细胞与分子生物学实验教程期末复习总结

原料包括样品，寡核苷酸引物，4种____________，合适的缓冲液及_____________
Mg2+ DNA聚合酶辅助因子
K+在源自文库火过程中有利于退火
由于不同大小和构象的核酸分子其电荷密度大致相同，因此要用凝胶，由于_______效应，使不同大小和构象的核酸迁移率出现差异
分子迁移率和分子量对数，胶浓度成反比，与电场强度成正比
荧光强弱反映___________，而迁移率反映______________
*琼脂糖凝胶预电泳目的？
①加热凝胶
②清洁凝胶孔，分子筛，消除杂质影响
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⑥
油镜用完后，必须用擦镜纸沾少许________将_________及__________上的香柏油擦干净
指示剂________与_________，分子量小，在不同浓度凝胶中电泳，近似于_________
电泳样品中除加入指示剂，还加入蔗糖，甘油来____________
染色剂有________(英文缩写，下同______)和吖啶橙（AO）
EB见光_________，染色时应_______
EB带____电荷，会中和________，因此加入了EB的胶内电泳，核酸的迁移速度_________
*条带带宽、颜色深浅、顺序与蛋白质的量、等电点、分子量的关系？
电泳后条带带宽、颜色深浅与蛋白质的量有关，蛋白质的含量越大，条带越宽，颜色越深，而条带的顺序则与等电点与分子量有关，等电点越低，分子量越小，离点样线距离越远
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②
以Folin-Denis反应检查流出液中蛋白质，主要靠蛋白质中的____________与___________________
点样时点在醋酸纤维薄膜______光泽面，电泳时_____光泽面向下，所用染料为_____________
*（注：此符号代表不需要掌握只需要了解的内容，下同）
*每条区带是否只代表一种蛋白质？
否，因为条带的位置与蛋白质所带电荷Q，半径r有关，具有相近特性的蛋白质位置不易区分
*电场越高越好？
否，电场强度过高，导致蛋白质在膜上电泳过程中温度升高，可能导致蛋白质在电泳过程中温度升高，可能导致蛋白质的变性从而影响实验结果
干扰实验的因素有_______、__________和_____________
干扰实验的因素有硫酸铵、Tris缓冲液、和某些氨基酸
*双缩脲法测定蛋白质含量的原理是什么？
蛋白质在碱性溶液里与Cu2+反应生成紫色络合物，一定范围内，紫色络合物颜色的深浅与蛋白质含量呈正比，而与蛋白质的相对分子质量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质的含量
先出来的是相对分子质量_____的_______________
比较脲酶活性所用试剂为________试剂
*向凝胶柱加入样品时，为什么必须保持胶面平整？上样体积为什么不能太大？
因为如果胶面有斜面会导致起点位置的差异，从而层析出的结果受影响。而上样体积太大，样品内两种蛋白质分布不均匀也会影响层析结果
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细胞与分子生物学实验教程期末复习总结
教材来源：【人民卫生出版社】
所学内容：
第二章
实验一血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳①
实验五凝胶柱层析分离鉴定蛋白质②
实验六DNS-氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析③
实验十三标准曲线法测定蛋白质含量④
实验十五聚合酶链反应（PCR）与琼脂糖凝胶电泳⑤
实验二十二显微镜使用⑥
实验二十五蟾蜍血细胞的体外融合⑦
*本方法能否用于分离核苷及核苷酸，为什么？
能，因为核苷与聚酰胺薄膜形成氢键能力较弱，但核苷酸可以，因为核苷酸多了磷酸基团，形成氢键的能力增强了。
*（背光为黄色的为重点，下同）
比移值Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离
DNS-氨基酸在紫外线照射下发黄色荧光
本实验中固定相是_______，流动相是（极性）和（非极性）
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⑤
DNA模板变性在____变性，形成___________
退火，降温至_______，加入反应体系两种_______退火至相应互补的DNA链上
引物延伸，调节到DNA聚合酶最适温度______，在4种_______存在下，由______延伸，而新合成的引物延伸链则可作为下一轮反应的模板
③
双向聚酰胺薄膜层析的原理
聚酰胺上的酰胺基团与氨基酸形成________，各种氨基酸形成________能力的强弱不同，决定了_______
的差异，__________________则展层速度___，____________________则展层速度___，各物质因此在聚酰胺薄膜上分离。
展层溶剂与被分离物质在_______表面竞争_________，被分离物质在_____与聚酰胺薄膜表面_______产生差异，___于展层溶剂的_________，不溶于________的______________
用_____握住镜臂，_____托镜座，你撸管一般用______
显微镜用完后，必须将目镜、物镜、反光镜用清洁的擦镜纸擦拭，勿用_______及其他药物擦拭
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⑦
细胞融合的诱导方法有_____________、化学因子如聚乙二醇（PEG）、_____________和___________
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④
*DNA定量测定的方法有哪六种？
双缩脲法优点为干扰物质_____，较___速，缺点是灵敏度____，范围是_____μg
分光光度计在波长______nm处，测出各管吸光度
含有两个以上______的物质在_____溶液中与_______反应生成紫红色络合物，即为双缩脲反应
实验二十六细胞有丝分裂及细胞骨架的显微观察⑧
实验二十七动物染色体的制备⑨
第三章
实验一标准管法测定葡萄糖含量⑩
第四章
实验一高分子量DNA小鼠肝细胞DNA提取⑪
实验二AKP Km测定⑫
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①
血清蛋白的等电点都在________以下，所以在pH8.6的巴比妥缓冲液以_______形式存在。