白喉疫苗工艺流程菌种

四、白喉毒素
1.白喉外毒素为棒状杆菌β-噬菌体tox基因表达 产物,可与细胞表面的特异性受体结合,干扰蛋 白质的合成，对人和动物都引起致死性毒性， 如心脏、肾上腺、肝、肾、胰及神经组织等均 受到损害。 2.白喉毒素是单一多肽，由560个氨基酸组成， 分子量为62kDa,等电点pH4.1，在pH6时加热55 ℃很快失活。 3.通过物理和化学方法将其纯化。
五、白喉类毒素
毒素经甲醛处理后去除毒性 而保留免疫原性
细 菌 毒 素
甲醛
类毒素
影响脱毒因素
PH
脱毒
甲醛 浓度
温度
温度、pH和甲醛浓度等均影响脱毒效果
１.温度越高脱毒越快，超过40℃影响抗原性， 一般37～38 ℃。 ２.在酸性时脱毒较慢，但游离甲醛含量高，在 保存过程中由于甲醛的继续作用，可导致脱 毒过甚，并影响毒素的稳定性；在碱性时脱 毒快，但抗原性损失较大，一般采用弱碱性。 ３.甲醛浓度大则脱毒快，但抗原损失大。
絮状单位测定
毒素或类毒素与相应抗毒素在适当的含量、比例、温度反 应时间等条件下可在试管中发生抗原抗体结合，产生肉眼 可见的絮状凝集反应， 根据抗毒素絮状单位标准品可测定类毒素的絮状单位（Lf ）值。
2 纯度：≥1500Lf/mgPN 3 安全性试验（豚鼠）
七、类毒素的质量检定
4效价测定
类毒素刺激机体产生特异性抗体的免疫应答和对相应抗 体的特异性结合反应。
三、白喉杆菌的致病力及毒素产生遗传学
1. 致病力 自然界中动物不感染白喉，只能在敏感动物中造成 人工感染。猴、马、家兔和豚鼠对白喉敏感实验 室常用的动物是家兔、豚鼠和NIH小鼠。 2.毒素产生遗传学 白喉是由白喉杆菌产生毒性很强的外毒素引起的。 白喉杆菌的产毒基因是由β嗜菌体携带。 β嗜菌 体感染无毒白喉杆菌后嗜菌体DNA与细菌DNA整合， 形成溶原性白喉杆菌而获得产毒能力（PW8株目前 用于白喉类毒素生产)。
外毒素 对神经 系统损 害
外毒素 对肾脏 损害
主要临床表现为上呼吸道发炎， 常常表现在咽部，有Байду номын сангаас在鼻腔、喉部和气管，
白喉流行特点
1.传染原：白喉杆菌是严格寄生于人类的细菌 没有中间宿主，病人及带菌者是唯 一的传染原。 2.传播途径：主要是呼吸道飞沫传播，也可通 过被污的器具和食物传播。 3.易感人群：人对白喉普遍易感，新生儿1岁时 白喉易感性达高峰。
AC脑膜 炎球菌 多糖结 合疫苗 HIB……
白喉疫苗
百日咳疫苗
伤寒疫苗 结合疫苗
白喉疫苗
一、白喉概述 二、病原学 三、白喉杆菌的致病力及毒素产生的遗传学 四、白喉毒素 五、白喉类毒素 六、生产工艺 七、类毒素的质量检定
白喉疫苗
白喉曾经是对儿童威胁非常大的传染病。 它是由白喉棒状杆菌引起的一种呼吸道传染病 细菌产生 的外毒素 对心肌损 害
二、病原学
1.细菌形态
白喉棒状杆菌菌体一端或两端膨大呈 棒状，有着色较深的异染颗粒，革兰 氏染色阳性，白喉杆菌无动力，无荚 膜，不形成芽孢。
白喉棒状杆菌显微镜下形态
白喉棒状杆菌显微镜下形态
二、病原学
2.培养特性 白喉杆菌是需氧菌，最适温度为34～35℃。能分解 葡萄糖、麦芽糖和糊精，产酸不产气，能还原硝酸 盐，不产生吲哚，不消化蛋白。 3.抵抗力 ⑴.白喉杆菌对抗生素有不同程度敏感，对青霉素和 红霉素极敏感。 ⑵.对消毒剂抵抗力弱，3％苯酚10min可将该菌杀死 ⑶.不耐热，58 ℃10mi或100℃ 1min即可被杀死。
类毒素的毒性逆转
温度升高 游离甲醛的浓度低 毒素纯度高
易发生毒 性逆转
防止或减 轻毒性逆 转
提高甲醛浓度、脱毒pH、 脱毒温度和延长脱毒时间； 增加非蛋白氮含量（于精制 毒素中加入赖氨酸、精氨酸 等）
六、白喉疫苗工艺流程
菌种（ PW8株 ） 传代扩增 发酵罐培养 离心去菌体 3～ 4代 34～35℃培养对数生长 末期收获，甲苯杀菌。 收集清液
⑴小鼠Vero细胞法
将标准和待检类毒素2倍稀释3～5个稀释度，皮下免疫N IH小鼠8只（0.5ml/只)，免疫5周采血，根据vero细胞 生长情况，以标准品的效价为标准，用平行线分析法进 行结果计算。
⑵豚鼠毒素攻击法
皮下免疫豚鼠10只（1ml/只），免疫4周后用毒素攻击， 观察5天根据存活率以标准品的效价为标准，用平行线分 析法进行结果计算。
㈠细菌形态 百日咳菌呈革兰氏染色阴性，短杆状或椭圆形
㈡生长特性
1.百日咳菌可分四种相变，Ⅰ相菌毒力最强有免 疫原性；Ⅳ相菌毒力消失，无免疫原性；ⅡⅢ 相菌介于Ⅰ Ⅳ相之间。 2.百日咳菌是需氧菌，最适温度为35～36℃,最 适pH6.8-7.0。 3.不发酵任何糖类、不分解糊精，尿素盐，不液 化明胶不产生吲哚，不利用枸橼酸盐。
营养缺 乏症
典型症状为突然阵发性痉咳，并带有吸气性尾 声或伴有呕吐，可持续数月。
百日咳流行特点
1.传染原：人是百日咳唯一的天然宿主百日咳 病人是传染原。 2.传播途径：主要是呼吸道飞沫传播，也可通 过被污的器具和食物传播。 3.易感人群：主要传染对象是6岁以下儿童，1 岁以内婴幼儿发病率50%。
二、病原学
细菌性疫苗
杨丽华
2011年3月
细菌性疫苗 1. 死疫苗 2. 活疫苗 3. 蛋白类疫苗 4. 多糖类疫苗 5. 多糖蛋白结合疫苗
细菌性疫苗种类
1 2 3 4 5
霍乱 伤寒
副伤寒 百日咳 疫苗……
卡介苗 鼠疫 布氏杆菌 伤寒 痢疾 霍乱 疫苗……
白喉 破伤风 百日咳 疫苗 ……
脑膜炎 伤寒vi 肺炎 流感嗜 血杆菌 多糖疫 苗……
超滤浓缩
硫酸铵两段盐析
除盐除菌
脱毒 原液 成品
氨离子及无菌检查
甲醛液 37℃ 脱毒试验（家兔） 检定（浓度、纯度、安全等） Al(OH)3吸附 检定（安全、效价等）
七、类毒素的质量检定
1 絮状单位（Lf）
是毒素或类毒素与抗毒素的结合单位，只能代表“量” 而不能完全代表活性。使用抗毒素絮状单位标准品来测定 类毒素的絮状单位。
百日咳疫苗
一、百日咳概述 二、病原学 三、百日咳疫苗发展简史 四、无细胞百日咳疫苗 ㈠、生产工艺流程 ㈡、质量检定 ㈢、APV的效果 ㈣、接种不良反应
百日咳概述
百日咳是对儿童威胁非常大的传染病， 它是由百日咳杆菌引起的一种呼吸道传染病。 并发症肺炎 形成肺气肿 肺不张，甚 至死亡。
急性脑炎、 呕吐、痉挛 和昏迷，死 亡或脑损伤