学研究领域。
对于基因表达调控、细胞分化和疾病发生发展等过程的研究，DNA甲基化都起到了关键的作用。
本文将详细解读59104甲基化提取试剂盒的使用说明，帮助科研人员更好地理解和使用该产品。
正文：
一、试剂盒组成
59104甲基化提取试剂盒包含有多种必要的组分，如裂解液、蛋白酶K、漂洗液、磁珠溶液等。
这些组分经过精心设计和优化，可以高效地从各种类型的样本中提取出高质量的甲基化DNA。
二、实验步骤
使用59104甲基化提取试剂盒进行DNA甲基化提取主要包括以下几个步骤：样本处理、裂解、磁珠结合、洗涤和洗脱。
每个步骤都有详细的实验操作指导，确保实验结果的准确性和重复性。
三、注意事项
在使用59104甲基化提取试剂盒的过程中，需要注意以下几点：首先，所有操作应在无菌条件下进行，以防止污染；其次，要按照说明书的指示精确控制各步的操作时间；最后，实验结束后应立即废弃使用过的材料，避免交叉污染。
结论：
总的来说，59104甲基化提取试剂盒是一款性能优良、操作简便的产品，适合于各类实验室进行DNA甲基化的研究。
通过深入理解并正确使用该试剂盒，科研人员可以更加有效地进行DNA甲基化的研究工作，推动表观遗传学领域的进步。
胃癌“早筛”丨血浆RNF180Septin9甲基化检测试剂盒获批上市，我们需要知道什么？
3. 申请人名称 ：博尔诚（北京）科技有限公司
4. 产品预期用途：该产品用于体外定性检测人血浆中甲基化的 RNF180 及 Septin9 基因。该产 品适用于经临床医师诊断建议胃镜检查同时由于患者个人原因拒绝进行胃镜检查的患者。检测 结果阳性不作为胃癌早期诊断或确诊的证据，检测结果阴性也不能排除胃癌的可能，患者最终 诊断应依据胃镜检查结果。该产品不用于普通人群的肿瘤筛查。基于现有研究，仅限于有胃癌 家族史者或 40 岁以上胃癌高风险人群检测。
NO.3 该试剂盒适用于普通人群筛查么？
NMPA批准该产品的适用范围/预期用途为： 该产品用于体外定性检测人血浆中甲基化的 RNF180 及 Septin9 基因。 该产品适用于经临床医师诊断建议胃镜检查同时由于患者个人原因拒绝进行胃镜检查的患者。 该产品不用于普通人群的肿瘤筛查。基于现有研究，仅限于有胃癌家族史者或40岁以上胃癌高 风险人群检测，患者最终诊断应依据胃镜检查结果。
综合可见，在临床上，经临床医师源自断建议胃镜检查同时由于患者个人原因拒绝进行胃镜检查 的患者（有胃癌家族史者或40岁以上胃癌高风险人群）可考虑适用该胃癌“早筛”产品，受益将会 比较高。 参考资料： 1. 胃癌诊疗规范（2018年版） 5. RNF180/Septin9 基因甲基化检测试剂盒（PCR 荧光探针法） 说明书
该试剂盒对病例组的检测灵敏度比传统蛋白肿瘤标志物高 40% 左右，其中在 I 期灵敏度比传统 蛋白肿瘤标志物高 40%左右， II 期灵敏度比传统蛋白肿瘤标志物高50%左右。
该试剂盒对临床试验中443例前瞻性样本检测胃癌的灵敏性为 62.10%，特异性为 85.44%。 该试剂盒对临床试验中783例回顾性样本检测胃癌的灵敏性为 61.69%，特异性为 84.58%。
甲基化试剂盒中文说明书
产品详细描述：在 3 小时内完全转化富含 GC的 DNA. 两次加热变性的反应步骤简化了由未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶的过程 .没有DNA 沉淀.并且通过柱层析一步完成DNA的纯化和脱硫.洗脱的超纯 DNA 对于一系列的分子生物分析是非常理想的。
描述EZ DNA Methylation-Gold KitTM 是我们 EZ DNA Methylation Kit产品的改进版. EZ DNA Methyl ation-Gold Kit 将 DNA 变性过程和亚硫酸氢盐转变过程转化为一步.此步骤采用温度变性来取代以前方案中使用氢氧化钠的化学变性过程. 经过DNA亚硫酸氢盐转变,试剂盒可大量回收到 DNA .两种试剂盒都是基于在胞嘧啶与亚硫酸氢钠之间发生的使胞嘧啶转变为尿嘧啶的三步反应. EZ DNA Meth ylation-Gold 与 EZ DNA Methylation Kits 都采用创新的柱内脱磺酸技术来减少不必要的DNA沉淀步骤以便每次都可以提供给研究人员较好的结果.试剂盒的设计可以减少模版降解和纯化过程中的DNA损失, 并且完全转化未甲基化的胞嘧啶.回收的DNA对于PCR扩增、限制性内切酶消化、测序、微阵列等下游分析是很理想的. 右图是 EZ DNA Methylation-Gold Kit所呈现出的结果.在经过亚硫酸氢盐处理后的DNA 测序结果. 使用EZ DNA Methylation-Gold Kit处理的甲基化的Cm pG (在 #5核苷酸位点)DNA.回收的DNA通过PCR来扩增并且直接测序.在 #5位置上甲基化的胞嘧啶仍然保持完整,当未被甲基化的胞嘧啶 (i.e., positions #7, 9, 11, 14 and 15)通过亚硫酸氢盐处理完后全部转化为尿嘧啶.试剂制备CT Conversion Reagent的制备试剂盒中所提供的CT Conversion Reagent是固体混合物并且一定要在首次使用前制备好. 通过添加 900 μl 水, 50 μl 的 M-Dissolving Buffer, 和 300 μl 的 M-Dilution Buffer 到一管的CT Conversion Reagent中. 在室温下溶解并且震荡10分钟或在摇床上摇动10分钟. 如果看到没有溶解的试剂是很正常的, 因为在溶液中的 CT Conversion Reagent 已经达到饱和状态.在使用之前将 CT Conversion Reagent 溶液在室温 (20°C -30°C)下避光保存.每管的 CT Conversion Reagent 是针对10次 DNA 处理设计的.为了得到较好的结果, CT Conversi on Reagent 应当在制备后立即使用.如果不立刻使用的话, CT Conversion Reagent 溶液可以在-2 0°C存储1星期.而且在使用之前存储的 CT Conversion Reagent 溶液一定要在室温下解冻并且通过震动或颠倒2分钟来混合. CT Conversion Reagent 对光很敏感,所以要尽量减少在光下的暴露.M-WASH BUFFER的制备添加24ml (对于200次的D5006应为96ml) 100%的乙醇到M-WASH BUFFER中来制备最终可以使用的M-WASH BUFFERProtocol：每次制备的DNA 范围在 500 pg 到 2 μg之间. 最佳量为200-500 ng.在PCR管中添加 130 μl 的 CT Conversion Reagent 到每 20 μl DNA 样品中. 如果 DNA 样品的体积小于 20 μl, 则用水来弥补差量. 通过轻弹试管或移液器操作来混合样品.For Example: 4 μl DNA 样品, 加入16 μl 水, 130 μl CT Conversion ReagentNote: 对于 DNA 体积 >20 μl, 就要调整 CT Conversion Reagent的制备过程. 对于每增加 10 μl DNA样品体积来说，水的量就要随之减少 100 μl. 例如, 40 μl DNA 样品, 就要添加 700 μl来制备 CT Conversion Reagent. DNA 样品的最大体积为每次转化反应50 μl. 不要调整 M-Diss olving Buffer 或 M-Dilution Buffer的体积.将样品管放到循环变温器并按以下步骤操作:1. 98°C 放置 10 分钟2. 64°C放置2.5 小时3. 立刻进行下述操作或者在4°C 下存储(最多20小时).添加 600 μl 的 M-Binding Buffer 到 Zymo-Spin IC Column 中，并将柱放如试剂盒所提供的Col lection Tube中.装填样品 (从步骤 2)到 Zymo-Spin IC? Column 含有 M-Binding Buffer. 盖上盖将柱颠倒数次来混合样品.全速 (>10,000 x g)离心 30 秒. 去除流出液.添加 200 μl 的 M-Wash Buffer 到柱中. 全速离心30 秒.添加 200 μl 的 M-Desulphonation Buffer 到柱中并且在室温 (20 °C- 30 °C) 下放置 15-20 分钟. 在培养后, 全速离心 30 秒.添加 200 μl 的 M-Wash Buffer 到柱中. 全速离心30 秒. 再添加 200 μl 的 M-Wash Buffer 并且离心 30 秒.直接添加 10 μl 的 M-Elution Buffer 到柱基质中. 将柱放置在 1.5 ml 的管中. 全速离心来洗脱 DNA.DNA 可立刻进行分析或储存在低于-20°C 下以备以后使用. 我们建议您对于每次PCR使用 2 - 4 μl洗脱的 DNA.。
D5020说明书(中文)
北京天漠科技开发有限公司（ZYMO RESEARCH 中国总代理）ZYMO RESEARCHThe Beauty of Science is to Make Things SimpleEZ DNA Methylation-Direct Kit™EZ DNA 甲基化试剂盒- DirectCatalog No. D5020 & D5021操作手册•亚硫酸氢盐直接转化来源于血液，组织或者细胞中的DNA •可很好的兼容小样品量的输入，如10个细胞或50pg的DNA•尤其适用于FFPE（石蜡包埋组织）和LCM（激光捕获显微切割）样品北京天漠科技开发有限公司（ZYMO RESEARCH 中国总代理）EZ DNA Methylation-Direct Kit™产品简述EZ DNA Methylation-direct kit 是EZ DNA Methylation kit 和EZ DNA Methylation-gold kit的改进版，EZ DNA Methylation-direct kit可对来自血液、组织和细胞中的DNA直接进行亚硫酸氢盐转化,而不需要提取或纯化DNA，这个试剂盒的敏感性非常强，可对少至10个细胞或50pg的DNA进行修饰。
此试剂盒与EZ DNA Methylation-gold kit一样都是将DNA变性和转化过程合二为一（见下图），而且在处理和纯化的过程中，可以减少模版降解和DNA的损失，以便完全转化未甲基化的C。
回收的DNA对于PCR扩增，限制性内切酶消化，测序，微阵列等下游操作都是非常理想的。
Page 1试剂制备在使用前添加260μl (D5020)或1040μl (D5021)的Proteinase K Storage Buffer 到Proteinase K 管中。
使得Proteinase K 的终浓度为20 mg/ml，完全溶解后储存在-20°C。
添加790μl的M-Solubilization Buffer和300μl的M-Dilution Buffer到CT Conversion Reagent中混合，然后再添加160μl的M-Reaction Buffer混合。
核酸提取及甲基化处理试剂_解释说明以及概述
核酸提取及甲基化处理试剂解释说明以及概述1. 引言1.1 概述核酸提取及甲基化处理是生物学研究中的重要过程，在分子生物学、遗传学和表观遗传学等领域具有广泛的应用。
核酸提取试剂是一类用于从样本中提取DNA 或RNA的化学试剂，而核酸甲基化处理试剂则用于研究DNA上的甲基化修饰，这些修饰在维持基因组稳定性和调控基因表达中扮演着重要角色。
本文将首先介绍核酸提取试剂的定义、原理以及常用种类和选择方法。
随后将讨论核酸提取步骤和方法，包括提供高纯度DNA或RNA所需的实验操作。
此外，我们还将对核酸甲基化处理进行概述，涵盖其原理与方法选择。
进一步探讨了甲基化修饰对于遗传信息传递、发育和疾病等方面的意义与应用。
最后，本文还将详细说明核酸提取及甲基化处理在生物研究中的应用。
我们将重点介绍它们在癌症研究、遗传学研究和表观遗传学研究中的重要作用。
这些应用将帮助读者更好地理解核酸提取及甲基化处理试剂在探索生物学机制、诊断疾病和开发治疗方法方面的价值。
综上所述，本文的目的是详细介绍核酸提取及甲基化处理试剂，讨论它们的原理、选择方法和应用。
通过了解这些信息，我们可以更好地理解并利用这些试剂在生物研究中的重要性，为未来发展提供有益启示。
2. 核酸提取试剂2.1 定义和原理:核酸提取试剂是一类用于从生物样本中纯化核酸（包括DNA和RNA）的化学试剂。
核酸提取是分子生物学研究中非常重要的一个步骤，它能够从复杂的混合物中分离出具有遗传信息的核酸。
通常，核酸提取涉及到细胞或组织的破碎、蛋白质消化、核酸的沉淀和洗涤等步骤。
在提取过程中，主要依靠离心、溶解、振摇和吸附等物理过程来分离目标核酸。
此外，也需要添加一些试剂来破坏细胞结构、去除蛋白质或其他污染物，并保护核酸不受损害。
2.2 常用试剂种类和选择:常见的核酸提取试剂包括：- 细胞裂解缓冲液：用于破坏细胞壁和细胞膜，释放内部核酸。
- 蛋白质消化液：用于去除蛋白质，避免在后续的纯化过程中干扰。
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产品详细描述：
在 3 小时内完全转化富含 GC的 DNA. 两次加热变性的反应步骤简化了由未甲基化的胞嘧啶转化
为尿嘧啶的过程 .
没有DNA 沉淀.并且通过柱层析一步完成DNA的纯化和脱硫.洗脱的超纯 DNA 对于一系列的分子生物分析是非常理想的。
描述
EZ DNA Methylation-Gold KitTM 是我们 EZ DNA Methylation Kit产品的改进版. EZ DNA Methyl ation-Gold Kit 将 DNA 变性过程和亚硫酸氢盐转变过程转化为一步.此步骤采用温度变性来取代以前方案中使用氢氧化钠的化学变性过程. 经过DNA亚硫酸氢盐转变,试剂盒可大量回收到 DNA .两种试剂盒都是基于在胞嘧啶与亚硫酸氢钠之间发生的使胞嘧啶转变为尿嘧啶的三步反应. EZ DNA Meth ylation-Gold 与 EZ DNA Methylation Kits 都采用创新的柱内脱磺酸技术来减少不必要的DNA沉淀步骤以便每次都可以提供给研究人员较好的结果.试剂盒的设计可以减少模版降解和纯化过程中的DNA损失, 并且完全转化未甲基化的胞嘧啶.回收的DNA对于PCR扩增、限制性内切酶消化、测序、微阵列等下游分析是很理想的. 右图是 EZ DNA Methylation-Gold Kit所呈现出的结果.
在经过亚硫酸氢盐处理后的DNA 测序结果. 使用EZ DNA Methylation-Gold Kit处理的甲基化的Cm pG (在 #5核苷酸位点)DNA.回收的DNA通过PCR来扩增并且直接测序.在 #5位置上甲基化的胞嘧啶仍然保持完整,当未被甲基化的胞嘧啶 (i.e., positions #7, 9, 11, 14 and 15)通过亚硫酸氢盐处理完后全部转化为尿嘧啶.
试剂制备
CT Conversion Reagent的制备试剂盒中所提供的CT Conversion Reagent是固体混合物并且一定要在首次使用前制备好. 通过添加 900 μl 水, 50 μl 的 M-Dissolving Buffer, 和 300 μl 的 M-Dilution Buffer 到一管的CT Conversion Reagent中. 在室温下溶解并且震荡10分钟或在摇床上摇动10分钟. 如果看到没有溶解的试剂是很正常的, 因为在溶液中的 CT Conversion Reagent 已经达到饱和状态.在使用之前将 CT Conversion Reagent 溶液在室温 (20°C -30°C)下避光保存.每管的 CT Conversion Reagent 是针对10次 DNA 处理设计的.为了得到较好的结果, CT Conversi on Reagent 应当在制备后立即使用.如果不立刻使用的话, CT Conversion Reagent 溶液可以在-2 0°C存储1星期.而且在使用之前存储的 CT Conversion Reagent 溶液一定要在室温下解冻并且通过震动或颠倒2分钟来混合. CT Conversion Reagent 对光很敏感,所以要尽量减少在光下的暴露.
M-WASH BUFFER的制备添加24ml (对于200次的D5006应为96ml) 100%的乙醇到M-WASH BUFFER中来制备最终可以使用的M-WASH BUFFER
Protocol：每次制备的DNA 范围在 500 pg 到 2 μg之间. 最佳量为200-500 ng.
在PCR管中添加 130 μl 的 CT Conversion Reagent 到每 20 μl DNA 样品中. 如果 DNA 样品的体积小于 20 μl, 则用水来弥补差量. 通过轻弹试管或移液器操作来混合样品.
For Example: 4 μl DNA 样品, 加入16 μl 水, 130 μl CT Conversion Reagent
Note: 对于 DNA 体积 >20 μl, 就要调整 CT Conversion Reagent的制备过程. 对于每增加 10 μl DNA样品体积来说，水的量就要随之减少 100 μl. 例如, 40 μl DNA 样品, 就要添加 700 μl来制备 CT Conversion Reagent. DNA 样品的最大体积为每次转化反应50 μl. 不要调整 M-Diss olving Buffer 或 M-Dilution Buffer的体积.
将样品管放到循环变温器并按以下步骤操作:
1. 98°C 放置 10 分钟
2. 64°C放置2.5 小时
3. 立刻进行下述操作或者在4°C 下存储(最多20小时).
添加 600 μl 的 M-Binding Buffer 到 Zymo-Spin IC Column 中，并将柱放如试剂盒所提供的Col lection Tube中.
装填样品 (从步骤 2)到 Zymo-Spin IC? Column 含有 M-Binding Buffer. 盖上盖将柱颠倒数次来混合样品.
全速 (>10,000 x g)离心 30 秒. 去除流出液.
添加 200 μl 的 M-Wash Buffer 到柱中. 全速离心30 秒.
添加 200 μl 的 M-Desulphonation Buffer 到柱中并且在室温 (20 °C- 30 °C) 下放置 15-20 分钟. 在培养后, 全速离心 30 秒.
添加 200 μl 的 M-Wash Buffer 到柱中. 全速离心30 秒. 再添加 200 μl 的 M-Wash Buffer 并且离心 30 秒.
直接添加 10 μl 的 M-Elution Buffer 到柱基质中. 将柱放置在 1.5 ml 的管中. 全速离心来洗脱 DNA.
DNA 可立刻进行分析或储存在低于-20°C 下以备以后使用. 我们建议您对于每次PCR使用 2 - 4 μl洗脱的 DNA.。