微生物纯培养的分离方法

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例一：分离 筛选蛋白酶 产生细菌
含牛奶选择培养基目的菌生长平板
营养选择因子：牛奶或酪蛋白
只允许分解利用蛋白质的目的菌生长，淘汰非目的菌 长出的目的菌并不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶
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例二：分离筛选产高温淀粉酶（65℃）细菌
单细胞
65℃培养
淀粉水解透明圈 目的菌菌落
选择培养基平板 （淀粉为唯一C源）
个体较小的微生物需采用显微操作仪
五、ห้องสมุดไป่ตู้滴分离法
较大的微生物可使用毛细管提取
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Each colony was examined microscopically
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四、选择培养基分离法
原理
❖ 创造适于目的微生物生长条件 ❖ 促使目的微生物快速生长呈优势菌 ❖ 抑制非目的微生物生长 ❖ 从混杂微生物中分离目的微生物
从土壤中a 分离纯微生物
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1、稀释倾注分离法
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2、稀释涂布分离法
涂布平板法
稀释倒平板法
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采用显微分离法从混杂群体中直接分离单 个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养， 称为单细胞（单孢子）分离法。
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❖ 营养琼脂平板上不能形成菌落 ❖ 分离难度与细胞或个体的大小成反比
三、单细胞挑取法
第五单元 微生物分离纯化及鉴定技术
模块一 微生物纯培养的分离方法
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微生物纯种分离
❖ 将多种混杂微生物，经某种技术或方法 分离成纯种的过程
纯培养（pure culture）
❖ 将在实验室条件下从一个细胞或一种 细胞群繁殖得到的后代称为纯培养。
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微生物纯种分离的原理和方法
微生物样品
分散成单个微生物
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同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
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一、划线法
分区划线法（蛇形线法）操作图
第一区划线 第二区划线 第三区划线
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7
分区划线法适用范围： 适用于浓度较大的样品
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8
连续划线法操作图
连续划线法适用范围： 适用于a浓度较小的样品 9
二、稀释平板法
104/ml
103/ml
102/ml
101/ml
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例：从土壤中分离能产生ß－半乳糖苷酶的微生物
富集培养
选择培养基分离
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目的菌验证
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涂布棒
弹簧接种枪
1.接种针 2.接种环 3.接种钩 4.接种锄 5.接种铲 6. 接种匙 7.接种刀 8.接种刀 9.剪刀 10.钢钩 11. 镊子 12.弹簧接种枪 13a.接种、枪（日本式） 23
接种工具
接种环的灭菌
接种环烧红
接种环稍冷却
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挑选单个菌落
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划线
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环境条件
1、实验台 2、空气
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某种方法
培养
单菌落
多种混杂
平板
每个菌落为纯种（纯培养）
单菌落转接培养
纯种（纯培养）
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3
菌落
单个微生物在适宜的固体培养基表面或内 部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可 见的、有一定形态结构的子细胞群体，称 为菌落。
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4
一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养；
单个微生物只在固体培养基上形成菌落；
在液体培养基中不会a 形成菌落
选择因子：营养选择因子淀粉
环境选a择因子65℃高温
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2、富集培养法
人为创造一些条件只让所需的微生物生长， 在这些条件下，所需要的微生物能有效地与 其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远 超过其他微生物。
富集培养是分离微生物菌种最强有力的技术之一
营养选择因子和生理条件选择因子可无穷尽组 合，可从自然界选择分离各类特异微生物
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1、利用选择培养基进行直接分离
选择培养基
只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
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1、利用选择培养基进行直接分离
土壤 选择培养基 单细胞 直接分离
37℃ 培养
目的菌优势 非目的菌
选择培养基平板 （含牛奶或酪蛋 白唯一C、N源）
目的菌落 菌落周围有透明 蛋白水解圈
例一：分离筛选蛋白酶产生细菌