细胞膜-胞浆-核膜蛋白分步提取方法
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10. 37℃下百度文库 1000g 离心3 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），上层是胞浆
蛋白部分，下层是细胞膜蛋白部分约为40-50μl。 11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
12. 用80-200μl 冰冷的提取液D 溶解步骤10 中的下层部分，即得细胞膜蛋白。 13. 将上述蛋白提取物定量③后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验④。
织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5 分钟，小心将匀浆吸入 另一预冷的干净离心管。在4℃，500g 条件下离心2-3 分钟，弃上清。）
3. 用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 4. 每5×106 个细胞中加入400ul 冷的蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下用试 剂盒所配针筒反复吸吹细胞，使细胞完全破裂。 5. 在4℃，1000g 条件下离心5 分钟。 6. 快速将上清（I）吸入另一预冷的干净离心管，在沉淀中加入200μl 冷的提取液 B，高速涡旋振荡15 秒。 7. 将混匀的提取液B 置2-8℃振荡1-2 小时，至沉淀充分裂解，沉淀明显减少。8. 37℃水
细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒
储存条件： 蛋白酶抑制剂-20℃保存； 磷酸酶抑制剂2-8℃保存； 蛋白提取液2-8℃保存。 有效期： 一年。
产品简介： 贝博细胞膜蛋白/胞浆蛋白/核膜蛋白提取试剂盒（货号：BB-31042）适用于从各种原代或传 代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、 肌肉、血管、 结缔组织等哺乳动物组织中分步提取细胞膜蛋白/胞浆蛋白/细胞核膜蛋白/核内蛋白。提取 过程简单方便，可在2 小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对 蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包 括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下 游蛋白研究。
蛋白提取步骤： 1. 提取液制备：每400ul 冷的蛋白提取液A/D 中加入分别加入2ul 蛋白酶抑制剂 混合物和2ul 磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。 2. 取5-10×106 个细胞①，在4℃，1000rpm 条件下离心5-10 分钟，小心吸取培养 基，尽可能吸干，用细胞刮刀收集细胞。（组织样本50-100mg 剪碎，加冷PBS，用组
浴10 分钟，37℃下②1000g-2000g 力离心5 分钟，此时溶液分为两层
（对着光线看），上层为核内蛋白，下层是核膜蛋白约为20-40μl。小心移除上 层，用1-2 倍体积的提取液D 溶解下层即为细胞核膜蛋白。 9. 在步骤6 中所得到的上清（I）中加入5ul 提取液C，充分混匀。37℃水浴10 分钟。
蛋白部分，下层是细胞膜蛋白部分约为40-50μl。 11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
12. 用80-200μl 冰冷的提取液D 溶解步骤10 中的下层部分，即得细胞膜蛋白。 13. 将上述蛋白提取物定量③后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验④。
织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5 分钟，小心将匀浆吸入 另一预冷的干净离心管。在4℃，500g 条件下离心2-3 分钟，弃上清。）
3. 用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 4. 每5×106 个细胞中加入400ul 冷的蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下用试 剂盒所配针筒反复吸吹细胞，使细胞完全破裂。 5. 在4℃，1000g 条件下离心5 分钟。 6. 快速将上清（I）吸入另一预冷的干净离心管，在沉淀中加入200μl 冷的提取液 B，高速涡旋振荡15 秒。 7. 将混匀的提取液B 置2-8℃振荡1-2 小时，至沉淀充分裂解，沉淀明显减少。8. 37℃水
细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒
储存条件： 蛋白酶抑制剂-20℃保存； 磷酸酶抑制剂2-8℃保存； 蛋白提取液2-8℃保存。 有效期： 一年。
产品简介： 贝博细胞膜蛋白/胞浆蛋白/核膜蛋白提取试剂盒（货号：BB-31042）适用于从各种原代或传 代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、 肌肉、血管、 结缔组织等哺乳动物组织中分步提取细胞膜蛋白/胞浆蛋白/细胞核膜蛋白/核内蛋白。提取 过程简单方便，可在2 小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对 蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包 括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下 游蛋白研究。
蛋白提取步骤： 1. 提取液制备：每400ul 冷的蛋白提取液A/D 中加入分别加入2ul 蛋白酶抑制剂 混合物和2ul 磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。 2. 取5-10×106 个细胞①，在4℃，1000rpm 条件下离心5-10 分钟，小心吸取培养 基，尽可能吸干，用细胞刮刀收集细胞。（组织样本50-100mg 剪碎，加冷PBS，用组
浴10 分钟，37℃下②1000g-2000g 力离心5 分钟，此时溶液分为两层
（对着光线看），上层为核内蛋白，下层是核膜蛋白约为20-40μl。小心移除上 层，用1-2 倍体积的提取液D 溶解下层即为细胞核膜蛋白。 9. 在步骤6 中所得到的上清（I）中加入5ul 提取液C，充分混匀。37℃水浴10 分钟。